СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ Российский патент 1999 года по МПК A61D19/00 

Изобретение относится к способам искусственного осеменения животных.

Известен способ определения оптимального срока осеменения кобыл, заключающийся в том, что определение оптимального времени осеменения осуществляется за счет определения показателя светового преломления шеечной слизи, который должен быть равен 1,3380 при плодотворном осеменении (Ав. св. N 1662547, М. кл. A 61 D 19/02).

Недостатком данного способа является отсутствие учета влияния совокупных показателей состава слизи на оплодотворяющую функцию сперматозоидов и, следовательно, на результативность осеменения.

За прототип взят способ определения антиспермальных антител (проба Курцрокк - Миллера), используемый в медицине, заключающийся в том, что в период предполагаемой овуляции каплю влагалищной слизи наносят на предметное стекло и рядом на это же предметное стекло наносят каплю свежедоставленной спермы. Расстояние между каплями должно быть равно 3 мм, капли накрывают покровным стеклом, под тяжестью которого слизь и сперма приходят в соприкосновение, не накрывая друг друга. Реакцию учитывают по расположению головок сперматозоидов и способности их к хемотропизму (Пшеничникова Т.Я. Бесплодие, диагностика и лечение, Свердловск, 1982).

Недостатком данного метода является то, что взятие слизи осуществляется из влагалища, состав слизи которого неблагоприятно воздействует на сперматозоиды. Процесс культивирования невозможен вследствие быстрого высыхания исследуемых сред, взятых в малом объеме. Тяжело также создать четкую границу раздела сред.

Для устранения вышеперечисленных недостатков предлагаем способ, включающий отбор слизи, соединение со спермой и ее оценку. Новым является то, что отбор слизи осуществляют из шейки матки в период предполагаемого осеменения коров в объеме 0,5-1 мл, соединяют с качественной размороженной спермой путем наслаивания эякулята на слизь в том же объеме (0,5-1 мл), герметично укупоривают и проводят культивирование в режиме 30 - 120 мин при температуре 37 - 37,5^oC, затем из глубоких слоев слизи берется проба, оценивается, учитывая показатели подвижности и скорости движения сперматозоидов.

Взятие слизи из шейки матки наиболее приемлемо, так как шейка матки является "депо" сперматозоидов, время выживания в этом органе составляет 54 часа. Наслаивание эякулята на слизь позволяет определить способность проникновения спермиев в слизь. Отбор слизи объемом 0,5-1 мл достаточен для проведения анализа, при взятии слизи менее 0,5 мл может произойти ее высыхание во время культивирования, а более 1 мл - не всегда возможно из-за выделения ее организмом в малых количествах. Доза эякулята при искусственном осеменении составляет также 1 мл, использование большего объема эякулята экономически нецелесообразно. При герметичном закупоривании жидкость не подвергается высыханию в период культивирования в режиме 37 - 37,5^oC (температура тела коров). Время, выбранное для культивирования, 30 - 120 мин является наиболее благоприятным для протекания реакции. При меньшей экспозиции реакция спермы со слизью не будет завершена, а культивирование более 120 мин может вызвать значительные нарушения структуры сперматозоидов в силу цитотоксического действия слизи. Оптимальным является время культивирования, составляющее 50 - 60 мин.

После культивирования берется проба из толщи жидкости, т.е. из глубоких слоев слизи, т. к. при положительном влиянии слизи шейки матки на спермии, последние должны проникнуть в толщу слизи и при этом сохранить способность к прямолинейно-поступательному движению со скоростью 2 - 5 мм/мин. Данную способность спермиев рассматривают, как одно из основных качеств при оценке спермы и успешном оплодотворении.

Пример выполнения способа.

В период предполагаемого осеменения у коровы из шейки матки взяли 1 мл слизи прибором Корчака. Слизь поместили в стерильную пробирку. Размороженную качественную сперму объемом 1 мл наслоили на слизь, герметично закупорили пробирку и поставили в термостат на 50 мин при температуре 37^oC. После культивирования пипеткой из толщи слизи взяли 0,3 мл содержимого, наружные стенки пипетки протерли марлевой салфеткой, каплю жидкости нанесли на предметное стекло и накрыли покровным стеклом.

Исследование под микроскопом дало положительную реакцию, т.к. сперматозоиды двигались прямолинейно-поступательно со скоростью 3 мм/мин.

Если в слизи обнаруживаются сперматозоиды с другими типами движения, склеенные или мертвые спермии, либо полное их отсутствие (отрицательная реакция), то необходимо проверить наличие нарушений в организме самки; уточнить время осеменения коров; использовать сперму другого быка.

Данный способ позволяет повысить результативность оплодотворения за счет возможности установления причин низкой оплодотворяемости, не вызывая при этом иммунизации самки спермой быка, и, как следствие, неплодотворного осеменения, ухудшения ее состояния.

Изобретение относится к способам искусственного осеменения животных. Способ включает отбор слизи, соединение со спермой и ее оценку. Новым является то, что отбор слизи производят из шейки матки в период предполагаемого осеменения, соединяют со спермой путем наслаивания эякулята на слизь, герметично укупоривают и культивируют 30 - 120 мин при 37 - 37,5^oC. Оценку производят взятием пробы из глубоких слоев культивируемой жидкости, учитывая показатели подвижности и скорости движения сперматозоидов. Способ обеспечивает повышение результативности оплодотворения.

Способ определения результативности оплодотворения, включающий отбор слизи, соединение со спермой и ее оценку, отличающийся тем, что отбор слизи производят из шейки матки в период предполагаемого осеменения, соединяют со спермой путем наслаивания эякулята на слизь, герметично укупоривают и культивируют 30-120 мин при 37-37,5^oС, оценку проводят взятием пробы из глубоких слоев прокультивированной жидкости, учитывая показатели подвижности сперматозоидов и скорости их движения.