СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МАЛОЙ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения функционального состояния печени, а именно выявления нарушения детоксицирующей /обезвреживающей/ функции печени.

Известна важнейшая роль детоксицирующей функции печени в формировании резистентности организма. Нарушение ее способствует возникновению заболеваний и более тяжелому их течению. Поэтому оценку детоксицирующей функции печени используют с целью прогноза в профилактической и клинической медицине.

Существуют различные способы оценки детоксицирующей функции печени. К ним относятся тесты, характеризующие поглотительно-выделительную функцию печени. Их принцип заключается в том, что в вену вводят раствор красителя и через различные промежутки времени в крови определяют концентрацию краски /А. И. Хазанов. Функциональная диагностика болезней печени. - М.: Медицина, 1988, стр. 79-85/. Способы информативны, но недостаточны. Кроме того, они травматичны, поскольку требуют неоднократного взятия венозной крови у пациента.

Среди способов оценки обезвреживающей функции печени большое значение придают определению активности ферментов биотрансформации как наиболее эволюционно совершенному механизму детоксикации организма.

Среди ферментов биотрансформации наиболее широкими функциями обладают ферменты 1 фазы, которые детоксицируют подавляющее большинство ксенобиотиков. Прежде всего к ним относится монооксигеназная система печени с цитохромом Р-450, активность которой в клинических условиях определяют по антипириновому тесту. При замедлении периода полувыведения антипирина судят о снижении детоксицирующей функции печени и наличии малой печеночной недостаточности. Способ информативен, но недостаточен.

За прототип изобретения принят способ оценки детоксицирующей функции печени, включающий определение активности НАД-алкогольдегидрогеназы /НАД-АДГ/сыворотки крови/ А.И. Хазанов. Функциональная диагностика болезней печени. - М.: Медицина, 1988, стр. 74-75/.

Способ заключается в том, что в сыворотке крови определяют активность НАД-алкогольдегидрогеназы /НАД-АДГ/и при ее повышении судят об активации детоксицирующей функции печени.

Способ выявляет разрушение печеночных клеток /синдром цитолиза/, однако он не обеспечивает выявления малой печеночной недостаточности, поскольку не позволяет оценить адекватность увеличения активности данного детоксицирующего фермента.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет повышения информативности.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе оценки детоксицирующей функции печени, включающем определение активности НАД-алкогольдегидрогеназы сыворотки крови, дополнительно определяют активность НАДН-алкогольдегидрогеназы, рассчитывают отношение второго к первому и при величине соотношения ниже 2,45 судят о наличии малой печеночной недостаточности.

Признак является новым, поскольку определение активности НАДН-алкогольдегидрогеназы /НАДН-АДГ/и ее отношения к активности НАД-АДГ для выявления малой печеночной недостаточности не использовались.

Обоснованием предлагаемого признака являются следующие научные данные. Известно, что наибольшее количество АДГ сосредоточено в печени человека. АДГ катализирует обратимое превращение алкоголей в соответствующие альдегиды и кетоны. Данная реакция протекает с НАД как кофактором. Превращение альдегидов и кетонов в спирты, также катализируемое АДГ, протекает с НАДН в качестве кофактора. В физиологических условиях реакция смещена в сторону восстановления высокореактогенных альдегидов до спиртов, поскольку альдегиды оказывают гепатотоксический и нейротоксический эффект. Поэтому можно предполагать, что преобладание НАД-зависимой реакции над НАДН-зависимой реакцией АДГ, свидетельствует о смещении баланса в сторону образования токсичных продуктов, нарушении детоксицирующей функции печени и наличии малой печеночной недостаточности.

Работоспособность способа доказана на репрезентативном материале путем верификации с характером течения гастроэнтерологических заболеваний и с показателями антипиринового теста.

Обследовано 10 здоровых детей и 111 детей с гастродуоденитом /ХГД/, атопическим дерматитом /АД/ и хроническим гепатитом/активным-ХАГ и персистирующим-ХПГ/. Проведено определение активности НАД-АДГ, НАДН-АДГ сыворотки крови, рассчитано соотношение НАДН-АДГ/НАД-АДГ. Показатели активности алкогольдегидрогеназы представлены в таблице.

Как видно из таблицы, активность обеих форм алкогольдегидрогеназы при заболеваниях органов пищеварения увеличивается, и степень увеличения тем больше, чем больше вовлечена в патологический процесс печень. В то же время соотношение форм фермента может меняться разнонаправленно, при этом аллергические состояния характеризуются тенденцией к преобладанию активности НАДН-АДГ, а заболевания печени - к преобладанию активности НАД-АДГ. Однако во всех группах встречаются дети, у которых соотношение НАДН-АДГ/НАД-АДГ ниже нормы в сигмальном диапазоне, т.е. ниже 2,45. При ХГД и АД такие дети составляют 32%, при заболеваниях печени - 70%. Большая часть детей этих детей имеет тяжелое течение заболевания независимо от вида патологии. Коэффициент сбалансированности обеих форм фермента коррелирует с величиной периода полувыведения антипирина /ч= -0,51, p<0,05/, что характеризует его снижение как признак малой печеночной недостаточности относительно метаболизма спиртов, альдегидов и кетонов. В то же время он является чувствительным критерием характера течения заболевания. Например, при АД при легком, средне-тяжелом и тяжелом течении заболевания низкий период полувыведения антипирина встречается в 40,50 и 70% случаев, высокая активность НАД-АДГ соответственно 44,45 и 66% случаев, высокая активность НАДН-АДГ в 67,77 и 83% случаев, низкий коэффициент сбалансированности встречается соответственно в 2, 8 и 45%.

Способ осуществляют следующим образом.

У обследуемого натощак забирают венозную кровь в количестве 2 мл. Для исследования используют сыворотку.

Активность НАД-АДГ определяют по образованию НАДН. Реакционная смесь содержит 2,7 мл глицин-NaOH буфера 0,1М pH 9,0, 0,4 мл сыворотки, 0,1 мл 96% зтанола и 0,1 мл 21,2 мМ раствора НАД. Реакцию запускают НАД. Изменение оптической плотности регистрируют при длине волны 340 нм при запуске реакции и через 1 мин.

Активность НАДН-АДГ определяют по убыли НАДН. Реакционная смесь содержит 2,0 мл фосфатного буфера 0,3 М pH 7,4, 0,2 мл сыворотки, 0,1 мл 4% раствора формалина и 0,1 мл 1,4 мл раствора НАДН. Реакцию запускают НАДН. Изменение оптической плотности регистрируют при длине волны 340 нм при запуске реакции и через 1 мин.

Расчет активности фермента ведут по формуле

где A - активность фермента в нМоль/мин х мл
E - изменение оптической плотности за 1 мин
V - общий объем реакционной смеси в кювете
1000 - коэффициент пересчета
6,22 - коэффициент молярной экстинции для НАД и НАДН при длине волны 340 нм
a - объем вносимой сыворотки
t - время реакции в мин.

Затем рассчитывают соотношение НАДН-АДГ/НАД-АДГ и при его значении ниже 2,45 судят о наличии малой печеночной недостаточности.

Примеры конкретного исполнения даны в виде выписок из историй болезни.

Пример 1.

Сергей Г. , 6 лет /история болезни N 1344/. Поступил в клинику ННИИДГЭ 30.05.94 г. с диагнозом; атонический дерматит, средне-тяжелое течение, стадия обострения. При поступлении имело место поражение кожи, локтевых и подколенных сгибов, шеи; беспокоил сильный приступообразный зуд. В указанных участках кожи отмечалась гиперемия, инфильтрация, папулезная сыпь, экскориации, трещины, серозно-кровянистые корочки. В сыворотке крови определили активность НАД-АДГ и НАДН-АДГ, которая составила 5,30 и 23,10 нМ/мин х мл. Соотношение оказалось равным 4,36 и свидетельствовало об отсутствии малой печеночной недостаточности. Сделан прогноз о благоприятном течении заболевания. В итоге комплексной терапии достигнуто клиническое выздоровление, при этом отмечался полный регресс кожных проявлений и исчезновение жалоб. В течение 6 месяцев после проведенного лечения рецидивов заболевания не было.

Пример 2.

Катя С, , 7 лет /история болезни N 58/. Поступила в клинику ННИИДГЭ 10.01.94 г. с диагнозом: атопический дерматит, средне-тяжелое течение, стадия обострения. При поступлении отмечалось поражение кожи локтевых и подколенных сгибов, за ушами; беспокоил сильный приступообразный зуд. В пораженных очагах имела место гиперемия, инфильтрация с выраженной лихенизацией, экскориации, серозно-геморрагические корочки. Активность НАД-АДГ составила 6,60 нМ/мин х мл, активность НАДН- АДГ - 16,1 нМ/мин х мл, соотношение НАДН-АДГ/НАД-АДГ - 2,44, что свидетельствовало о наличии малой печеночной недостаточности. Сделан прогноз о неблагоприятном характере течения заболевания. После общепринятой терапии наступило клиническое улучшение; в ходе дополнительного лечения, проведенного амбулаторно, было достигнуто клиническое выздоровление. Однако в течение 6 месяцев после проведенной терапии 2 раза отмечались рецидивы заболевания, при этом выявлена тенденция перехода средне- тяжелого характера течения в тяжелый.

Использование предлагаемого способа выявления малой печеночной недостаточности позволяет получить следующий положительный эффект:
- расширение информации о состоянии детоксицирующей функции печени
- доступность для врача выявления малой печеночной недостаточности
- обеспечение прогноза течения заболеваний
- новый подход к коррекции нарушений детоксицирующей функции печени.

Способ может быть использован в медицине для определения функционального состояния печени, а именно для раннего выявления малой печеночной недостаточности. Определяют активность НАД-алкогольдегидрогеназы сыворотки крови и активность НАДН-алкогольдегидрогеназы, рассчитывают отношение второго к первому и при величине соотношения ниже 2,45 судят о наличии малой печеночной недостаточности. Способ обеспечивает положительный эффект в виде расширения информации о состоянии детоксицирующей функции печени. 1 табл.

Способ выявления малой печеночной недостаточности, включающий определение активности НАД-алкогольдегидрогеназы сыворотки крови, отличающийся тем, что дополнительно определяют активность НАДН-алкогольдегидрогеназы, рассчитывают отношение второго к первому и при величине соотношения ниже 2,45 судят о наличии печеночной недостаточности.