БРОМИД 1-(β--ФЕНИЛЭТИЛ)-4-(П-ДИМЕТИЛАМИНОБЕНЗИЛИДЕНАМИНО)-1,2,4-ТРИАЗОЛИЯ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИОКСИДАНТНЫМ, ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКИМ, β--АДРЕНОБЛОКИРУЮЩИМ, УТЕРОТОНИЧЕСКИМ И СНИЖАЮЩИМ ВНУТРИГЛАЗНОЕ ДАВЛЕНИЕ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1999 года по МПК C07D249/08 A61K31/41 

Изобретение относится к медицине и фармации, в частности к новым биологически активным соединениям, являющимся основой для создания лекарственных препаратов с широким спектром биологической активности.

Известны лекарственные препараты обладающие антиоксидантной активностью: дибунол, α- токоферол (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1994, т. 2, с. 213 - 215, 34 - 36).

Указанные препараты не обладают противоишемическим, адреноблокаторным, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действиями. Кроме того, у них недостаточно высока антиоксидантная активность.

Известен лекарственный препарат пирацетам, обладающий противоишемической активностью (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1994, т. 1, с. 132 - 135).

Недостатком этого препарата является узкоограниченность биологической активности и недостаточно высокая противоишемическая активность.

Известно применение β- адреноблокаторного средства - анаприлин (Методические рекомендации по экспериментальному доклиническому изучению β- адреноблокирующих соединений. - М., 1984, С. 16). Недостатком является узкоограниченность применения и малая эффективность.

Известен лекарственный препарат обзидан, который обладает β- блокирующим действием, снижает внутриглазное давление, но не оказывает антиоксидантного действия (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1994, т. 1, с. 330 - 332).

Известны близкие по строению биологически активные вещества производные 1,2,4-триазола (патенты Украины N 2446, 2444, 2439, кл. C 07 D 249/08, A 61 K 31/41).

Указанные аналоги обладают антикоагулянтной, фибринолитической и антиишемической активностью, но ни один из них не обладает антиоксидантным, β- адреноблокаторным, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действиями.

Ближайшим структурным аналогом предлагаемого соединения является бромид 1-/1-карбоксиэтил/-4/-п-диметиламинобензилиденамино/-1,2,4- триазолия, обладающий антиоксидантной активностью (патент Украины N 2445, кл. C 07 D 249/08).

Недостатком этого аналога является узкоограниченный спектр биологической активности.

В основу изобретения поставлена задача создания нового биологически активного вещества с максимально расширенным спектром фармакологической активности, превосходящей по эффективности известные лекарственные препараты.

Решение этой задачи обеспечивает бромид 1-( β- фенилэтил)-4- (п-диметиламинобензилиденамино)-1,2,4-триазолия /AE-401/, формулы

обладающий антиишемическим, антиоксидантным, β- адреноблокаторным, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действиями.

Заявляемое соединение отличается от структурного аналога наличием в 1-м положении β- фенилэтильного радикала вместо 1-карбоксиэтильного.

Для иллюстрации данного изобретения приводим пример постадийного получения заявляемого соединения.

Пример 1. Стадия 1. Бромид 1-( β- фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия. Смесь, состоящую из 5,04 г (0,06 м) 4-амино-1,2,4-триазола и 11,1 (0,06 м) β- бромэтилбензола в 30 мл нитрометана кипятят в течение 8 ч. После этого растворитель отгоняют и выделяют целевой продукт. Полученное соединение перекристаллизовано из 15 мл бутанола.

Выход: 15,7 (92%). Желтоватое вещество, растворимое в низких спиртах, диметилформамиде, диоксане, нерастворимо в гексане и эфире.

Т.пл. 93 - 97^oC.

Найдено, %: C 44,4; H 4,9; Br 29,8; N 20,7;
C₁₀H₁₃BrH₄.

Вычислено, %: C 44,6; H 4,86; Br 29,7; N 20,8.

ИК-спектр: 1610 см^-1 ( ν C=N); 3000 см^-1 ( γ CH ар); 3250 см^-1 (NH₂).

Пример 2. Стадия 2. Бромид 1-( β- фенилэтил)-4-амино-1,2,4-триазолия растворяют в 20 мл этанола. К полученному раствору прибавляют 2,98 г (0,02 м) п-диметиламинобензальдегида и 2 - 3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. Реакционную смесь оставляют на сутки, выделенный продукт перекристаллизовывают из смеси вода-этанол 6:1 либо из смеси ацетон-этанол 5:1.

Выход: 6,8 г (85%). Желтое морковно-желтое) кристаллическое вещество, трудно растворимо в воде, растворимо в низших спиртах, диметилформамиде, нерастворимо в гексане и эфире.

Т.пл. 168 - 171^oC.

Найдено, %: C 56,8; H 5,2; Br 20,2; N 17,5;
C₁₉H₂₂BrN₅.

Вычислено, %: C 57,0; H 5,5; Br 19,95; N 17,5.

ИК-спектр: 1610 см^-1 ( ν C=N); 3000 см^-1 ( γ CH ар.).

Заявляемое соединение обладает антиоксидантной, β- адреноблокирующей, противоишемической, утеротонической активностью и снижает внутриглазное давление.

ЛД₅₀ соединения AE-401 составляет 165 (140 - 190) мг/кг при внутрибрюшинном введении крысам.

Антиоксидантную и противоишемическую активность заявляемого соединения изучали на модели ишемии головного мозга, вызванную односторонней перевязкой общей сонной артерии у белых крыс линии Вистар, массой 280 - 300 г, обоего пола. Соединения и эталоны сравнения вводились один раз в сутки, в течение 4 суток, параллельно формированию ишемии, следующим образом: AE-401, в дозе 1,65 мг/кг, внутрибрюшинно; дибунол - 50 мг/кг, внутрибрюшинно; α- токоферол - 50 мг/кг, подкожно; пирацетам - 100 мг/кг, внутрибрюшинно. На 4 сутки, после последнего введения препаратов, животных декапитировали. Для исследования брали кусочки ишемизированного полушария головного мозга.

Об антиоксидантной активности исследуемого соединения судили по снижению накопления в тканях головного мозга продуктов свободно-радикального окисления - диеновых конъюгатов (ДК) (Коган В.С., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. - М.: Медицина, 1986 - 260 с.), триенкетонов (ТК) (Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. - М.: Медицина, 1989, 368 с.), малонового диальдегида (МДА) (Андреева Л. Н. , Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой //Лаб. дело, 1988, N 11, с. 41 - 44), а также по снижению торможения активности антиоксидантных ферментов - супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари С., Чабай, Секей И. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения в биологических материалах //Лаб. дело, 1986, N 11, с. 678 - 681), каталазы (Королюк М.А. Способ определения каталазы //Лаб. дело, 1988, N 1, с. 16 - 18), глутатионпероксидазы (ГПР) (Гаврилова А.Р., Хмара Н. Ф. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщенных концентрациях субстрата //Лаб. дело, 1986, N 12 с. 721 - 723), а также по сохранению запасов эндогенного α- токоферола (Беленичев И.Ф., Тишкин В.С. Способ определения α- токоферола в биологическом материале //Тез.докл. 4 науч. съезда специалистов по клинической лабораторной диагностике республики Беларусь, 17 - 18 сентября 1992 г., г. Гродно: Б.И., 1992, с. 72).

О противоишемической активности заявляемого соединения судили по нормализации некоторых показателей углеводного обмена - лактата, пирувата и малата (Современные методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) /Под ред. М.И. Прохоровой. Л.: Изд-во Ленинградского университета. - 1982. - 272 с.), а также по снижению гиперферментемии церебрального изоэнзима креатинфосфокиназы (ВВ-КФК) (Яровая Г.А., Доценко В.Л., Заболоцкий Н.Н. Распределение изоферментов методом ионно-обменной хроматографии на микроколонках //Методы разделения и анализа в биохимии. - М. РИОЦИОЛУВ, 1982, с. 37 - 40).

Как видно из данных, представленных в табл. 1 и 2, заявляемое соединение снижает образование продуктов свободно-радикального окисления: ДК - на 49,3% ТК - на 55,7%, МДА - на 55,9% (а известные антиоксиданты α- токоферол и дибунол на 4,2 и 18,7%, на 19,3 и 27,4%, на 23,7 и 29,2% соответственно), каталазы на 74,4%, ГПР на 223,0%, защищает запасы α- токоферола на 280,4% ( α- токоферол и дибунол практически не влияют на активность антиоксидантых ферментов, защищают запасы α- токоферола на 57,2 и 29,4% соответственно.

Из данных, представленных в табл. 3, видно, что заявляемое соединение снижает уровень лактата на 28,9%, и повышает уровень пирувата на 90,9%, малата на 70%, тем самым нормализуя отдельные звенья углеводного обмена (противоишемическое средство пирацетам снижает лактат на 14,9%, повышает уровень пирувата и малата на 72,7% и 85% соответственно); снижает гиперферментемию ВВ-КФК на 50% (пирацетам на 21,5%).

Таким образом, новое соединение бромид 1-( β- фенилэтил)-4-(п-диметиламинобензилиденамино)-1,2,4-триазолия превышает по выраженности антиоксидантного эффекта дибунол и α- токоферол, а по выраженности противоишемического действия - пирацетам.

β- Адреноблокирующая активность изучалась по снижению тахикардии, вызванной изадрином (Метод. рекомендации по экспериментальному доклиническому изучению β- адреноблокирующих соединений, предлагаемых для клинических испытаний в качестве антиангинальных, антиаритмических, антигипертензивных и антиглаукомных средств. - М., 1984. - 16 с.). Исследуемое соединение вводили внутрибрюшинно в дозе 2 мкг/кг, анаприллин в дозе 2,54 мкг/кг после введения изадрина.

Как видно из данных, представленных в табл. 4, соединение AE-401 снижает тахикардию, вызванную изадрином на 27,8%, а эталонный β- адреноблокатор анаприллин - на 12,1%.

Таким образом, по выраженности β- адреноблокирующей активности, соединение AE-401 превосходит эталонный β- адреноблокатор.

Сравнительная оценка утеротонического влияния нового соединения AE-401 и β- адреноблокатора обзидана проведена на модели изолированного рога матки крысы. Опыты выполнены на самках крыс линии Вистар массой 220 - 240 г. За 24 ч до опыта животным внутримышечно вводили диэтилстильбестрол в дозе 0,1 мг/кг. После обескровливания под эфирным наркозом препарированный рог матки помещали в ванночку с раствором Локка при температуре 37^oC. Исходная нагрузка составляла 750 мг. Регистрацию сокращений рога матки осуществляли с помощью механотрона 6 мх1С и самописца Н 388-1. Установившиеся спонтанные сокращения подавляли добавлением в раствор адреналина в концентрации 1•10^-7 г/мл. Наблюдали дозозависимую способность восстанавливать сократительную деятельность матки при различных концентрациях обзидана и соединения AE-401. Для оценки результатов использовали интегральный показатель - эффективность сократительной деятельности рассчитываемый по формуле:

где E - эффективность контрактильной способности матки, выраженная в деловых единицах; ∑ - знак суммы; A - амплитуда единичного сокращения; K - коэффициент (определяется калибровкой); t - время регистрации гистерограмм; r - длительность схватки.

На основании полученных данных строили кривую доза-эффект, по которой находили основные характеристики лекарственного вещества: ЕД₅₀ (средняя эффективная доза). ЕД₇₀ (верхняя точка линейного участка кривой). ЕД₁₀₀ (субмаксимальная доза, которая приведена в табл. 5).

Характеристики кривой доза-эффект свидетельствуют, что для соединения AE-401 присуще более крутое нарастание фармакологического эффекта и его субмаксимальная доза (доза, вызывающая полное восстановление сократительной функции матки) ниже, чем у обзидана.

Таким образом, соединение AE-401 обладает выраженным утеротоническим действием и по силе своего эффекта превышает известный β- адреноблокатор обзидан.

Фармакологическую активность соединения AE-401 по снижению внутриглазного давления изучали на модели простагландиновой гипертензии у кроликов породы "Белый великан". В работе исследовали действие препаратов на трех группах животных с модельной патологией: 1 группа - применение 0,25% AE-401; 2 группа - 0,1% обзидан; 3 группа - контрольная. Изучаемый препарат инстиллировали в правый глаз кролика, а через 60 мин в оба глаза субконъюнктивально вводили 0,1 мл (0,5 мл) простагландина F (Бунин А.Я., Яковлев А.А., Кошлев Н. А. //Вест.офтальмол. - 1976. - N 2. - С. 20 - 25). Внутриглазное давление (ВДГ) измеряли через каждый час, на протяжении 5 ч. Сравнивали показатели экспериментального правого и контрольного левого глаза, в который закапывали физиологический раствор. Офтальмотонус определяли тонометром Маклакова (Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому изучению β- адреноблокирующих соединений, предлагаемых для клинических испытаний в качестве антиангинальных, антиаритмических, антигипертензивных и антиглаукомных средств. - М., 1984. - 16 с.). Изучали истинное ВГД (Po), продукцию водянистой влаги (F). Динамика гидродинамических показателей под влиянием инстилляций 0,25% AE-401 и 0,1% обзидана при простагландиновой гипертензии представлена в табл. 6. Как видно из табл. 6, через 1 ч после введения простагландина отмечается подъем истинного ВГД при инстилляции AE-401 на 30%, обзидана на 22%, а в контрольных глазах на 42%. Через 2 ч после введения простагландина истинное ВГД при инстилляции AE-401 остается повышенным на 10%, на фоне обзидана - возвращается к исходному уровню, а в контрольных глазах остается повышенным на 30%. При дальнейшем наблюдении отмечается уменьшение истинного ВГД ниже исходного значения при инстиляции обоих препаратов, в то время как в контрольных глазах отмечалось повышение истинного ВГД на 4,7%.

Соединение AE-401 уменьшает продукцию водянистой влаги в первые 3 ч в среднем в 1,3 раза, а на четвертом часу в 2,2 раза по сравнению с контролем. Введение обзидана уменьшало продукцию влаги в 1,8 - 1,9 раза в течение первых двух часов.

Таким образом, соединение AE-401 обладает антиглаукомным действием, превышая эталонный препарат как по силе, так и по длительности эффекта.

Таким образом, заявляемое соединение AE-401 обладает антиоксидантным, противоишемичеким, β-адреноблокирующим, утеротоническим, снижающим внутриглазное давление действием и по силе эффекта превосходящим известные фармакологические эталоны.

Бромид 1- (β--фенилэтил) -4- (п-диметиламинобензилиденамино) - 1,2,4-триазолия формулы, приведенный в описании, обладает антиоксидантным, противоишемическим, β-адренноблокирующим, уреротоническим и снижающим внутриглазное давление действием. 6 табл.

Бромид1-(β-фенилэтил)-4-(п-диметиламинобензилиденамино)-1,2,4-триазолия, формулы

обладающий антиоксидантным, противоишемическим, β-адреноблокирующим, утеротоническим и снижающим внутриглазное давление действием.