СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/74 

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинико-диагностическим исследованиям состояния коры надпочечников.

Известно, что глюкокортикоиды, являющиеся гормонами, образующимися в корковом веществе надпочечников, по своей химической природе являются производными циклопентанопергидрофенантрена и оказывают регулирующее влияние на углеводный обмен. Всякое сильное психическое или физическое воздействие на организм человека споровождается изменением секреторной деятельности коры надпочечников.

В целом, глюкокортикоидные гормоны в сравнении с полипептидными гормонами и производными аминокислот являются значительно более стабильными. Это позволяет определять их в таких биологических жидкостях, как кровь, моча, синовиальная жидкость из коленного сустава, плевральная жидкость и др.

Исследования показали, что для суммарной оценки функции коры надпочечников достаточно исследования неконъюгированных 11-оксикортикостероидов (11-ОКС).

Известен способ определения 11-оксикортикостероидов в плазме крови по их флюоресценции в серноспиртовом реактиве (В.Г.Колб, B.C.Камышников. Справочник по клинической химии. Изд. второе, перер. и допол. - Минск: Беларусь, 1982, с.309-312).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения 11-оксикортикостероидов в плазме крови (Биохимические и иммунологические методы оценки регулирующих систем организма. Материалы для самостоятельной работы студентов и слушателей факультета повышения квалификации преподавателей. Куйбышев. Минздрав РСФСР, Куйбышевский медицинский институт им. Д.И.Ульянова, ЦНИЛ, 1989, с. 17-19).

Данный способ основан на том, что выделенные экстракцией из плазмы крови кортикостероиды, имеющие гидроксилы при 11-м и 21-м углеродных атомах, обнаруживают по флюоресценции после обработки проб смесью концентрированной серной кислоты и этилового спирта, а затем определяют концентрацию 11-оксикортикостероидов по формуле:

где X - определяемая концентрация кортикостероидов в плазме, мкг/мл;
E_oп - интенсивность флюоресценции опытной пробы;
Е_ст - интенсивность флюоресценции стандартной пробы, содержащей 1мкг гормонов;
Е_к - интенсивность флюоресценции контрольной пробы.

Недостатком известного способа является то, что в качестве биологического материала, который берется у людей при обследовании, используют кровь, забор который из вены является травматичным для человека и требует специально подготовленного помещения, обученного медицинского персонала, стерильных инструментов, одноразовых шприцев.

При массовых обследованиях на предприятиях многие люди отказываются от этой услуги.

В основу изобретения положена задача упрощения и удешевления способа оценки функции коры надпочечников, снижение травматичности исследования при заборе биологической жидкости, повышение эффективности диагностирования.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе оценки функции коры надпочечников, основанном на заборе биологической жидкости, определении в ней концентрации 11-оксикортикостероидов флуориметрическим методом, в качестве биологической жидкости производят забор слюны человека в химически чистые пробирки в количестве 1-3 мл, а для проведения анализа используют 0,5 слюны с добавлением в нее 0,5 мл дистиллированной воды и 1 мл этилового спирта, а по возрастанию или уменьшению концентрации 11- оксикортикостероидов в слюне судят соответственно об усилении или снижении функции коры надпочечников.

В результате проведенных экспериментальных исследований выявлены ранее неизвестные свойства слюны человека, а именно: между концентрациями 11-оксикортикостероидов в крови и в слюне существует положительная корреляционная связь.

В связи с этим установлена возможность и целесообразность использования в качестве биологической жидкости слюны для оценки функции коры надпочечников по определению в слюне концентрации 11-оксикортикостероидов.

Способ оценки функции коры надпочечников осуществляют следующим образом.

В качестве биологической жидкости используют слюну человека, перед забором пробы которой обследуемый промывает ротовую полость кипяченой водой, просушивая полость салфеткой.

Сбор слюны производят в химически чистые пробирки в количестве 1-3 мл.

Для анализа берут 0,5 мл слюны, добавляя 0,5 мл дистиллированной воды и 1 мл 50 % этилового спирта. Затем приливают 3 мл гексана и встряхивают в течение одной минуты. После этого удаляют гексан и к водной фазе добавляют 5 мл хлороформа, встряхивают в течение 3 мин.

После удаления водной фазы добавляют 1 мл 2 % раствора карбоната натрия, встряхивают 1 мин. Затем удаляют водную фазу, далее приливают 1 мл дистиллированной воды, встряхивают 1 мин.

После этого центрифигируют смесь в течение 10 мин при 1500 об/мин.

Переносят 4 мл хлороформа в пробирки, содержащие 1,5 мл смеси 96 % этилового спирта и 96 % серной кислоты, выдерживающей пробу Саваля, в соотношении 3:7 по объему. Далее встряхивают в течение 1 мин, удаляют хлороформ.

А через 1 ч измеряют интенсивность флюоресценции на аппарате БИАН-130. Длина волны возбуждения 436 мм, флюоресценции 510 мм.

Для определения концентрации 11-оксикортикостероидов сравнивают интенсивность флюоресценции исследуемой и стандартной проб, содержащих изучаемые гормоны известной концентрации в слюне:

Х - определяемая концентрация кортикостероидов в слюне, мкг/мл;
Е_оп - интенсивность флюоресценции опытной пробы;
Е_ст - интенсивность флюоресценции стандартной пробы, содержащей 1 мкг гормонов;
Е_к - интенсивность флюоресценции контрольной пробы, не содержащей гормонов.

При возрастании концентрации 11-оксикортикостероидов в исследуемой слюне делают вывод об усилении функции коры надпочечников, а при уменьшении концентрации 11-оксикортикостероидов в слюне делают вывод о снижении функции коры надпочечников.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом способе оценки функции коры надпочечников, изложенных в формуле изобретения.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию "новизна".

Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию "изобретательский уровень" заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.

Результаты поиска показали, что заявляемое изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого изобретения преобразований на достижение технического результата.

Следовательно, заявляемое изобретение "способ оценки функции коры надпочечников" соответствует критерию "изобретательский уровень".

Критерий "промышленная применимость" подтверждается тем, что предлагаемое изобретение может быть успешно использовано при массовом обследовании населения в диагностических целях для оценки состояния коры надпочечников и эффективно внедрено в систему здравоохранения России и СНГ.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической лабораторной диагностике. Способ обеспечивает повышение эффективности диагностирования, упрощение и удешевление исследования функции коры надпочечников. Проводят забор биологической жидкости, определение в ней концентрации 11-оксикортикостероидов по интенсивности флюоресценции и оценку усиления или снижения функции коры надпочечников по возрастанию или уменьшению соответственно концентрации 11-оксикортикостероидов, при этом в качестве биологической жидкости используют слюну обследуемого человека в количестве 0,5 мл с добавлением в нее 0,5 мл дистиллированной воды и 1 мл 50%-ного этилового спирта.

Способ оценки функции коры надпочечников, включающий забор биологической жидкости, определение в ней концентрации 11-оксикортикостероидов по интенсивности флюоресценции и оценку усиления или снижения функции коры надпочечников по возрастанию или уменьшению соответственно концентрации 11-оксикортикостероидов, отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости используют слюну обследуемого человека в количестве 0,5 мл с добавлением в нее 0,5 мл дистиллированной воды и 1 мл 50%-ного этилового спирта.