СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ РОГОВИЦЫ Российский патент 2000 года по МПК A61F9/00 A61K35/44 

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и может быть использовано при лечении эрозий и язв роговицы у человека.

Эрозии и язвы роговицы - одна из наиболее трудноподдающихся лечению нозологий заболевания глаз, для которой характерны глубина и тяжесть поражения тканей, резкое нарушение обменных процессов в роговице, искажение и ослабление биосинтеза белков в строме, непокрытой эпителием.

Регенерация эпителия роговицы происходит путем миграции, пролиферации и адгезии клеток к строме. Миграция эпителиальных клеток в сторону дефекта сопровождается снижением их нормальной митотической активности. Медленная эпителизация или полное ее отсутствие создают условия для инфицирования, истончения и перфорации роговицы, что в свою очередь может привести к гибели глаза. Замедление репарации при трофических язвах роговицы обусловлено нарушением обмена веществ в тканях, действием протеолитических ферментов, аллергизирующих факторов. Недостаточная эффективность традиционной терапии, которая включает применение ингибиторов протеолитических ферментов (гордокс, контрикал), препаратов нуклеинового ряда, солкосерила, витаминов в качестве стимуляторов различных стадий репаративных процессов в роговице, диктует необходимость поиска нового способа лечения (1).

В связи с этим нами проявлен интерес к вопросу о целесообразности широкого использования культивированных in vitro фетальных клеток (ФК) роговицы человека при эрозиях и язвах роговицы, замедленной эпителизации роговицы после фоторефракционной кератэктомии (ФРК), болезни трансплантата, послеоперационной кератопатии при артифакии и др. заболеваний роговицы.

Фетальные ткани обладают рядом доказанных уникальных и незаменимых свойств. К ним относятся: повышенный пролиферативный потенциал, сниженная антигенная активность, содержание ряда ростовых, антибактериальных и аналгезирующих факторов (2,3,4,5).

Техническим результатом предлагаемого изобретения является ускорение репаративной регенерации всех слоев роговицы реципиента за счет использования суспензии культивированных in vitro фетальных клеток роговицы человека.

Технический результат достигается путем введения в глаз суспензии ФК роговицы методом инстилляций и субконъюнктивальных инъекций.

Источником культуры эпителиальных и эндотелиальных клеток роговицы служит ткань роговицы 14 - 22-недельных эмбрионов человека, которые получены при проведении искусственного прерывания беременности по медицинским показаниям.

Аборты проводятся в государственном учреждении - Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии (НЦАГ и П) РАМН строго в соответствии с основами законодательства об охране здоровья граждан - статья N 36, приказом МЗ РФ N302 от 28.12.93 г., рекомендациями ВОЗ, принятыми РФ, а также нормами этического Комитета и специально созданной комиссии по госпитализации.

Перед трансплантацией культура представляет собой первичную монокультуру эпителиальных (100%) и эндотелиальных (80% + 20% стромальных фибробластов) клеток с характерными признаками. Непосредственно перед трансплантацией суспензию клеток тщательно отмывают от культуральной среды, подсчитывают количество жизнеспособных клеток по исключению трепанового синего (как правило, 95%) и суспензируют в минимальном объеме физиологического раствора. Для лечения используют суспензию эмбриональных клеток с концентрацией 10⁶ кл/мл. Доза вводимых фетальных клеток отработана экспериментально. Время пребывания размороженного материала при положительной температуре не должна превышать 2 ч.

Способ лечения осуществляют путем инстилляций (каждые 15 мин в течение 1 часа) в конъюнктивальную полость глаза суспензии фетальных клеток эпителия роговицы больным при эрозиях роговицы, пациентам с замедленной эпителизацией роговицы после ФРК, или субконъюнктивальных инъекций суспензии эпителиальных и эндотелиальных клеток роговицы, больным с язвой роговицы, послеоперационной кератопатией на артифакичном глазе, болезнью трансплантата.

Лечение проведено 22 больным в возрасте от 19 до 72 лет. Количество больных по характеру и патологии представлено в таблице.

В результате инстилляций в конъюктивальную полость глаза суспензии фетальных клеток эпителия роговицы у всех пациентов отмечалась полная эпителизация трофических эрозий и уменьшение эпителиального флера роговицы через 24 ч после начала лечения.

Через сутки после субконъюктивальной инъекции ФК отмечалось значительное уменьшение площади и глубины язвы роговицы, полная эпителизация наступала на 3-4 сутки.

Клинический пример: больной А., 35 лет, история болезни N 3365. Поступил в отдел травматологии и реконструктивной хирургии МНИИ ГБ им.Гельмгольца с диагнозом: ОД- васкуляризированное бельмо роговицы III категории (после рецидивирующего герпетического кератита). Операция: ОД- сквозная субтотальная пересадка роговицы. На 8-й день после операции появился отек трансплантата и выраженная смешанная инъекция, а на 12-й день началось тотальное расплавление сквозного трансплантата с его истончением. Несмотря на активную антипротеолитическую терапию, состояние трансплантата ухудшалось: он полностью помутнел, стали прорезываться швы. Местное лечение фетальными клетками роговицы человека начато через 2 недели после операции. На следующий день после субконъюнктивальной инъекции отмечалась положительная динамика, процесс расплавления был купирован. Повторное введение суспензии ФК через 2 недели привело к дальнейшему улучшению состояния сквозного трансплантата с почти полным восстановлением прозрачности через один месяц.

Резюмируя представленные данные клинического исследования, можно сказать, что результатом использования фетальных клеток роговицы человека явилось ускорение репаративной регенерации поврежденных тканей глаза реципиента: полная эпителизация роговицы и значительное уменьшение ее отека, почти полное восстановление прозрачности сквозного трансплантата роговицы.

Учитывая возможность постоянно располагать запасом донорского материала, а также эффективность и простую методику трансплантации, применение фетальных клеток роговицы человека представляется перспективным при лечении заболеваний глаз.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Адамова Н. А. "Экспериментальное обоснование и клиническое применение препарата фибронектина при заболеваниях и повреждениях роговицы".- Канд. дис. - Одесса, 1992 г., с.16, 23.

2. Смирнов С.В., Шахламов М. В." Лечение ожогов фетальными тканями человека". - М.: Трансплантация фетальных тканей и клеток человека, 1996 г., с. 73.

3. Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Молнар Е.М. "Трансплантация фетальных тканей человека: анализ состояния проблемы и перспективы развития". - М.: Трансплантация фетальных тканей и клеток человека, 1996 г., с.5-9.

4. Seiger A., Olson L, "Cell Tissue Res".-1977. -P. 285-316.

5. Bjorlund, Lindwall O. " Trends Neurosci ".- 1987.-Vol. 10.- P.509- 516.

Изобретение относится к медицине, в частности офтальмологии, и может быть использовано при лечении заболеваний роговицы человека. Проводят аллотрансплантацию суспензии фетальных клеток роговицы человека. Суспензию вводят субконъюнктивально в количестве 200.000 клеток в 0,2-0,3 мл физиологического раствора. Суспензию инстиллируют в конъюнктивальную полость глаза каждые 15 мин в течение 1 ч. Способ способствует ускорению процесса репаративной регенерации роговицы реципиента.

Способ лечения заболеваний роговицы путем аллотрансплантации, отличающийся тем, что для лечения используют суспензию фетальных клеток роговицы человека концентрацией 10⁶ кл/мл, которую вводят субконъюнктивально в количестве 200.000 клеток в 0,2 - 0,3 мл физиологического раствора или инстиллируют непосредственно в конъюнктивальную полость глаза каждые 15 мин в течение 1 ч.