СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАТЕРИАЛА, СОДЕРЖАЩЕГО КЛЕТКИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, МАТЕРИАЛ, СОДЕРЖАЩИЙ КЛЕТКИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ФИБРОМАТОЗА МАТКИ, ХРОНИЧЕСКОГО ПРОСТАТИТА И НАРУШЕНИЙ МУЖСКОЙ ПОЛОВОЙ ФУНКЦИИ МЕТОДОМ ТРАНСПЛАНТАЦИИ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/48 A61K35/55 A61B17/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения материала, содержащего клетки предстательной железы и предназначенного для трансплантации больным, собственно материалу, содержащему клетки предстательной железы, полученной новым способом, и к трансплантологическим методам лечения фиброматоза матки, хронического простатита и нарушений мужской половой функции путем трансплантации полученного материала.

Известен способ получения материала из внутриутробных плодов человека и животных (плодов свиньи, плодов крупного рогатого скота), содержащего, в частности, островковые клетки поджелудочной железы. Способ заключается в том, что поджелудочную железу внутриутробных плодов человека, крупного рогатого скота или свиньи извлекают в стерильных условиях, промывают в растворе Хенкса с антибиотиками, разрезают на фрагменты размером 2-3 мм, которые вновь промывают раствором Хенкса с антибиотиками. Затем ткань погружают в 0,1-0,3%-ный раствор коллалитина (препарат, содержащий коллагеназу) или смесь равных частей 0,1%-ного раствора коллалитина и 0,1%-ного раствора трипсина на 20-30 мин при температуре 20-22. Далее удаляют раствор ферментов, переносят материал в 0,3%-ный раствор трипсина, помещают на магнитный размешиватель и подвергают обработке в течение 15-20 мин. Делают два - три слива раствора трипсина со взвешенными в нем одиночными клетками и небольшими клеточными комплексами в центрифужные флаконы, а затем центрифугируют и осадок ресуспендируют. Полученные не осевшие клетки и клеточные комплексы пофракционно отделяют и засевают ими культуральные матрасы. Инкубацию проводят при температуре 36-37^oC в течение 8-10 дней с заменой ростовой среды каждые 3-4 дня. При этом была получена культура, подавляющую часть которой составляют бета-клетки (см. Экспериментальные основы клинической трансплантации островковых клеток. /Шумаков В.И., Блюмкин В.Н., Скалецкий Н.Н., Шальнев Б.И. в сборнике "Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы (очерки)", М., "Канон", 1995, с. 38-42).

К недостаткам известного способа относится значительная потеря клеток в процессе многоэтапной обработки материала, в частности при нахождении на магнитном размешивателе и при центрифугировании, а также при фракционном осаждении клеточных комплексов и одиночных клеток.

Известен материал, содержащий бета-клетки, полученный указанным выше способом (см. там же).

К недостаткам известного материала, полученного данным способом, относится его сниженная биологическая активность из-за недостатков способа его получения, в процессе которого часть клеток уничтожается, а часть травмируется при нахождении на магнитном размешивателе и при центрифугировании.

Известен способ получения суспензии жизнеспособных клеток Лейдига млекопитающих - интерстициальных клеток тестикул эмбриона человека, коровы, свиньи, а также новорожденных поросят и телят, причем новорожденные особи должны быть максимально раннего возраста для того, чтобы не успела оформиться стабильная антигенная видовая специфичность. Для приготовления суспензии используются растворы, содержащие питательный субстрат для клеток, в частности пользуются составами стандартных сред для клеток животной ткани - средами Игла, растворами Хенкса, средой 199 и подобными. При этом все операции проводятся в асептических условиях. Полученная суспензия должна быть стерильна (см. патент Российской Федерации N 2078590, A 61 M 37/00, A 61 K 35/48, 10.05.97).

Известен способ лечения фиброматоза матки с применением андрогенов и анаболических стероидов (см. Травянко Т.Д., Сольский Я.П. "Справочник по акушерско-гинекологической эндокринологии". Киев, Здоровья, 1989, с. 196-197).

Известен способ лечения фиброматоза матки с применением агониста гонадотропин-рилизинг гормона (см. Лейн Дж. и др. Применение агониста гонадотропин-рилизинг гормона для лечения гинекологических заболеваний. "Акушерство и гинекология", N 2, 1991, с. 17).

Однако эти способы лечения не эффективны в ряде случаев. К тому же у определенного процента больных после окончания лечения, в результате которого произошло уменьшение размера опухоли, впоследствии опухоль вновь увеличивалась.

Известен способ лечения хронического простатита, заключающийся в том, что пациенту под капсулу обеих долей предстательной железы вводят суспензию жизнеспособных клеток Лейдига (клеток эмбриональной тестикулярной ткани) млекопитающих эмбрионального происхождения и новорожденных в доле не менее 2 млн. клеток в 1 мл (см. патент Российской Федерации N 2078590, A 61 М 37/00, A 61 К 35/48, 10.05.97).

Известен способ лечения больных с нарушением мужской половой функции, заключающийся в том, что пациенту под белковую оболочку яичка вводят суспензию клеток Лейдига (клеток эмбриональной тестикулярной ткани) в количестве не менее 2 млн. клеток в 1 мл (см. патент Российской Федерации N 2026643, A 61 В 17/00, A 61 К 35/48, 20.01.95).

К недостаткам этих способов можно отнести некоторую их сложность и опасность травматизации соответствующих органов с возможным развитием в последующем воспалительного процесса (в том числе аутоиммунного характера), так как для достижения положительного результата лечения необходимо вводить суспензию клеток под капсулу долей предстательной железы или под белочную оболочку яичка.

Задачей изобретения, относящегося к способу получения материала, содержащего клетки предстательной железы, является его упрощение, увеличение гарантированно высокого процента (до 90%) извлечения неповрежденных клеток из исходного материала и удешевление за счет отказа от применения фермента, содержащего коллагеназу.

Задачей изобретения, относящегося к материалу, содержащему клетки предстательной железы, является получение материала с высокой биологической активностью.

Задачей изобретения, относящегося к способам лечения фиброматоза матки, хронического простатита и нарушений мужской половой функции, является повышение эффективности лечения за счет использования материала с высокой биологической активностью.

Поставленная задача решается тем, что при получении материала, содержащего клетки предстательной железы, используют предстательную железу взрослого молодого или новорожденного кролика (возможно использование предстательной железы другого млекопитающего), при этом извлеченную предстательную железу промывают в растворе Хенкса с добавлением антибиотиков, разрезают ее на фрагменты и засевают полученным материалом культуральные матрасы, добавляя культуральную (ростовую) среду и сыворотку млекопитающих, затем обеспечивают необходимый (оптимальный) режим, для культивируемых микрофрагментов предстательной железы, для чего осуществляют инкубацию при температуре 35 - 40^oC в продолжение от двух суток до шести недель с однократным или многократным снижением температуры до 4 - 25^oC и выдержкой при пониженной температуре, а также с временным однократным или периодическим снижением концентрации сыворотки.

Поставленная задача для материала, содержащего клетки предстательной железы, решается за счет использования указанного выше способа его получения.

Поставленная задача для способа лечения фиброматоза матки решается при его осуществлении, в процессе которого производят трансплантацию материала, содержащего клетки предстательной железы, при этом упомянутый материал может быть трансплантирован в различные органы и ткани: подкожно, внутримышечно, в частности в прямую мышцу живота, в печень (непосредственно в паренхиму или через воротную вену или ее ветви), в пульпу селезенки, в селезеночную вену, в полость брюшины, в специально создаваемый мышечный карман, в паренхиму печени или в большой сальник.

Принципиальным отличием способа получения материала, содержащего клетки предстательной железы, в соответствии с данным изобретением является его простота и относительно низкая себестоимость за счет того, что в качестве исходного материала используются предстательная железа новорожденных, молодых или взрослых кроликов, а не эмбрионов, как в ближайшем аналоге. Для предложенного способа возможно и использование эмбрионов млекопитающих, но это нецелесообразно, так как железистые структуры в эмбриональной предстательной железе еще не сформированы.

При осуществлении способа в соответствии с настоящим изобретением исключаются операции, травмирующие клетки предстательной железы, а именно центрифугирование, обработка на магнитном размешивателе, и операция обработки ферментом для растворения коллагеновых волокон. В соответствии с настоящим изобретением удается обеспечить высвобождение более 90% клеток предстательной железы, содержащихся в исходной предстательной железе.

Для получения материала, содержащего клетки предстательной железы, может быть использована предстательная железа млекопитающих, в частности новорожденных млекопитающих или их плодов. Имеющийся опыт показывает, что возможно использование предстательной железы крупного рогатого скота и их плодов, а также лошадей и свиней, плода человека, но наиболее доступным и дешевым материалом является предстательная железа новорожденных, молодых или взрослых кроликов.

Для получения материала, содержащего клетки предстательной железы, извлекают предстательную железу, например молодого или взрослого кролика, и помещают ее в холодный раствор Хенкса с добавлением антибиотиков. Вынув предстательную железу из раствора, удаляют ее капсулу и прослойки соединительной ткани с кровеносными сосудами. Декапсулированную предстательную железу измельчают до микрофрагментов размером до 1 мм и вновь промывают раствором Хенкса с добавлением антибиотиков. Полученным материалом засевают культуральные матрасы, куда добавляется культуральная (ростовая) среда и сыворотка млекопитающих. В качестве сыворотки может быть использована сыворотка крупного рогатого скота. Затем засеянные культуральные матрасы помещают в термостат, где обеспечивают оптимальный режим для клеток предстательной железы, для чего осуществляют инкубацию при постоянной температуре, находящейся в диапазоне 35 - 40^oC, в течение от двух суток до шести недель, при этом однократно снижают температуру в зависимости от необходимости (за культурой ведется микроскопический контроль) до 4 - 25^oC и выдерживают определенное время при пониженной температуре. Длительность выдержки определяется экспериментально для конкретного вида культуры клеток. Для получения высококачественного материала, содержащего клетки предстательной железы, производят временное однократное или периодически повторяющееся снижение концентрации сыворотки. Время выдержки при пониженной концентрации сыворотки также определяется экспериментально для конкретного вида культуры клеток предстательной железы.

Полученный материал может быть использован для трансплантации непосредственно после сбора или сохранен достаточно длительное время до операции при пониженной температуре или с помощью замораживания.

Способ лечения фиброматоза матки осуществляют с использованием материала, содержащего клетки предстательной железы, полученных с использованием предложенного способа.

Выбор способа введения материала, содержащего клетки предстательной железы, может быть различным, то есть материал может быть трансплантирован в различные органы и ткани: внутримышечно, в частности в прямую мышцу живота, в печень (в паренхиму или через воротную вену или ее ветви), в пульпу селезенки, в селезеночную артерию, в полость брюшины, в специально создаваемый мышечный карман, в большой сальник или подкожно.

Самым простым по технике исполнения, эффективным и наименее травматическим для больного является введение материала, содержащего клетки предстательной железы, посредством шприца в прямую мышцу живота.

Аналогичным образом осуществляют способы лечения хронического простатита и нарушения мужской половой функции.

Использование материала, содержащего клетки предстательной железы, полученного предложенным способом, для трансплантации позволит существенно повысить эффективность операции, упростить получение и снизить себестоимость полученного материала, что в свою очередь является предпосылкой для широкого внедрения указанных выше способов лечения.

Ниже описываемые примеры иллюстрируют эффективность трансплантации материала, содержащего клетки предстательной железы, при фиброматозе матки, хроническом простатите и нарушениях мужской половой функции.

Пример 1. Больная С.Е., 52 лет, поступила в гинекологическое отделение с диагнозом: фиброматоз матки. При УЗИ на левой боковой стенке матки определяется участок фиброматоза без четких контуров средним диаметром 23 мм. Миометрий несколько неоднородной эхоструктуры. Заключение: фиброматоз тела матки. Спустя 4 суток после поступления больной была выполнена внутримышечная трансплантация материала, содержащего клетки предстательной железы, полученные от молодых кроликов. Еще через 2 дня больная была выписана из стационара под амбулаторное наблюдение. При контрольном УЗИ, проведенном через 6 недель после трансплантации, были получены следующие данные: при исследовании матки участков фиброматоза не обнаружено. Миометрий обычной структуры. Заключение: патологических изменений не выявлено.

Последующее 16-месячное наблюдение признаков рецидива фиброматоза матки не выявило.

Пример 2. Больной Б.В., 39 лет. Страдает хроническим простатитом в течение 8 лет. За последние 4 года стал отмечать значительное ослабление половой функции. Неоднократные курсы традиционного лечения у уролога и сексопатолога не дали положительного эффекта. Больному была выполнена внутримышечная трансплантация материала, содержащего клетки предстательной железы, полученные от взрослых кроликов. Уже через 2 недели после пересадки больной стал отмечать значительное улучшение общего состояния, повышение работоспособности. В течение последующих 2 месяцев у больного повысилась сексуальная активность: частота полноценных сексуальных контактов увеличилась с 2,1 в месяц до 2,5 в неделю. Столь значительное улучшение половой функции отмечалось по меньшей мере в течение 8 мес. после трансплантации.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения материала, содержащего клетки предстательной железы новорожденных, молодых и взрослых кроликов, к материалу, содержащему клетки предстательной железы, полученные предложенным способом, и к трансплантологическим методам лечения фиброматоза матки, хронического простатита и нарушений мужской половой функции путем трансплантации материала, содержащего клетки предстательной железы. Технический результат, относящийся к получению материала, содержащего клетки предстательной железы, и к собственно материалу, заключается в том, что используют предстательную железу млекопитающего, при этом извлеченную предстательную железу промывают, разрезают ее на фрагменты и засевают полученным материалом культуральные матрасы, добавляя культуральную (ростовую) среду и сыворотку млекопитающих, затем обеспечивают оптимальный режим инкубации. Технический результат, относящийся к способам лечения фиброматоза матки, хронического простатита и нарушений мужской половой функции, заключается в том, что производят трансплантацию материала, содержащего клетки предстательной железы, полученного указанным способом, при этом материал может быть трансплантирован в различные органы и ткани. 5 с. и 32 з.п. ф-лы.

1. Способ получения материала, содержащего клетки предстательной железы, заключающийся в использовании в качестве исходного материала предстательной железы млекопитающего, при этом извлеченную предстательную железу промывают, разрезают на микрофрагменты и засевают полученным материалом культуральные матрасы, добавляя культуральную (ростовую) среду и сыворотку млекопитающих, после чего осуществляют инкубацию в термостате при постоянной температуре с последующей выдержкой при более низкой температуре, отличающийся тем, что для извлечения клеток предстательной железы из фрагментов предстательной железы обеспечивают режим инкубации при постоянной температуре, находящейся в диапазоне 35 - 40^oC в течение от двух суток до шести недель с однократным снижением температуры до 4 - 25^oC и выдержкой при этой температуре, а также с однократным или периодическим снижением концентрации сыворотки млекопитающих, после чего собирают клетки предстательной железы с культурального матраса и получают материал для трансплантации. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для промывания предстательной железы используют холодный раствор Хенкса с добавлением антибиотиков. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что перед измельчением предстательной железы удаляют капсулу железы и прослойки соединительной ткани с кровеносными сосудами. 4. Материал, содержащий клетки предстательной железы, полученные из предстательной железы млекопитающего, отличающийся тем, что он получен способом по п.1. 5. Способ лечения фиброматоза матки, включающий введение биологически активных элементов, отличающийся тем, что в качестве биологически активного элемента используют материал, содержащий клетки предстательной железы, по п. 4 и осуществляют его трансплантацию. 6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют внутримышечно. 7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в прямую мышцу живота. 8. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в паренхиму печени. 9. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют через воротную вену или ее ветви. 10. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в пульпу селезенки. 11. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в полость брюшины. 12. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в большой сальник. 13. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в селезеночную артерию. 14. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в специально созданный мышечный карман. 15. Способ по п. 5, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют подкожно. 16. Способ лечения хронического простатита, включающий введение в организм биологически активных элементов, отличающийся тем, что в качестве биологически активного элемента используют материал, содержащий клетки предстательной железы, по п.4 и осуществляют его трансплантацию. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют внутримышечно. 18. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в прямую мышцу живота. 19. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в паренхиму печени. 20. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют через воротную вену или ее ветви. 21. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в пульпу селезенки. 22. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в полость брюшины. 23. Способ по. 16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в большой сальник. 24. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в селезеночную артерию. 25. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в специально созданный мышечный карман. 26. Способ по п.16, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательный железы, трансплантируют подкожно. 27. Способ лечения нарушений мужской половой функции, включающей введение биологически активных элементов, отличающийся тем, что в качестве биологически активного элемента используют материал, содержащий клетки предстательной железы, по п.4 и осуществляют его трансплантацию. 28. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют внутримышечно. 29. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в прямую мышцу живота. 30. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в паренхиму печени. 31. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют через воротную вену или ее ветви. 32. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в пульпу селезенки. 33. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в полость брюшины. 34. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в большой сальник. 35. Способ по п. 27, отличающийся тем, что материал содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в селезеночную артерию. 36. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют в специально созданный мышечный карман. 37. Способ по п.27, отличающийся тем, что материал, содержащий клетки предстательной железы, трансплантируют подкожно.