СПОСОБ ОТБОРА НЕЙРООНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии, и может быть использовано для отбора нейроонкологических больных для проведения специфической противоопухолевой иммунотерапии.

Неудовлетворенность результатами лечения опухолей головного мозга несмотря на использование после операции лучевого лечения и химиотерапии способствует развитию новых противоопухолевых лечебных методик. Одним из направлений в составе комплексного лечения онкологических заболеваний является противоопухолевая иммунотерапия.

Как и любой способ противоопухолевого лечения, иммунотерапия имеет ограниченную эффективность - считается, что наибольший эффект она имеет при лечении меланомы, гипернефромы. Отчасти это связано с иммуногенностью указанных опухолей и слабым эффектом от традиционных способов лечения - лучевое, химиотерапия. Тем не менее, в настоящее время в онкологических центрах идет активное применение противоопухолевой иммунотерапии у больных с новообразованиями различной гистоструктуры и локализации. Существует устойчивое мнение, что для развития противоопухолевого иммунного ответа опухоль должна быть иммуногенной, иметь на поверхности клеток достаточную презентацию опухолеспецифических антигенов, достаточное количество антигенов главного комплекса гистосовместимости, необходимых для представления пептидов опухолевых антигенов профессиональными антигенпрезентирующими клетками (дендритные клетки) и, наконец, иммуносупрессия, существующая у многих онкологических больных, может ограничивать иммунный ответ (А.Ройт, Дж.Бростофф, Д.Мейл. Иммунология опухолей. // В кн. Иммунология, М., 2000. - С.384-385).

Противоопухолевую иммунотерапию проводят больным исходя из гистоструктуры опухоли, состояния больного, согласно протоколам, принятым в онкологическом центре, где она проводится. С практической точки зрения целесообразно иметь способ отбора больных, у которых вышеуказанные условия соблюдены, имеется иммунный ответ на опухоль, усиление которого с помощью специфической противоопухолевой иммунотерапии позволит получить положительный лечебный эффект.

Изобретение направлено на создание способа отбора нейроонкологических больных для проведения иммунотерапии, позволяющего сразу после операции выявить существование иммунного ответа на опухоль, проводить противоопухолевую иммунотерапию и иметь в результате положительный лечебный эффект.

Сущность изобретения заключается в том, что выявляют наличие существующего специфического противоопухолевого иммунного ответа путем обнаружения специфических противоопухолевых антител на поверхности клеток новообразования, обработанных белком А Staphilococcus aureus, меченным флуоресцином, с помощью флуоресцентного микроскопа сразу после удаления фрагмента опухолевой ткани. В зависимости от наличия или отсутствия специфических противоопухолевых антител на поверхности клеток новообразования принимают решение о проведении противоопухолевой иммунотерапии.

Наличие антител на клетках опухолей, представленных иммуноглобулинами класса G, указывает на то, что: иммунная система распознала антигены опухоли, на которые выработаны специфические антитела; гематоэнцефалический барьер открыт для выполнения эффекторных функций иммунной системы и стимуляция противоопухолевого иммунитета способна оказать положительный лечебный эффект.

Способ осуществляется следующим образом. Сразу после удаления фрагмента опухолевой ткани для выявления существования и количественной оценки антител к клеткам опухолей нервной системы ткань новообразования гомогенизируют в буфере А: 0.05 М Трис/0.15 М NaCl/0.01 М ЭДТА/0.001 М РМСФ рН 7.2 из расчета 10 мл буфера А на 1 г ткани. Обнаружение комплексов "опухолевая клетка-IgG" осуществляется с помощью конъюгата белок-А-FITC ("Sigma") из расчета, что белок А из St. Aureus является моноспецифическим лигандом Ig G и специфично связывается с Ig G на поверхности клеток опухоли. Регистрацию флуоресценции осуществляют на флуоресцентном микроскопе. При флуоресцентном свечении более 50% поверхности исследуемого материала принимают решение о проведении иммунотерапии.

Заявляемый способ отбора нейроонкологических больных для иммунотерапии был использован при изучении фрагментов опухолей у 21 нейроонкологического пациента. Были исследованы образцы доброкачественных астроцитом, злокачественных глиом, менингиом. Согласно заявляемому способу гомогенизированные в буфере А фрагменты опухолей обрабатывались белком А, меченным флуоресцином. Мазки суспензии опухолей исследовались на микроскопе Opton-Axioplan при длине волны 510 нм. Интенсивность связывания антител на поверхности клеток опухоли оценивали как выраженную, если 75% и более части исследуемого материала имело флуоресцентное свечение, среднюю - 50-75% исследуемого материала имело свечение, и слабую - менее 50%, принималось во внимание отсутствие свечения. Слабое флуоресцентное свечение либо его отсутствие расценивалось как отсутствие иммунного ответа на опухоль.

Клетки злокачественных глиальных опухолей оказались интенсивно окрашены в 63% наблюдений, что указывало на существование специфического противоопухолевого гуморального иммунного ответа у данных больных. А при исследовании образцов доброкачественных опухолей - астроцитом и менингиом интенсивное флуоресцентное свечение встречалось заметно реже - лишь в 8% наблюдений. Особенностью являлось то, что при исследовании опухолей одного гистотипа степень выраженности флуоресцентного свечения могла существенно отличаться и являлась критерием для отбора больных к проведению иммунотерапии.

Приводим клинический пример 1. Больная К., 67 лет, история болезни №813-04 поступила в НХО №2 ИМЧ РАН через 1 месяц после операции, удаления глиобластомы левой лобной доли, что указывало на быстрый рост опухоли. После реоперации и исследования согласно заявляемому способу образца новообразования на существование иммунного ответа было выявлено интенсивное флуоресцентное свечение более 50% поверхности исследуемого образца опухоли, что указывало на присутствие на опухоли большого количества специфических антител, т.е. наличие у больной противоопухолевого иммунного ответа. Было принято решение о проведении иммунотерапии. Поведение после операции 5 курсов специфической противоопухолевой иммунотерапии, включающей подкожное введение аутологичных дендритных клеток с лизатом собственной опухоли больного, активированных аутологичных лимфоцитов позволило получить выживаемость 15 месяцев после реоперации, что указывает на выраженный лечебный противоопухолевый эффект от проведенного иммунологического лечения.

Пример 2. Больной А., 34 лет, история болезни №636-04 прооперирован в НХО №2 ИМЧ РАН по поводу анапластической астроцитомы правой лобной доли. При микроскопическом исследовании образца опухоли, обработанного белком А, меченным флуоресцином, отмечалось скудное свечение (менее 50% поверхности исследуемого образца опухоли), что указывало на крайне слабый противоопухолевый иммунный ответ у больного. Через 2 месяца после операции и проведенного в составе комплексного лечения курса специфической противоопухолевой иммунотерапии у пациента возник продолженный рост новообразования, что демонстрирует неэффективность иммунотерапии у данного больного.

Изобретение относится к области медицины, в частности к нейрохирургии. Способ обеспечивает выявление сразу после операции существование иммунного ответа на опухоль и проведение иммунотерапии с положительным лечебным эффектом. Отбор нейроонкологических больных для иммунотерапии проводят путем гомогенизации опухолевого фрагмента в буфере А, обработки белком А из Staphilococcus.aureus, являющимся моноспецифическим лигандом Ig G и меченным флуоресцеином, затем выявляют интенсивность связывания антител на поверхности клеток по степени выраженности флуоресцентного свечения, причем при флуоресцентном свечении более 50% поверхности исследуемого материала принимают решение о проведении иммунотерапии данным нейроонкологическим больным.

Способ отбора нейроонкологических больных для иммунотерапии, отличающийся тем, что опухолевый фрагмент гомогенизируют в буфере А, обрабатывают белком А из Staphilococcus aureus, являющимся моноспецифическим лигандом Ig G и меченным флуоресцеином, затем выявляют интенсивность связывания антител на поверхности клеток по степени выраженности флуоресцентного свечения, причем при флуоресцентном свечении более 50% поверхности исследуемого материала принимают решение о проведении иммунотерапии данным нейроонкологическим больным.