СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИЕМИИ Российский патент 1997 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к клинической микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики бактериемии у больных с лихорадочным состоянием.

Большинство инфекционных заболеваний сопровождается бактериемией. В практической работе клинического микробиолога бактериологическая диагностика бактериемии занимает особое положение и относится к наиболее сложным и трудным методам исследования. Качество и сроки получения результатов влияют на раннее назначение специфической антибактериальной терапии и прогноз заболевания для данного больного.

Известен способ диагностики бактериемии путем микроскопического исследования мазка периферической крови. (Кост Е.А. "Справочник по клиническим лабораторным методам исследования", 1975, стр. 71). На предметное стекло наносят каплю крови и распространяют ее углом предметного стекла или иглой до величины двухкопеечной монеты; не фиксируя, красят красителем Романовского в течение 40 45 мин. Микроскопируют. У подавляющего числа больных с клинически выраженной малярией в мазках крови обнаруживали малярийных паразитов, которые находились внутри эритроцита или свободно лежали между форменными элементами крови. Однако способ нашел применение только для диагностики малярии и оказался непригодным для диагностики других инфекционных заболеваний ввиду низкой чувствительности способа.

Известен способ диагностики путем посева крови в питательную среду (Францев В. И. "Бактериальный эндокардит при врожденных пороках сердца", 1986, стр. 74). Венозную кровь в количестве 5 10 мл помещают в 50 -100 мл жидкой питательной среды. Термостатируют при 37^oC в течение не менее 10 дней с ежедневным просмотром. При наличии видимого роста производят высев на плотную питательную среду с целью получения микробной массы. Микроскопируют, идентифицируют и определяют чувствительность выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам по общепринятой, классической схеме. Возбудители бактериемии обычно выявлялись в 31 54% случаев. Процент выявлений гемокультуры зависел от техники забора крови, метода культивирования микроорганизмов.

Недостатком этого способа диагностики бактериемии является длительный срок получения гемокультуры (не менее 10 дней) и низкая эффективность диагностики бактериемии.

Наиболее близким аналогом является способ диагностики бактериемии, в частности, выделения возбудителей брюшного тифа и паратифов из крови, включающий взятие крови из вены больного в стерильный флакон с раствором цитрата натрия, посев и инкубирование ее в питательной среде с последующим учетом выросших колоний (а.с.СССР N 1459247, кл. C 12 Q 1/04, 1987).

Недостатком известного аналога является низкая эффективность диагностики бактериемии, вызываемой возбудителями различных видов.

Задачей изобретения является сокращение сроков и повышение эффективности диагностики бактериемии.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что берут лейкоцитарный слой крови и производят прямой его посев на плотную питательную среду.

Способ осуществляется следующим образом. В стерильную пробирку с 0,5 мл 5% лимонно-кислого натрия вносят 4,5 мл исследуемой венозной крови. Тщательно перемешивают, затем центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 20 мин. На эритроцитах лежит белый слой, состоящий из форменных элементов крови. Плазма удаляется, а слой отбирается капилляром Панченкова и в виде капли наносится на поверхность 5% кровяного агара. Тщательно растирается петлей. Чашки с посеянной кровью помещают в эксикатор или в микроанаэростат и просматривают через 18 24 ч. Выросшие колонии микроскопируют, изучают биохимическую активность и чувствительность к антибактериальным препаратам. Ответ выдается на 3 4 день от момента посева крови, что позволяет считать его экспресс-способом. Бактериемия была диагностирована в 97% случаев.

Пример 1. Больной Б-ов Л.Б. с клиническим диагнозом инфекционный эндокардит. При посеве во флакон с питательной средой рост гемокультуры не получен. При экспресс-посеве получен рост Providencia rettgeri. На основании этого был подобран антибиотик, которым было проведено успешное лечение.

Пример 2. Больная Б-о Е.П. с диагнозом инфекционный эндокардит. При экспресс-посеве получена культура E.Coli. Во флаконе с питательной средой гемокультура была отрицательной. Проведенное целенаправленное лечение оказалось эффективным.

В таблице представлены результаты диагностики бактериемии при параллельных исследованиях крови у больных с подозрением на инфекционный эндокардит. Посев крови предшествовал антибактериальной терапии. Диагноз базировался на совокупности клинических, инструментальных и бактериологических данных. Критерии диагноза не отличались от общепринятых (лихорадка, СОЭ, L-глуболины, гамма-глобулины, фибриноген, СРБ и т.д.). Окончательно диагноз был подтвержден эффективностью проведенного лечения.

Преимущество разработанного способа заключается в следующем:
97% диагностики бактериемии,
сокращение сроков диагностики бактериемии до 3-х дней с момента забора крови.

Использование: микробиология, диагностика бактериемии, экспресс-посев крови. Сущность изобретения: в качестве посевного материала используют лейкослой крови и вносят в питательную среду - 5% кровяной агар, приготовленный на высокопитательной основе. Условия культивирования микроаэрофильные или анаэробные, последние являются предпочтительными. Чашки с посевами просматривают через 18 - 24 ч и ответ выдают на 3 сутки от момента забора крови. Разрешающая способность бактериолоческой диагностики бактериемии разработанными способом составляют 97%. 1 табл.

Способ диагностики бактериемии, включающий забор исследуемой крови, посев и инкубирование ее в питательной среде с последующим учетом выросших колоний, отличающийся тем, что для посева используют лейкоконцентрат, выделенный из исследуемой крови.