СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ СТАФИЛОКОККОВ Российский патент 1999 года по МПК C12N1/20 A61K39/85 C12N1/20 C12R1/44 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к разработке питательной среды для выращивания стафилококков.

Известно использование казеиногидролизатной среды с добавлением сыворотки крови, подачи стерильной углекислоты и кислорода для промышленного культивирования стафилококков /Дзагуров С.Г., Резепова М.И. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов. М.: Медицина, 1975, 222 с./.

Недостатком является сложность технического процесса промышленного культивирования стафилококков на данной среде.

За прототип взята среда N 2 Курской биофабрики, используемая в биологической промышленности для выращивания микобактерий туберкулеза и состоящая из следующих компонентов, г на 1 л дистиллированной воды: лимонная кислота 10,0; фосфорно-кислый калий двухзамещенный 5,0; лимонно-кислый аммоний 5,0; серно-кислый магний 0,5; серно-кислое железо 0,05; серно-кислый цинк 0,1; хлористый кобальт 0,002; глицерин 50,0; аспарагин 1,0; гликокол 1,0.

Среда представляет собой солевые питательные растворы, отличающиеся высокими питательными свойствами для микробов.

Попытки использовать для выращивания стафилококков данную синтетическую среду не имели положительного результата.

Пересеянная с мясопептонного бульона /МПБ/ на жидкую синтетическую среду культура стафилококков не обеспечивала надлежащий рост микроорганизмов. В отдельных колбах рост биомассы стафилококков составлял не более 2 млрд. микробных тел в 1 мл, что неэффективно.

Цель предполагаемого изобретения - разработка среды для выращивания стафилококков с большим содержанием микробных тел в 1 мл культуральной жидкости, пригодной для промышленного культивирования стафилококков при производстве стафилококковых антигенов и вакцинных препаратов.

Разработанная среда содержит компоненты в следующем соотношении, г на 1 л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; фосфорно-кислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; хлористый натрий 4,9-5,0; серно-кислый магний 4,9-5,0; серно-кислое железо 0,04-0,05; серно-кислый цинк 0,08-0,09; аспарагин 0,9-1,0; гликокол 0,9-1,0 и глицерин 30,0-31 мл.

Опыты показали, что при увеличении содержания в питательной среде хлористого натрия с 0,5 г до 5 г обеспечивалось последовательное накопление биомассы стафилококков с 2 до 4 млрд. микробных тел в 1 мл. Дальнейшее увеличение хлористого натрия в питательной среде не сопровождалось увеличением биомассы стафилококков.

Лучшие результаты по накоплению биомассы стафилококков до 8 млрд. микробных тел в 1 мл были получены на вариантах сред при уменьшении количества лимонной кислоты с 10 г до 5 г.

Увеличение содержания в питательной среде серно-кислого магния с 0,5 г до 5 г способствовало максимальному накоплению биомассы стафилококков при первом посеве до 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Последующее 4-5-кратное пассирование микробов на данной среде приводило к еще более обильному и равномерному росту микробов до концентрации 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Следующие последовательные пересевы стафилококков на жидкую солевую питательную среду не вызывали ослабления или усиления роста микроорганизмов.

Следует отметить, что в ходе поисковых опытов нами не отмечено влияние на рост стафилококков хлористого кобальта и лимонно-кислого аммония, в связи с чем они были исключены из компонентов нового варианта среды.

Таким образом, использование данного варианта жидкой солевой синтетической среды обеспечивало хороший и бурный рост стафилококков с первого дня инкубирования и позволяло при 4-5-кратном пассировании на ней микробов при плотности посева 90-100 млн. микробных тел на 1 мл среды стабилизировать и максимально повысить накопление биомассы до 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. При этом для выращивания стафилококков на данной синтетической среде не требуется подача стерильного кислорода и углекислоты, что существенно упрощает технологию получения стафилококковых антигенов и вакцинных препаратов.

Среду готовят путем последовательного растворения или предварительно смешанных компонентов в дистиллированной воде с последующей нейтрализацией аммиаком до pH 7,0-7,2 перед автоклавированием.

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для выращивания стафилококков. Среда содержит компоненты при следующем соотношении, г на 1 л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9 - 5,0; фосфорно-кислый калий двухзамещенный 4,9 - 5,0; хлористый натрий 4,9 - 5,0; серно-кислый магний 4,9 - 5,0; серно-кислое железо 0,04 - 0,05; серно-кислый цинк 0,08 - 0,09; аспарагин 0,9 - 1,0; гликокол 0,9 - 1,0 и глицерин 30,0 - 31,0 мл. Среда обеспечивает бурный рост стафилококков с первого дня инкубирования, что позволяет повысить накопление биомассы до 14 - 15 млрд. микробных клеток в 1 мл культуральной жидкости. При этом не требуется подача стерильного кислорода и углекислоты.

Среда для выращивания стафилококков, содержащая лимонную кислоту, фосфорно-кислый калий двухзамещенный, хлористый натрий, серно-кислый магний, серно-кислое железо, серно-кислый цинк, аспарагин, гликокол и глицерин, отличающаяся тем, что среда содержит компоненты в следующем соотношении, г на 1 л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9 - 5,0; фосфорно-кислый калий двухзамещенный 4,9 - 5,0; хлористый натрий 4,9 - 5,0; серно-кислый магний 4,9 - 5,0; серно-кислое железо 0,04 - 0,05; серно-кислый цинк 0,08 - 0,09; аспарагин 0,9 - 1,0; гликокол 0,9 - 1,0; глицерин 30,0 - 31,0 мл.