Изобретение относится к медицине и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм и изготовлении медицинских изделий для использования в общей хирургии, стоматологии и дерматологии.
Известен способ получения коллагена из костной ткани, включающий очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию (US N 4172128, A 61 K 35/32).
Однако применение коллагена, полученного указанным способом, может привести к аллергическим или воспалительным реакциям, так как он содержит свободные концы коллагеновых волокон.
Задачей изобретения является повышение качества конечного продукта.
Технический результат достигается тем, что в способе получения коллагена из костной ткани, включающем очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию; костную ткань измельчают до получения костной крошки размером от 700 до 2000 мкм, проводят гидролиз в течение 24-48 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, затем нейтрализуют до pH 6,8-7,8, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре 37oC, затем повторно проводят гидролиз смесью раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.
Костную ткань измельчают до крошки размером 700-2000 мкм, так как при размере костной крошки менее 700 мкм значительно повреждаются коллагеновые волокна, а при ее размере более 2000 мкм процесс гидролиза удлиняется.
Гидролиз костной крошки проводят в течение 24-48 часов в смеси раствора в 0,4 Н раствора гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, что позволяет полностью выделить и обезжирить весь костный коллаген.
Удаляют надосадок центрифугированием. При 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, так как при центрифугировании менее 3000 об/мин, осаждается менее 50% гидролизата, а при более 5000 об/мин часть основного продукта уходит в осадок.
Обработку 0,125%-ным раствором папаина при 37oC позволяет провести полный гидролиз свободных неколлагеновых белков кости и удалить свободные концы коллагеновых волокон, так как папаин, являясь протеолитическим ферментом, гидролизует белки животного происхождения (Диксон М. и др. Ферменты, т. 1, М., 1982, с. 20-40).
Повторное проведение гидролиза смесью раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1 позволяет удалить из ткани гидролизированные белки и их остатки.
Способ осуществляется следующим образом.
Кость очищают от мышц, связок и прочего, измельчают до получения костной крошки размером 700-2000 мкм, затем проводят гидролиз в течение 24-48 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, нейтрализуют до pH 6,8-7,8, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре 37oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.
Пример.
1 кг костей быка очищают от мышц, связок и прочего. Распиливают на кусочки, измельчают до получения костной крошки размером 800 мкм. Затем проводят гидролиз в течение 24 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, затем нейтрализуют до pH 6,8, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре не выше 37oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУЛЬФАТИРОВАННЫХ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ | 2000 |
|
RU2162331C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНА ИЗ КОСТНОЙ ТКАНИ | 2004 |
|
RU2273489C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСОВМЕСТИМОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ СТОМАТОЛОГИИ | 1999 |
|
RU2155025C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУЛЬФАТИРОВАННЫХ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ | 2005 |
|
RU2304441C1 |
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУЛЬФАТИРОВАННЫХ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ | 2004 |
|
RU2273486C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАТЕРИАЛОВ ИЗ КОСТНОЙ ТКАНИ И ПОЛУЧЕННЫЙ ЭТИМ СПОСОБОМ МАТЕРИАЛ ДЛЯ ОСТЕОПЛАСТИКИ И ТКАНЕВОЙ ИНЖЕНЕРИИ | 2005 |
|
RU2342162C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ | 1999 |
|
RU2139715C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА "БИО-МАТРИКС ИМПЛАНТ I" ДЛЯ СТОМАТОЛОГИИ | 1998 |
|
RU2136298C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ | 1998 |
|
RU2129871C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА "БИО-МАТРИКС ИМПЛАНТ" ДЛЯ СТОМАТОЛОГИИ | 1998 |
|
RU2136297C1 |
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм и изготовлении медицинских изделий для использования в общей хирургии, стоматологии и дерматологии. Сущность изобретения: костную крошку размером 700-2000 мкм гидролизуют в течение 24-48 ч в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, нейтрализуют до рН 6,8-7,8, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 мин, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при 37oС, затем повторно гидролизуют смесью раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют. Технический результат - повышение качества конечного продукта.
Способ получения коллагена из костной ткани, включающий очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию, отличающийся тем, что костную ткань измельчают до получения костной крошки размером 700 - 2000 мкм, проводят гидролиз в течение 24 - 48 ч в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, нейтрализуют рН 6,8 - 7,8, центрифугируют при 3000 - 5000 об/мин в течение 20 - 40 мин, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при 37oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1: 1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.
US 4172128 A, 23.10.1979 | |||
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАСТИЧНОГО МАТЕРИАЛА ИЗ КОЛЛАГЕНА | 1989 |
|
RU2033165C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА "БИО-МАТРИКС ИМПЛАНТ" ДЛЯ СТОМАТОЛОГИИ | 1998 |
|
RU2136297C1 |
Устройство для предотвращения самоотвинчивания гаек | 1948 |
|
SU83868A1 |
US 5411887 A, 02.05.1995. |
Авторы
Даты
2001-01-20—Публикация
2000-04-21—Подача