МОНОЭТАНОЛАММОНИЕВАЯ СОЛЬ 6-НИТРО-3H-ХИНАЗОЛОН-4-ИЛ-3-УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩАЯ АНТИОКСИДАНТНУЮ И ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТИ Российский патент 2000 года по МПК C07D239/88 A61K31/522 A61P9/10 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям и может быть использовано в медицине.

Известны структурные аналоги: производные (3,4-дигидрохиназолил-3-он-4)- карбоновые кислоты, проявляющие антиоксидантную активность (Украiна, Фармацевтичний журнал.- 1995.- N1.- С.80-82), формулы:

n=0,1; R=OH, OALk, NHR₂; R₁=H, CH₃, С₂H₅; R₂= Alk, Het
Недостатком известного аналога является отсутствие противоишемической активности.

Известен структурный аналог (прототип): моноэтаноламмониевая соль (3,4-дигидрохиназолил-3-он-4)-α- пропионовой кислоты, формулы:

проявляющая антиоксидантную активность (Украiна, Вiсник фармацii.-1995.- N3-4.-С.29-34).

Недостатком этого аналога также является отсутствие противоишемической активности.

В основу изобретения поставлена задача создания новых биологически активных веществ в ряду производных 4(3H)-хиназолона, обладающих не характерным для этого ряда антиоксидантным и противоишемическим действием на мозговую ткань.

Решение этой задачи обеспечивает моноэтаноламмониевая соль 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты, формулы:

проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активность.

Моноэтаноламмониевая соль 6-нитро-3H-хиназолон-4-ил-3- уксусной кислоты в отличие от известных аналогов содержит в положении 6 (шесть) хиназолонового ядра нитрогруппу и является водорастворимой солью, что приводит к улучшению фармакотехнологических свойств и более выраженному антиоксидантному и противоишемическому действию.

В отличие от других широкоизвестных биологических аналогов (α-токоферола ацетат, дибунол, пирацетам) соединение по изобретению оказывает антиоксидантное действие на всех этапах развития ишемии, повышая активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного α-токоферола и снижая уровень накопления продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) с одновременным уменьшением расходa макроэргических фосфатов и углеводов.

Получают заявленное соединение взаимодействием 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты с моноэтаноламином в среде этанола.

Пример: 2,49 г (0,01 моль) 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты растворяют в 20 мл этанола при нагревании, к полученному раствору прибавляют 0,67 г (0,011 моль) свежеперегнанного моноэтаноламина и реакционную смесь кипятят 10-15 минут, последние 3 минуты с активированным углем.

Уголь отфильтровывают, раствор охлаждают, образовавшийся осадок отфильтровывают, на фильтре промывают ацетоном и сушат. Получают целевой продукт с выходом 89%. Желтое кристаллическое вещество с Т_плавл. = 191-196^oC (интервал плавления 2^oC) (из спирта), растворимо в воде, спирте, диоксане, ДМФА.

Найдено, %: С 46,9, H 4,9; N 17,7,
Вычислено, %: С 46,5 H 4,6; N 18,1; C₁₂H₁₄N₄O₆.

В ИК-спектрах наблюдаются характеристические полосы поглощения карбонильных групп в области 1720-1600 см¹, а также валентные колебания нитрогруппы в области 1500 см'¹ (ассим.) и 1450 см'¹ (сим.).

Индивидуальность соединения подтверждена методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Silufol" в системах растворителей: бензол - уксусная кислота - вода (2:8:1), бутанол- уксусная кислота - вода (4:1:5). Значение R_f•100 равно 74 и 78 единиц соответственно.

Острая токсичность соединения при внутрибрюшинном введении мышам равна 2890 мг/кг.

Антиоксидантную и противоишемическую активности синтезированного соединения исследовали на модели острого нарушения мозгового кровообращения на белых крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 г. Исследуемые животные были разбиты на 7 экспериментальных групп по 6 животных в каждой группе. Одностороннюю перевязку общей сонной артерии проводили под этаминал-натриевым наркозом (этаминал-натрий вводился в дозе 40 мг/кг) путем выделения сосуда и наложения на него лигатуры. Исследуемое вещество вводили в дозе 1/100 ЛД₅₀, дибунол и пирацетам в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг соответственно внутрибрюшинно, а α-токоферол в дозе 50 мг/кг подкожно, 1 раз в сутки в течение 4 дней параллельно формированию ишемии. Через 2 часа после последнего введения исследуемого вещества животные выводились из эксперимента путем декапитации.

В тканях мозга определяли содержание конечных и начальных продуктов ПОЛ, активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного α-токоферола, интенсивность углеводного и энергетического обмена.

Использовались следующие методы исследования: определение уровня диеновых конъюгатов (ДК) методом прямой спектрофотометрии гептановой вытяжки (В.С. Коган и др. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. - М. ; Медицина, 1986); определение малонового диальдегида (МДА) по тесту с тиобарбитуровой кислотой (Л.И.Андреева и др. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой //Лаб. дело.- 1988.- N11.- С. 41 - 43); определение супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари С. и др. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения //Лаб. дело.- 1985.- N11.- С. 678-681); определение активности глутатионпероксидазы (ГПР) (Гаврилова А.Р. и др. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата //Лаб. дело. - 1986. - N12.- С. 721-723): определение каталазы (Королюк М.А. и др. Метод определения активности каталазы //Лаб. дело.- 1988.- N1.- С. 16-19): определение содержания субстратов углеводного обмена (Методы биохимических исследований /Под ред. Прохоровой М.И. - Л.: Из-во ЛГУ, 1982.- 278 с.); определение содержания макроэргических фосфатов хроматографически (Захарова Н. Б. , Рубин В. И. Тонкослойная хроматография нуклеотидов на пластинках "Силуфол" //Лаб. дело.- 1980.- N12.-С. 735-738.); определение α-токоферола спектрофотометрически (Способ определения α-токоферола в биологическом материале /И.Ф.Беленичев и др. //Тез. докл. IV научного съезда специалистов по клинической лаб. диагностике респуб. Беларусь, Гродно.- 1992.-С. 182.).

Результаты экспериментов, приведенные в таблицах 1,2,3,4, показывают, что в условиях односторонней перевязки общей сонной артерии происходит угнетение активности ферментов антиоксидантной защиты в тканях головного мозга, накопление в ней содержания продуктов ПОЛ, нарушение анаэробных и аэробных путей образования энергии, снижение содержания адениловых нуклеотидов, т.е. наблюдалось уменьшение утилизации кислорода энергопродуцирующими системами и ускорение процессов свободнорадикального окисления (СРО).

Введение заявляемого соединения на фоне ишемии головного мозга приводило к активации антиоксидантных систем защиты, что проявилось в увеличении активностей СОД в 2,9 раза, каталазы в 1,9 раза, ГПР в 0,68 раза, что выгодно отличает изучаемое соединение от антиоксидантов "прямого" действия - дибунола и α токоферола ацетата (таблица 1). Под влиянием соединения существенно снижалось содержание продуктов ПОЛ на 45-54% (таблица 2).

Как показывают результаты исследований, соединение активирует как анаэробные, так и аэробные пути образования энергии (повышая уровень пирувата и малата на 58,3, 43,7% соответственно, таблица 3), при этом наблюдалась тенденция к повышению уровня адениловых нуклеотидов (АТФ и АМФ на 42,7%, 54,5% соответственно, таблица 4).

Ингибируя процессы ПОЛ и нормализуя отдельные звенья углеводного обмена, синтезированное соединение оказывает выраженный антиоксидантный и протекторный эффекты на клетки мозга, превышая действие таких антиоксидантов, как α-токоферола ацетат и дибунол, приближаясь по силе действия к пирацетаму - противоишемическому препарату.

Изобретение относится к новому соединению - моноэтаноламмониевой соли 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты ф-лы (I), которая проявляет антиоксидантную и противоишемическую активности и может найти применение в медицине. 4 табл.

Моноэтаноламмониевая соль 6-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты формулы

проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активности.