СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИЕМИИ ПРИ ПОДОЗРЕНИИ НА СЕПСИС Российский патент 2003 года по МПК C12Q1/04 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к бактериологии и хирургии, и может быть использовано для диагностики сепсиса.

Известны различные способы выявления возбудителей в крови [1]. Эти способы включают радиоизотопную маркировку микроорганизмов и продуктов их метаболизма; скрининг бактерий, окрашенных акридиновым желтым; реакции коагглютинации и латексагглютинации; иммунологические методы; полимеразную цепную реакцию; лизис-центрифугирование (после добавления лизирующих агентов во флакон с кровью производят центрифугирование с последующей инокуляцией концентрата в обычную питательную среду). Однако существенным недостатком этих способов является анатомическое несоответствие между областью максимального насыщения бактериями, токсинами и местом забора крови на исследование. Сложность получения определенного количества микроорганизмов, достаточных для проведения исследования, затрудняет использование антибиотиков, чувствительных к микроорганизмам, вызвавших заболевание, проведению мероприятий по лечению и профилактике сепсиса.

Известен способ забора крови из периферической вены, при котором кровь берут из локтевой вены за 1 час до ожидаемого подъема температуры тела или озноба. Забор производят в количестве от 2 до 4 мл с интервалом 20 мин [2]. После инкубации в термостате в течение 7 суток производят посев крови на питательную среду и следят за появлением роста колоний микроорганизмов. Этот способ принят за ближайший аналог. Однако, как и при других способах, место забора крови выбрано без учета разницы концентрации бактерий и токсинов в центральной и периферической венозной крови.

Применяемые способы определения бактериемии направлены, в первую очередь, на выявление наличия и, во вторую, на количество микробов в крови. Несоответствие лабораторной диагностики при выраженной клинической картине сепсиса обусловливает поиск новых способов обнаружения бактерий в крови. Проведенные экспериментальные и клинические исследования по изучению центральной лимфодинамики выявили, что при гнойно-воспалительных процессах бактериальное обсеменение центральной венозной крови значительно выше, чем периферической. Под центральной венозной кровью подразумевается кровь, находящаяся в русле левого плечеголовного ствола, в месте, находящемся после впадения в венозную систему грудного протока. Нами было показано, что частота обнаружения бактерий в центральной венозной крови увеличивается по отношению к группе сравнения на 50-70%. Из этого следует, что наиболее эффективным из всех известных способов для выявления гемокультуры, в том числе при сепсисе является обнаружение бактерий в центральной венозной крови.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является возможность обнаружения у больных сепсисом наличия живых бактерий в крови.

Технический результат достигается за счет забора крови из левого венозного плечеголовного ствола путем пункции локтевой, подключичной или яремной вены и подведения катетера к обозначенному месту.

В зависимости от выбранного места венозной пункции: левая локтевая, левая подключичная, левая яремная - подбирается катетер определенной длины, соответствующий условию нахождения центрального конца в полости левого плечеголовного ствола, производится забор крови из установленного катетера в левом венозном плечеголовном стволе. Кровь инкубируют в термостате в течение 7 суток, а затем высевают на питательную среду по общепринятым методикам.

Способ осуществляется следующим образом.

Больного укладывают в горизонтальное положение на спине. Выбирают место венозной пункции в бассейне левого плечеголовного ствола. Определяют точку проекции верхней трети левого плечеголовного ствола. Скелетотопически эта точка соответствует левому краю грудины, на 2 см ниже яремной вырезки. Измеряют расстояние от выбранного места пункции до точки верхней трети левого плечеголовного ствола. Соответственно этому расстоянию подбирают венозный катетер. Производят пункцию вены, через которую катетер проводят на ранее определенную длину. Таким образом, достигается установка центрально конца катетера в заданном условием месте - верхней трети левого плечеголовного ствола. После окончания процедуры производят забор крови из установленного в центральной вене катетера. Кровь инкубируют в термостате 7 суток, затем высевают на обычную питательную среду.

Способ прошел экспериментальное испытание на кафедре оперативной хирургии Ивановского государственного медицинского института на мелких лабораторных животных - 24 крысы линии Вистар, самцы, весом до 180 г, возраст 6-10 мес. Наркоз - пары эфира. Создавали модель сепсиса. В область спины крысы подкожно вводили альфа-токсин в количестве 0,05 мкл (серии 128/9 института им. Гамалея). Через 24 часа в то же место вводили культуру золотистого стафилококка (штамм 13407); затем производили массаж места введения [3]. Исследуемый материал забирали на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14 сутки. Исследовали: центральную венозную кровь (ЦВК) - забор путем пункции легочной артерии в количестве 0,5-1,0 мл; периферическую венозную кровь (ПВК) - забор путем пункции хвостовой вены, в количестве 1,0-1,5 мл. ЦВК и ПВК засевали на двойную среду, состоящую из 1,5% мясо-пептонного скошенного агара и 1% сахарного бульона из расчета 1 об. на 10 об. питательной среды, в 10 чашках Петри, разделенных на 4 части. Посевы инкубировали при 37^oС. Просмотр производили ежедневно в течение 5 суток. При наличии роста микробов делали мазки, окрашивали по Граму и идентифицировали культуру. Результаты эксперимента приведены в таблице 1. Они подтвердили, что в ЦВК процент выявления живых бактерий при сепсисе в среднем в 2 раза выше, чем в ПВК.

Клинические испытания способ прошел на кафедре хирургических болезней 1 МГМСУ на базе ГБ 56 на 54 больных разного пола, возраста и природы синдрома системного воспалительного ответа. Забор крови ЦВК и ПВК осуществляли соответственно из плечеголовного венозного ствола и локтевой вены. Данные представлены в таблице 2. Из таблицы следует, что клинические испытания полностью подтверждают экспериментальные данные.

Результаты экспериментальных и клинических испытаний свидетельствуют, что ЦВК по сравнению с ПВК дает при сепсисе рост гемокультуры значительно чаще, достигая 50-70%.

Пример 1. Больной Д. 30-ти лет перенес аппендэктомию по поводу деструктивного аппендицита. Послеоперационный период протекал тяжело. Был выписан на 18 сутки. Вновь поступил в больницу спустя 3 месяца с жалобами на недомогание, вечерами отмечалась субфебрильная температура тела. При всевозможных исследованиях гнойный очаг не определялся. Иммунологические исследования выявили повышение иммуноциркулирующих комплексов 3-х фракций. Трижды посев крови из локтевой вены не выявил возбудителя. Забор крови из левого плечеголовного ствола выявил рост стафилококка. После проведенной эндолимфатической терапии (клафоран 1,0 - 1 раз в сутки в течение 6 дней вводился в катетеризированный лимфатический сосуд) наступило выздоровление. Рост микробной флоры больше не наблюдался. Лабораторные показатели крови нормализовались.

Пример 2. Больная С. 55 лет поступила в больницу с диагнозом: абсцедирующий фурункул лобка, сахарный диабет II типа. Произведена срочная операция: вскрытие, дренирование гнойного очага. Несмотря на это у больной развился синдромом гнойно-резорбтивной лихорадки. Клиническая картина соответствовала сепсису, однако посевы крови из локтевой вены гемокультуру не выявляли. Посев крови, взятой из левого плечеголовного ствола, выявил рост колоний стафилококка. После лимфотропного введения клафорана в количестве 1 г ежедневно в течение 7 суток явления сепсиса купированы, рана зажила вторичным натяжением. Рост микробной флоры из крови прекратился. Лабораторные показатели нормализовались. Больная была выписана домой.

Таким образом, предложенный способ является более чувствительным и позволяет:
- выявлять гемокультуру в тех случаях, когда обычным известным способом бактериемию обнаружить не удается;
- идентифицировать культуру микроорганизма, определить чувствительность к нему антибиотика и назначить адекватную антибиотикотерапию, которая является непременным условием успешного лечения сепсиса и других инфекционных заболеваний.

Способ предлагается для внедрения его в клинику как метод выбора при различных воспалительных, инфекционных и септических состояниях с синдромом системного воспалительного ответа.

Источники информации
1. Hoeffel D.P., Hinrichts S.N., Garvin K.L. Molekular diagnostics for the detection of musculoskeletal infection. Clin Ortopaed Red Res 1999; 360; 37-47.

2. Sbanson D.C. Blood culture technique: controversies. J Antimic Chem 1990; 25(Suppl): 17-29.

3. Мержвинский И.А. с соавт. Способ изучения хронического септического процесса на лабораторных животных. Патент 2143749 от 27.12.1999 г.

Изобретение относится к медицине, микробиологии и может быть использовано для выявления бактериемии при подозрении на сепсис. Исследуют центральную венозную кровь, полученную из верхней трети левого плечеголовного ствола путем катетеризации левой кубитальной, или подключичной, или яремной вены. Способ позволяет повысить эффективность выявления бактериемии при подозрении на сепсис. 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

1. Способ выявления бактериемии при подозрении на сепсис, включающий исследование венозной крови на наличие микроорганизмов, отличающийся тем, что исследуют центральную венозную кровь, полученную из верхней трети левого плечеголовного ствола.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для получения крови катетеризируют левый плечеголовной ствол через левую кубитальную, или подключичную, или яремную вену.