Микроскопический способ определения обезвоженности тканей полости рта на модели микробиома языка Российский патент 2018 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины - микробиология/бактериология, стоматология/детская стоматология, и может быть использовано для определения нехватки воды в макроорганизме на модели микробиома языка путем микроскопии с иммерсией окрашенных методом Грама мазков из соскоба слизистой оболочки языка у детей и взрослых.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) считает стоматологическое здоровье неотъемлемой и важной частью общего здоровья и подчеркивает, что оно является определяющим фактором качества жизни человека. Программа глобального стоматологического здоровья ВОЗ 2007 года основывается на стратегии управления факторами риска и определяет их приоритетные направления во всем мире. Важными ее компонентами являются рекомендации по профилактике кариеса зубов.

По данным научных исследований, на Дальнем Востоке сохраняется высокий уровень пораженности кариесом зубов детей и взрослых (Старовойтова Е.Л., Антонова А.А. Распространенность и интенсивность кариеса зубов у детей раннего возраста в Хабаровском крае. Науч. труды X международ. конгресса «Инновационные технологии в биологии и медицине» г. Москва. РУДН. 2009. с. 986; Кузьмина Э.М. Стом. заболеваемость населения России. М. 2009. 236 с.; Старовойтова Е.Л., Антонова А.А., Лемещенко О.В. Планирование первичной профилактики кариеса у детей раннего возраста с учетом уровня знаний и стоматологического статуса беременных женщин. Жур. науч. статей «Здоровье и образование в XX1 веке», г. Москва. 2017. №3. с. 24-29).

Известно, что в этиологии инфекционного кариозного процесса, имеют значение резиденты полости рта грам + кокки Streptococcus mutatis (Caufield P.W., Cutter G.R., Dasanayake A.P.: Initial a cquisition of mutans streptococci by infants: evidence for a discrete window of infectivity. J DentRes 1993; Paes Leme, H. Koo, С.M. Bellato, G. Bedi, and J.A. Cury. The Role of Sucrose in Cariogenic Dental Biofilm Formation. New Insight. J Dent Res 2006. 878-887; Хавкин А.И., Ипполитов Ю.А., Алешина E.О., Комарова О.H. Микробиота и болезни полости рта. 2015. 78-81). Стрептококки вида S. mutans инициируют формирование зубного налета / биологической пленки на поверхности зуба и обеспечивают, за счет коадгезии, накопление других представителей патогенной флоры (Кузнецов Е.А., Царев В.Н. и др., 1996; Burt and Pai, 2001; Чайковская И.В. 2002; Berkowitz R., J. Causes. 2003, Тец В.В. 2008; Скрипкина Г.И., 2014; Хавкин А.И., Ипполитов Ю.А. Микробиота и болезни полости рта. 2015. 78-81). Стрептококки составляют значительную долю микрофлоры зубной бляшки, до 80% от общего количества микроорганизмов полости рта (Weiilherell I.A. Composition of dental enamel. 1975. №2. P. 1415-1420; Максимовский Ю.M. 2009). Наиболее важным фактором вирулентности S. mutans является их процветание в кислой среде (Овруцкий Г.Д., Леонтьев В.К., 2010).

В настоящее время в Хабаровском крае заболевания слизистых оболочек полости рта/СОПР имеют бактериальную, вирусную, грибковую этиологию, это неспецифические гингивиты, стоматиты, глосситы, связанные с ролью резидентов полости рта. Несмотря на современные методы исследования и введение стандартов качества лечения, на существенное снижение заболеваемости их влияние ограничено.

Получить стойкий положительный эффект при лечении кариеса раннего детского возраста можно только при использовании комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на все звенья этиопатогенеза заболевания, в том числе и на кариесогенную микрофлору (Кисельникова Л.П., Зуева Т.Е. Кариес временных зубов у детей раннего возраста: обоснование этиопатогенетических подходов к профилактическому лечению. Стоматология детского возраста и профилактика. 2007).

Благодаря корректировке внешних для зуба параметров среды, предоставляется возможность влиять на изменение степени устойчивости зуба к кариесу, что регламентировано трудами В.Б. Недосеко, 2008.

Развитие гингивитов и стоматитов, как рецидивирующих воспалительных процессов СОПР, чаще эндогенного происхождения, связано с активизацией условно-патогенных микроорганизмов - нормальных обитателей полости рта, при снижении иммунной резистентности макроорганизма. Риск развития кариеса повышается не из-за наличия какого-то конкретного заболевания, а в зависимости от степени тяжести иммунодефицитного состояния. Общее для любых заболеваний, повышающих подверженность зубов кариесу, это вызванное ими угнетение естественной сопротивляемости организма. Иммунопатологические механизмы, действуют синергично с другими неуправляемыми или относительно управляемыми факторами кариесогенного риска: отклонения от физиологического течения беременности, заболевания ребенка на первом году жизни, искусственное вскармливание, нарушения саливации, воздействие неблагоприятного экологического фона, что приводит к формированию сниженной резистентности тканей зубов. В настоящее время кариес зубов относят к управляемым заболеваниям. Изменить ситуацию как на популяционном, так и на индивидуальном уровнях можно, управляя основными кариесогенными факторами: недостаточная обеспеченность организма детей и взрослых фторидами, плохой гигиенический уход за зубами, частое употребление сахаросодержащих продуктов и напитков (Леонтьев В.К., Пахомов Г.Н. Профилактика стоматологических заболеваний. М.: КМК-ИНВЕСТ. 2006. 410 с.). Прогрессирование кариеса зубов у детей имеет сильную корреляцию с гигиеной полости рта, углеводной нагрузкой и санологической культурой родителей.

Малоизученным остается вопрос о влиянии водно-электролитного баланса на течение заболеваний СОПР и развитие кариеса у детей.

Общее количество воды в организме человека около 50-83% массы тела и зависит от возраста, пола и комплекции. В организме новорожденных воды до 83% массы тела. С возрастом ее процентное содержание постепенно уменьшается, достигая у мужчин около 60%, а у женщин 50% массы тела. В пожилом и старческом возрасте до 40-45%. При этом распределяется вода так: в среднем 2/3 ее объема / около 40% массы тела находятся в клетках, а остальное во внеклеточном пространстве (Н.М. Батырханова. Физиология и нарушения водно-солевого обмена. Казань. 2012 г.).

Вода является универсальным биологическим растворителем и только в водной среде могут протекать все сложнейшие биохимические процессы в живом организме. Вода выполняет транспортную функцию, перенося вещества по организму, участвуя в выведении из организма конечных продуктов обмена веществ, является основным пластическим материалом и принимает активное участие в терморегуляции.

Поскольку вода, которую мы пьем, способствует функционированию клеток, то уменьшение потребляемой воды приводит к потере содержания воды внутри и отрицательно сказывается на их активности. В результате хроническое обезвоживание вызывает симптомы, которые трактуются как признаки различных заболеваний. Вода обеспечивает процесс гидролиза - химического взаимодействия вещества с водой, при котором сложное вещество распадается на два и более новых веществ. Осмотическое движение воды через мембрану в состоянии генерировать гидроэлектрическую энергию, которая преобразуется и хранится в энергетических резервуарах в форме АТФ / аденозинтрифосфат и ГТФ / гуанозинстрифосфат - двух важнейших систем, химических источников энергии в организме, используюющиеся в простейших обменах, особенно в процессе нейротрансмиссии. Вода формирует определенную структуру, которая используется в качестве связующего вещества в клеточной архитектуре, скрепляя твердые вещества в клеточной мембране; элементы, продуцируемые клетками мозга, по «водным путям» доставляются к нервным окончаниям для использования в передаче сообщений; белки и энзимы функционируют более эффективно в растворах пониженной степени вязкости. В растворах высокой степени вязкости, при состоянии обезвоживания, эффективность белков и энзимов снижается, то есть вода сама регулирует все функции организма, включая активность растворенных веществ, которые она разносит (F. Batmanghelidj. Your body's many cries for water. Vienna. Global Health Solutions. 2001).

Известно, что водно-солевой баланс является фундаментальной составляющей здоровья человека, обеспечивая базовые механизмы функционирования макроорганизма. Потребности новорожденного ребенка в воде для здорового роста и развития удовлетворяются сначала за счет воды, содержащейся в молоке, которое он пьет, а потом - за счет потребления чистой воды как таковой. В то же время организм всеми силами старается удержать воду, например, почки исключают максимальное количество воды на последних стадиях образования мочи. В число факторов, регулирующих водный баланс в период роста ребенка, входят гормон роста и другие, связанные с ним гормоны и нейротрансмиттеры, такие, как гистамин, приводят в действие механизм жажды. Дети растут, постоянно испытывая обезвоживание, и необычного в этом нет. Процесс роста и деления клеток требует большого количества воды. Вода - это 75% каждой клетки. Тело растущего ребенка постоянно нуждается в воде и требует ее; в противном случае рост будет невозможен. Если естественные потребности организма в воде будут удовлетворяться с помощью жидкостей, содержащих химикаты, и сладких напитков, то здоровый рост и развитие - процессы, инициатором которых является чистая вода, будут протекать недостаточно активно, что чревато кризисными явлениями, в том числе, такими как астма и аллергия (F. Batmanghelidj, М.D. For health, for healing, for life / You're Not Sick, You're Thirsty! N.Y. 2003).

Нормальный водно-солевой баланс обеспечивает базовые механизмы функционирования не только макроорганизма, но и его аутофлоры в системе индивидуальной симбиотической системы тела человека и микробов, формирующейся после рождения и складывающейся в процессе роста и развития ребенка между биотопами организма человека, включая полость рта, и его многочисленными микробиомами, которые в комплексе могут быть отнесены к зависимо функционирующему, уникальному органу - неповторимой по составу у каждого конкретного человека нормальной микрофлоре.

Активное участие резидентов полости рта в патогенезе гингивитов, стоматитов и кариесе, происходит с образованием видимых биопленок. Известно, что повлиять на зрелые биопленки, применяя антибиотики, антисептики, которые с трудом проникают в микробные структуры, проблематично, особенно в условиях снижения влияния на них антител и макрофагов - факторов гуморального и клеточного местного иммунитета.

Колонии бактерий обладают свойством адгезии к органическим структурам и образуют налет, который совсем недавно называли бактериальной бляшкой (Asikainen S, Chen С: Oral ecology and person to person transmission of Aa and Pg. Periodontology 2000, Rateischak K.H., Wolf H.F.: Parodontologie. Aufl. Thieme 1989). В современной трактовке бактериальный налет также называют «биопленкой, которая является специализированной бактериальной экосистемой, обеспечивающей жизнеспособность и сохранение составляющих ее видов микроорганизмов и увеличение общей популяции» (Caufield P.W., Cutter G.R. Initial a cquisition of mutans streptococci by infants: evidence for a discrete window of infectivity. J DentRes 1993, Леус П.А. Коммунальная стоматология. 2000). Бактерии могут прилипать к разным поверхностям полости рта, включая покрытые пленкой слюны поверхности зубов, эпителия щек, десен и языка, и в дальнейшем колонизировать их. Если эти поверхности уже колонизированы, особое значение приобретает способность бактерий разных видов прилипать друг к другу в процессе коадгезии. Такое взаимодействие между бактериями приводит к образованию гетерогенных по составу биопленок и формированию пищевых взаимоотношений между микробами.

При хронических воспалительных процессах СОПР образуется налет из микробов и некротических масс, имеются изъязвления, покраснение, субъективно ощущается сухость и болезненность. При высокой активности и интенсивности кариеса зубов у детей, наряду с поражением твердых тканей зубов, имеется большое количество видимого зубного налета, на 90% состоящего из индигенной микрофлоры. Налет может быть вязким, сниматься с трудом. Одним из основных этиологических факторов, действующих на биохимическом уровне и приводящих к развитию кариеса, является зубная бляшка. Ее количество, площадь поверхности зуба, которую она занимает, скорость образования после удаления - своеобразные индикаторы риска развития кариеса у разных людей. Однако сама по себе зубная бляшка - это возможность развития кариеса, но не обязательно неизбежность. У детей всех возрастных групп чаще всего регистрируется «неудовлетворительный», «плохой» и «очень плохой» гигиенический уход. У малышей с ранним детским кариесом в полости рта отмечается большое количество налета, нередко трудно снимающегося, с желтоватым оттенком, и связанные с ним проявления катарального гингивита, гиперемия и отечность десны альвеолярного отростка (В.В. Корчагина. Лечение кариеса зубов у детей раннего возраста. Москва. МЕДпресс-информ. 2008. 168 с.). При этом уровень резистентности зубов к кариесу у них может быть кардинально отличным. Только плохой гигиенический уход не может привести к разрушению «слабых зон». В реализации этой возможности играют роль тип и количество бактерий в зубной бляшке или по-другому, в биопленке.

Биопленка - особая форма организации микрофлоры в организме человека. Она представляет собой хорошо взаимодействующее сообщество микроорганизмов, состоящее из бактерий одного или нескольких видов, занимающих чувствительные рецепторы в макроорганизме и колонизирующие на них, а также отделенных от внешней среды структурой, являющейся производной продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и клеток тканей, на которых они адгезируют. Согласно концептуальной модели зубной биопленки по Jill S. Nield-Gehrig (2003) она состоит из бактерий; микроколоний, агрегатов микроколоний бактерий, экстрацеллюлярного полисахаридного матрикса EPS-субстанции, эпителиоцитов, компонентов слюны и пищи, клеток крови, при здоровых зубах и пародонте. Микробиологический портрет здоровой пленки: S. sanguinis, S. mitis, S. salivarium, Veillonella, Actinomycetaceae, Haemophilus, Bacteroides. Биопленка, ассоциируемая с кариесом, пародонтитом, периимплантитом, представлена нарушением микробного гомеостаза: доминирование ацидогенных и ацидотолерантных Streptococci spp. и Lactobacillus spp., утрата доминантных позиций основной симбионтной и увеличение представительства транзиторной микрофлоры (О.С. Гилева. Материалы конферен. «Опережая будущее». Г. Масис. М.: Эндодонтия today. 2012 г.).

Специальные исследования показали, что в биопленке по-иному, в сравнении с чистыми культурами бактерий, происходят их многочисленные физиолого-биологические процессы (O’Toole G.A., Kaplan Н.В. Biofilm formation as microbial development. Ann. Rev. Microbiol. 2000. №54. P. 49-79). Сообщество организует единую генетическую систему, устанавливающую поведенческие формы для членов биопленки, определяющую их трофические, энергетические и другие связи между собой и внешним миром (Slots J, Jorgensen М.G. Effective, safe, practical and affordable periodontal therapy: where are we going, and are we there yet? Periodontology 2002). Последнее получило специальное название: «социальное поведение микроорганизмов»-«quorum sensuum» (Бабин В.Н., Домарадский И.В. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры. Электрон. версия Росс. химического журнала. 2006. №6; Гинцбург А.Л., Ильина Т.С., Романова Ю.М. «Quorum sensing» или социальное поведение бактерий. ЖМЭИ. 2003. №5. С. 86-93).

Патогенные бактерии не проявляют агрессивности против организма хозяина до тех пор, пока степень их вирулентности не достигает необходимого уровня, чтобы эффективно преодолеть защиту организма хозяина. In vitro резистентность биопленки антибиотикам в 500-1000 раз превышает аналогичную способность отдельных бактерий (Allais G. Биопленка полости рта. Новое в стоматологии. 2006).

В повышении эффективности профилактических мероприятий важное значение имеет знание количественных и качественных характеристик состава и свойств смешанной слюны у детей (Petersson L.G., Lynch Е. Remineralization of primary root caries lesions using an amino fluoride rinse and dentifrice twice a day. Amer. J. Dent. 2007. no. 20. pp. 93-96.; White D.J. Effect of a Staibilized Stannous Fluoride Dentifrice on Plague Acid / Toxin Production. Clin. Dent. 2007. no. 18. pp. 4-21). Кариес зубов имеет полифакторный генез, который связан с агрессивными воздействиями экзогенных и эндогенных факторов (Dyer Т.А., Humphris G., Robinson P.G. Public awareness and social acceptability of dental therapists. Brit. Dent. J. 2010. vol. 208. P. 21-23). К этиологическим факторам относятся и медико-географические условия проживания населения, которые определяют специфические региональные биологические и средовые факторы риска

Снижение рН в зубной бляшке сопровождает каждый прием пищи, содержащей ферментируемые углеводы: кривая Стефана достигает перигея через 5-20 минут и возвращается к исходному уровню к 30-60 минуте после поступления пищи в полость рта (Stephan. R.M. Changes in the hydrogen ion concentr. on tooth surfaces and in caries lesion. J.A.D.A. 1940. Vol. 27. P. 718-720).

Известно, что одними из важнейших гуморальных факторов защиты полости рта являются иммуноглобулины IgA, IgG, IgM. Они попадают в слюну в результате местного синтеза плазматическими клетками и из крови путем транссудации через десневой желобок (Denisov А.В. The salivary glands. Saliva. TH. Publishing house of the Russian Academy of Medical Science. 2003. p. 136). Основным в полости рта является секреторный иммуноглобулин A (sIgA), который синтезируется непосредственно эпителиальными клетками выводных протоков слюнных желез и считается наиболее эффективным в обеспечении местной антимикробной защиты слизистых оболочек полости рта (Radish, I.V., Daurova F.J., Nikulina G.V, Torshin V.I. Features of local immunity at students from various climatic regions. Technologies of live systems. 2008. №4. P. 24-28; Radish, I.V., Torshin V.I, Papilko I.V., Daurova F.J., Nikulina G.V. The research of immunolog. indicators of an oral liquid at various times days. Bulletin RUFP. 2007. N. 6. P. 75-79).

Лизоцим, наряду с антибактериальными свойствами, обладает способностью стимулировать неспецифическую реактивность организма, оказывать противовоспалительное и муколитическое действие (Amerongen, A.V.N., Ligtenberg A.J.M., Veerman E.C.I. Implications for Diagnostics in the Biochem. and Physiol. of Saliva. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2007. V. 1098. N1. P. 1-6).

Важным свойством слюны является скорость ее секреции, которая обеспечивает качественное омывание различных поверхностей эмали зубов. Так, у детей с компенсированным течением кариеса зубов оптимальная скорость слюноотделения 0,43±0,02 мл/мин., а у детей с декомпенсированным течением кариеса скорость слюноотделения сниженная 0,27±0,01 мл/мин (Р<0,05). Повышение вязкости смешанной слюны отмечается в обеих группах 3,59 и 3,01 ед., что может рассматриваться как один из биологических факторов риска развития патологических процессов твердых тканей зубов деминерализирующего характера у детей (Т.Е. Яворовская. Сравнительная характеристика состава и свойств смешанной слюны у детей школьного возраста Acta medica Eurasica. 2016. №1. С. 36-40).

Стоматологи пытаются профилактировать кариес зубов в детском возрасте, не зная на сегодняшний день объективных показателей нормы, за исключением клинической индексной оценки состояния органов и тканей полости рта. Но клиническая оценка в основном говорит уже о случившемся факте развития кариеса зубов, и нести первичную профилактическую направленность не может. Осуществить донозологическую диагностику возможно, используя объективные и доступные для внедрения в практику прогностические критерии. Это, в первую очередь, возрастные физико-химические параметры ротовой жидкости кариесрезистентных детей, микробиологический ландшафт полости рта, резистентность эмали зуба к воздействию кариесогенных факторов. В современной стоматологии большое значение в научных исследованиях отводят роли ротовой жидкости в развитии заболеваний органов полости рта и, в первую очередь, в развитии кариеса зубов. Смешанная слюна состоит из воды на 99%, органических и неорганических веществ, тем самым являясь многокомпонентной системой. Она обладает буферными свойствами за счет наличия в ней бикарбонатной и фосфатной буферной системы. Электролиты слюны играют первостепенную роль в процессах реминерализации (кальций, фосфаты, фториды). Перенасыщенность слюны гидроксиапатитом является причиной естественного подщелачивания среды ротовой жидкости. Установлено, что минерализующая функция слюны осуществляется благодаря ее пересыщенности ионами кальция и фосфатами. А степень насыщения ее определяет рН среды. Слюна представляет собой структурированную биологическую жидкость, объем которой распределен между мицеллами. В результате воздействия какого-либо неблагоприятного фактора в полости рта или в организме в целом нарушается кристаллическая структура слюны. Это указывает на связь между структурными и минерализующими свойствами слюны. Катионы калия и натрия обеспечивают ионную силу слюны и стабилизируют конфирмации макромолекул белков. Так, при увеличении содержания катионов калия и натрия выше физиологических норм и низком содержании общего белка происходит нарушение кристаллической структуры ротовой жидкости. Мицеллярное состояние ионов кальция и гидрофосфата в слюне является основным механизмом пересыщенности. Устойчивость мицелл зависит от водородного показателя. Подкисление среды приводит к снижению устойчивости гранул мицелл за счет повышения концентрации дегидрофосфатионов, которые снижают заряд гранул мицелл.

Большое значение в развитии кариозного процесса отводится осадку ротовой жидкости, который состоит из микрофлоры, клеточных элементов, детрита, остатков пищи, кислой фосфотазы, альдолазы, молочной и пировиноградной кислоты. Жидкая фаза слюны не обладает выраженной метаболической активностью, приводящей к кислотопродукции и декальцинации. Более опасен с этой точки зрения осадок, который за счет протеолитической активности негативно влияет на защитные функции эмали. У кариесрезистентных лиц количество осадка на 30% ниже по сравнению с кариесподверженными лицами. При развитии кариеса возрастает нерастворимая фаза осадка слюны. Установлено, что нарушение процессов минерализации в полости рта, определяющихся минерализующим потенциалом слюны, который, в свою очередь, характеризуется произведением растворимости, напрямую зависящим от активной концентрации кальция, содержания общего фосфора и рН среды, происходит при изменении содержания активных концентраций калия и натрия, снижения общего белка в слюне, изменения показателей электропроводности и вязкости, что приводи к кариесу (Леонтьев В.К. Иванова Г.Г. Методы исследования ротовой жидкости и состояния твердых тканей зубов обзор литературы, часть 1, 2. Институт стоматологии. 2013).

В норме в полости рта преобладают анаэробные микроорганизмы, которые в качестве питательной среды используют плотный белковый налет на языке, зубах и внутренней поверхности щек. При недостаточной саливации бактерии накапливаются на поверхности слизистой оболочки полости рта и твердых тканей зубов. При гипосаливации слюна теряет свою антимикробную, буферную, минерализующую и очищающую функции.

У анаэробных микроорганизмов из пировиноградной кислоты при участии фермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ) образуется молочная кислота / лактат. Поэтому исследование активности ЛДГ в слюне и зубном налете позволяет оценить интенсивность образования анаэробных микробных колоний. В норме активность ЛДГ не превышает 125 МЕ/л. В случае недостаточного объема слюны и ротовой жидкости, в условиях хронической дегидратации и неудовлетворительной гигиены полости рта формируется зубной налет, активность гликолитического фермента колеблется в диапазоне 150-500 МЕ/л (Т.П. Вавилова, О.О. Янушевич, И.Г. Островская. Слюна. Аналитические возможности и перспективы. М. 2014. С. 273-277).

Минерализующая функция слюны имеет особенности, заключающиеся, прежде всего, в значительной вариабельности реакций ее среды (рН). В слюне рН изменяется в значительных пределах - от 6,0 до 8,0. С уменьшением рН степень перенасыщения слюны гидроксиаппатитом резко снижается и падает ее минерализующая активность. У лиц с хроническими заболеваниями слюнных желез на 40% снижется уровень секреции, рН достигает 6,98±0,05 и в ее составе резко повышается концентрация натрия и калия, что сопровождается резким увеличением заболеваемости кариесом.

Снижение уровня секреции слюны является неблагоприятным фактором, так как уменьшение тока слюны приводит к ухудшению механического и химического очищения полости рта от остатков пищи, детрита, микробной массы. Одним из важных свойств слюны является ее защитная функция. Она связана с механическими, иммунологическими и антибактериальными свойствами слюны. Постоянный ток слюны, увлажнение ею слизистой оболочки способствуют сохранению органов полости рта в активном функциональном состоянии, предотвращают высыхание слизистой оболочки и развитие воспалительных процессов. Мукопротеины слюны / муцин уменьшают трение органов полости рта, придают слюне необходимую вязкость. Слюна играет основную роль в самоочищении полости рта. Слюнные железы обеспечивают адекватный объем секреции, ток и качество слюны, необходимые для формирования пищевого комка, удобного для разжевывания и заглатывания (Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. Биология полости рта. М.: Мед. книга, 2001).

Самоочищение полости рта ухудшается при увеличении вязкости слюны. Эти факторы также отрицательно влияют на процессы минерализации в полости рта, так как ее уровень зависит от омывания зубов слюной. Кроме того, ухудшение самоочищения полости рта приводит к снижению интенсивности процессов минерализации в полости рта и созданию благоприятных условий для развития в ней микрофлоры.

Известны способы оценки состояния водно-электролитного обмена и диагностики его нарушений, которые базируются на основе комплексного анализа характера заболевания, его патофизиологических особенностей и клинических данных: возраст, пол, рост, анамнез, тяжесть состояния, жалобы, двигательная и психическая активность, неврологический статус, температура тела, величина пульса, среднединамического АД и ЦВД, наличие интоксикационного синдрома, изменение массы тела больного, наличие или отсутствие жажды, состояние слюнобразования, сухость или гипергидратация кожи, слизистых оболочек, языка, подмышечных и паховых областей, наполнение вен, особенно вен опущенной книзу руки, тургор тканей, тонус глазных яблок, наличие отеков, асцита, интенсивность диуреза, наличие патологических потерь жидкости, характер теряемой жидкости, объем и скорость ее потери, и клинико-лабораторных данных, непосредственно характеризующих водно-электролитный обмен, а именно состояние водно-электролитного баланса (Долгов В.В., Эмануэль В.Л. Лабораторная диагностика нарушений водно-электр. обмена. 2012).

Известны способы оценки водно-электролитного обмена в биохимическом анализе крови, в первую очередь по состоянию концентрационных показателей крови, отражающих степень ее сгущения или разведения. Например, осмолярность плазмы - количественная мера осмотически активных веществ, растворенных в плазме. Может измеряться прямым путем или рассчитываться по содержанию в плазме натрия, глюкозы, мочевины. В норме составляет 290-310 мосм/л. При недостатке воды в организме осмолярность плазмы увеличивается. Затем гематокрит - это отношение объема эритроцитов к объему крови. В норме у мужчин 40-54%, у женщин 37-47%. Гематокрит увеличивается при дегидратации.

На наличие дегидратации указывает количественное содержание натрия в крови. Норма: 135-145 ммоль/л. Содержание натрия повышается при недостаточном введении воды или при дегидратации. В общем анализе мочи, значение имеет ее плотность. При нормальном поступлении жидкости плотность 1,010-1,020, она отображает способность почек сохранять или экскретировать воду. Повышение плотности мочи говорит о дегидратации (Кишкун А.А. Биохим. иссл. в клин. практике. М. 2014 г.).

Только комплекс перечисленных выше исследований позволит установить характер водно-электролитных нарушений. Такая клиническая и лабораторная диагностика дегидратации тканей организма имеет существенные недостатки, а именно: она определяет выраженную обезвоженность макроорганизма при инфекционной и неинфекционной патологии, является общей, и применяется при острой и значительной потере воды организмом. Также она не учитывает ни особенностей течения стоматологических заболеваний слизистых оболочек полости рта, кариеса зубов, ни признаки хронического обезвоживания и требует больших временных и финансовых затрат. В доступной нам литературе нет описания микроскопического способа диагностики хронической обезвоженности у детей и взрослых.

Таким образом, лабораторная диагностика хронических рецидивирующих воспалительных процессов полости рта: стоматитов, глосситов, гингивитов, а также социально-значимой инфекции кариеса зубов, должна быть не только этиологически точной, но и отражать признаки хронической, даже незначительной, обезвоженности макроорганизма, играющей ведущую роль в патогенезе заболеваний, по микроскопическим признакам нехватки воды в тканях полости рта, что имеет значение для комплексного лечения и профилактики рецидивов, и отражает индивидуализированный, согласно современным требованиям, подход к терапии в стоматологии.

Для качественной диагностики, индивидуальных подходов к лечению и профилактике воспалительных заболеваний СОПР и кариеса предлагаем к использованию дополнительные микроскопические методы для обнаружения признаков хронической обезвоженности организма детей и взрослых, усугубляющей течение любого патологического процесса, выявляемой, прежде всего, в тканях полости рта.

Задача изобретения: предложить способ микроскопической диагностики для опосредованного определения обезвоженности тканей полости рта у детей и взрослых по состоянию микробиома языка путем выполнения соскоба со слизистой оболочки языка с использованием стандартного окрашивания методом Грама нативного материала, лишенный вышеперечисленных недостатков.

Технический результат состоит в том, что выполняется щадящая диагностическая процедура детям и/или взрослым, с возможностью опосредованного выявления нехватки воды в тканях полости рта по определению наличия, количества, особенности расположения в скоплениях представителей индигенной микрофлоры полости рта человека, с легкодоступной для забора биоматериала слизистой оболочки спинки языка, без применения клинического осмотра и способов клинической лабораторной диагностики исследования слюны, крови, мочи с учетом биохимических и/или реологических признаков обезвоженности.

Повышается скорость и качество диагностики, с появлением возможности неоднократного бактериоскопического исследования за нативным состоянием микробиома слизистых оболочек спинки языка как опосредованного способа выявления микроскопических признаков нехватки воды биотопа полости рта путем микроскопии соскоба биоматериала с язычной поверхности с целью контроля за результатами проводимой терапии. Разработка индивидуальной программы профилактики развития кариозного процесса, воспалительных, рецидивирующих заболеваний СОПР путем бактериоскопического контроля в процессе профилактики и лечения с возможностью коррекции терапевтических процедур у детей и взрослых. Отсутствие препятствий к неоднократному забору биологического материала с поверхности языка на приеме у стоматолога или другого специалиста, позволяет широко использовать способ выявления признаков обезвоженности. Донозологическая профилактика кариеса у детей, лечение кариозной болезни у взрослых, комплексная терапия заболеваний СОПР играет важную роль в сохранении стоматологического здоровья населения как социально значимого показателя качества жизни.

Технический результат достигается тем, что перед началом профилактических и лечебных мероприятий проводят микроскопическое исследование биологического материала со слизистой языка детей и/или взрослых, с определением наличия, общего количества и состава микробной флоры, выраженности коадгезии, соадгезии и гистадгезии микробной флоры, особенностей расположения и фигур скоплений микроорганизмов в пространстве поля зрения микроскопа, подсчета количества скоплений определенной формы, определение их размера, исследование фона окрашенного препарата, наличия тяжей обезвоженной слизи, для обнаружения признаков хронической обезвоженности слизистых полости рта организма человека с дальнейшей индивидуальной коррекцией лечения.

В качестве биоматериала для микроскопии используется соскоб слизистой корня и спинки языка, который берут на границе задней и средней трети спинки (место перехода в корень языка) и с поверхности средней трети, проводя 2-3 раза стерильным деревянным шпателем вдоль по центру языка по направлению от корня до кончика языка с усилием надавливая на слизистую. Забранный в количестве 0,5 мл нативный биоматериал наносится шпателем поочередно на два сухих стерильных предметных стекла и равномерно распределяется на каждом стекле площадью около 1,5-2 см² в пределах круга-метки, предварительно выполненной восковым карандашом по стеклу. Препараты высушиваются на воздухе 20 минут, фиксируются мазками вверх в непрерывно пламени спиртовки 5-6 секунд и окрашиваются сложным дифференциальным методом Грама (Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: учебное пособие / под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. - М.: Медицина, 2004. - 576 с., с. 93-94). Результаты оценивают после исследования на биологическом микроскопе с иммерсией, с использованием объектива иммерсионного ×100 и окуляра ×15 окрашенных по Граму двух нативных мазков соскоба слизистой языка на каждом из двух предметных стекол.

Выявление нехватки воды в тканях слизистых оболочек полости рта у детей и взрослых проводят по совокупности микроскопических признаков: учитывают наличие большого количества микроорганизмов полости рта, их неравномерное распределение по исследуемому препарату, микробная флора формирует преимущественно скопления, имеющие форму шаров, овалов, встречаются конгломераты скоплений неправильной, неестественной/вынужденной формы, и таких скоплений в каждом поле зрения фиксируют не менее 3-5, при этом отмечают сильно выраженный процесс коадгезии микробов между собой, когда внутри обезвоженных тяжей слизи разные виды микроорганизмов тесно адгезированы на поверхности друг друга, представляя из скопления округлое образование, в том числе значительно выражена соадгезия, когда между собой взаимодействуют микроорганизмы одного вида. Хорошо виды фигуры вынужденного соположения микробов в виде разнообразных форм, конгломератов скоплений, по размеру достигающих 20-100 мкм. При этом гистадгезия, когда обнаруживаются микробы разных видов на поверхности грамотрицательного многослойного плоского эпителия, слабо или умеренно выражена. Клетки эпителия содержат небольшое или умеренное количество микробов на поверхности. Цитоплазма эпителия окрашивается по Граму в розовый цвет, ядро в ярко-розовый цвет, микроорганизмы грам вариабельны. Определяются тяжи и/или скопления обезвоженной слизи.

Кроме того, ярким патогномоническим признаком недостатка воды в ротовой жидкости и смешанной слюне является фон окрашенного мазка. При обезвоженности общий фон микроскопического препарата на 60-80% бесцветный, неокрашенный, так как секретируемые жидкости отсутствуют в нем или их количество незначительно. Фотографии соскобов слизистой языка, окрашенные по Граму, с выраженной микроскопической картиной обезвоженности представлены на Фиг. 1, Фиг. 2, Фиг. 3 и Фиг. 4.

В случае нормального содержания воды в тканях полости рта, фон препарата в основном, на 60-80% розовый, поскольку секретируемые жидкости при окрашивании по Граму, грамотрицательны, имеют слабую розовую окраску. Признаки коадгезии слабо или умеренно выражены, содгезия слабая или умеренная - единичные клетки, гистадгезия также слабая или умеренная. Скопления микроорганизмов в виде шаров отсутствуют. Если скопления и определяются, они единичные, имеют неправильную форму, по размеру незначительны, до 5-15 мкм. Скопления микробов могут отсутствовать совсем. Микроорганизмы из соскоба равномерно распределены по стеклу в нативном препарате, независимо от их небольшого или значительного количества. Фотографии соскобов слизистой языка, окрашенные по Граму, с нормальной микроскопической картиной без признаков обезвоженности тканей полости рта представлены на Фиг. 5, Фиг. 6, Фиг. 7 и Фиг. 8.

Степень хронической обезвоженности не оценивается, поскольку не представляет клинической значимости, не является фатальной, не требует экстренных мероприятий, легко и быстро корригируется применением чистой воды в возрастных дозах перорально.

Стандартное стоматологическое исследование и анкетирование проведено в группе 33 человек методом случайной выборки в течение 2013-2016 г. г. разного пола, возраста - от 1 года до 71 года с проявлениями воспалительного процесса СОПР по типу гингивита, стоматита и глоссита и кариеса зубов. Обследовано 23 человека с заболеваниями СОПР различной степени тяжести, а также 10 детей с высоким и очень высоким уровнем интенсивности кариеса. Всем детям проводилась оценка кпу зубов, гигиенический индекс (ГИ). Интенсивность поражения зубов кариесом определяли с помощью индекса кпу: число кариозных, пломбированных и удаленных временных зубов по поводу осложненного кариеса. Для расчета гигиены полости рта использовали индекс для детей раннего возраста по Э.М. Кузьминой, 2000. От родителей получено информированное согласие в соответствии со ст. 20, №323 - ФЗ от 21.11.2011 г. Материалы из полости рта от взрослых получены из поликлиники - 76%, из гастроэнтерологического отделения - 12%, отделения диализа и нефрологии - 12%. В качестве биоматериала для бактериологического исследования и микроскопии использовали соскоб слизистой языка. Для микроскопической диагностики использовали соскобы с поверхности слизистой оболочки дорсальной поверхности/спинки языка, нанося исследуемый материал на предметное стекло, окрашивая по Граму. Результаты оценивали после микроскопии с иммерсией, объектив ×100 в соответствии с формулой патента на изобретение РФ №2549989. Способ характеризует качественный и количественный состав микробиома в его нативном, естественном состоянии, включая клетки эпителия. Выполнен стандартный статистический анализ.

Проведенные исследования выявили признаки хронического обезвоживания у 88% пациентов с заболеваниями СОПР и 78% у детей с кариесом зубов. После выявления микроскопических признаков нехватки воды в макроорганизме, в течение нескольких дней исследуемые в группах принимали чистую воду в возрастных дозах. После этого проходили повторное микроскопическое исследование. Данные результатов микроскопического исследования с учетом характерных признаков хронической обезвоженности тканей полости рта до и после приема воды представлены в таблице 1.

Преимуществами предлагаемого способа являются:

- безвредность, скорость, экономичность;

- доступность биотопа спинки языка у детей и взрослых;

- для внедрения в стандартную практику врача-стоматолога имеется возможность выявления количества микроорганизмов микробиома полости рта, их принадлежности к грамнегативным или грампозитивным бактериям, морфологии, пространственного расположения, коадгезии и соадгезии между собой и гистадгезии к клеткам эпителия;

- щадящая диагностическая процедура для детей раннего возраста; простота использования;

- возможность быстрой опосредованной диагностики хронической нехватки воды в организме детей и взрослых, обезвоживания тканей полости рта, без применения прямого клинического осмотра, дополнительного клинико-диагностического исследования крови, мочи и слюны, специального оборудования;

- повышение качества диагностики, с появлением возможности неоднократного бактериоскопического контроля за обезвоженностью как опосредованного/ ориентировочного способа выявления нехватки воды в процессе проводимого комплекса профилактических мероприятий;

- быстрая диагностика и немедленное принятие мер для восполнения нехватки воды в тканях;

- профилактика кариеса зубов у детей раннего возраста путем бактериоскопического контроля в процессе лечения/профилактических мероприятий и возможностью коррекции процедур;

- профилактика заболеваний СОПР, когда обезвоживание способствует усугублению патологического процесса, уменьшению процессов самоочищения, а при его выявлении есть возможность немедленно подключить применение воды;

- отсутствие препятствий к неоднократному забору биологического материала с поверхности спинки языка на приеме у стоматолога, или другого специалиста, позволяет широко использовать предлагаемый способ;

- доступность биотопа полости рта; отсутствуют психогенные реакции, стресс у детей раннего возраста при применении заявляемого способа;

- отсутствуют противопоказания для применения способа; возможность использовать способ как в сочетании с другими методиками, так и без них.

Пример 1

Пациент Д., 51 год, предъявляет жалобы на чувство жжения, дискомфорта и инородного тела во рту. Изменение цвета языка: ярко-красный. Извращение вкуса и боль при приеме пищи.

Анамнез жизни: Перенесенные заболевания: ОРВИ. Наличие туберкулеза, гепатита и СПИДа отрицает. Хронических заболеваний нет. Аллергический анамнез не отягощен. Профессиональные вредности и болезни отсутствуют. Употребление алкоголя, наркотических веществ отрицает. На вредном производстве не работал. Стаж курения более 15 лет, протезирование ранее не проводил. Из напитков предпочитает очень горячий кофе без молока, крепкий горячий чай. Воду практически не пьет.

Status praesens: Общее состояние средней тяжести, страдание, вялость. Кожа бледно-розового цвета, эластичная. Сухостей, сыпи, кровоизлияний, шелушений и язв на коже не выявлено. Конфигурация лица не изменена, кожные покровы бледно-розового цвета, нормально увлажнены. Кожных высыпаний и припухлостей нет. Красная кайма губ сухая, определяются трещины, эрозий и изъязвлений нет. Регионарные лимфатические узлы: подчелюстные, подбородочные, шейные не увеличены, не спаяны с окружающими тканями, безболезненны при пальпации. Осмотр полости рта: слизистая оболочка губ, щек, твердого и мягкого неба бледно-розового цвета, умеренно увлажнена, без патологических изменений; отечности не наблюдается. Небные миндалины не увеличены, гнойных пробок в лакунах не выявлено, налета нет. Цвет языка: ярко-красный. Отмечается его отечность, гиперемия, болезненность при пальпации. Определяется белый налет на языке, плотный и фиксированный. Выраженное слюноотделение. Маргинальная часть десны и межзубные сосочки отечны и гиперимированы. Наблюдается кровоточивость из вершины сосочков при надавливании у их основания и при зондировании. Зубодесневое соединение не нарушено. Патологических пародонтальных карманов нет. Частичная вторичная адентия. Все зубы до экватора коронок покрыты темно-коричневым налетом курильщика. Мягкий зубной налет светло-коричневого цвета, локализован в пришеечной области всех зубов. Имеется наддесневой зубной камень коричневого цвета, плотной консистенции и поддесневой зубной камень на всех зубах. Глубина преддверия в норме. Аномалий положения и формы зубов не выявлено. Некариозные поражения зубов отсутствуют. КПУ равно 12. Индекс гигиены / ИГР-У равняется 2,8, что указывает на неудовлетворительное гигиеническое состояние полости рта. Папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс / РМА равен 52% - средняя степень воспаления.

Диагноз: Хронический катаральный гингивит, генерализованный, средней степени тяжести. Глоссит неуточненной этиологии.

Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды в тканях слизистой оболочки полости рта: количество микроорганизмов полости рта значительное, фон препарата бесцветный на 80-90%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами вязкой слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 5-7, их размеры от 40 до 80 мкм, значительно выражены процессы коадгезии и соадгезии внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии единичные в каждом поле зрения, имеются клетки грибов кандиды, коэффициент гистадгезии умеренный. Клетки эпителия имеют угловатые очертания, до 3-4 в каждом поле зрения.

Рекомендовано: для уменьшения болевого синдрома во время принятия пищи, протертые супы, слизистые каши и различные пюре. До и после еды, а так же в течение дня полоскания полости рта раствором фурацилина или 0,05% раствором хлоргексидина для предотвращения вторичного инфицирования и осложнений. Если болевой синдром выражен ярко, аппликации с анестетиками - 2% раствор лидокаина. При наличии признаков сухости языка для снижения болей смесь анестезина и глицерина.

Фибринный и некротический налет удалять ватным тампоном, смоченным протеолитическими ферментами: трипсин или химотрипсин. Натощак за 30 минут до еды или через час после еды рекомендовано употребление чистой воды в возрастной дозе в течение недели.

Микроскопия соскоба корня языка после применения воды не выявляет признаков обезвоженности, эпителий обычных размеров и очертаний, количество микроорганизмов большое, они равномерно распределены по стеклу, скоплений микробов не обнаружено, коадгезия, соадгезии и гистадгезия умеренные. Фон препарат розовый на 60%.

Состояние пациента значительно улучшилось, местные признаки воспаления уменьшились. Слизистые оболочки влажные, остаточные явления глоссита.

Пример 2

Пациент И., 39 лет, предъявляет жалобы на кровоточивость десен во время приема пищи и чистке зубов, на эстетический дефект: пигментированные зубные отложения.

Анамнез жизни: Перенесенные заболевания: ОРВИ. Наличие туберкулеза, гепатита и СПИДа отрицает. Хронических заболеваний нет. Аллергический анамнез не отягощен. Профессиональные вредности и болезни отсутствуют. Употребление алкоголя, табака, наркотических веществ отрицает. На вредном производстве не работал. Из напитков предпочитает крепкий чай, энергетические напитки. Воду практически не пьет.

Anamnesis morbi: При сборе анамнеза установлено, что 2 года назад отметил кровоточивость десен при чистке зубов.

Status praesens: Общее состояние удовлетворительное. Кожа бледно-розового цвета, нормально увлажнена, эластичная. Сухости, сыпи, кровоизлияний, шелушений и язв на коже не выявлено. Конфигурация лица не изменена, кожные покровы бледно-розового цвета, нормально увлажнены. Кожных высыпаний и припухлостей нет. Красная кайма губ без патологических изменений; губы нормально увлажнены; сухости, корок, трещин, эрозий и изъязвлений нет. Регионарные лимфатические узлы: подчелюстные, подбородочные, шейные не увеличены, не спаяны с окружающими тканями, безболезненны при пальпации. Осмотр полости рта: слизистая оболочка губ, щек, твердого и мягкого неба бледно-розового цвета, умеренно увлажнена, без патологических изменений; отечности не наблюдается. Язык нормальных размеров, слизистая оболочка бледно-розового цвета, умеренно увлажнена. Спинка языка чистая, десквамаций, трещин и язв нет. Наблюдается небольшая обложенность спинки. Болезненности, жжения, языка не наблюдается. Небные миндалины не увеличены, гнойных пробок в лакунах не выявлено, налета нет. Маргинальная часть десны и межзубные сосочки отечны и гиперимированы. Наблюдается кровоточивость из вершины сосочков при надавливании у их основания и при зондировании. Зубодесневое соединение не нарушено. Патологических пародонтальных карманов нет. Прикус ортогнатический. Все зубы до экватора коронок покрыты темно-коричневым налетом от крепкого чая. Мягкий зубной налет светло-коричневого цвета, локализован в пришеечной области всех зубов. Имеется наддесневой зубной камень коричневого цвета, плотной консистенции и под-десневой зубной камень на всех зубах. Глубина преддверия в норме. Аномалий положения и формы зубов не выявлено. Некариозные поражения зубов отсутствуют. КПУ составляет 8. Индекс гигиены / ИГР-У равняется 3,3 - неудовлетворительное гигиеническое состояние полости рта. Папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс / РМА равен 41%, что указывает на среднюю степень воспаления.

Диагноз: Хронический катаральный гингивит, генерализованный, средней степени тяжести.

Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды в тканях слизистой оболочки полости рта: количество микроорганизмов полости рта значительное, фон препарата бесцветный на 60-70%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами обезвоженной слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 3-4, их размеры от 20 до 60 мкм, выражены процессы коадгезии и соадгезии внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии 5-10 в каждом поле зрения, имеются клетки грибов кандиды, коэффициент гистадгезии умеренный. Клетки эпителия до 2-3 в каждом поле зрения. Рекомендовано к комплексному лечению гингивита подключить натощак за 30 минут до еды или через час после еды употребление чистой воды в возрастной дозе в течение недели.

Микроскопия соскоба корня языка после применения воды не выявляет признаков обезвоженности, эпителий обычных размеров, количество микроорганизмов небольшое, они равномерно распределены по стеклу, скоплений микробов не обнаружено, коадгезия, соадгезии и гистадгезия умеренные. Фон препарат розовый на 80%.

Состояние пациента значительно улучшилось, местные признаки воспаления уменьшились. Слизистые оболочки влажные, остаточные явления гингивита.

Пример 3

Ребенок О., 2 года 9 месяцев, кпу зубов равно 1. Хорошая гигиена полости рта / ГИ - 0,14, значение кариесогенного зубного налета - 0 баллов. В полости рта: 64 зуб - хроническое течение кариеса, компенсация: кариозная полость средних размеров, дентин плотный, пигментированный. Ребенок обследован микробиологически и микроскопически, согласно предлагаемого способа. Забор биоматериала производили из 4-х биотопов: налет с вестибулярной и язычной поверхностей зубов, межзубного промежутка и со слизистой оболочки спинки языка. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями Streptococcus mutans по 2-му классу, что соответствует КОЕ<105/мл; статистически значимых различий не выявлено. Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 2 класс / КОЕ<105/мл, межзубного промежутка - 2 класс, что соответствует КОЕ<105/мл. Был назначен комплекс лечебно - профилактических мероприятий, включающий: санацию полости рта, нормализацию характера и режима питания с устранением углеводного фактора, аппликация фторидов местно 1 раз в 3 месяца, консультация у педиатра. После демонстрации образцов с выросшими колониями патогенных бактерий для повышения мотивации, родителей обучали гигиене полости рта с использованием зубной нити и регулярным употреблением чистой питьевой воды по схеме.

Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды в тканях слизистой оболочки полости рта: количество микроорганизмов полости рта умеренное, фон препарата бесцветный на 60-70%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами обезвоженной слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 3-6, их размеры от 30 до 80 мкм, выражены процессы коадгезии и соадгезии внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии единичные в каждом поле зрения, клетки грибов кандиды отсутствуют, коэффициент гистадгезии умеренный. Клетки эпителия до 0-2 в каждом поле зрения. Рекомендовано к комплексному лечению кариеса подключить натощак за 30 минут до еды или через час после еды употребление чистой воды в возрастной дозе в течение недели.

Контроль употребления чистой питьевой воды осуществляли родители, 5 раз в день. Утром натощак после предварительной гигиенической чистки зубов, давали ребенку чистую воду в возрастной дозе. Вечером перед сном, предварительно проводили гигиеническую чистку зубов, давали ребенку чистую воду. После проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий с контролируемом употреблением чистой питьевой воды по разработанной нами схеме, показатели стоматологического статуса улучшились. Значение кпу осталось прежним - 1, но в структуре индекса изменился компонент «к» - «0», «п» - 1. Анализ полученных результатов показал прежнее значение ГИ - 0,14, и кариесогенности зубного налета до 0 баллов. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями Streptococcus mutans соответствует 1-у классу КОЕ<10⁵/мл; Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 0 класс, то есть КОЕ<10⁴/мл, межзубного промежутка - 1 класс, то есть КОЕ<10⁵/мл.

Микроскопия соскоба корня языка после применения воды не выявляет признаков обезвоженности, эпителий обычных размеров, количество микроорганизмов небольшое, они равномерно распределены по стеклу, скоплений микробов не обнаружено, коадгезия, соадгезии и гистадгезия слабые. Фон препарата розовый на 80%.

Состояние ребенка улучшилось, признаки кариесогенного риска уменьшились. Слизистые оболочки влажные, гигиена полости рта удовлетворительная. В течение диспансерного наблюдения новых очагов кариозного поражения зубов у ребенка выявлено не было.

Пример 4

Ребенок С., 2 года 10 месяцев, кпу зубов равно 8. Плохая гигиена полости рта / ГИ - 0,68, значение кариесогенного зубного налета - 2 балла. В полости рта: 54, 53, 52, 51, 61, 62, 63, 64 зубы: острое течение кариеса, декомпенсация: кариозные полости глубокие, дентин влажный, светлый. Ребенок обследован микробиологически и микроскопически, согласно предлагаемого способа. Забор биоматериала осуществляли из 4-х биотопов: налет с вестибулярной и язычной поверхностей зубов, межзубного промежутка и со слизистой оболочки спинки языка. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями Streptococcus mutans составила - 3 класс, что соответствует КОЕ>10⁶/мл; статистически значимых различий не выявлено. Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 3 класс КОЕ>10⁶/мл, межзубного промежутка - 3 класс, что соответствует КОЕ>10⁶/мл.

Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды в тканях слизистой оболочки полости рта: количество микроорганизмов полости рта значительное, фон препарата бесцветный на 60-80%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами обезвоженной слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 3-4, их размеры от 20 до 70 мкм, значительно выражены процессы коадгезии и соадгезии внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии единичные в каждом поле зрения, клетки грибов кандиды отсутствуют, коэффициент гистадгезии слабый. Клетки эпителия до 0-3 в каждом поле зрения.

В данном клиническом случае мы не назначали регулярное употребление чистой питьевой воды по предложенной нами схеме. Ребенку провели разработанный нами комплекс лечебно-профилактических мероприятий, включающий в себя: санацию полости рта, нормализацию характера и режима питания с устранением углеводного фактора, аппликацию фторидов местно 1 раз в 3 месяца, консультацию у педиатра. После демонстрации образцов с выросшими колониями патогенных бактерий для повышения мотивации, родителей обучали гигиене полости рта с использованием зубной нити. После проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий без употребления чистой воды по предложенной нами схеме, показатели стоматологического статуса также улучшились, обсемененность кариесогенными бактериями уменьшилась. Значение кпу осталось прежним - 8, но в структуре индекса изменился компонент «к» - «0», «п» - 8. Анализ полученных результатов показал достоверное уменьшение ГИ - 0,28, значения кариесогенности зубного налета улучшились до 1 балла. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями S. mutans соответствует 1-у классу / КОЕ<10⁵ /мл; статистически значимых различий не выявлено. Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 1 класс / КОЕ<10⁵/мл, межзубного промежутка - 1 класс, или КОЕ<10⁵/мл.

Микроскопия соскоба корня языка после применения комплексного лечения без применения воды выявляет те же признаки обезвоженности, количество микроорганизмов умеренное, они неравномерно распределены по стеклу, скопления микробов разной формы и размеров, коадгезия, соадгезии высокая, гистадгезия слабая. Фон препарата бесцветный на 60%. В течение диспансерного наблюдения прирост одного очага кариеса зубов.

Пример 5

Ребенок Р., 2 года 11 месяцев, кпу зубов равно 4. Плохая гигиена полости рта / ГИ - 0,62 и выраженный кариесогенный зубной налет - 2 балла. В полости рта: 52, 51, 61, 62 зубы - хроническое течение кариеса, компенсация: кариозные полости выполненные плотным, пигментированным дентином. Ребенок обследован микробиологически и микроскопически, согласно предлагаемого способа. Взят биоматериал из 4-х биотопов: налет с вестибулярной и язычной поверхностей зубов, межзубного промежутка и со слизистой оболочки спинки языка. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями Streptococcus mutans составила - по 3-му классу, что соответствует КОЕ>10⁶/мл: статистически значимых различий не выявлено. Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 1 класс / КОЕ<10⁵/мл, межзубного промежутка - 1 класс, что соответствует КОЕ<10⁵/мл. Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды: количество микроорганизмов полости рта умеренное, фон препарата бесцветный на 70-80%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами обезвоженной слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 3-8, их размеры от 20 до 50 мкм, значительно выражены коадгезия и соадгезия внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии единичные, кандиды отсутствуют, гистадгезия слабая. Эпителий 2-3 в каждом поле зрения.

Ребенку провели разработанный нами комплекс лечебно-профилактических мероприятий, включающий в себя: санацию полости рта, нормализацию характера и режима питания с устранением углеводного фактора, аппликацию фторидов местно 1 раз в 3 месяца, консультацию у педиатра. После демонстрации образцов с выросшими колониями патогенных бактерий для повышения мотивации, родителей обучали гигиене полости рта с использованием зубной нити. После проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий без употребления воды, по предложенной нами схеме, показатели стоматологического статуса также улучшились, обсемененность кариесогенными бактериями уменьшилась. Значение кпу осталось прежним - 4, но в структуре индекса изменился компонент «к» - «0», «п» - 4. Анализ полученных результатов показал достоверное уменьшение ГИ - 0,20, значения кариесогенности зубного налета улучшились до 1 балла. Выявили, что обсемененность слизистой спинки языка и язычной поверхности зубов кариесогенными бактериями Streptococcus mutans соответствует 1-у классу / КОЕ<10⁵/мл; статистически значимых различий не выявлено. Обсемененность вестибулярной поверхности зуба - 1 класс / КОЕ<10⁵/мл, межзубного промежутка - 1 класс, что соответствует КОЕ<10⁵/мл.

Микроскопия соскоба корня языка после применения комплексного лечения без воды выявляет те же признаки обезвоженности, количество микроорганизмов умеренное, они неравномерно распределены по стеклу, скопления микробов разной формы и размеров, коадгезия, соадгезии высокая, гистадгезия слабая. Фон бесцветный на 60%. В течение диспансерного наблюдения прирост одного очага кариозного поражения.

Пример 6

Ребенку М. 2 года 11 месяцев. Мать жалуется на наличие белых пятен и кариозных полостей на зубах верхней и нижней челюсти. Отмечает, что иногда дочь жалуется на боль при приеме пищи на нижней челюсти справа. Зубы чистят с 7 месяцев регулярно. Грудное вскармливание до 2-х лет. Для отлучения ребенка от груди перевели на компот. Со слов матери в любое время суток ребенок пьет «домашний компот». Воду не пьет. Из сладкого употребляет сахар в чистом виде, путем погружения пальца и облизывания, так несколько раз в один прием. В возрасте двух лет ребенок перенес герпесную ангину. На момент болезни гигиену полости рта не осуществляли. Пищевая аллергия: мед, яичный желток.

Status localis: на вестибулярной поверхности в придесневой области зубов 5.5, 5.4, 5.2, 5.1, 6.1, 6.2, 6.4, 6.5, 7.5, 7.4, 8.5, 84 кариозные полости с неровными контурами, подрытыми краями. Эмаль хрупкая, белесоватого цвета. Кариозная полость выполнена большим количеством влажного, светлого желтоватого цвета дентина, который легко удаляется экскаватором, пластами. Зондирование стенок кариозных полостей болезненное, быстропроходящая болевая реакция на холодную воду.

Микроскопия соскоба корня и спинки языка выявила признаки нехватки воды в тканях: количество микроорганизмов полости рта умеренное, фон препарата бесцветный на 60-80%, микроорганизмы в скоплениях, напоминающих шары, бесформенные конгломераты с тяжами обезвоженной слизи, имеются скопления микробов в каждом поле в количестве 3-5, их размеры от 20 до 60 мкм, выражены процессы коадгезии и соадгезии внутри фигур скопления микробов. Лептотрихии единичные в каждом поле зрения, клетки грибов кандиды отсутствуют, коэффициент гистадгезии слабый. Клетки эпителия до 0-1 в каждом поле зрения.

Микроскопия соскоба корня языка после применения комплексного лечения с употреблением воды по предложенной нами схеме не выявляет признаки обезвоженности, умеренное количество микробов, равномерно распределены по стеклу, скопления микробов отсутствуют, коадгезия, соадгезии слабая, гистадгезия слабая. Фон розовый на 80%. В течение диспансерного наблюдения прироста очагов кариозного поражения зубов нет.

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения нехватки воды в тканях полости рта. Делают соскоб по слизистой языка, учитывают совокупность микроскопических признаков хронической обезвоженности: большое количество и неравномерное распределение микробов, их скопления в шары и конгломераты неправильной формы, до 20-100 мкм, по 3-5 и более в поле зрения, сильно выраженная коадгезия и соадгезия, слабая или умеренная гистадгезия, тяжи обезвоженной слизи, фон препарата на 60-80% бесцветный; при нормальном содержании воды фон на 60-80% розовый за счет секрета, микроорганизмы располагаются равномерно, коадгезия, соадгезия и гистадгезия слабая или умеренная, единичные скопления 5-15 мкм неправильной формы. Способ позволяет быстро и многократно определять обезвоженность тканей полости рта у детей и взрослых из доступного биотопа с дальнейшей индивидуальной коррекцией. 8 ил., 1 табл., 6 пр.

Микроскопический способ определения обезвоженности тканей полости рта по состоянию микробиома языка у детей и взрослых, включающий микроскопию с иммерсией окрашенных по Граму двух мазков на предметных стеклах из соскоба 0,5 мл нативного биоматериала со слизистой языка, с определением наличия, количества и состава микробной флоры, формы, количества и размеров скоплений микроорганизмов, выраженности коадгезии, соадгезии и гистадгезии, исследование фона препарата, наличия тяжей слизи, отличающийся тем, что соскоб берут на границе задней и средней трети и с поверхности средней трети языка, с усилием проводя 2-3 раза шпателем вдоль по центру, учитывают совокупность микроскопических признаков хронической обезвоженности тканей слизистых оболочек полости рта: большое количество микроорганизмов, их неравномерное распределение по препарату, скопление микробов в шары, овалы, в конгломераты неправильной, неестественной/вынужденной формы до 20-100 мкм, не менее 3-5 в каждом поле зрения, сильно выраженная коадгезия микробов между собой и значительно выраженная соадгезия, при этом гистадгезия на поверхности многослойного плоского эпителия слабая или умеренная, определяются тяжи и/или скопления обезвоженной слизи, общий фон препарата на 60-80% бесцветный, неокрашенный; при нормальном содержании воды в тканях полости рта, фон препарата на 60-80% розовый, при грамотрицательном окрашивании секретируемых жидкостей микроорганизмы равномерно распределены по стеклу, коадгезия, соадгезия и гистадгезия слабые или умеренные, отсутствуют скопления микроорганизмов в виде шаров или единичные скопления 5-15 мкм неправильной формы.