СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НЕЙТРОФИЛОВ У ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/50 

Относится к медицине, а именно к иммунологии и пульмонологии, а также может быть использован для оценки неспецифической иммунорезистентности человека и диагностики воспалительных заболеваний бронхолегочной системы (БЛС).

Известен метод определения функционального состояния фагоцитов и оценки их участия в воспалительном процессе. Этим методом является метод Маянского (см. Маянский А.Н., Галиуллин А.Г. "Реактивность нейтрафила", 1984, с.33-39). Принцип метода состоит в том, что, сталкиваясь с активированным нейтрофилом, НСТ восстанавливается в диформазан, который в виде грубодисперсных темно-синих гранул, нерастворимых в воде, откладывается внутри или на поверхности клеток. Количество выпавшего диформазана служит критерием интенсивности реакции.

Этот метод достаточно точен, однако отличается большой длительностью выполнения, требует получения крови в объеме 20 мл, используются дорогостоящие реактивы, он многоэтапен и трудоемок.

Оценка роли нейтрофилов в развитии локального воспаления сопряжена с получением биопсийного материала, что является достаточно инвазивным и в силу этого не используется в практике, а применяется только с целью дифференциальной диагностики.

Наиболее близким по технической сущности, достигаемому эффекту и заявляемому способу и выбранным в качестве прототипа является способ определения продуктов перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) (по Гаврилову А.Б.). Данный метод обладает ограниченной информативностью, так как не предусматривает анализа изопропанолрастворимых липидов, в то время как большая часть продуктов ПОЛ является интермедиатами свободнорадикального окисления фосфолипидов, экстрагируемых именно изопропанолом. Кроме того, данные, получаемые при методе-прототипе, характеризуются высокой вариабельностью и более низкой воспроизводимостью, чем предложенный нами метод, (см. Хышиктуев Б.С. "Метаболизм липидов и процессы их пероксидации при хронических неспецифических заболеваний легких", дисс. канд. мед. наук, 1990, Чита).

Задачей настоящего изобретения является обеспечение быстрой неинвазивной и точной оценки функционального статуса циркулирующих нейтрофилов и их участие в развитии воспалительного процесса бронхолегочной системе.

Техническим результатом является разработка алгоритма оценки кислородного метаболизма циркулирующих нейтрофилов и их участие в воспалительном повреждении БЛС. Указанная задача реализуется за счет того, что в известном способе оценки функционального состояния циркулирующих нейтрофилов у человека, согласно изобретению, регистрируют уровень изоропонолрастворимых продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) и по значению этого показателя рассчитывают при помощи системы эмпирических уравнений регрессии показатели функционального статуса нейтрофилов; и при снижении этого показателя ниже 0,18 (для первичных) и менее 0,25 (для вторичных продуктов) диагностируют воспалительный процесс в БЛС.

Проведенные исследования по патентным и научно-техническим источникам информации показали, что предлагаемый способ не известен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Предлагаемый способ может быть применен в любой больнице, снабженной типовым оборудованием.

Таким образом, заявляемый способ является доступным и, следовательно, практически применимым.

Предлагаемый способ диагностики осуществляется с помощью общедоступного набора лабораторного оборудования и реактивов для экстракционно-спектрофотометрического определения молекулярных продуктов ПОЛ в биологическом материале (см. И. А. Волчегорский., А.Г. Налимов, Б.Г. Яровинский Р.И., Лифшиц, Вопросы мед. химии - 1989.- N1, С. 127-131).

Заявляемый способ осуществляется следующим образом: вначале собирается КВВ через систему охлажденных трубок, затем 0,5 мл КВВ экстрагируют 5-ю мл смеси гептан-изопропанол (1:1) в закрытых пробирках при встряхивании в течение 20 мин. Липидный экстракт переносят в отдельную пробирку и разбавляют 5-ю мл смеси гептан- изопропанол 3:7, добавляют 2 мл водного раствора соляной кислоты (pH 2). После разделения фаз декантируют и отбрасывают гептановую фазу экстракта, а к водно-спиртовой фазе добавляют 1 кубический см сухого NaCl, встряхивают, после отделения водной фазы аккуратно извлекают изопропанольную фазу и подвергают ее спектрофотометрии при длинах волн 220, 232 и 278 нанометра. О содержании переокисленных липидов судят по величине индекса окисления E₂₃₂/E₂₂₀ и E₂₇₈/E₂₂₀.

Нами проведен корреляционный анализ и регрессионный анализ (таблица 1) между индексом окисления (содержание изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ) и центральными показателями функционального статуса нейтрофилов периферической крови у 30 здоровых, некурящих доноров и 30 больных хроническим бронхитом в фазе обострения.

Статистическая обработка продемонстрировала наличие достоверных взаимосвязей между уровнем первичных изопропанол- растворимых продуктов ПОЛ, с одной стороны, и показателями радикал- продуцирующей активности нейтрофилов крови, с другой стороны.

При изучении (таблица 2) было установлено одновременное снижение уровня первичных и вторичных изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ в КВВ. Таким образом, при снижении содержания изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ менее 0,18 (для первичных) и менее 0,25 (для вторичных продуктов) диагностируется воспалительный процесс в БЛС.

Изобретение относится к области медицины, частности к иммунологии. Сущность способа: путем определения индекса окисления изопропанолрастворимых продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) регистрируют уровень изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ в КВВ и при помощи эмпирически установленных уравнений рассчитывают показатели функционального состояния циркулирующих нейтрофилов, а при снижении содержания изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ менее 0,18 (для первичных) и менее 0,26 (для вторичных) от нормальных показателей диагностируют воспалительный процесс в бронхолегочной системе. Способ обеспечивает ускорение оценки функционального статуса циркулирующих нейтрофилов у человека. 2 табл.

Способ оценки функционального состояния циркулирующих нейтрофилов крови путем определения индекса окисления изопропанолрастворимых продуктов перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ), отличающийся тем, что регистрируют уровень изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ в КВВ и при помощи эмпирически установленных уравнений рассчитывают показатели функционального состояния циркулирующих нейтрофилов, а при снижении содержания изопропанолрастворимых продуктов ПОЛ менее 0,18 (для первичных) и менее 0,26 (для вторичных) от нормальных показателей диагностируют воспалительный процесс в бронхолегочной системе.