ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 521, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ Российский патент 2001 года по МПК C12N1/20 A61K39/104 C12N1/20 C12R1/385 

Описание патента на изобретение RU2169194C2

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против синегнойной инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц.

Синегнойная инфекция распространена повсеместно, наносит значительный экономический ущерб звероводству и представляет опасность здоровью людей. В зверосовхозах ежегодно регистрируются энзоотии среди норок, песцов и лисиц. Зарегистрированы случаи болезни у кроликов, нутрий, хорей. В последние годы стали отмечать синегнойную инфекцию у собак домашнего содержания.

Патология при синегнойной инфекции как у людей, так у животных очень разнообразна - поражение репродуктивной системы, септические процессы в организме, поражение желудочно-кишечного тракта у молодых животных, поражение молочных желез и т.д. У лисиц и песцов она протекает с поражениями гениталий и сопровождается нарушением процесса беременности - абортами, рассасыванием эмбрионов, пропустованием самок.

Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабельностью, поэтому эффективность специфической профилактики определяется полнотой антигенного состава входящих в вакцину компонентов.

Известен вакцинный штамм Pseudomonas aeruginosa PA-7 второго серотипа, используемый для изготовления анатоксин-вакцины против синегнойной инфекции (SU N 1202109, опубл. 15.06.86).

Однако известный штамм не содержит антигены возбудителя псевдомоноза пушных зверей и не обеспечивает формирование иммунитета против синегнойной инфекции пушных зверей.

Наиболее близким аналогом является штамм Pseudomonas aeruginosa N202 шестого серотипа, входящий в состав инактивированной вакцины против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок ("Ветеринарные препараты". Справочник, под ред. Д.Ф. Осидзе., М.: Колос, 1981, с. 306-308).

Однако известный производственный штамм имеет нестабильные вирулентные и иммуногенные свойства и, более того, не позволяет профилактировать псевдомоноз песцов и лисиц, вызываемый возбудителями других серовариантов.

Задачей изобретения является получение штамма Pseudomonas aeruginosa для изготовления эффективной вакцины против псевдомоноза пушных зверей независимо от серологического профиля возбудителя.

Технический результат изобретения заключается в получении нового штамма Psendomonas aeruginosa 5211, способного продуцировать основные факторы патогенности в оптимальных значениях и позволяющего изготовить вакцину против любых серовариантов синегнойной палочки не только для песцов и лисиц, но и других восприимчивых к данной инфекции зверей и животных.

Сущность изобретения: штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5211 выделен от самки песца з/с "Тимоховский" и депонирован в коллекции штаммов возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А. Афанасьева и имеет регистрационный номер 5211.

Штамм Ps. aeruginosa 5211 предназначен в качестве продуцента протеолитических ферментов (щелочной протеазы и эластазы) при изготовлении специфического иммунного препарата против синегнойной инфекции песцов и лисиц.

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa НИИПЗК N 5211 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Генетические маркеры.

Серовариант 06 (Habs)
Пиоцинотип 268678
Штамм 5211 протеолитический.

Морфологические свойства. Производственная культура представляет собой тонкие прямые грамотрицательные палочки, размером 2-3 х 0,5 микрона. Палочки подвижные, монотрихи, спор не образуют, в мазках располагаются поодиночке и рядами.

Культуральные свойства. Аэроб, оптимальная температура роста при 32-37oC, сохраняет способность к росту и размножению при 42oC. Растет почти на всех питательных средах с pH 8,0. На поверхности МПБ образует характерную серовато-серебристую пленку. Образует пигмент пиоцианин. Лучшей средой культивирования является среда Iensen'a, обогащенная солями и аминопептидом. На МПА образует S- и R-формы, с преобладанием S-форм.

Биохимическая активность. Высокая кислотообразующая активность в отношении глюкозы и галактозы; в аэробных условиях расщепляет сахара с образованием глюконовой кислоты без газа, разжижает желатин, свертывает молоко, не вызывает образования индола и сероводорода. Образует цитохромоксидазу, вызывает гидролиз ацетамида.

Вирулентные свойства. При внутрибрюшинном введении белым мышам LD/50 составляет 1,3 • 107 КОЕ/мл.

Антигенные свойства. Штамм вырабатывает щелочную протеазу, экзотоксин А.

Токсигенные свойства. В жидкой питательной среде вырабатывает щелочную протеазу (показатель гидролиза казеина 320), экзотоксин А (РПГА 1:128).

Хранение штамма. При температуре 6±2oC в ампулах в лиофилизированном состоянии более трех лет; в пробирках в столбике полужидкого агара, приготовленного на бульоне Мартена с добавлением 0,5%-ного глютамата натрия и 1%-ного глицерина, под вазелиновым маслом в течение трех месяцев; в пробирках на скошенном агаре не более 14 дней.

Контроль за состоянием штамма. Контролируют морфологические, биохимические, культуральные и вирулентные свойства не реже 1 раза в три месяца. Антигенные свойства (протеазу и эластазу) проверяют перед производством иммунного препарата. Штамм предварительно культивируют в среде Iensen'a.

Показатель гидролиза казеина щелочной протеазой в реакции диффузии в казеиновый агар должен быть не менее 320.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5211 культивируют на бульоне Мартена или синтетической среде при 32oC в течение 18-20 часов при постоянном встряхивании на шуттель-аппарате. По истечении срока инкубации культуру проверяют на чистоту роста в мазках, окрашенных по Грамму.

Далее из выросшей культуры отбирают пробу, центрифугируют ее при 6000 об. /мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают и исследуют на содержание: экзотоксина А в реакции преципитации (РП) с антитоксической сывороткой и/или на щелочную протеазу в реакции гидролиза казеина, и/или на эластазу в РП с моновалентной антиэластазной сывороткой. Титры должны составлять: экзотоксина А - не ниже 1:4, щелочной протеазы - не ниже 1:32, эластазы не ниже 1:16.

После контроля выросшей культуры на токсигенность и протеолитическую активность отделенную бакмассу подвергают инактивации любым известным способом и добавляют адъювант, например гидроокись алюминия.

Пример 2. Полученную по примеру 1 вакцину проверяют на безвредность на 9 песцах. Вакцину вводят внутримышечно в область бедра правой лапы в дозах: трем песцам по 1,0 мл, трем по 2,0 мл и трем по 3,0 мл.

Проводят ежедневное наблюдение за песцами в течение 7 дней с индивидуальным прощупыванием места инъекции. Термометрию песцов проводят дважды на 2-ой и 4-ый дни после введения препарата.

Результаты исследования показали, что все песцы вели себя обычно, корм поедали полностью, агрессивность не наблюдалась. Температура тела была в пределах нормы 37-39oC. При прощупывании места инъекции вакцины не было обнаружено опухания конечности, болезненности.

Пример 3. Полученной вакциной иммунизируют песцов на ферме, неблагополучной по синегнойной инфекции, для исследования влияния иммунизации на результаты воспроизводства, поскольку основная патология при синегнойной инфекции проявляется именно в период воспроизводства.

В данном хозяйстве среди песцов отмечаются случаи абортов, пропустования самок, рождение мертвых щенков. При этом у абортированных самок на последних сроках беременности (за неделю до срока щенности) при бактериологическом исследовании была выделена культура синегнойной палочки 03 и 09 сероваров.

Полученной по примеру 1 вакциной иммунизируют 50 самок песцов внутримышечно в дозе 1,5 мл. В качестве контроля служат другие 50 самок, аналогичные по возрасту, окрасу и условиям содержания и кормления.

Установлено, что применение вакцины повысило плодовитость песцов опытной группы на 0,7 щенка. Вакцина предотвратила рассасывание плодов у некоторых самок опытной группы, в то время как у некоторых самок контрольной группы был зарегистрирован приплод всего в 4-5 щенков. Это чаще всего обусловлено рассасыванием плодов в первой половине беременности.

Таким образом, вакцина на основе штамма 5211 позволит предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по синегнойной инфекции.

Похожие патенты RU2169194C2

название год авторы номер документа
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 449, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2169188C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 476, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2169189C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 527, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Балакирев Н.А.
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2169195C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 514, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Тинаева Е.А.
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2169193C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA ЛО, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
  • Ригель И.А.
RU2169192C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 529, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
  • Ригель И.А.
RU2169190C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 529, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
  • Ригель И.А.
RU2169191C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 524, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Балакирев Н.А.
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2147318C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 499, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 1999
  • Балакирев Н.А.
  • Литвинов О.Б.
  • Семикрасова А.Н.
RU2147317C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА И ПСЕВДОМОНОЗА ПЕСЦОВ И ЛИСИЦ 2005
  • Семикрасова Алла Николаевна
  • Тинаева Елена Александровна
  • Полунина Надежда Анатольевна
  • Савельев Сергей Сергеевич
  • Литвинов Олег Борисович
  • Геллер Вера Иосифовна
RU2348425C2

Реферат патента 2001 года ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 521, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ

Изобретение предназначено для производства вакцинных препаратов против синегнойной инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5211 депонирован в коллекции штаммов - возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А. Афанасьева и имеет регистрационный номер 5211. Штамм относится к 06 сероварианту. Штамм культивируют на бульоне Мартена или синтетической среде при 32oC в течение 18 - 20 ч при постоянном встряхивании. После контроля выросшей культуры на токсигенность и протеолитическую активность отделенную бакмассу подвергают инактивации. Далее добавляют адъювант - гидроокись алюминия и расфасовывают. Изобретение позволяет предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по синегнойной инфекции, независимо от серологического профиля возбудителя.

Формула изобретения RU 2 169 194 C2

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5211, используемый для изготовления вакцины против псевдомоноза пушных зверей.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2001 года RU2169194C2

ВАКЦИНА ПРОТИВ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО НОРОК, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПСЕВДОМОНОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО НОРОК 1982
  • Селиванов А.В.
  • Седов Н.К.
  • Данилов Е.П.
  • Кириллов А.К.
  • Карпов В.М.
  • Литвиненко И.И.
RU1066074C
Штамм @ @ РА-7,используемый для получения анатоксина 1984
  • Бродинова Н.С.
  • Мороз А.Ф.
  • Самойленко И.И.
  • Левдикова Г.А.
SU1202109A1
RU 95113158 А, 10.03.98
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКЗОТОКСИНА А ИЗ PSEUDOMONAS AERUGINOSA 1988
  • Михайлова Н.А.
  • Кузнецова Т.Н.
  • Баснакьян И.А.
RU1587723C
Грохот 1988
  • Андреечкин Иван Прохорович
  • Максаев Виктор Антонович
  • Попил Яков Степанович
  • Туник Григорий Никифорович
  • Беринберг Зиновий Шлемович
  • Журавель Василий Афанасьевич
  • Гольдин Арон Абрамович
  • Лихенко Александр Николаевич
  • Рипный Григорий Максимович
  • Шифрин Семен Исаакович
  • Юрасов Павел Павлович
  • Завражин Вячеслав Николаевич
  • Мехальчишин Владимир Степанович
  • Новиков Петр Петрович
SU1538933A1
ГВОЗДЯК Р.И., ЯКОВЛЕВА Л.М
Об особенностях патогенности Pseudomonas Aeruginosa
- Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, М.: МЕДИЦИНА, 1987, № 3, с.3-6.

RU 2 169 194 C2

Авторы

Балакирев Н.А.

Литвинов О.Б.

Семикрасова А.Н.

Даты

2001-06-20Публикация

1999-08-12Подача