Различные производные фруктов, овощей и зерновых культур, являющиеся производными мевалоната (изопреноиды), обладают способностью подавлять инициированный химическим путем канцерогенез. Это объяснялось способностью изопреноида опосредованно стимулировать действие, нейтрализующее ядовитые вещества, а также противоокислительным действием некоторых изопреноидов. Ни одним из указанных свойств не объясняется потенциальное воздействие, которое изопреноиды оказывают на стадию стимуляции/развития инициированного химическим путем канцерогенеза и на рост образовавшихся химическим путем и имплантированных опухолей (смотри обзор Elson, 1995; Elson и Yu, 1994). Воздействие, оказываемое изопреноидами на рост опухолей, существенно различается. Посредством посттранскрипционного действия (смотри Correll и др., 1994; Parker и др. , 1993; D.М. Peffley и А.К. Gayen, личная переписка) изопреноиды подавляют активность редуктазы кофермента А 3-окси-3-метилглутарила (HGM-CoA), при этом указанная активность считается фактором, ограничивающим скорость синтеза холестерина. Статины являются конкурентными ингибиторами HMG-CoA-редуктазы. Существует почти полная взаимосвязь между способностью разнообразных изопреноидов подавлять опухоли на поздней стадии развития и их воздействием на активность НMG-CoA-редуктазы. Активность редуктазы опухолей различается от аналогичной активности редуктазы печени тем, что она устойчива к регулированию регенерации стерина. Тем не менее, опухоль сохраняет высокую восприимчивость к пост-транскрипционному регулированию, вызванному различными изопреноидами. В результате подавления активности НMG-CoA-редуктазы, опосредованного изопреноидом, группы полупродуктов пути метаболизма мевалоната становятся ограничителями посттрансляционного развития сопутствующих росту белков (смотри обзор Elson, 1995, Elson и Yn, 1994).
В одном из недавних обзоров был представлен перечень изопреноидов разнообразного строения, обладающих различными способностями подавлять синтез мевалоната (смотри Elson, 1995).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен способ подавления роста опухолевых клеток. Способ включает оказание воздействия на опухолевую клетку сочетанием по меньшей мере двух продуктов пути обмена мевалоната, выбранных из группы, включающей статины, иононы и токотриенолы.
В предпочтительном варианте осуществления ионон выбирают из группы, включающей бета-ионон; 6-10-диметил-3,5-ундецен-2,9-дион; 6,10-диметил-9,10-эпокси-3,5-ундеценон-2; 9,10-диацетокси-6,10-диметил-3,5-ундеценон-2; 6-10-диметил-9,10-диол-3,5-ундеценон-2 и альфа-ионон. В число предпочтительных токотриенолов входят d-гамма-токотриенол, 2-дезметилтокотриенол, d-дельта-токотриенол и d-токотриенол. В число предпочтительных статинов входят ловастатин, правастатин, симвастатин и флувастатин.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения опухолей, состоящая из эффективно действующего количества по меньшей мере двух веществ, выбранных из группы, включающей токотриенолы, статины и иононы.
Одной из целей настоящего изобретения является предотвращение или уменьшение роста опухоли и метастазов.
Другой целью настоящего изобретения является увеличение длительности периода выживаемости страдающих от опухолей пациентов после выявления у них опухоли.
Еще одной целью настоящего изобретения является предотвращение образования опухолей.
Другие цели, преимущества и признаки настоящего изобретения станут очевидны для специалиста в данной области после ознакомления с описанием, патентными притязаниями и чертежами.
На фиг. 1 изображена диаграмма зависимости быстрого размножения клеток меланомы В16 от воздействующей дозы токолов.
На фиг. 2А и В проиллюстрировано действие сочетаний гамма-токотриенола, бета-ионона и карвакрола на популяции клеток меланомы И16.
На фиг.2А проиллюстрировано действие гамма-токотриенола и бета-ионона.
На фиг.2В проиллюстрировано действие карвакрола и бета-ионона.
На фиг. 3 изображена кривая выживаемости мышей-носителей опухоли, получавших обогащенную изопреноидом пищу после выявления у них плотной имплантированной меланомы В16.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен способ подавления роста опухолевых клеток путем воздействия на них сочетанием изопреноидов. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения сочетание состоит из по меньшей мере одного токотриенола и по меньшей мере одного ионона. В другом варианте осуществления настоящего изобретения сочетание состоит из по меньшей мере одного токотриенола и по меньшей мере одного статина. В третьем варианте осуществления настоящего изобретения сочетание состоит из по меньшей мер одного статина и по меньшей мере одного ионона. Как мы предполагаем, в другом приемлемом варианте осуществления настоящего изобретения сочетание будет состоять из всех трех продуктов пути обмена мелавоната.
Под "токотриенолом" имеется в виду вещество, входящее в следующую группу. Семейство витамина Е включает смесь витамеров, преимущественно состоящих из токоферолов и токотриенолов. Токотриенолы являются эпимерами соответствующих токоферолов. В таблице А описаны типичные токоферолы и токотриенолы.
В число предпочтительных токотриенолов входят d-гамма-токотриенол и 2-дезметилтокотриенол. В число других предпочтительных токотриенолов входят d-бета-токотриенол, d-дельта-токотриенол и d-токотриенол.
Под "иононом" подразумевается вещество, входящее в следующую группу. Иононы являются широко распространенными в природе соединениями, родственными каротиноиду. Альфа-ионон и бета-ионон, а также ряд их насыщенных кислородом производных широко присутствуют в растениях в свободной и связанной формах. Их биологическая активность сводится к действию в качестве фитоалексинов. Иононы также образуются при посредстве теплового и фотохимического окисления каротинов.
В число предпочтительных иононов входят бета-ионон (4-2,6,6-триметил-1-циклогексенил-1)-3-бутенон-2; 6-10-диметил-3,5-ундецен-2,9-дион; 6,10-диметил-9-10-эпокси-3,5-ундеценон-2; 9,10-диацетокси-6,10-диметил-3,5-ундеценон-2 и 6-10-диметил-9,10-диол-3,5-ундеценон-2. В число других предпочтительных иононов входят альфа-ионон (4-(2,6,6-триметил-2-циклогексенил-1))-3-бутенон-2.
Под "статином" подразумевается вещество, входящее в следующую группу. Статины являются производными метаболитов грибков (ML-236B/кoмпaктин/мoнoкaлин К), выделенных из Pythium ultimum, Monacus ruber, Peniccilium citrinum, Реniccilium brevicompactum и Aspergillius terreus. Данные аналоги 3-окси-3-метилглутаровой кислоты (HMG) являются конкурентами HMG-CoA за место присоединения на субстрате HMG-CoA-редуктазы. В США статины отпускаются по рецептам. Например, ловастатин (Mevacor/Merck), симвастатин (Zocor/Merck), правастатин (Pravachol/Bristol-Myers Squibb) и флувастатин (Lescol/Sandoz). Известно еще несколько клинических исследовании, включая исследование, осуществленное в компании Warner-Lambert в ходе испытаний на поздней стадии. Большая часть липофильных статинов иногда вызывает заболевания костно-мышечной системы (миозит, острый некроз скелетных мышц), однако большинство побочных эффектов, отмеченных в ходе клинических испытаний, были умеренными и легко переносимыми (головная боль, боль в животе, запор, метеоризм и диарея). (Смотри Pedersen, T. R., N. Engl., J Med. 333:1350-1351, 1995; Kohashigawa, J. A. et al., N. Engl. J. Med. 333: 621-627, 1995). В таблице Б приведен перечень некоторых предпочтительных статинов.
В табл.В описана химическая формула предпочтительных статинов.
В число предпочтительных статинов входят ловастатин, правастатин, симвастатин и флувастатин.
В приведенных ниже примерах продемонстрирован эффект синергии в случае, когда клетки меланомы В16 были подвергнуты воздействию сочетаний токотриенолов, ловастатина и ионона.
В одном из приведенных ниже примеров было зафиксировано уменьшение числа клеток меланомы В16 на 68% (через 48 ч). Был получен 9%-ный эффект синергии сверх общей суммы индивидуальных показателей.
При испытаниях in vivo, в ходе которых измерялась выживаемость мышей-носителей после имплантации меланомы, три значения Р для изопреноида, полученные при сравнении со смешанным лечением, находились в пределах от 0,66 до 0,16 тогда как три значения Р для изопреноида, полученные при сравнении с лечением изопреноидом, превышали 0,88. Во-первых, следует отметить, что во всех случаях существенно увеличилась длительность периода выживаемости (Р < 0,03). Различия между воздействием при однократном применении было несущественным. Показатели Р непараметрического испытания оказались в пределах 0,64 - 0,95. Когда было проверено различие между результатом однократного лечения и смешанного лечения, непараметрические показатели Р оказались в пределах 0,16 - 0,64. Тенденция к уменьшению показателей Р предполагает возможный эффект синергии.
Под "синергией" имеется в виду выраженное в процентом исчислении уменьшение числа клеток, составляющее по меньшей мере дополнительно 5% сверх общей суммы индивидуальных показателей, либо увеличение выживаемости носителя, составляющее 5% сверх обшей суммы индивидуальных показателей.
В целях настоящего изобретения была оценена способность in vitro ряда разнообразных соединений изопреноида и способность in vivo d-гамма-токотриенола и бета-ионона подавлять опухоль. Мы исходили из того, что изопреноиды, имеющие между собой мало сходства, за исключением общего предшественника - изопентил пирофосфата - подавляют быстрое размножение клеток меланомы, и доказали, что индивидуальное действие изопреноидов, испытанных в двухкомпонентных смесях, является аддитивным. Мы также отметили, что в результате потребления d-гамма-токотриенола в качестве части пищевого рациона происходит подавление роста имплантированных опухолей.
В описанных ниже примерах приведен расчет концентраций изопреноидов разнообразной структуры, необходимых для сдерживания на 50% увеличения популяции клеток мышиной меланомы В 16 (F10) при культивировании в течение 48 ч (показатель IC50). Показатели IC50 у d-лимонена и периллилового спирта, монотерпенов на 1-й стадии испытаний составили соответственно 450 и 250 мкмоль/л; у родственных циклических монотерпенов (перилл альдегид, карвакрол, тимол), ациклического монотерпена (гераниол) и аналога концевого кольца бета-каротина (бета-ионон) показатель IC50 находился в пределах 120-150 мкмоль/л. Показатель IC50 у фарнезола, аналога боковой цепи токотриенолов (50 мкмоль/л), оказался в диапазоне между показателем альфа-токотриенола (110 мкмоль/л) и показателями гамма-токотриенола (20 мкмоль/л) и дельта-токотриенола (10 мкмоль/л). Отличающийся новизной токотриенол, у которого отсутствуют метиловые группы на токоловых кольцах, продемонстрировал исключительно высокую сдерживающую способность (показатель IС50 0,9 мкмоль/л). В ходе первого из двух исследований отнятым от матери в период грудного вскармливания женским особям мышей линии С57ВL в течение 10 дней до и 28 дней после имплантации, отличающейся агрессивностью роста и высокой метастатической активностью мышиной меланомы В16 (F10), давали экспериментальный пищевой рацион. В результате замещения в рационе АIN-76А d-гамма-токотриенола dl-альфа-токоферолом в пересчете на изомолярный эквивалент (116 мкмоль/кг рациона) и эквивалент витамина Е (928 мкмоль/кг рациона) было отмечено замедление роста опухоли на 36% и 50%, соответственно (Р < 0,05). В ходе второго исследования меланомы были выявлены до того, как мышам начали давать экспериментальный рацион, в состав которого входили 2 мкмоль/кг d-гамма-токотриенола и бета-ионона по отдельности и в сочетании. В состав четвертого рациона входило 4 мкмоль/кг d-гамма-токотриенола (смотри фиг.3). В результате каждого курса лечения период выживаемости носителей увеличился (Р < 0,03). Настоящее изобретение основано на том, что, как было нами установлено, индивидуальное действие некоторых изопреноидов являлось аддитивным, а индивидуальное действие других изопреноидов отличалось эффектом синергии. Данное явление даст основание предполагать, что определенное сочетание изопреноидов может быть исключительно эффективным для применения в химиотерапии.
Способы согласно настоящему изобретению могут быть осуществлены в нескольких вариантах. В одном из вариантов осуществления человеку или животному вводится сочетание изопреноидов в виде фармацевтической или ветеринарной композиции, содержащей безопасную и эффективную дозу. В другом варианте осуществления пациент получает пищевой рацион, обогащенный сочетанием изопреноидов. Поскольку статины в настоящее время отпускаются только по рецептам, предпочтительно не добавлять их в пищу.
В состав пищевого рациона человека и животных и фармацевтических препаратов, используемых в способах согласно настоящему изобретению, входит выбранное сочетание изопреноидов, дополненное обычными кормами для животных, пищевыми добавками для человека или апробированными фармацевтическими разбавителями и носителями.
Обладающие высокой активностью токотриенолы включают d-гамма-токотриенол, d-дельта-токотриенол и 2-дезметилтокотриенол, причем два последних имеют природное происхождение, d-гамма-токотриенол и d-дельта-токотриенол могут быть извлечены из богатых токотриенолом фракций масла из рисовых отрубей или пальмового масла с использованием известных из техники способов. 2-Дезметилтокотриенол может быть извлечен из богатых токотриенолом фракций масла из рисовых отрубей известными из техники способами.
Бета-ионон может быть подучен из множества промышленных источников. Например, бета-ионон можно подучить по каталогу Aldrich Flavors and Fragrances no. W25950-0; бета-ионон также перечислен в каталогах Aldrich Fine Chemical и Sigma. В указанных каталогах, а также в Bedoukian Research Distinctive Perfume & Flavor Ingredients перечисланы и другие иононы.
Ловастатин является наиболее легко промышленно доступным веществом.
Помимо добавления в пищевой рацион пациента сочетание изопреноидов может быть введено в виде фармацевтической пли ветеринарной композиции, такой как таблетки с энтеросолюбильным покрытием, распадающиеся в кишечнике, капсулы, порошки, растворы или эмульсии. Подлежащая приему точная доза зависит от вида изопреноида, способа применения, веса пациента и характера состояния. Обращаем внимание на то, что использованная ниже в примере линия клеток меланомы отличается исключительной устойчивостью к химиотерапевтическому воздействию. Таким образом, реальная дозировка при лечении пациента может оказаться ниже предложенной в нашей экспериментальной модели.
Доза действующих веществ в фармацевтическом составе обычно обеспечивает суточное потребление, существенно меньшее, чем их доза в случае приема таких веществ по отдельности. Периллиловый спирт, являющийся изопреноидом, признанным в результате клинических испытании обладающим противоопухолевым действием, вводят в дозах свыше 8 г/сутки; ловастатин клинически эффективен при лечении опухолей мозга, однако отличается плохой переносимостью при дозировке ~2 г/сутки (>20 х дозы, вводимой при повышенном содержании холестерина в крови). При дозировке на уровне < 300 мг/сутки токотриенолы эффективно снижают уровень холестерина. Мы предполагаем, что за счет эффекта синергии действующих веществ предпочтительная суточная доза должна содержать 250 мг токотриенола/2000 мг ионона/150 мг статина (~2 мг/кг веса тела). Максимальная суточная доза должна содержать 500 мг токотриенола/4000 мг ионона/300 мг статина.
Типичная распадающаяся в кишечнике таблетка с энтеросолюбильным покрытием имеет следующий состав, мг:
Действующие начала:
d- гамма-Токотриенол - 50
6,10-Диметил-9,0-эпокси-3,5 ундеценон-2 - 400
Статин - 30
Носители/наполнители: микрокристаллическая целлюлоза, гликолят натрия, кукурузный крахмал, гидрогенизированный парафин растительного масла, стеарат магния, тальк.
Предпочтительная стандартная суточная доза составляет 5 таблеток.
Сначала изготавливают плитку или таблетку любой нужной формы, а затем добавляют в нее небольшое количество жидкости, содержащей действующие начала, мг:
d-гамма Токотриенол - 50
6,10-Диметил-9,0-эпокси-3,5 ундеценон-2 - 400
Предпочтительно, чтобы в плитке или таблетке присутствовали соответствующие ароматизаторы для придания приемлемого вкусового ощущения. Существенно важно, чтобы действующие начала добавляли после осуществления всех операций, связанных с выпеканием или нагревом, и завершения охлаждения, поскольку токотриенолы не обладают теплоустойчивостью. Такая плитка или таблетка может быть упакована в герметично закрытый пакет.
Поскольку токотриенолы и иононы являются относительно нетоксичными веществами, при желании могут вводиться дозы, превышающие приведенные выше максимальные значения, в особенности, это касается распадающейся в кишечнике композиции с энтеросолюбильным покрытием. Тем не менее, в результате приема более высоких дозы может заметно пострадать кишечная флора, что приведет к жедудочно-кишечным расстройствам. В случае приема композиций согласно настоящему изобретению рекомендуется ограничивать суточную дозу потребления витамина Е. Большая часть липофильных (поглощающих жир) статинов иногда вызывает заболевания костно-мышечной системы (миозит, острый некроз скелетных мышщ), однако большинство отмеченных в отчетах о клинических испытаниях побочных эффектов были умеренными и легко переносимыми (головная боль, боли в животе, запор, метеоризм и диарея). Пациенты (смотри Thibault, et al., Clinical Cancer Research 2:483-491, 1996) переносили прием доз, приближающихся к 2 г/сутки (25 мг/кг веса тела).
Для специалистов в данной области очевидно, что в настоящее изобретение может быть внесено множество модификаций и изменений, не выходящих за рамки его объема и сути. Таким образом, изобретение ограничено лишь следующими ниже притязаниями.
ПРИМЕРЫ
Использованные сокращения: HGM СоА-3-окси-3-метилглутарил-КоА-редуктаза; IС50 - концентрация, необходимая для сдерживания на 50% роста популяции клеток меланомы; TRF - богатая токотриенолом фракция пальмового масла; TRF25 - не содержащая оризанола богатая токотриенолом (фракция масла из рисовых отрубей.
А: Вещества и способы
Изопреноиды: d-лимонен (97%), периллиловый спирт (99%), перилл альдегид (92%), карвакрол (98%), тимол (98%), бета-ионон (96%), гераниол (98%), фарнезол (96) и dl-альфа-токоферол (97%) были приобретены у компании Aldrich Chemical (Милуоки, штат Висконсин). Сокращенный перечень концентрированных природных источников и ароматические свойства данных изопреноидов приведен ниже в таблице 1. В результате предварительных исследований было установлено, что не содержащая оризанола богатая токотриенолом фракция масла из рисовых отрубей (TRF25), полученная методом молекулярной дистилляции (смотри Dr. Laxman, Singh, Vitamins, Inc., Chicago, IL), обладает очень мощным подавляющим опухоль действием. Фракция состояла из 6% d-альфа-токоферола, 12,5% d-альфа-токотриенола, 21% d-гамма-токотриенола, 10% d-дельта-токотриенола, 4,5% d-токотриенола, 17% d-2-дезметилтокотриенола, 18% не установленных изомеров токотриенола и 10% стеринов и триглицеридов (смотри Qureshi, et al., неопубликованные данные). Основные компоненты - d- алфа-токотриенол, d-гамма-токотриенол, и d-дельта-токотриенол, и d-2-дезметилтокотриенол были выделены компанией Advanced Medical Research (Мэдисон, штат Висконсин). Для отделения d-гамма-токотриенола от богатой токотриенолом фракции (TRF) пальмового масла (содержащей 36% d-гамма токотриенола, 18% d-альфа-токотриенола, 12% d-дельта-токотриенола и 22% d-альфа-токоферола) была разработана методика хроматографии, предоставленная в качестве дара Институтом по исследованию пальмового масла (Куала-Лумпур, Малайзия). Суспендированный в гексане силикагель (Merck, 60 мкм, 150 г) поместили и стеклянную воронку объемом 350 мл с фриттованным диском. Гель промыли в 1 л гексана, после чего в 20 мл гексана было добавлено 5 г TRF. Токолы были элюированы методом последовательного введения в гекан 500 мл смесей диэтилового эфира (5-, 10, 12, 14-, 16-, 18, 20-, 22-, 25- и 30-процентной). Реакцию элюирования после каждого введения растворителя в фильтрационную колбу ускоряли за счет использования вакуума, полученного в результате отсасывания воды. Элюаты были высушены под вакуумом, остатки были подвергнуты повторному растворению в гексане и идентифицированы на основании времени задержки и характера абсорбции с использованием системы анализа HPLS. Элюированная с использованием 18%-ного диэтилового эфира фракция преимущественно (98%) состояла из d-гамма-токотриенола.
Определение показателя IC50: полученные от Dr. William В. Ershler клетки мышиной меланомы В 16 (F10), представляющие собой линию опухолевых клеток с высоким метастатическим потенциалом (смотри Tsukamoto, et al., 1991), были выращены в виде однослойной культуры (в колбах размером 35 х 10 мм) в 3 мл среды RMP1 (компания Sigma), в которую было добавлено 10% сыворотки новорожденного теленка (GIBCOBRL, Гранд-Анленд, штат Нью-Йорк) и 80 мг/л гентамицина (компания Sigma, Сент-Луис, штат Миссури). Культуры, посеянные с использованием 1-1,5 х 105 клеток, инкубировали в течение 24 ч при 37oС в увлажненной воздушной среде, содержащей 5% СО2. Через 24 ч (время 0) были добавлены изопреноиды, растворенные в абсолютно чистом этаноле; все культуры содержали 5 мл этанола/л (85 мкмоль/л). Культуры были дополнительно инкубированы в течение 48 ч. Среда была удалена, а однослойные кутьтуры были дважды промыты компенсированным солевым раствором Hanks (компания Sigma), после чего в течение 2 мин инкубированы в растворе трипсина-ЭДТК (компания Sigma) при 37oС. Трипсин был дезактивирован путем суспендирования клеток в среде, содержащей 10% плодной сыворотки коровы (компания Sigma). Клетки были гранулированы и подвергнуты повторному суспендированию в компенсированном солевом растворе Hanks. С помощью гемоцитометра было подсчитано количество жизнеспособных клеток, то есть клеток, не содержавших 0,4% трипанового голубого (GIBCOBRL); исходя из результатов окончательного подсчета клеток, вывели количество клеток через 24 ч и получили оценочный результат чистого прироста клеток. Расчет концентрации изопреноида, необходимой для сдерживания на 50% (IC50) чистого прироста клеток за 48 ч основан на экспериментальных данных, полученных в результате проведения трех или более оценок.
Исследования с использованием животных: Опыт по оценке способности различных изопреноидов подавлять опухоль был расширен за счет двух исследований пищевых рационов. В ходе первого из них было изучено воздействие потребления d-гамма-токотриенола и бета-ионона в качестве части пищевого рациона на выживаемость мышей-носителей после имплантации им меланомы. Во-первых, был приготовлен базовый пищевой рацион, основанный на рекомендациях AIN-76A (Американский институт питания, 1977), однако не содержащий кукурузного масла и dl-альфа-токоферола. Данные ингредиенты н очищенное от витамина E кукурузное масло были приобретены у компании Teklad Test Diets (Мэдисон, штат Висконсин). Исходные растворы dl-альфа-токоферола (80 мкмоль/г) и d-гамма-токотриенола (80 мкмоль/г) были получены с помощью очищенного от витамина Е кукурузного масла. Исходные растворы токолов, разбавленные очищенным от витамина Е кукурузным маслом, смешали с базовым рационом, в результате чего был получен готовый рацион, содержавший 5% кукурузного масла и токол в заданной концентрации. Там, где это оговорено, в масло был добавлен бета-ионон. Рацион, приготовляемый еженедельно, хранился в охлажденном виде. Емкости для пищи очищались и заполнялись ежедневно.
Эксперимент 1: Отнятые от матери в период грудного вскармливания женские особи мышей линии C57BL (компания Harlan-Sprague Dawley, Мэдисон, штат Висконсин) были разделены на четыре группы и помещены в пластиковые клетки с настилом из древесной стружки, где их содержали при 25oС в режиме попеременной смены условий дня и ночи каждые 12 ч. Все четыре группы мышей (по 20 мышей в каждой) в течение 10 дней до и 28 дней после имплантации клеток меланомы В16 кормили экспериментальным рационом. Согласно схеме препараты были разделены на четыре курса лечения, состоящих из двух видов токолов, dl-альфа-токоферола и d-гамма-токотриенола, при этом каждое вещество содержалось в рационе в двух различных дозах, 116 и 924 мкмоль/кг рациона. Такая схема дала возможность произвести два сравнения рационов, содержащих равные дозы токола, и одно сравнение рационов, содержащих примерно равные дозы в пересчете на эквивалент d-альфа-токоферола. Не имея точных оценочных данных биологической активности d-гамма-токотриенола, мы исходили из сообщения о том, что 2,5,8 (d-бета) и 2,7,8 (d-гамма) триметилтокофеголы обладают аналогичной способностью поглощать кислород (максимально 66% от уровня поглощения кислорода 2,5,7,8 (d-альфа) тетраметилтокоферолом), а как класс соединений токотриенолы обладают биологической активностью в пределах 5 - 30% биологической активности токоферолов (смотри Karnal-Eldir and Appelqvist, 1996), в результате чего была сделана предварительная оценка, согласно которой биологическая активность d-альфа-токоферола по меньшей мере в шесть раз уступает биологической активности d-гамма-токотриенола. Затем мы сделали поправку на биологическую активность dl-альфа-токоферола (70% от биологической активности d-альфа-токоферола) и пришли к выводу о том, что соотношение биологической активности токотриенолл и токоферола равно 8:1, что и было положено в основу при составлении экспериментальных рационов. Клетки меланомы, культивированные и собранные описанным выше способом (смотри Shoff et al., 1991) были дважды промыты составом RPMI 1640, содержащим 10% плодной сыворотки коровы (GIBCOBRL). Гранулированные клетки были суспендированы и подсчитаны (98% жизнеспособных клеток) после разведения в 0,4%-ном трипановом голубом красителе. Затем клетки были дополнительно разведены в составе RPMI 1640(1 х 108 клеток/л), и 0,1 мл суспензии (1 х 104 клеток/л) было подкожно введено каждой мыши в боковую область живота. Исследование было завершено на 28 день, когда погибла первая мышь из контрольной группы. Мыши были умерщвлены чрезмерной дозой СО2, а опухоли были экстирпированы и взвешены. Протокол был изучен и утвержден Коллегией комитета по охране сельскохозяйственных животных и животных, используемых в биологических исследованиях.
Эксперимент 2: Отнятые от матери в период грудного вскармливания женские особи мышей линии C57BL (60 особей, компания Harlan-Sprague Dawley, Мэдисон, штат Висконсин) были акклимированы к условиям содержания и пищевому рациону AIN-76 А (116 мкмоль dl-альфа-токоферола на 1 кг рациона), как это было описано выше. Были имплантированы опухоли, после чего мышей продолжали кормить рацином AIN-76A. Начиная с 8-го дня после имплантации производили ежедневную пальпацию с целью выявления опухоли. Впервые опухоли были обнаружены на 14 день. За каждой мышью в подгруппах из пяти особей методом случайного выбора был закреплен номер, соответствовавший определенному типу рациона. Экспериментальные курсы лечения предусматривали содержание 2 и 4 ммоль d-гамма-токотриенола/кг рациона. Дополнительно было испытано воздействие на выживаемость мышей бета-ионона (2 ммоль/кг рациона AIN-76A) и смеси двух изопреноидов (2 ммоль каждого/кг рациона каждого). Мышей продолжали кормить соответствующим экспериментальными рационами; умирающие мыши, выявленные наблюдателем, прошедшим подготовку в центре по исследованию ресурсов животного мира, были умерщвлены чрезмерной дозой СО2, а опухоли были зкстирпированы и взвешены. Протокол был изучен и утвержден Коллегией комитета по охране сельскохозяйственных животных и животных, используемых в биологических исследованиях.
Статистические методики: Для оценки связанных с лечением эффектов было использовано программное обеспечение Staview и SuperNOVA (компания Abacus Concepts, Беркли, штат Калифорния). Связанные с лечением различия в весе тела и опухолей, срок до момента появления опухоли и срок до наступления смерти были установлены с использованием методики анализа раздельных параметров изменчивости и попарного сравнения наименьших средних квадратичных значений. Связанные с лечением различия в сроках наступления смерти также были оценены с использованием параметрических (методом попарного сравнения) и непараметрических (методом относительного ранжирования Wilcoxon) испытаний (смотри Haycock, et al., 1992).
В. Результаты
На фиг. 1 приведена типичная оценка зависимости быстрого размножения клеток меланомы В16 от дозы воздействия токолов. Культуры (3 мл), посеянные с использованием 1-1,5 х 105 клеток, были инкубированы в течение 24 ч до введения токолов. Жизнеспособные клетки были подсчитаны через 48 ч после введения токолов. Пунктирной линией показан результат подсчета клеток через 24 ч (время 0). На пересечении сплошной горизонтальной линии и линии, построенной для каждого токола, показана концентрация, при которой токол на 50% подавил рост числа клеток в период инкубирования (показатель IC50). Показатели IC50 (средний, среднеквадратичного отклонения и n) для всех испытанных изопреноидов приведены в таблице. В соответствии с фиг.1 dl-альфа-токоферол не оказывал воздействия на число клеток. Способность сдерживать рост клеток отдельных токотриенолов находилась в обратной зависимости от числа метиловых групп на кольце 6-хроманола: d-альфа-токотриенол (метиловые группы в положениях углерода 5, 7, 8 и 2) < < d-гамма-токотриенол (метиловые группы в положениях углерода 7, 8 и 2) <d-дельта-токотриенол (метиловые группы в положениях углерода 8 и 2) < <d-2-дезметилтокотриенол (метиловые группы отсутствуют) (смотри таблицу 1).
Показатель IС50 у этой последовательности токотриенолов находился в обратной зависимости от числа метиловых групп на кольце 6-хроманола. Показатели IC50, рассчитанные на основании диаграмм, построенных для наиболее полярных монотерпеноидных спиртов периллилового спирта ([R]4-изопропенил-1 -метанол-циклогесен), периллальдегида ([R]-4-изпропенил-1 -карбоксальдегид-циклогексен), тимола (5-метил-2-изопропилфенол), карвакрола (5-изопропил-2-метилфенол) и гераниола (3,7-трансдиметил-2,6-октадиенол-1) оказались также гораздо ниже показателей d-лимонена ([R]4-изопропенил-1-метил-1 -циклогесен). Показатель IC50 бета-ионона, представляющего собой аналог концевого кольца бета-каротина, был аналогичен показателям наиболее полярных монотерпенов (смотри таблицу 1). Показатель IC50 фарнезола (3,7,11-транс, транстриметил-2,6,10-додекатриенол-1), являющегося сесквитерпеном и структурном аналогом боковой цепи токотриенола, оказался в диапазоне между показателями d-альфа-токотриенола и d-гамма- и d-дельта-токотриенолов.
В ходе первого исследования было оценено воздействие d-гамма-токотриенола и dl-альфа-токоферола на сроки выявления плотной опухоли и рост имплантированной меланомы В16. Как указывалось выше, было проведено два сравнения курсов лечения с использованием равных концентраций токола (116 и 928 мкмоль/кг рациона) и одно сравнение курсов лечения с использованием примерно 80 мкмоль эквивалентов d-альфа-токоферола (35 мг)/кг рациона. На момент имплантации опухоли вес мышей, получавших пищевой рацион с высоким содержанием токоферола, был значительно меньше веса мышей, получавших рацион с низким содержанием токола (смотри таблицу 2). На 28 день после имплантации меланомы составляли 15% веса мышей, получавших рацион AIN-76A. Были испытаны два вида токолов, каждый на двух уровнях. Анализ раздельных параметров изменчивости показал значительный эффект действия токолов (P<0,001) и уровни (Р<0,04) на 28-й день после имплантации опухоли; при этом отсутствовало доказательство взаимодействия этих двух факторов (Р<0,77). Анализ сравнения наименьших средних квадратичных значении подтвердил подавляющее рост опухоли действие гамма-токотриенола (смотри таблицу 2). Измерение еще одного параметра роста опухоли, а именно срока от имплантации до выявления опухоли, показало значение токола (Р<0,03), уровня (Р<0,01) и взаимодействия (Р<0,02). Анализ сранения наименьших средних квадратичных значений показал, что влияние курса лечения с использованием 928 мкмоль d-гамма-токотриенола/кг рациона на данный параметр роста опухоли существенно отличается от влияния других курсов лечения.
Затем было определено, что воздействие изопреноидов на рост клеток меланомы В16 в культуре является аддитивным, а в некоторых случаях синергическим. На фиг. 2А проиллюстрировано аддитивное воздействие гамма-токотриенола и бета-ионона на популяции клеток меланомы В16. Значения являются средними величинами ± среднеквадратичное отклонение; сгруппированные данные растровой электронной микроскопии = 36 (х104). Подсчет числа клеток, показывающий уменьшение их популяции относительно контрольной группы, приведен в приложенной таблице.
На фиг.2В проиллюстрировано аддитивное действие карвакрола и бета-ионона на популяции клеток меланомы В16. Значения показатели средними величинами ± среднеквадратичное отклонение, n = 28; сгруппированные данные растровой электронной микроскопии = 62 (х104). Подсчет числа клеток, показывающий уменьшение их популяции относительно контрольной группы, приведен в приложенной таблице.
Средние значения a-h, не снабженные надстрочным знаком (a>b>c>d>e>f>g>h), являются различными (Р<0,001). В соответствии с фиг.2 в ходе одного испытания клетки меланомы В16 были инкубированы с бета-иононом и d-гамма-токотриенолом (смотри фиг. 2А). d-гамма-токотриенол (7,5 мкмоль/л) и бета-ионон (50 мкмоль/л) снизили число клеток через 48 ч на 19 и 10% соответственно (смотри фиг. 2А). Снижение числа клеток на 34%, достигнутое с помощью спаренных изопреноидов, превысило снижение на 29%, предсказанное на основании суммирования индивидуальных воздействий (смотри фиг.2А). При более высоких концентрациях d-гамма-токотриенола (15 мкмоль/л) и бета-ионона (100 мкмоль/л) число клеток через 48 ч снизилось на 34 и 16% соответственно; аддитивное действие, а именно снижение числа клеток на 68% оказалось также значительнее суммы индивидуальных воздействий (59%) (смотри фиг.2А).
В то время как вышеперечисленные результаты указывают на синергическое действие d-гамма-токотриенола и бета-ионона, исследование, в ходе которого карвакрол применялся в паре с бета-иононом, выявило лишь их аддитивное действие (смотри фиг. 2В). Карвакрол (50 мкмоль/л) и бета-ионон (75 мкмоль/л) снизили число клеток через 48 ч на 25 и 31% соответственно; аддитивное действие, а именно снижение числа клеток на 48% составило менее 56% от предсказанного на основании суммирования индивидуальных воздействий. Карвакрол (100 мкмоль/л) и бета-ионон (150 мкмоль/л) снизили число клеток через 48 ч на 35 и 65% соответственно; аддитивное действие, а именно снижение числа клеток на 84% снова оказалось менее 100% от предсказанного на основании суммирования индивидуальных воздействий (смотри фиг. 2В). Снижение числа клеток, предсказанное на основании суммирования индивидуальных воздействий изопреноидов, в значительной мере соотносится с достигнутым при помощи спаренных изопреноидов (r = 0,91, n = 8, Р <0,01).
Затем был задан вопрос, сможет ли d- гамма-токотриенол или бета-ионон в качестве части пищевого рациона продлить период выживаемости мышей-носителей имплантированной меланомы. После выявления плотных меланом были предприняты курсы диетотерапии. Был также задан вопрос, будут ли эти изопреноиды различной структуры оказывать аддитивное воздействие на выживаемость. Методом случайного выбора за каждой мышью в подгруппах из пяти особей был присвоен номер, соответствовавший одному из экспериментальных рационов. Срок до момента выявления опухоли был одинаков во всех группах (смотри таблицу 3). В результате лечения период 50-процентной выживаемости возрос на (42 ± 4,5)%, а средний период выживаемости - на 30% (Р <0,005); различия между средними показателями выживаемости в экспериментальных группах были незначительными (смотри таблицу 3, фиг 3). На фиг.3 изображена кривая, отображающая выживаемость мышей-носителей, получавших обогащенный изопреноидом рацион после выявления плотной имплантированной меланомы В16. В таблице 4 приведены данные средней выживаемости. При использовании бета-ионона и гамма-токотриенола1 концентрация составляла 2 ммоль изопреноида на кг рациона; при использовании смеси 2 ммоль каждого вида изопреноида на кг рациона; и при использовании гамма-токотриенола2 - 4 ммоль гамма-токотриенола на 1 кг рациона.
Согласно схеме эксперимента каждое животное в подгруппе из 5 особей могло быть объединено с другим членом подгруппы для проведения испытаний. Ниже в таблице 4 приведены показатели Р попарного сравнения с учетом нормального и ненормального распределения. Результаты всех анализов выявили наличие существенных различий между средними показателями у контрольной и лечебных групп; различия между средними показателями в лечебных группах были несущественными. Тенденция, проиллюстрированная в таблице 4, придает дополнительную достоверность результатам анализа in vitro, демонстрирующего наличие по меньшей мере аддитивного действия обоих изопреноидов. В то время как показатели Р трех сравнений изопреноида с изопреноидной терапией превышают 0,88, показатели Р трех сравнений изопреноида со смешанной терапией находятся в пределах от 0,66 до 0,16.
С. Обсуждение
Меланома В16 (F10) дает возможность создать жесткую модель оценки in vitro и in vivo действия фармакологических веществ (смотри Gruber, et al., 1992; Kuwasbima, et. al., 1990; Mac Neil, et al., 1992; Tsukamoto, et al., 1991; Shoff, et al., 1991). Нами установлено, что в результате потребления рациона, содержавшего суточную дозу в 0,4 мкмоль d-гамма-токотриенола, происходило подавление роста меланомы В16, имплантированной в боковую область живота мыши-носителя. В ходе проведенного нами наиболее строгого испытания рациона, содержавшего суточную дозу в 7 мкмоль d-гамма-токотриенола или бета-ионона, происходило подавление роста выявленной меланомы В16. В результате испытаний in vitro было доказано аддитивное действие двух названных изопреноидов (смотри фиг 2А, В). В результате потребления рациона, содержавшего суточную дозу, равную 7 мкмоль d-гамма-токотриенола, период выживаемости увеличился на 35%. В то время как удвоение потребляемой суточной дозы d-гамма-токотриенола (14 мкмоль/сутки) не привело к дополнительному увеличению периода выживаемости (-0,21 сут, Р=0,95), в результате увеличения суточной лозы потребления d-гамма-токотриенола (7 (мкмоль/cутки) на 7 мкмоль/сутки за счет бета-ионона наблюдалась тенденция увеличения периода выживаемости (+0,83 сут, Р=0,65, смотри таблицы 3, 4). В ходе данного исследования была оценена реакция выявленных меланом В16 на бета-ионон и d-гамма-токотриенол, представляющих собой два изопреноида, структурно родственных двум противоокислительным питательным веществам, еще недавно не считавшимся обладающими действием, подавляющим рост опухолей (смотри Greenberg и Sporn, 1996). Оба изопреноида обеспечивают значительное увеличение периода выживаемости (смотри таблицу 4). Мы обратили внимание, что, как было установлено, значительное потребление аскорбиновой кислоты (733 мкмоль/сутки) подавляет рост имплантированной меланомы В16 (смотри Meadows, et al., 1991). Наши исследования показали, что потребление рациона, содержащего восьмикратно увеличенные дозы в пересчете на эквивалент d-альфа-токоферола, оказывало минимальное воздействие на рост опухоли, тогда как рацион на основе d-гамма-токотриенола, содержащий лишь эквивалентное рациону АIN-76А количество d-альфа-токоферола, обеспечил значительное подавление роста опухоли.
D. Синергическое действие ловастатина, токотриенола и ионона
i. Предпосылки
Ловастатин, являющийся грибковым aнтибиотиком, конкурентно подавляет активность редуктазы кофермента А 3-окси-3-метилглутарила (НMG СоА) (смотри J. L. Goldstein и М.S. Brown, Nature 343:425-430, 1990). Бета-ионон (смотри S.G. Yu, et al., J. Agric. Food Chem. 42:1493-1496, 1994), являющийся чистым изопреноидом, и родственные вещества подавляют активность HMG-СоА-редуктазы посредством подавления ее синтеза (обзор Н. Мо, et al., Nutritional Oncology, издательство D. Huber & G. Blackburn, Academic press, NY, в печати; С. E. Elson, et al. , Amer. Assoc. Cancer Res., в печати). Токотриенолы, представляющие собой группу смешанных изопреноидов, подавляют активность редуктазы за счет инициирования протеолитического расщепления фермента (смотри выше С. Е. Elson, в печати). За счет подавления активности редуктазы ловастатин и последующие производные (смотри выше J.L. Goldstein и М.S. Brown. 1990; R.A. Parker, et al., J. Biol. Chem. 268:l1230-11238, 1993), бета-ионон и родственные чистые изопреноиды (смотри выше S. G. Yu, et al., 1994; Н. Мо, et al., в печати) и токотриенолы (смотри выше H. Мо, et al., в печати; R.A. Parker, et al., 1993; A.A. Qureshi, et. al., J. Biol. Chem. 261:10544-10550, 1986; A. A. Qureshi, et. al., Материалы Международной Конференции по пальмовому маслу, 1996, Куала-Лумпур, Малайзия, стр. 168-180) снижают уровни холестерина в крови. У клеток, подвергнутых воздействию ловастатина, многократно увеличивается содержание HMG-CoA-редуктазы, что происходит в результате повышения активности редуктазы после удаления ингибитора (смотри выше J. L. Goldstein и M.S. Brown, 1990). Клеточная активность, лежащая в основе увеличения массы редуктазы, приводит к увеличению транскрипции и эффективности переработки информационной РНК HMG-CoA-редуктазы и уменьшению протеолитического расщепления фермента. Бета-ионон (смотри выше S.G. Yu, et al. , 1994) и токотриенолы (смотри выше R.A. Parker, et al., 1993) ослабляют степень повышения активности (смотри S.G. Yu, et al., 1994) и увеличения массы (смотри выше R.А. Parker, et al., 1993) редуктазы, вызванные воздействием ловастатина.
Промежуточные продукты пути обмена мевалоната являются существенно важными для посттрансляционной модификации белков, играющих важную роль в быстром размножении клеток (смотри выше Н. Мо, et al., в печати). За счет конкурентного подавления синтеза мевалоната, принудительно вызванного станинами, происходит сдерживание быстрого размножения культивированных клеток (смотри выше J. L. Goldstein и M.S. Brown, 1990) и роста имплантированных опухолей (смотри W. Maltese, et al., J. Clin. Invest., 76:1748-1754, 1985; J. P. Jani, et. al., Invasion Metastasia 13:314-324, 1993). В результате пятилетних контрольных наблюдений за 745 пациентами с повышенным содержанием холестерина в крови, получавшими до 80 мг в сутки ловастатина, было выявлено снижение на 33 % заболеваемости раком (14 выявленных случаев, 21 предсказанный) (смотри J. A. Tolbert, Arch. Intern. Med., 153-1079-1087, 1993). На 1 стадии испытаний оценивалась переносимость ловастатина, принимаемого в постепенно увеличивающихся дозах (от 3 до 43 циклов ежемесячно проводимых 7-дневных курсов лечения) 88 пациентами с плотными опухолями (39 из них с опухолями мозга, 24 - с гормональнонезависимым раком предстательной железы. Принимаемые дозы находились в пределах от 2 до 45 мг/кг (максимальная доза при повышенном содержании холестерина в крови составляет 80 мг/сутки). У шестидесяти пациентов было отмечено в общей сложности 128 случаев интоксикации; частота и серьезность случаев интоксикации заметно возросли, когда уровень дозировки достиг 25 мг/сутки. С целью предотвращения интоксикации и улучшения переносимости ловастатина группе пациентов, принимавших 30 и более мг/кг ловастатина, был прописан убихинон. Убихинон не привел к снижению частоты случаев интоксикации, однако существенно смягчил их серьезность. Авторы пришли к выводу о том, что глиомы на поздней стадии развития предположительно являются подходящей целью для 2 фазы испытаний, и рекомендуют провести исследование альтернативных схем лечения, имеющих целью добиться длительного подавления синтеза мевалоната (смотри A. Thibault, et al., Clin. Cancer Res., 2:483-491, 1996).
ii. Синергическое действие ионона, токотриенола и ловастатина при подавлении роста опухолевых клеток
Известно, что бета-ионон, гамма-токотриенол и ловастатин по отдельности сдерживают быстрое размножение клеток мышиной меланомы B16/А10. Показатели IC50 бета-ионона и гамма-токотриенола составляют 140 мкмоль (смотри L. Не, et al., J. Nutr. 127:668-674, 1997) и 20 мкмоль (смотри выше L. Не, et al.). Использовав протокол исследований проведенных упомянутым выше Не, et al., мы установили, что клетки меланомы В16, инкубированные с использованием (1,9 ± 0,3) мкмоль/л ловастатина, растут со скоростью, составляющей (61,4 ± 4,6)% скорости роста в контрольных группах. Данный показатель подтверждает данные, полученные с в результате проведения количественного анализа образования колоний (смотри выше J. P. Jani, et. al., 1993). Результаты проведенных in vivo исследований показывают, что ловастатин (50 мг/кг), принимаемый через день (смотри выше J. L. Goldstein и М.S. Brown, 1990), бета-ионон (2 ммоль/кг рациона) (смотри выше L. Не, et. al., 1997) и гамма-токотриенол (116-2000 мкмоль/кг рациона) по отдельности сдерживают рост имплантированной опухоли мышиной меланомы В16F10.
В результате проведенных нами in vitro количественных анализов была зафиксирована синергическая зависимость между подавляющим рост опухоли действием всех трех веществ. Подавляющее опухоль действие каждого сочетания оказывается более сильным, чем предсказанное на основании суммирования отдельных действий (смотри таблицу 5).
В таблице 5 сведены результаты наших количественных анализов in vitro. В ней приведены различные концентрации ловастатина, бета-ионона и гамма-токотриенола, а также способность подавлять рост опухоли каждого вещества. Рост числа клеток, подвергнутых их воздействию, фиксировался в процентах от роста числа клеток в контрольных группах. В таблице 5 показано, что 2 мкмоль ловастатина и 150 мкмоль бета-ионона соответственно на 50% и 32% снижают рост числа клеток (50% и 68% роста в контрольных группах), а в результате предсказанного комбинированного действия двух соединений произошло сдерживание роста на 82% (50% + 32%) или снижение роста клеток до уровня 18% относительно контрольных групп. Рост клеток был снижен на 90% или до уровня 10% относительно контрольных групп. В серии испытаний, в ходе которых ловастатин применялся в сочетании с изопреном (токотриенолом или иононом), нами было предсказано уменьшение числа клеток на 66% (33 ± 5% от уровня контрольной группы), однако было зафиксировано их уменьшение на 87% (13±4% от уровня контрольной группы). Сочетания изопреноидов обеспечивали снижение роста клеток на 50%, при этом предсказанное уменьшение составляло 57% (50% предсказанного уменьшения в контрольной группе, 43% полученного уменьшения в контрольной группе).
Очевидно, что каждое сочетание ловастатина, бета-ионона и токотриенола обеспечило снижение роста клеток на величину, уступающую предсказанному аддитивному показателю.
В соответствии с таблицей 5 мы предсказываем полное подавление роста клеток с помощью смеси, содержащей 2 мкмоль ловастатина, 5 мкмоль токотриснола и 50 мкмоль ионона.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ЛИПОСОМАЛЬНАЯ ДОСТАВКА СОЕДИНЕНИЙ, ОСНОВАННЫХ НА ВИТАМИНЕ Е | 2002 |
|
RU2328273C2 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ | 2008 |
|
RU2484132C2 |
| СПОСОБ УГНЕТЕНИЯ РОСТА МЕЛАНОМЫ У МЫШЕЙ-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ | 2023 |
|
RU2813701C2 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ | 2017 |
|
RU2711606C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ N1,N4-БИС-(БУТА-1,3-ДИЕНИЛ)БУТАН-1,4-ДИАМИНА И СПОСОБЫ ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ | 2007 |
|
RU2448693C2 |
| БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К CD25 И Fc ГАММА-РЕЦЕПТОРУ ДЛЯ ЭЛИМИНАЦИИ ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ КЛЕТОК | 2017 |
|
RU2759970C2 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ | 2013 |
|
RU2644210C2 |
| Способ создания полинеоплазии со стимуляцией опухолевого роста в условиях первичного иммунодефицита в эксперименте | 2021 |
|
RU2751930C1 |
| Способ моделирования первично-множественного роста злокачественных опухолей с подавлением одной опухоли другой в условиях первичного иммунодефицита | 2021 |
|
RU2750127C1 |
| ДНК-ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ОПУХОЛЕВОГО РОСТА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2004 |
|
RU2343195C2 |
Изобретение может быть использовано в медицине для предотвращения или уменьшения роста опухолей и метастаз. Способ подавления роста опухолевых клеток включает стадию, на которой опухолевые клетки подвергают воздействию эффективной дозы композиции, содержащей токотриенол и ионон, или статин и ионон, или токотриенол, статин и ионон. Способ подавления роста опухоли включает стадию, на которой пациента подвергают воздействию эффективной дозы композиции, включающей или по меньшей мере один токотриенол и по меньшей мере один ионон, или по меньшей мере один токотриенол, по меньшей мере один статин и по меньшей мере один ионон, или по меньшей мере один статин и по меньшей мере один ионон. Заявлена фармацевтическая композиция, содержащая эффективную дозу или по меньшей мере одного токотриенола и по меньшей мере одного ионона, или по меньшей мере одного токотриенола, по меньшей мере одного статина и по меньшей мере одного ионона, или по меньшей мере одного статина и по меньшей мере одного ионона. Заявленные сочетания активных компонентов композиции при ее использовании создают эффект синергизма. Это позволит повысить эффективность лечения пациентов при снижении безопасности химиотерапии. 3 с. и 12 з.п. ф-лы, 4 ил., 8 табл.
| US 5591772 А, 07.01.1997 | |||
| Система регулирования температуры в кабине летательного аппарата | 1971 |
|
SU382075A1 |
| US 5605930 А, 25.02.1997 | |||
| RU 94002913 А1, 27.12.1995. | |||
