СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА Российский патент 2002 года по МПК A61K35/14 A61K38/30 A61K38/36 A61K39/00 A61P37/02 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и иммунологии, и может быть использовано при лечении злокачественных опухолей головного мозга.

Известен способ лечения злокачественных опухолей головного мозга включающий химиолучевую терапию (патент РФ 2125871, А 61 К 31/17, A 61 N 5/10, 1999), в котором в качестве химиотерапевтического препарата используют белустин в ежедневной дозе 40 мг до суммарной дозы 200-280 мг в сочетании с лучевой терапией. Для повышения эффективности лечения дополнительно вводят альфа-2-интерферон. Недостатки способа - развитие панцитопении и иммуносупрессии.

Известен способ лечения злокачественных опухолей головного мозга с использованием цитокиновой терапии (патент РФ 2133624, А 61 К 38/20, А 61 К 38/21, А 61 В 17/00, 1999), принятый нами за прототип. При этом осуществляют внутривенное введение дрожжевого рекомбинантного интерлейкина-2 в дозе до 20 ME. Затем проводят курс внутривенного введения лимфокин-активированных киллерных клеток вместе с дрожжевым рекомбинантным интерлейкином-2. Недостатки прототипа - неспецифичность способа, имеет осложнения, связанные с введением интерлейкина-2 (например - отеки), при этом интерлейкин-2 быстро разрушается в организме.

Изобретение направлено на создание способа лечения злокачественных опухолей головного мозга, позволяющего сократить побочные эффекты и осложнения, увеличить при этом продолжительность жизни пациентов, сохранить качество жизни. Это достигается за счет предложения Т-лимфоцитам опухолевого антигена "профессиональными" антиген-представляющими клетками организма - дендритными клетками, которые содержат опухолевый антиген, введенный им in vitro, обеспечивая, таким образом, специфичность способа. Дополнительно вводят активированные аутологичные лимфоциты, обеспечивающие продукцию интерлейкинов (в том числе и интерлейкин-2), что позволяет катализировать иммунологический противоопухолевый ответ.

Сущность способа заключается в следующем: фрагмент опухоли, взятый во время операции, диссоциируют на экстракт белков, используемый в дальнейшем как антиген. Из периферической крови, взятой у пациента, выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами. Вначале к моноцитам, а затем к полученным из них дендритным клеткам добавляют антигенный материал. Далее дендритные клетки вводят внутрикожно больному. Параллельно проводят иммуномодуляцию с использованием активированных лимфоцитов, которые получают из мононуклеарных лейкоцитов больного, активированных с помощью фитогемагглютинина. Активированные лимфоциты также вводят внутрикожно.

Таким образом, адекватно показанный иммунокомпетентным клеткам опухолевый антиген в сочетании с неспецифическим иммуностимулирующим эффектом (за счет активированных лимфоцитов) позволяет активизировать специфический противоопухолевый иммунитет и дает возможность использования данного способа в качестве адъювантного лечения в составе комплексного противоопухолевого лечения.

Заявляемый способ отличается от прототипа тем, что из периферической крови больного выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами, далее в среду к полученным из моноцитов дендритным клеткам, а также путем электропорации внутрь клеток добавляют антигенный материал, приготовленный из опухоли больного, затем дендритные клетки вводят внутрикожно, дополнительно проводят иммуномодуляцию, используя активированные с помощью фитогемагглютинина лимфоциты больного.

Способ осуществляется следующим образом. Во время хирургической операции забирают фрагмент опухоли не менее 3 см³, содержащий живые опухолевые клетки и по возможности не содержащий нормальные и некротизированные ткани. Фрагмент опухоли помещают в стерильный раствор и передают для изготовления антигенного материала в течение 1 суток. Для приготовления антигена фрагмент опухоли облучают в дозе 200 Гр, диссоциируют на клетки. Полученные опухолевые клетки отмывают и разрушают путем повышения РН среды, в которой находятся клетки до РН 11,5, с последующим понижением РН до 6,5. Полученный из них экстракт белков используют как антиген для предоставления дендритным клеткам. Перед каждым раундом лечения производят забор 40-60 мл периферической крови больного в шприц, содержащий раствор гепарина. Конечная концентрация гепарина 30 единиц на 1 мл. Кровь поступает на обработку не позднее 6 часов после забора. Из взятой крови выделяют моноциты, которые культивируются в течение 7 дней с ростовыми факторами (гранулоцит-макрофаг колониестимулирующий фактор и интерлейкин-4 в количестве 1000 ед/мл) с постоянным контролем и сменой среды. На 6 день к дендритным клеткам добавляют приготовленный из опухоли данного больного антигенный материал и в этот же день антигенный материал вводят внутрь полученных дендритных клеток с помощью электрического разряда (электропорация).

Забор периферической крови для приготовления активированных лимфоцитов производят, как и для дендритных клеток, но в количестве 15-20 мл. Для приготовления активированных лимфоцитов из крови выделяют мононуклеарные лейкоциты, которые активируют к пролиферации с помощью фитогемагглютинина и на 4 сутки вводят внутрикожно. Цель процедур - активация возможно большего числа Т-лимфоцитов при преимущественной стимуляции Th-1 клеточного пути иммунного ответа.

На 8 сутки больному вводят внутрикожно дендритные клетки. Количество вводимых клеток варьирует от 2•10⁵-10⁷ Курс лечения включает 2 лечебных цикла в первый месяц, цикл включает в себя инъекцию активированных лимфоцитов на 4 сутки и дендритных клеток на 8 сутки, и в последующем один лечебный цикл каждые 2 месяца.

Заявленный способ разработан в РНХИ им. профессора А.Л. Поленова и ПИЯФ им. Б.П. Константинова и прошел клинические испытания при лечении 3 больных со злокачественными опухолями головного мозга.

Приводим пример - выписку из истории болезни 76/2000. Больной И., 54 лет, диагноз: Глиобластома правых лобной и теменной долей мозга. Продолженный рост опухоли. Операции в 1996, 1998, 1999 гг., 2 курса лучевого лечения, 3 курса полихимиотерапии.

19.01.2000 сделана повторная (4) операция костно-пластическая трепанация черепа в правой лобно-темено-височной области, субтотальное удаление опухоли. Согласно заявляемому способу во время операции у больного был взят фрагмент опухоли объемом 10 см³, а после операции проводились заборы 60 и 20 мл периферической крови. Используя опухоль и мононуклеарные клетки периферической крови больного, а также используя активированные лимфоциты больного, проводилось лечение в виде 2 внутрикожных инъекций (одна инъекция активированных лимфоцитов, через 4 суток инъекция дендритных клеток с опухолевым антигеном) каждые 2 недели в течение 1 месяца, а затем раз в 2 месяца.

В период проведения лечения у больного несколько регрессировал левосторонний гемипарез по сравнению с дооперационным уровнем, показатель социальной адаптации дооперации соответствовал 50 баллам по шкале Карновского, в процессе лечения составил 70 баллов и сохраняется на протяжении всего периода наблюдения после операции. По данным КТ головного мозга спустя 5 месяцев после операции данных за продолженный рост опухоли нет. Сохраняется хорошее самочувствие больного, в основном себя обслуживает самостоятельно, выполняет мелкую домашнюю работу, с интересом читает книги, смотрит телепередачи, жалоб активно не предъявляет.

Использование данного способа позволило
- избежать осложнений, связанных с введением IL-2
- улучшить и стабилизировать состояние больного по шкале социальной адаптации Карновского
- сохранить хорошее самочувствие больного
достичь пятимесячного периода свободного от прогрессии опухоли.

Изобретение относится к медицине. Предложен способ лечения злокачественных опухолей головного мозга, включающий выделение из крови больного моноцитов, их культивирование с ростовыми факторами, добавление к полученным из моноцитов дендритным клеткам и внутрь клеток антигенного материала из опухоли больного и внутрикожное введение дендритных клеток, дополнительно проводят иммуномодуляцию активированными лимфоцитами больного. Способ позволяет активизировать специфический противоопухолевый иммунитет.

Способ лечения злокачественных опухолей головного мозга путем иммунотерапии, отличающийся тем, что из периферической крови больного выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами, далее в среду к полученным из моноцитов дендритным клеткам, а также путем электрокорпорации внутрь клеток добавляют антигенный материал, приготовленный из опухоли больного, затем дендритные клетки вводят внутрикожно, дополнительно проводят иммуномодуляцию, используя активированные с помощью фитогемагглютинина лимфоциты больного.