ПЕПТИДЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С РЕЦЕПТОРОМ КАЛЬЦИТОНИНА Российский патент 2003 года по МПК C07K14/585 C07B59/00 A61K51/08 A61K38/23 A61P35/00 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть). ТC

Изобретение относится к синтетическому связывающемуся с рецепторами кальцитонина соединению, имеющему молекулярную массу менее 10000 Д, которое представляет собой пептид, ковалентно соединенное с хелатором радиоактивного металла с образованием реагента, при этом упомянутый реагент проявляет аффинность по связыванию с рецептором кальцитонина, равную или превышающую аффинность связывания с упомянутым рецептором, характерную для нативного, помеченного радиоактивным йодом кальцитонина. Соединения могут быть помечены радиоактивным способом с помощью подходящего изотопа и использоваться в качестве радиодиагностических или радиотерапевтических средств для визуализации опухолей в теле млекопитающего. Описаны также сцинтиграфическое визуализирующее средство для определения локализации и характера опухоли, композиция для образования комплекса реагента с радиоактивным технецием или рением, радиотерапевтическое средство для сцинтиляционной визуализации, набор для получения радиофармацевтического препарата и способ получения описанного реагента. 9 с. и 5 з.п. ф-лы, 6 табл.

1. Синтетическое связывающееся с рецепторами кальцитонина соединение, имеющее молекулярную массу менее примерно 10 000 Д, которое представляет собой пептид, выбранный из группы, состоящей из
a) пептида, характеризующегося аминокислотной последовательностью
СН₂СО. SNLST. Hhc. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 9),
где хелатор встраивается в состав пептида по боковой аминокислотной цепи указанной последовательности,
b) пептида, включающего домен связывания с рецептором кальцитонина, который циклизован с помощью тиоэфирной связи;
c) пептида, включающего аминокислотную последовательность
CH₂CO. SNLSTX - SEQ ID N0 : 10;
где X выбирается из группы, включающей остаток цистеина, остаток гомоцистеина и остаток гомогомоцистеина;
d) пептида, включающего аминокислотную последовательность:
СН₂СО. Х¹LSTХ₂ - SEQ ID N0 : 11;
где X¹ выбирается из группы, включающей остаток аланина, остаток глицина и остаток серина;
X² выбирается из группы, включающей остаток цистеина, остаток гомоцистеина и остаток гомогомоцистеина, ковалентно соединенное с хелатором радиоактивного металла с образованием реагента, при этом указанный реагент проявляет аффинность по связыванию с рецептором кальцитонина, равную или превышающую аффинность связывания с указанным рецептором, характерную для нативного, помеченного радиоактивным йодом кальцитонина. 2. Синтетическое связывающееся с рецепторами кальцитонина соединение, имеющее молекулярную массу менее примерно 10 000 Д, которое представляет собой пептид, выбранный из группы, состоящей из
a) пептида, характеризующегося аминокислотной последовательностью
СН₂СО. SNLST. Hhc. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 9),
где хелатор встраивается в состав пептида по боковой аминокислотной цепи указанной последовательности;
b) пептида, включающего домен связывания с рецептором кальцитонина, который циклизован с помощью тиоэфирной связи;
c) пептида, включающего аминокислотную последовательность:
CH₂CO. SNLSTX - SEQ ID N0 : 10;
где X выбирается из группы, включающей остаток цистеина, остаток гомоцистеина и остаток гомогомоцистеина;
d) пептида, включающего аминокислотную последовательность:
CH₂CO. X¹LSTX² - SEQ ID N0 : 11;
где X¹ выбирается из группы, включающей остаток аланина, остаток глицина и остаток серина;
X² выбирается из группы, включающей остаток цистеина, остаток гомоцистеина и остаток гомогомоцистеина, ковалентно соединенное с хелатором радиоактивного металла с образованием реагента, при этом указанный реагент проявляет аффинность по связыванию с рецептором кальцитонина, составляющую не менее одной десятой от аффинности связывания с указанным рецептором, характерную для нативного, помеченного радиоактивным йодом кальцитонина. 3. Реагент по п. 1 или 2, отличающийся тем, что хелатор выбирают из группы, включающей
а) C(pgp)^S-(aa)-C(pgp)^S,
где (pgp)^S - Н или тиолзащищающая группа;
(аа) - любая первичная α- или β-аминокислота,
b)

где каждый R независимо представляет собой Н, СН₃ или С₂Н₅;
каждый из (рgр)^S независимо представляет собой тиолзащищенную группу или Н;
m, n или р - независимо представляют собой 2 или 3;
А = линейный или циклический низший алкил;
с)

где каждый R независимо представляет собой Н, СН₃ или С₂Н₅;
m, n или р - независимо представляют собой 2 или 3;
А = линейный или циклический низший алкил;
V = Н или -СО-пептид;
R' = Н или пептид;
при этом, что когда V = Н, то R' = пептид и когда R'= H, то V = -СО-пептид;
d)

где n, m и р независимо представляют собой 0 или 1;
каждый R' независимо представляет собой Н, низший алкил, гидроксиалкил(С₂-С₄) или алкоксиалкил(С₂-С₄);
каждый R независимо представляет собой Н или R", где R" представляет собой замещенный или незамещенный низший алкил или фенил, не включающий тиоловую группу;
один из R или R' представляет собой L, при этом когда R' представляет собой L, то -NR'₂ представляет собой амин, а L представляет собой бивалентную группу, связывающую хелатор с соединением;
е)

где n, m и р независимо представляют собой 0 или 1;
каждый R' независимо представляет собой Н, низший алкил, гидроксиалкил(C₂-C₄) или алкоксиалкил(С₂-С₄);
каждый R независимо представляет собой Н или R", где R" представляет собой замещенный или незамещенный низший алкил или фенил, не включающий тиоловую группу;
один из R или R' представляет собой L, при том, что когда R' представляет собой L, то -NR'₂ представляет собой амин, а L представляет собой бивалентную группу, связывающую хелатор с соединением;
f)
(HOOCCH₂)₂ N (CR₂) (CR₂) N (CH₂COOH) (CR₂) (CR₂) N (CH₂COOH);
где каждый R независимо представляет собой Н, C₁-C₄-алкил или арил, а один R ковалентно соединен с бивалентным линкером;
g)
(HOOCCH₂)₂ N (CR₂) (CR₂) N (СН₂СООН);
где каждый R независимо представляет собой Н, С₁-С₄ алкил или арил, а один R ковалентно соединен с бивалентным линкером;
h) 1,4,7,10-тетраазадодекантетрауксусная кислота;
i)

где n - целое число, равное 2 или 3;
каждый R независимо представляет собой Н, С₁-С₄-алкил или арил, а один R ковалентно соединен со связывающимся с рецепторами кальцитонина соединением;
j) десферриоксиамин. 4. Реагент по п. 1 или 2, отличающийся тем, что хелатор, включающий единственную тиолсодержащую составляющую, имеет формулу
A-CZ (B) - { C(R¹R²)} n - X,
где А представляет собой Н, НООС, H₂NOC, (аминокислота или пептид)-NHOC, (аминокислота или пептид)-ООС или R⁴;
В представляет собой Н, SH, -NHR³, -N(R³)-(аминокислота или пептид) или R⁴;
Х представляет собой Н, SH, -NHR³, -N(R³)-(аминокислота или пептид) или R⁴;
Z представляет собой Н или R⁴;
R¹, R², R³ и R⁴ - независимо представляют собой Н или с прямой или разветвленной цепью или циклический низший алкил;
n представляет собой 0, 1 или 2;
(аминокислота) представляет собой любую первичную α- или β-аминокислоту, не имеющую тиоловой группы;
(пептид) представляет собой пептид, включающий 2-10 аминокислот;
где В представляет собой -NHR³ или -N(R³)-(аминокислота или пептид); Х представляет собой SH; n представляет собой 1 или 2;
где Х представляет собой -NHR³ или -N(R³)-(аминокислота или пептид), В представляет собой SH; n представляет собой 1 или 2;
где В представляет собой Н или R⁴; А представляет собой НООС, H₂NOC, (аминокислота или пептид)-NHOC, или (аминокислота или пептид)-ООС; Х представляет собой SH; n представляет собой 0 или 1;
где А представляет собой Н или R⁴, далее где В представляет собой SH, Х представляет собой -NHR³ или -N(R³)-(аминокислота или пептид) и где Х представляет собой SH, В представляет собой -NHR³ или -N(R³)-(аминокислота или пептид); n представляет собой 1 или 2;
где Х представляет собой Н или R⁴, А представляет собой НООС, H₂NOC, (аминокислота или пептид)-NHOC или (аминокислота или пептид)-ООС; В представляет собой SH;
где Z представляет собой метил, Х представляет собой метил, А представляет собой НООС, H₂NOC, (аминокислота или пептид)-NHOC, или (аминокислота или пептид)-ООС; В представляет собой SH; n представляет собой 0;
где В представляет собой SH, Х не представляет собой SH и где Х представляет собой SH, В не представляет собой SH;
при этом тиоловая составляющая находится в восстановленной форме;
при этом указанный хелатор необязательно выбирают из группы, включающей
a) - (аминокислота)¹-(аминокислота)² { A-CZ(В)-{ С(R¹R²)} _n-X} ;
b) -{ A-CZ(В)-{ C(R¹R²)} _n-X} - (аминокислота)¹-(аминокислота)²;
c) -(первичная α-, β- или β, γ-диаминокислота)-(аминокислота)¹-{ A-CZ(В)-{ С(R¹R²)} _n-X} ;
d) { A-CZ(В)-{ С(R¹R²)} _n-X} -(аминокислота)¹-(первичная α-, β- или β, γ-диаминокислота),
где (аминокислота)¹ и (аминокислота)² независимо представляют собой любые естественно встречающиеся, модифицированные, замещенные или измененные α или β аминокислоты, не включающие тиоловую группу; I
e) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-цистеин;
f) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-изоцистеин-;
g) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-гомоцистеин-;
h) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-пеницилламин-;
i) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-2-мepкaптoэтилaмин-;
j) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-2-мepкaптoпpoпилaмин-;
k) (аминокислота)¹-(аминокислота)²-2-мepкaптo-2-метилпропиламин-; и
l) (аминокислота)¹-(аминокислота)² -3-меркаптопропиламин-; при этом карбоксильный конец или боковая цепь указанного хелатора ковалентно связана с соединением и (аминокислота)¹ необязательно выбирается из группы, включающей α, β-диаминокислоту, имеющую свободный α-амин и β, γ-диаминокислоту, имеющую свободный β-амин;
m) -цистеин-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота);
n) -изоцистеин-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота);
о) -гомоцистеин-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота);
р) -пеницилламин-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота);
q) 2-меркаптоуксусная кислота- (аминокислота)-(α, β- или β, γ--диаминокислота);
r) 2- или 3-меркаптопропионовая кислота-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота); и
s) 2-меркапто-2-метилпропионовая кислота-(аминокислота)-(α, β- или β, γ-диаминокислота);
при этом N-конец или боковая цепь указанного хелатора ковалентно связана с соединением;
t) -Gly-Gly-Cys-;
u) -Ala-Gly-Cys-;
v) - (ε -Lys)-Gly-Cys-;
w) - (δ-Orn)-Gly-Cys-;
x) - (γ-Dab)-Gly-Cys-;
у) - (β-Dap)-Lys-Cys-;
z) - (β-Dap)-Gly-Cys-;
aa) - Cys(BAT). 5. Реагент, имеющий формулу, выбираемую из группы, включающей
CH₂COSNLST. Hhc. VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 4)
CH₂COSNLST. Hhc. VLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (ε -K) GC. амид
CH₂COSNLST. Hhc. VLGKLSC(CH₂CO. GGCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂CO. SNLST. Hhc. VLGKLSC(CH₂CO. (β-Dap)KCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂CO. SNLST. Hhc. VLGKLSC(CH₂CO. (ε-K)GCE. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
СН₂СО. SNLST. Hey. VLGKLSC(CH₂CO. GGCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂CO. SNLST. Hey. VLGKLSC(CH₂CO. (β-Dap)KCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂CO. SNLST. Hey. VLGKLSC(CH₂CO. (ε-K)GCE. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
СН₂СО. SNLST. Cys. VLGKLSC(CH₂CO. (GGCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
СН₂СО. SNLST. Cys. VLGKLSC(CH₂CO. (β-Dap)KCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂CO. SNLST. Cys. VLGKLSC (CH₂CO. (ε-K)GCE. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
SNLST. Asu. VLGKLSC(CH₂CO. (β-Dap)KCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
SNLST. Asu. VLGKLSC(CH₂CO. (β-Dap)KCK. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид
CH₂COSNLST. Hhc. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 5);
CH₂COSNLST. Hсy. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 6);
CH₂COSNLST. Cys. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 7);
SNLST. Asu. VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид (SEQ ID N0 : 8). 6. Реагент по п. 5, имеющий формулу
CH₂CO. SNLST. Hhc. VLGKLSC(CH₂CO. (ε-К)GCE. амид)
ELHKLQTYPRTNTGSGTP. амид. 7. Реагент по любому из пп. 1-6, помеченнный радиоактивным металлом, для визуализации опухолей в теле млекопитающего. 8. Сцинтиграфическое визуализирующее средство для определения локализации и характера опухоли, включающее реагент по любому из пп. 1-6 и технеций-99m. 9. Композиция для образования комплекса с радиоактивным технецием или рением, включающая реагент по любому из пп. 1-6 и ион олова в качестве восстановителя. 10. Радиотерапевтическое средство для сцинтиляционной визуализации, включающее реагент по любому из пп. 1-6 и цитотоксический радиоактивный изотоп, предпочтительно радиоактивный изотоп, выбираемый из группы, включающей скандий-47, медь-67, галлий-72, иттрий-90, олово-117m, йод-125, йод-131, самарий-153, гадолиний-159, диспрозий-165, гольмий-166, иттербий-175, лютеций-177, рений-186, рений-188, астат-211, висмут-212 и висмут-213. 11. Радиотерапевтическое средство по п. 10, используемое для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, характеризующегося экспрессией или сверхэкспрессией рецепторов кальцитонина. 12. Набор для получения радиофармацевтического препарата, включающий герметичную ампулу, содержащую определенное количество реагента по любому из пп. 1-6 и достаточное количество восстановителя для мечения реагента технецием-99m, рением-186 или рением-188. 13. Набор для получения радиофармацевтического препарата, включающий герметичную ампулу, содержащую определенное количество реагента по любому из пп. 1-6. 14. Способ получения реагента по любому из пп. 1-6, включающий осуществление твердофазного пептидного синтеза соединения, связывающегося с рецептором кальцитонина.