СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРПЛАЗИИ, ДИСПЛАЗИИ И РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/68 G01N33/52 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам гистологической дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазий и рака предстательной железы.

Проблема ранней и точной диагностики гиперпластических состояний предстательной железы (доброкачественного компенсаторного процесса), диспластических изменений эпителиальной ткани и рака предстательной железы становится наиболее актуальной в современной онкологии в связи с неуклонным ростом показателей заболеваемости и смертности мужчин от карцином предстательной железы. Современные инструментальные методы исследования предстательной железы (ультразвуковые и др.) не во всех случаях дают достаточную информацию для проведения дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных процессов в железе. В связи с этим сохраняется необходимость в дальнейшей разработке новых высокоинформативных методов гистологической и цитологической диагностики заболеваний предстательной железы.

Известны различные методы морфологической диагностики опухолей предстательной железы, включающие в себя способы гистологической и цитологической диагностики, а также способ электронной микроскопии (Райхлин Н.Т., Давид Г., Лапиш К., Ультраструктура опухолей человека. Руководство для диагностики. - М. : Медицина, 1981, с.280-292), заключающийся в определении степени дисдифференцировки клеток по изменению их ультраструктур. Однако известный способ является дорогостоящим, трудоемким и недостаточно информативным.

В качестве ближайшего аналога принят способ гистологической диагностики гиперплазии, дисплазии и рака предстательной железы (Патологоанатомическая диагностика опухолей человека. М., 1982, стр. 313-317). Способ включает в себя микроскопическое исследование гистологических срезов биоптатов ткани предстательной железы, окрашенных гематоксилином и эозином, подробное описание гистологической картины среза и постановку патологогистологического диагноза, с использованием руководств, атласов и международных гистологических классификаций, основанный на подробных описаниях и сравнениях микроскопической картины среза биоптата с типичными изображениями опухолей и опухолеподобных образований предстательной железы.

Согласно требованиям Международной гистологической классификации опухолей предстательной железы (Всемирная Организация здравоохранения. Женева, 1982) в числе эпителиальных опухолей выделяют доброкачественные и злокачественные новообразования, в числе последних: аденокарциномы (мелкоацинарная, крупноацинарная, криброзная, солидно-трабекулярная и другие), переходноклеточный рак, плоскоклеточный рак и недифференцированный рак. Диагностика гиперплазий и дисплазий предстательной железы в руководствах классифицируется следующим образом: нодозная гиперплазия (аденома, гипертрофия), которая может быть железистой, аденоматозной, стромальной и смешанной, а также атипическая гиперплазия и дисплазия. При диагностике указанных форм доброкачественных новообразований допускается субъективизм и подмена понятий метаплазии и дисплазии.

Однако известный способ не является точным. Он не дает возможности достоверно дифференцировать доброкачественные новообразования - гиперплазии от начинающихся диспластических процессов. Отсутствие объективных критериев диагностики ведет к субъективизму, к плохой воспроизводимости диагноза разными специалистами, не позволяет своевременно выявлять переходную стадию опухолеобразования и проводить рациональную лечебную тактику.

Задачей изобретения является создание объективного и точного способа дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазий и раков предстательной железы.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазий и рака предстательной железы, включающем гистологическое исследование срезов биоптатов, срезы биоптатов окрашивают по Фельгену и проводят микротелефотометрическое определение содержания дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в ядрах интерфазных клеток, росткового слоя, формирующего пролиферационный пул клето, и вычисляют индекс накопления ДНК - средний взвешенный показатель на одно ядро в единицах плоидности, и при его значениях от 2,2 до 3,7 диагностируют гиперплазию, от 3,8 до 6,5 - дисплазии, а от 6,6 и выше - разные формы рака предстательной железы. При значениях индекса накопления ДНК 3,8-4,7 диагностируют легкую степень дисплазий, 4,8-5,5 умеренную и при 5,6-6,5 - тяжелую степень дисплазий эпителия предстательной железы.

Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат. Способ обладает высокой точностью и объективностью. Он дает возможность при любых подозрениях патологоанатома на развитие патологической клеточной пролиферации точно определить ее или доброкачественный или злокачественный характер, а также установить тяжесть диспластического процесса, от легкой до тяжелой. Пограничные значения индекса накопления ДНК в ядрах эпителиальных клеток исследуемой популяции указывают на переход новообразования от доброкачественного к злокачественному состоянию. Эти данные позволяют разработать своевременную и рациональную терапию патологии предстательной железы.

Технический результат достигается за счет того, что используются высокоинформативные критерии - изменение содержания ДНК в ядрах клеток эпителиальной ткани. ДНК является носителем генетической информации, обеспечивающей воспроизводство соответствующих нормальных клеточных популяций, а при появлении в геноме онкогена и работе промотора - формирование нового клона клеток с другими биологическими свойствами, проявляющимися в злокачественном росте. Предлагаемый впервые подход определения содержания ДНК в ядрах клеток ростковой популяции, выявляемой только на гистологических срезах, существенно отличает изобретение от аналогов, хотя уже имеется опыт изучения отдельных клеток и их скоплений на цитологических и гистологических препаратах или с использованием метода проточной фотометрии взвеси клеток (Автандилов. Введение в количественную патологическую морфологию. М., 1980, стр.173-187; Mellen et al. Zbl. Pathol. l994, 140:237-242); Steinbeck. Proc. Natl. Sci, USA, 1996, 93:479-484; Acta oncologica, 1997, 36, l:3-12, Eur.J. Histochem, 1997, 41:243-254; Haroske et al. Acta stereologica, 1998, 17/3:357-382).

Способ диагностики, основанный на определении содержания ДНК в ядрах эпителиальных клеток с применением микротелефотометрии для новообразований предстательной железы, ранее не применялся. Впервые разработаны точные количественные критерии: индекс накопления ДНК, позволяющий не только дифференцировать гиперплазию, дисплазии и рак, но и степень тяжести диспластического процесса, а также различные формы рака предстательной железы.

Способ осуществляется следующий образом. Гистологический срез биоптата толщиной 8 мкм депарафинируют и окрашивают по Фельгену, без фоновой подкраски (Меркулов. Курс патологогистологической техники Л., 1969; Haroske et al. Acta stereologica, 1998, 17/3: 357-382). На микротелефотометре проводят морфометрические и денситометрические исследования и определяют содержание ДНК в интерфазных ядрах эпителиальных клеток росткового слоя протоков или желез простаты. Одновременно исследуют до 64 ядер лимфоцитов того же среза или залитых в парафин и подсаженных к ткани железы, залитой в парафин. Среднее значение содержания ДНК-количества генетической информации на один лимфоцит - принимают за две единицы плоидности, соответствующие двойному набору хромосом (2c), и используют этот показатель в качестве "стандарта плоидности" (Haroske et al. Acta stereologica, 1998, 17/3:357-382). Далее определяют содержание ДНК в ядрах не менее 100 эпителиальных клеток ростковых зон и делят каждый полученный результат на стандарт плоидности, получая значения содержания ДНК на одно ядро эпителиальной клетки. Для общей оценки пролиферативного клона эпителиальных клеток вычисляют предложенный нами в 1972 году "индекс накопления ДНК - ИНДНК" (Диплом на открытие N 68 "Закономерность накопления ДНК в ядрах клеток ростковой популяции при дисплазии и злокачественном росте тканей человека"), приходящиеся на "условное ядро" (среднее взвешенное значений измерений ядер определенной клеточной популяции). Этот индекс характеризует весь ростковый клон клеток, чего нельзя достигнуть другими методами исследования (цитологическим, проточным). И при значениях указанного индекса в единицах плоидности от 2,2 до 3,7 диагностируют гиперплазию (железистую, сосочковую, криброформную, постатрофическую и базально-клеточную - доброкачественные процессы), от 3,8 до 6,5 - дисплазии (пограничный процесс), а от 6,6 и выше, в основном с 8,- разные формы рака предстательной железы (злокачественные процессы).

При значениях индекса накопления ДНК 3,8 - 4,7 диагностируют легкую степень дисплазии, 4,8 - 5,5 - умеренную, а при 5,6 - 6,5 тяжелую степень дисплазии эпителия предстательной железы.

Раки предстательной железы, в зависимости от степени дисфференцировки от высоко- до низкодифференцированных форм имеют большие значения ИНДНК. Латенетный рак - 8,0 - 9,2, мелкоацинарный -8,9-11,8, крупноацинарный - 9,0 = 10,7, криброзный рак - 11,8, солидно-трабекулярный рак - 12,9 и недиференцированные формы до 17 единиц плоидности.

Пример 1. Больной Ш., 55 лет. Клинический диагноз: хронический простатит. Объем предстательной железы 48 куб.см. Патологогистологический диагноз: железистая дисплазия средней тяжести на фоне хронического простатита. Результаты микротелефотометрического исследования срезов, окрашенных де Фельгену - "индекс накопления ДНК" - 2,8 с. Заключение: железистая гиперплазия на фоне хронического простатита.

Пример 2. Больной М. , 65 лет. Клинический диагноз: аденома предстательной железы. Объем железы 52 куб.см. Патологогистологический диагноз: выраженная дисплазия желез предстательной железы. Результаты микротелефотометрического исследования срезов, окрашенный по Фельгену - "индекс накопления ДНК" - 8,3 с. Заключение - высокодифференцированный латентный рак предстательной железы.

Использование: в медицине, в частности в онкологии. Проводят микротелефотометрическое исследование срезов биоптатов, окрашенных по Фельгену, для определения содержания дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в ядрах интерфазных клеток популяции ростковых зон и вычисляют индекс ее накопления, и при его значениях от 2,2 до 3,7 диагностируют гиперплазию, от 3,8 до 6,5 - дисплазию, а от 6,6 и выше - разные формы рака предстательной железы. Способ позволяет провести точную дифференциальную диагностику при любых подозрениях на развитие клеточной пролиферации в предстательной железе, определить ее доброкачественный или злокачественный характер, установить степень тяжести диспластического процесса, что позволяет провести своевременное и адекватное лечение. 1 з.п. ф-лы.

1. Способ дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазии и рака предстательной железы, включающий гистологическое исследование срезов биоптатов, характеризующийся тем, что срезы окрашивают по Фельгену, проводят микротелефотометрическое определение содержания дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в ядрах интерфазных эпителиальных клеток популяции ростковой зоны и вычисляют индекс ее накопления - средний взвешенный показатель на одно ядро, в единицах плоидности, - и при его значениях от 2,2 до 3,7 диагностируют гиперплазию, от 3,8 до 6,5 - дисплазию, а от 6,6 и выше - разные формы рака предстательной железы. 2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что при значениях индекса накопления ДНК 3,8 - 4,7 диагностируют легкую степень дисплазии, 4,8 - 5,5 - умеренную, а при 5,6 - 6,5 - тяжелую степень дисплазии предстательной железы.