СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапевтической стоматологии, и может быть использовано при выявлении группы риска при заболеваниях слизистой оболочки полости рта (СОПР).

Заболевания СОПР возникают на фоне снижения слюноотделения, местной резистентности, нарушения процессов дифференцировки и ороговения клеток эпителия, а также изменения микробиоценоза слизистой оболочки. В связи с этим возникла необходимость выявления начальных нарушений указанных процессов для определения предрасположенности и, следовательно, ранней, донозологической диагностики заболеваний СОПР.

Известен способ определения состояния СОПР путем контактной флюоресцентной биомикроскопии (Филюрин М. Д. Диагностика предопухолевых заболеваний и рака губы и слизистой оболочки полости рта с применением контактной флюоресцентной биомикроскопии. //Стоматология. 1989, 2. С.19).

Однако известный метод оценивает лишь состояние сосудистого русла, а также требует дорогостоящей аппаратуры.

Наиболее близким по достигаемому положительному результату прототипом является способ определения состояния СОПР и тканей пародонта (патент 2158426), включающий взятие соскоба эпителиоцитов с внутренней поверхности щеки, их отмывание, фиксацию, окраску и подсчет среднего количества адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците, а также определение индекса колонизации буккального эпителия (ИКБЭ) с учетом интенсивности кариеса (КПУ) и гигиенического индекса (ГИ) полости рта. При ИКБЭ от 0 до 9 состоянию ротовой полости присваивают 0 баллов и оценивают как предрасположенность к воспалительным заболеваниям СОПР, при ИКБЭ от 10 до 59 - 1-2 балла - состояние оценивают как нормальное, КПУ=0, ГИ=1-1,4 балла, при ИКБЭ от 60 до 89 - 3 балла - группа риска, при ИКБЭ от 90 до 119 - 4 балла - состояние оценивают как компенсированное, КПУ - 1-4. При ИКБЭ от 120 до 159 - 5 баллов - как субкомпенсированное, КПУ - 5-7 баллов, при ИКБЭ от 160 и выше - 6 - 10 баллов - как декомпенсированное состояние ротовой полости, КПУ - 8 баллов.

Однако известный способ не позволяет проводить комплексную донозологическую диагностику воспалительных и дистрофических заболеваний СОПР, поскольку не выявляет начальных нарушений местной резистентности, процессов дифференцировки и ороговения клеток эпителия.

Авторы предлагают способ комплексной оценки состояния СОПР, позволяющий выявить группу риска и предрасположенности к заболеваниям СОПР.

Положительным результатом заявленного изобретения является повышение точности определения состояния слизистой оболочки полости рта.

Положительный результат достигается тем, что у стоматологических пациентов проводят забор слюны, соскоб эпителия и микробиологический мазок; определяют скорость слюноотделения и оценивают фагоцитарную активность лимфоцитов с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста); в соскобах определяют электрокинетическую подвижность ядер эпителиоцитов, затем полученные мазки окрашивают и подсчитывают количество микроорганизмов, фиксированных на одной эпителиальной клетке с последующей оценкой реакции адсорбции микроорганизмов (РАМ), а также определяют индекс дифференцировки клеток эпителия (ИДК) на основании ядерно-цитоплазматического соотношения и индекс кератинизации (ИК) по проценту безъядерных клеток; микробиологический мазок подвергают бактериологическому исследованию с качественной и количественной оценкой микрофлоры.

Для определения удовлетворительных и неудовлетворительных критериев оценки морфологических и функциональных параметров СОПР обследовано 433 человека обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет без видимой патологии СОПР с общесоматическими заболеваниями (желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, сахарным диабетом). В контрольную группу вошли 50 относительно здоровых лиц обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет. На основании полученных морфологических и функциональных показателей (таблица 1) разработаны критерии оценки состояния СОПР (таблица 2). Показатель микробиоценоза оценивали по традиционным микробиологическим критериям.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования пациентов собирают слюну натощак или не менее чем через 2 часа после еды и определяют скорость слюноотделения в мл/мин. Если она составляла 0,5-0,7 мл/мин, то показатель считают удовлетворительным. При слюноотделении менее 0,5 мл/мин показатель характеризуют как неудовлетворительный.

В полученной слюне оценивают фагоцитарную активность лейкоцитов с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста). Полученную слюну помещают сразу же на лед, очищают ее, промывая забуференным изотоническим раствором хлорида натрия и центрифугируя при 1500 об/мин в течение 15 минут на центрифуге ОПМ-3. Для определения спонтанного НСТ-теста в пробирку берут 0,1 мл подготовленной слюны, 0,05 мл 0,2% раствора нитросинего тетразолия в 0,05 мл забуференного изотонического раствора хлорида натрия, а для проведения стимулированного НСТ-теста вместо забуференного изотонического раствора хлорида натрия в качестве активизирующей смеси берут 0,05 мл зимозана. Затем пробирки помещают в термостат на 15 минут при температуре 37 градусов, делают мазки, высушивают в течение 24 часов, фиксируют в 96% этиловом спирте в течение 25 минут, окрашивают 0,1% раствором нейтрального красного в 0,45% растворе хлористого натрия. В каждом мазке производят подсчет гранул в одном лейкоците (расчет ведут на 100 клеток) с использованием светового микроскопа (например, "Биолан") под иммерсионной системой. Затем определяют отношение стимулированного НСТ-теста к спонтанному. Если это соотношение 2 и выше, то показатель считают удовлетворительным, если ниже 2 - неудовлетворительным.

Затем производят соскоб со слизистой оболочки щеки для определения электрокинетической подвижности ядер эпителиоцитов, наносят его на стекло и помещают в аппарат для микроэлектрофореза, например "Потенциал-1". С помощью светового микроскопа при увеличении объектива х90, окуляра х7 оценивают подвижность ядер 100 эпителиальных клеток. Если подвижных ядер 70% и более, то показатель считают удовлетворительным, если подвижных ядер менее 70%, то показатель оценивают как неудовлетворительный.

Далее производят соскобы со слизистой оболочки нижней губы в области зоны Клейна, щеки по линии смыкания зубов и боковой поверхность языка для определения индекса дифференцировки клеток (ИДК) и индекса кератинизации (ИК) и неспецифической резистентности СОПР, наносят их на предметное стекло, высушивают в течение 1 часа, фиксируют в смеси 96% этилового спирта и медицинского эфира в соотношении 1:1 в течение 10 минут, окрашивают гематоксилин-эозином и микроскопируют в световом микроскопе под иммерсионной системой при увеличении объектива х90, окуляра х7. В соскобах с помощью окуляра - линейки вычисляют ядерноцитоплазматическое соотношение (ЯЦС) 100 эпителиальных клеток, на основании которого оценивают степень дифференцировки каждого эпителиоцита: при ЯЦС от 0,50 до 0,49 клетку относят к 1 степени дифференцировки, при ЯЦС от 0,40 до 0,49 - 2 степень дифференцировки, при ЯЦС от 0,30 до 0,39 - 3 степень дифференцировки, при ЯЦС от 0,20 до 0,29 - 4 степень дифференцировки, при ЯЦС от 0,10 до 0,19 - 5 степень дифференцировки, при отсутствии ядра (ЯЦС=0) - 6 степень дифференцировки. Затем высчитывают ИДК по формуле
ИДК=1a+2б+3в+4г+5д+6е,
где 1-6 - цифровое обозначение степей дифференцировки, а, б, в, г, д, е - процент клеток соответствующей степени дифференцировки. Если ИДК равен 450-470, то его считают удовлетворительным, если ИДК ниже 450 или выше 470, то его считают неудовлетворительным.

ИК определяют путем подсчета процента безъядерных клеток. Если ИК равен 15-25%, то его считают удовлетворительным, если ИДК ниже 15% или выше 25%, то его считают неудовлетворительным.

Кроме того, в соскобах подсчитывают количество бактерий, адсорбированных на поверхности каждой эпителиальной клетки (расчет проводят на 100 клеток). В зависимости от количества фиксированных микроорганизмов клетки распределяют на 5 групп: 1 группа - на поверхности клеток нет микроорганизмов или единичные бактерии, 2 группа - от 5 до 25 бактерий, 3 группа - от 26 до 50 бактерий, 4 группа - от 50 до 200, 5 группа - более 200 бактерий. Клетки первой, второй и пятой групп относят к группе с отрицательной РАМ ("РАМ-"), клетки третьей и четвертой групп - к группе с положительной РАМ ("РАМ+"). По проценту клеток с "РАМ+" определяют неспецифическую резистентность каждого участка СОПР. При "РАМ+", равной 31% и выше, показатель резистентности удовлетворительный, при "РАМ +" ниже 30% - неудовлетворительный.

Затем производят микробиологический мазок стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки щеки, неба и боковой поверхности языка для оценки микробиоценоза СОПР, его посев на стандартные микробиологические среды (например, мясопептонный агар, кровяной, желточно-солевой, молочно-солевой агары, пестрый ряд Гисса, мясопептонный бульон, среда Сабуро плотная и жидкая) и выделяют чистую культуру микроорганизмов. На основании морфологических, тинкториальных, биохимических признаков и изучения антигенной структуры проводят идентификацию по бинарной номенклатуре с изучением количества выделенного штамма в материале. Если присутствует нормальная и/или условно-патогенная флора в этиологически незначимой концентрации (<10⁴ КОЕ), то показатель микробиоценоза СОПР оценивают как удовлетворительный. При наличии патогенной флоры и/или условно-патогенной флоры в этиологически значимой концентрации (≥10⁴ КОЕ), то показатель микробиоценоза СОПР считают неудовлетворительным.

Всего определяют 7 морфологических и функциональных показателей состояния СОПР (таблица 2).

Если показатель удовлетворительный, то его оценивают в 1 балл, если показатель неудовлетворительный, то его оценивают в 0 баллов. Полученные баллы суммируют и определяют морфо-функциональный индекс слизистой оболочки полости рта (МФИСОПР).

Если все показатели СОПР удовлетворительные или один из них неудовлетворительный (МФИСОПР= 7-6 баллов), то состояние СОПР оценивают как хорошее, т.е. пациенты данной группы не нуждаются в проведении специального комплекса корригирующих мероприятий.

Если два - четыре показателя СОПР неудовлетворительные (МФИСОПР=5-3 балла), то состояние СОПР оценивают как удовлетворительное; эти пациенты нуждаются в соответствующих корригирующих мероприятиях, направленных на нормализацию нарушенных морфологических и функциональных показателей.

Если пять - семь показателей СОПР неудовлетворительные (МФИСОПР=2-0 баллов), то состояние СОПР характеризовали как критическое и пациентам необходима комплексная коррекция всех морфологических и функциональных показателей для профилактики воспалительных и дистрофических заболеваний СОПР (таблица 3).

Предлагаемый способ может быть проиллюстрирован следующими клиническими примерами:
1. Больная М. , 34 года, относительно здорова, ведет активный образ жизни, обратилась для профилактического осмотра.

Объективно: слизистая оболочка полости рта бледно-розового цвета, без видимых изменений.

После санации показатели состояния СОПР были следующими:
1. Скорость слюноотделения - 0,57 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,15 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 85% (удовлетворительная);
4. РАМ-71% (удовлетворительный);
5. ИДК - 468 (удовлетворительный);
6. ИК - 18% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, стафилококк эпидермальный >10⁴ КОЕ, нейссерия >10⁴ КОЕ (неудовлетворительный).

МФИСОПР=6 (состояние СОПР хорошее).

Больной была проведена коррекция микробиоценоза после определения чувствительности к антисептикам с помощью полосканий хлоргексидином.

После проведенного курса показатели состояния СОПР составили:
1. Скорость слюноотделения - 0,58 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,14 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 86% (удовлетворительный);
4. РАМ - 71% (удовлетворительный);
5. ИДК - 464 (удовлетворительный);
6. ИК - 20% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, стафилококк эпидермальный >10⁴ КОЕ, нейссерия 10² КОЕ (удовлетворительный).

МФИСОПР=7 (состояние СОПР хорошее).

2. Больной С., 60 лет, обратился с целью санации. Сопутствующая патология - язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки в стадии ремиссии.

После санации показатели состояния СОПР были следующими:
1. Скорость слюноотделения - 0,46 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,0 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 72% (удовлетворительный);
4. РАМ - 55% (неудовлетворительный);
5. ИДК - 484 (неудовлетворительный);
6. ИК - 28% (неудовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк гемолитический >10⁴ КОЕ, стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, стафилококк эпидермальный >10⁴ КОЕ, дифтероид - >10⁴ КОЕ (удовлетворительный).

МФИСОПР=4 (состояние СОПР удовлетворительное).

Больному была проведена соответствующая комплексная коррекция: для нормализации микробиоценоза после определения чувствительности к антисептикам назначены полоскания хлоргексидином, отвары трав для повышения слюноотделения, кератопластики (витамин А), местно для стабилизации процессов ороговения, а также общеукрепляющая и витаминотерапия.

После проведенного курса показатели состояния СОПР составили:
1. Скорость слюноотделения - 0,52 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,1 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 74% (удовлетворительный);
4. РАМ - 57% (удовлетворительный);
5. ИДК - 480 (неудовлетворительный);
6. ИК - 24% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, стафилококк эпидермальный >10⁴ КОЕ, дифтероид 10³ КОЕ (удовлетворительный).

МФИСОПР=6 (состояние СОПР хорошее).

3. Больной М., 72 года, страдает инсулиннезависимым сахарным диабетом в стадии субкомпенсации и ишемической болезнью сердца (II стадия недостаточности кровообращения), обратился с целью санации, отмечает сухость полости рта.

После санации показатели состояния СОПР были следующими:
1. Скорость слюноотделения - 0,36 мл/мин (неудовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 1,87 (неудовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 32% (неудовлетворительный);
4. РАМ - 28% (неудовлетворительный);
5. ИДК - 482 (неудовлетворительный);
6. ИК - 23% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк гемолитический >10⁴ КОЕ, стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, стафилококк золотистый >10⁴ КОЕ, дифтероид >10⁴ КОЕ (неудовлетворительный).

МФИСОПР=1 (состояние СОПР критическое).

Больному была проведена соответствующая комплексная коррекция: для нормализации микробиоценоза после определения чувствительности к антисептикам назначены полоскания хлоргексидином, отвары трав для повышения слюноотделения, кератопластики (витамин А) местно для стабилизации процессов ороговения, гидромассаж СОПР для улучшения микроциркуляции, иммунокоррекция (иммудон), а также общеукрепляющая и витаминотерапия.

После проведенного курса показатели состояния СОПР составили:
1. Скорость слюноотделения - 0,54 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,12 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 54% (неудовлетворительный);
4. РАМ - 60% удовлетворительный);
5. ИДК - 484 (неудовлетворительный);
6. ИК - 23% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, дифтероид 10³ КОЕ (удовлетворительный).

МФИСОПР= 5 (состояние СОПР удовлетворительное). Больному рекомендовано продолжать аппликации кератопластиков (витамин А) местно для стабилизации процессов дифференцировки и ороговения, гидромассаж и общеукрепляющую и витаминотерапию.

Через 2 месяца показатели состояния СОПР составили:
1. Скорость слюноотделения - 0,56 мл/мин (удовлетворительный);
2. Отношение стимулированного НСТ - теста к спонтанному - 2,0 (удовлетворительный);
3. Электрокинетическая подвижность ядер эпителиоцитов - 62% (неудовлетворительный);
4. РАМ - 70% (удовлетворительный);
5. ИДК - 468 (удовлетворительный);
6. ИК - 20% (удовлетворительный);
7. Результаты микробиологического исследования: стрептококк негемолитический >10⁴ КОЕ, дифтероид 10³ КОЕ (удовлетворительный).

МФИСОПР=6 (состояние СОПР хорошее).

По предлагаемому способу обследовано 433 человека обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет без видимой патологии СОПР с общесоматическими заболеваниями (желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, сахарным диабетом). В контрольную группу вошли 50 относительно здоровых лиц обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет. В результате получены следующие данные по морфо-функциональному состоянию СОПР (таблица 4).

Таким образом, МФИСОПР всесторонне отражает состояние СОПР и позволяет прогнозировать возникновение заболеваний слизистой оболочки, а следовательно, выявить группу риска и работать с данным контингентом в плане проведения первичной и вторичной профилактики. Предлагаемый способ может быть использован в лечебно-профилактических учреждениях стоматологического профиля как прогностический тест при оценке состояния СОПР.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения состояния слизистой оболочки полости рта. Делают соскоб эпителиоцитов с внутренней поверхности щеки. Приготовляют мазок с последующим подсчетом среднего количества адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците. Проводят забор слюны с определением скорости слюноотделения и оценкой фагоцитарной активности лейкоцитов по соотношению стимулированного теста восстановления нитросинего тетразолия к спонтанному. Берут соскоб со слизистой оболочки щеки для определения электроподвижности ядер эпителиоцитов. Дополнительно проводят соскобы со слизистой оболочки щеки, неба и боковой поверхности языка, которые окрашивают и микроскопируют с последующим определением индекса дифференцировки клеток и индекса кератинизации. Определяют морфо-функциональный индекс слизистой оболочки полости рта (МФИСОПР) в баллах. При МФИСОПР=7-6 состояние СОПР оценивают как хорошее, при МФИСОПР=5-3 - удовлетворительное, при МФИСОПР=2-0 - критическое. Способ позволяет повысить эффективность оценки состояния слизистой оболочки полости рта. 4 табл.

Способ определения состояния слизистой оболочки полости рта (СОПР), включающий взятие соскоба эпителиоцитов с внутренней поверхности щеки, приготовление мазка с последующим подсчетом среднего количества адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците, отличающийся тем, что проводят забор слюны с определением скорости слюноотделения и оценкой фагоцитарной активности лейкоцитов по соотношению стимулированного теста восстановления нитросинего тетразолия к спонтанному и соскоб со слизистой оболочки щеки для определения электроподвижности ядер эпителиоцитов; дополнительно проводят соскобы со слизистой оболочки щеки, неба и боковой поверхности языка, которые окрашивают и микроскопируют с последующим определением индекса дифференцировки клеток, индекса кератинизации, и определяют морфо-функциональный индекс слизистой оболочки полости рта (МФИСОПР) в баллах и при МФИСОПР= 7-6 состояние СОПР оценивают как хорошее, при МФИСОПР= 5-3 - удовлетворительное, при МФИСОПР= 2-0 - критическое.