СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ЭНДОМЕТРИЯ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в гинекологии, лабораторной диагностике.

Перекисное окисление липидов (ПОЛ) относится к числу тех широко распространенных свободно-радикальных реакций, которые способны модифицировать течение многих физиологических и патологических процессов /1/.

Проявлению повреждающего действия свободно-радикальных реакций (СРР) и перекисных соединений препятствует сложная многокомпонентная антиоксидантная система (АОС), которая состоит из неферментативного и ферментативного звеньев и обеспечивает противоокислительную биологическую защиту /2/.

Ферментативный катализ свободных радикалов происходит в основном в липидном слое мембран клеток с участием ферментов: супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, глутатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР), глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Г-6-ф-Д), глутатионтрансферазы (Г-S-Т). Посредством участия в работе ферментативных антиоксидантов (АО) реализуется АО-эффект глутатиона (GSH) /4/.

В настоящее время накопилось огромное число данных, свидетельствующих о важной, а подчас определяющей роли СРР в канцерогенезе /2/.

В работах последних лет отмечено, что одни и те же морфологические изменения эндометрия обладают различной степенью опасности перехода в злокачественные заболевания. Большое внимание уделяется изучению изменений, происходящих в организме женщины задолго до возникновения рака, что позволяет проводить направленную профилактику и лечение фоновых заболеваний /6/.

В качестве прототипа могут служить работы Л. Берштейна и соавт. /1/, оценивающих ПОЛ по образованию МДА (спонтанного и индуцированного аскорбатом-0,5 ммоль и НАДФН-0,9 ммоль) в процессе инкубации компонентов реакции в течение 30 минут при 37^oС. На основе полученных данных исследователи определили, что:
1) ткань опухолей эндометрия значительно более чувствительна к стимуляции реакций ПОЛ:
2) повышение ПОЛ более свойственно новообразованиям, характеризующимся меньшей степенью дифференцировки и при II-III клинической стадии заболевания.

В.Н. Серов, Л.И. Стерлягов /6/ определяют конечный продукт ПОЛ - малоновый диальдегид (МДА) в сыворотке крови при полипозе эндометрия, различных вариантах гиперплазии и раке матки. МДА определяли по методике Ishiharae в сыворотке крови на спектрофотометре 26-Б при длине волны 254 нм. В результате этого обследования отмечено повышение содержания МДА при переходе от полипоза к раку.

В этих работах имеются недостатки:
1) во-первых, судить о полной картине и роли ПОЛ в патогенезе развития ГПЭ и рака эндометрия только по определению вторичного продукта - МДА не представляется возможным;
2) во-вторых, ни в одной работе не определялись показатели антиоксидантной защиты.

Задачей изобретения является раннее выявление лиц высокого онкологического риска.

Поставленную задачу решают за счет того, что определяют первичные продукты перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы и по результатам анализа диагностируют доброкачественные гиперпластические процессы эндометрия.

Все исследования ведут скрининговым методом. Распределение по клиническим группам проводили после морфологического исследования эндометрия, вceгo обследовано 152 человека. Контрольную группу составили 50 здоровых женщин. Больных с железисто-фиброзными полипами (ЖФП) было - 36, железистыми полипами (ЖП) - 34; железисто-кистозной гиперплазией (ЖКГЭ) - 32.

Клиническое обследование заключалось в изучении анамнеза, симптомов заболевания, выявлении нейроэндокринных нарушений, анализа результатов предыдущих выскабливаний. Из дополнительных методов обследования проводили гистероскопию, ультразвуковое исследование (УЗИ). В сыворотке крови радиоиммунологическим методом определяли уровень эстрадиола и прогестерона.

Средний возраст здоровых женщин составил 29,3±1,09 лет, больных с ЖФП - 33,5±1,5; ЖП - 32,1±1,4, ЖКГЭ - 34,7±1,3. Длительность заболевания колебалась от 1-3 месяцев до 1,5 лет.

Содержание первичных продуктов ПОЛ - ДК и ГПЛ определяют согласно методикам, предложенным И. Д. Стальной /7/, В.Б. Гавриловым, М.И. Мишкорудной /3/.

Содержание конечного продукта - МДА - по методике М. Kurian, G.V.N. Jyer, /10/.

Активность ферментов - глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, каталазы, глутатион-S-трансферазы, а также содержание глутатиона по Beutler /9/.

СОД определяют согласно методике С. Чевари, Д. Анзял, Я. Штренгер /8/.

Глутатионпероксидазу - по методике В. М. Моина /5/.

Уровень первичных проектов ПОЛ - гидроперекисей липидов (ГПЛ), диеновых конъюгатов (ДК) и вторичного продукта МДА, а также активность ферментов АОС (каталазы, ГП, ГР, Г-6-ф-Д, СОД, Г-S-T, GSH) определяли в упакованных эритроцитах. Забор крови из локтевой вены проводили утром, натощак, накануне перед выполнением УЗИ, гистероскопии, выскабливания полости матки. Свежая гепаринизированная кровь тщательно перемешивалась и разливалась в центрифужные пробирки по 8-10 мл. После 15-минутного центрифугирования при 3000 об/мин осторожно отбиралась плазма и лейкоциты. Эритроциты трижды отмывались холодным раствором 0,9% NaCl. Для этого эритроциты суспендировали в течение 10 минут при 3000 об/мин, супернатант отбрасывали. Последнее центрифугирование проводили в течение 20 минут при 3000 об/мин для более плотной упаковки клеток.

В результате обследования по крови отмечено усиление пероксидации липидов в мембранах у больных с данной патологией. Содержание ГПЛ и ДК в эритроцитах женщин с доброкачественными гиперпластическими процессами эндометрия (ГПЭ) достоверно отличалось от их уровня в эритроцитах здоровых женщин.

Содержание МДА, его базального уровня, в основной группе при сравнении средних величин с контролем снижалось. Полученные результаты были не достоверны. Такое снижение содержания МДА в эритроцитах при ГПЭ может быть обусловлено расходованием продукта на образование поперечных сшивок в белок-липидных комплексах биомембран, ускоренным метаболизмом продукта при данной патологии.

Активность антиоксидантных ферментов изменялась в эритроцитах больных ГПЭ по-разному: у глутатионпероксидазы и каталазы увеличивалась, у глутатионтрансферазы, глутатионредуктазы, супероксиддимсмутазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы - снижалась по сравнению с активностью соответствующих ферментов в эритроцитах здоровых женщин.

При различных гистологических формах наблюдается неоднозначное изменение содержания продуктов ПОЛ и активности ферментов АОС (табл. 1, 2, 3).

У больных с железистыми полипами содержание ДК в эритроцитах увеличивалось на 48%. Железисто-фиброзными полипами - на 71%, железисто-кистозной гиперплазией - на 165% по сравнению с контролем. Изменение ГПЛ имело другую направленность: самый высокий уровень гидроперекисей липидов отмечался у больных железистыми и железисто-фиброзными полипами - 134% и 64% соответственно. И незначительное увеличение по сравнению с нормой найдено в эритроцитах больных с железисто-кистозной гиперплазией (табл.1).

Содержание МДА при различных гистоморфоструктурах ГПЭ достоверно не отличалось (табл.2).

Найдено, что активность ГПО и каталазы достоверно не отличалась от таковой в контрольной группе у больных с ЖП и ЖФП и достоверно повышалась на 65% и 72% соответственно в эритроцитах больных ЖКГЭ (табл.3).

В отличие от вышеназванных ферментов активность ГР, Г-S-T, Глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, СОД, содержание глутатиона снижались при всех формах ГПЭ по сравнению с контрольной величиной. Наибольшее снижение происходило в активности Г-S-T и в содержаниии глутатиона 32-45% и в 47% соответственно (табл.3)
По полученным результатам высчитывали соотношение ГП/ДК и Кат/ДК в каждом индивидуальном случае. Определили, что у здоровых женщин в группе контроля соотношение ГП/ДК равнялось 18-18,4, а Кат/ДК - 21-21,3. В группах с патологией эндометрия эти показатели были низкими: ГП/ДК - 11-14: Кат/ДК 14-15. Причем соотношение этих показателей имело обратную корреляцию с распространенностью процесса (очаговый или диффузный) и с преобладанием железистого компонента, т.е. при ЖКГЭ и ЖП более низкими, чем при ЖФП.

Таким образом, полученные результаты показали, что при ГПЭ в эритроцитах происходит гиперактивация ПОЛ, выражающаяся в существенном повышении содержания его первичных продуктов - диеновых конъюгатов и гидроперекисей, которые обладают способностью существенно модифицировать соотношение холестерин/фосфолипиды, тем самым изменяя проницаемость для различных ионов, взаимодействие рецепторов клеточной мембраны, приводить к разрыву нитей ДНК, что является основой спонтанного и индуцированного мутагенеза. Повышение активности ГПО и каталазы в эритроцитах на фоне сниженной активности других ферментов и содержания глутатиона не достаточно для нормализации содержания ДК и ГПЛ при ГПЭ. При прогрессирующем снижении внутриклеточного глутатиона происходит дисрегуляция метаболизма клетки в целом. Такие нарушения в метаболизме на уровне клетки ведут к нарушению ее адаптивных свойств и усиленной пролиферации.

Исходя из этого содержание диеновых конъюгатов и гидроперекисей липидов в эритроцитах, а также активность каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы, содержание глутатиона и их соотношение: ГП/ДК, равное 11-14; Кат/ДК, равное 14-15, могут быть рекомендованы в качестве значимого критерия наличия ГПЭ наряду с традиционными, но достаточно трудоемкими методами диагностики.

Источники информации:
1. Перекисное окисление липидов в ткани рака эндометрия: связь с гормоночувствительностью опухоли и гормональным канцерогенезом / Л.М. Берштейн, А. В. Вакуленко, Д.С. Вишневский, Е.В. Цырлина // Вопросы онкологии. - 1996. - Т. 42, 3. - С.37-39.

2. Владимиров Ю.А. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1989. - 4. - С.10.

3. Гаврилов В. Б., Мишкорудная Б.С. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лабораторное дело. - 1987. - 3. - С.33-36.

4. Зенков Н. К., Менщикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительный процессов. // Успехи современной биологии. - 1993. - T.113, 4. - С.456-470.

5. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лабораторное дело. - 1986. - 2.-С.724-727.

6. Серов В.Н., Стерлягов Л.И. Информативность некоторых показателей гемостаза в формировании групп риска по развитию рака эндометрия // Акушерство и гинекология. - 1991. - 4. - С.48-56.

7. Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. - М.: Медицина, 1977. - 203 с.

8. Чевари С., Андял Т., Штренгер Я. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение // Лабораторное дело. - 1991. - 10. - С.9-13.

9. Beutler E. Red cell metabolism. A manual of biohemical methods // Grune and Stratton Orlando, San Diego, New York, London, Toronto, Monreal, Sydney, Tokyo, 1984.

10. Kunan M., Iver G. V. N. Lipid peroxidation in erythrocytes from different animal species / Indian. Y. Biochem Biophys. - 1976. - 13. - P.67-70.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в гинекологии, лабораторной диагностике. Для этого определяют первичные продукты перекисного окисления липидов, активность ферментов антиоксидантной системы и соотношение ГП/ДК и Кат/ДК и при ГП/ДК, равном 11-14, Кат/ДК=14-15 диагностируют доброкачественные гиперпластические процессы эндометрия. Преимущества способа: способ является менее трудоемким, сравнительная простота и доступность в получении биоматериала; требует малых затрат времени. 3 табл.

Способ ранней диагностики доброкачественных гиперпластических процессов эндометрия, включающий забор венозной крови, анализ ее на содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) - малонового диальдегида, отличающийся тем, что дополнительно в эритроцитах определяют первичные продукты перекисного окисления липидов: гидроперекиси (ГП) и диеновые конъюгаты (ДК), активность ферментов антиоксидантной системы: глутатионпероксидазы (ГП) и каталазы (Кат), рассчитывают соотношение показателей ГП/ДК, Кат/ДК и при значении первого соотношения 11-14, второго - 14-15 диагностируют доброкачественные гиперпластические процессы эндометрия.