СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/53 G01N21/01 

Описание патента на изобретение RU2217756C2

Изобретение относится к иммунологии, в частности к оценке результатов иммунологических анализов.

Цель изобретения - обеспечение возможности детектирования колориметрических результатов исследований без использования специализированных приборов.

Предшествующий уровень техники.

Известны многочисленные устройства для количественной детекции содержимого лунок плоскодонных плашек (патенты US 4710031, US 5671290, US 4810096, JP 10274624A2).

Наиболее близкий аналог предлагаемого изобретения описан в патенте US 4710031 на "Microtiter plate reader". Предлагается ридер для плоскодонных плашек, который позволяет проводить визуальную экспертизу содержимого массива лунок плашки. Ридер включает средства поддержки плашки с лунками и имеет светоизлучающую поверхность, расположенную сверху. Области светоизлучения расположены таким образом, что соответствуют измеряемым на плашке лункам. Устройства ввода светового сигнала расположены снизу под плашкой и таким образом, чтобы обеспечить выборочную юстировку лунок.

Однако все предлагаемые аппараты не являются универсальными и зачастую представляют из себя закрытые или частично закрытые системы.

Сущность изобретения
Предлагаемые способ и приспособление позволяют проводить количественную оценку результатов иммуноферментного анализа с помощью регистрации и обработки оптического сигнала от лунок иммунологических плоскодонных стрипов с любым размером лунок. После проведения иммуноферментного анализа в зависимости от его результатов изменяется окраска содержимого лунок стрипа. Так как это изменение зависит от наличия аналита в исследуемом образце, измерение оптической плотности лунок позволяет оценить количество аналита в исследуемых образцах. Для измерения оптической плотности нами предложен следующий метод. Стрип, содержащий окрашенные продукты иммуноферментного анализа, помещали в фиксирующее прспособление таким образом, что дно лунок стрипа было обращено в сторону источника света и оптического датчика сканера. При этом лунки стрипа находились параллельно оси перемещения оптического датчика сканера. Световой пучок от источника света через прорези в фиксирующем устройстве попадал на дно лунок стрипа и, отражаясь от них, регистрировался датчиком. Полученный сигнал поступал со сканера в компьютер, формируя изображение дна лунок стрипа. Эти изображения обрабатывали с помощью программы "SigmaScan Pro 5"(Copyright 1987-1999 SPSS Inc.). Эта программа преобразует суммарную оптическую плотность изображения в числовую форму.

Мы использовали планшетный сканер с оптическим разрешением от 400•600 до 600•600 dpi. Выбор данного диапазона разрешения был обусловлен двумя факторами: при меньшем оптическом разрешении для точной регистрации оптической плотности разрешение недостаточно, а при большем существенно увеличиваются системные требования к компьютеру и возрастает время анализа изображения из-за многократно большего размера файла со сканированным изображением. Сканирование изображений производили в различных режимах, подбирая оптимальный. Для фиксации стрипа на планшете сканера и минимизации оптических искажений полученного изображения, что приводит к искажению результатов, мы использовали специальное фиксирующее приспособление. Фиксирующее приспособление представляет собой прозрачный экран с прорезями, позволяющими фиксировать плоскодонный стрип вдоль оси перемещения оптического датчика сканера.

Для измерения концентрации аналита в исследуемых образцах измеряется оптическая плотность лунок, в которых был проведен иммуноферментный анализ образцов аналита с известной концентрацией в серийных разведениях. После измерения оптической плотности с помощью полученных данных строится калибровочная кривая. Оптическая плотность исследуемых образцов наносится на график калибровочной кривой для вычисления концентрации аналита в них.

Изобретение поясняется чертежами, где:
на фиг. 1 показано фиксирующее приспособление для плоскодонных стрипов, вид сверху;
на фиг.2 - фиксирующее приспособление, вид сбоку;
на фиг.3 - фиксирующее приспособление, вид спереди.

На фиг. 1 изображен один из конструктивных вариантов фиксирующего приспособления для стрипов. Приспособление состоит из прозрачного экрана 1, в котором вырезаны вдоль оси перемещения оптического датчика сканера фиксатора для стрипов 2. На фиг.2 и 3 изображено это же приспособление в разрезе по осевой линии, фронтальная и боковая проекции соответственно.

Пример
В лунки стандартного 8-луночного плоскодонного стрипа помещали серийные разведения конъюгата кроличьих антител с пероксидазой хрена. Затем в эти лунки добавляли равное количество смеси тетраметилбензидина с перекисью водорода в цитратном буфере с рН 4,7. Через 10 минут реакцию останавливали добавлением в лунки 50% Н2SO4. Окрашенный стрип помещали в плашечный фотометр "Multiscan EX" и учитывали результат реакции при длине волны 450 нм. Затем стрип помещали в фиксирующее приспособление и сканировали изображение стрипа с разрешением 400•600 и 600•600 dpi. Полученное изображение анализировали при помощи программы "SigmaScan Pro 5"(Copyright 1987-1999 SPSS Inc.), используя для оценки всю поверхность изображения дна лунок стрипа с применением синего программного светофильтра. Как параметр для оценки использовали среднюю оптическую плотность. Полученные данные по светопропусканию преобразовали по формуле А=1/D, где А - оптическая плотность в относительных единицах, а D - среднее светопропускание в относительных единицах. Данные, полученные при разрешениях 400•600 и 600•600 dpi, практически совпали. При попытке получения данных с разрешением менее 400•600 dpi изображение утрачивало четкость, что затрудняло его обработку, а при разрешении более чем 600•600 dpi числовые значения данных практически не изменялись, но значительно увеличивался объем файлов, что затрудняло работу с ними. Полученные оптические плотности нанесли на графики. После их сравнения выяснилось, что оба графика (и со сканера, и с "Multiscan EX") равномерно монотонны и позволяют использовать их в качестве калибровочной кривой для оценки иммуноферментного анализа. Различие состояло в том, что кривая, полученная с "Multiscan EX", имела более логарифмический характер, что менее удобно для измерений, связанных с крайними областями этой кривой.

Серийные разведения конъюгата были использованы для построения калибровочной кривой. Использовались разведения 1:1600; 1:3200; 1:6400; 1:12800; 1: 25600. Затем были приготовлены разведения 1:2000; 1:5000; 1:10000, использованные как исследуемые образцы. Иммуноферментный анализ лунок калибровочной кривой и исследуемых лунок проводили одновременно, затем измеряли оптическую плотность в них двумя способами: на "Multiscan EX" и с помощью обработки изображения лунок, помещенных в фиксатор на планшетном сканере, как было описано выше. С помощью полученных данных строили калибровочные кривые оптических плотностей. Затем оптическую плотность исследуемых лунок наносили на соответствующие графики калибровочных кривых. Таким образом были получены данные концентраций конъюгата в образцах. Результаты эксперимента приведены в таблице.

Из таблицы видно, что погрешность при измерении обоими методами находится в пределе 6%. Так как измерение оптической плотности результатов иммуноферментного анализа с помощью "Multiscan EX" считается стандартным, можно утверждать, что измерения с помощью сканера с предложенным нами фиксирующим приспособлением также может быть использовано для таких измерений.

Похожие патенты RU2217756C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК МОНОСЛОЙНЫХ КУЛЬТУР И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ 2001
  • Зарайский Е.И.
  • Маркин А.В.
RU2217495C2
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА 2001
  • Зарайский Е.И.
  • Маркин А.В.
RU2217755C2
СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И СОСТОЯНИЯХ 2002
  • Поддубиков А.В.
  • Ванеева Н.П.
  • Ястребова Н.Е.
  • Маркина О.А.
  • Цветкова Н.В.
RU2213971C1
ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ АЛЬФА2-МИКРОГЛОБУЛИНА ФЕРТИЛЬНОСТИ (АМГФ)/ГЛИКОДЕЛИНА, РЕАГИРУЮЩИХ С РАЗЛИЧНЫМИ ГЛИКОФОРМАМИ БЕЛКА 2007
  • Болтовская Марина Николаевна
  • Маршицкая Маргарита Игорьевна
  • Назимова Светлана Владимировна
  • Старосветская Нелли Андрониковна
  • Степанов Александр Алексеевич
RU2360966C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМ БАКТЕРИЯМ ОДНОВРЕМЕННЫМ ВЫЯВЛЕНИЕМ IGG АНТИТЕЛ 2002
  • Ванеева Н.П.
  • Ястребова Н.Е.
  • С.И.
  • Сергеев В.В.
  • Цветкова Н.В.
  • Калина Н.Г.
RU2213972C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА 2009
  • Тимченко Нелли Федоровна
  • Недашковская Елена Петровна
  • Андрюков Борис Георгиевич
RU2429480C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНКОРПОРИРОВАННЫХ КОНТРОЛЬНЫХ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ ПУТЕМ СУШКИ В ЛУНКАХ ПЛАНШЕТА 2012
  • Бурков Анатолий Николаевич
  • Уланова Татьяна Ивановна
  • Обрядина Анна Петровна
  • Климашевская Светлана Владимировна
  • Матвеева Елена Михайловна
  • Филипенко Мария Михайловна
RU2508405C1
Способ идентификации биологических маркеров, обнаруживаемых в биологических материалах человека в связи с возможным наличием патологических состояний организма человека, в том числе онкологических заболеваний, осуществляемый путем мультиплексного иммуноферментного сэндвич-иммуноанализа 2021
  • Максимов Николай Львович
  • Петровский Станислав Викторович
RU2779104C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЗАДЕРЖКИ ПОЛОВОГО РАЗВИТИЯ У МАЛЬЧИКОВ ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА С ОЖИРЕНИЕМ 2013
  • Вербицкая Ольга Георгиевна
  • Попова Виктория Александровна
  • Афонин Александр Алексеевич
  • Пузикова Олеся Зиновьевна
  • Шкурат Татьяна Павловна
  • Александрова Анжела Аслановна
  • Золотухин Петр Владимирович
RU2530719C1
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИОФАГОВ 2015
  • Катаева Любовь Владимировна
  • Вакарина Арина Александровна
  • Степанова Татьяна Фёдоровна
RU2587636C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 217 756 C2

Реферат патента 2003 года СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

Изобретение относится к иммунологии. Сущность изобретения заключается в том, что стрип, лунки которого содержат продукты иммуноферментной реакции, помещают в фиксирующее приспособление, представляющее собой экран с цилиндрическими сквозными отверстиями, соответствующими дну лунок стрипа и обеспечивающие прохождение светового потока, его отражение, затем определяют оптическую плотность полученного отражения с разрешением от 400•600 до 600•600 dpi и по ее величине оценивают результаты анализа. Технический результат - детектирование результатов исследования без использования специализированных приборов. 1 табл., 3 ил.

Формула изобретения RU 2 217 756 C2

Способ количественной оценки результатов иммуноферментного анализа с использованием прозрачного плоскодонного стрипа, отличающийся тем, что стрип, лунки которого содержат продукты иммуноферментной реакции, помещают в фиксирующее приспособление, представляющее собой экран с цилиндрическими сквозными отверстиями, соответствующими дну лунок стрипа, и обеспечивающие прохождение светового потока к лункам стрипа и его отражение, затем определяют оптическую плотность полученного отражения с разрешением от 400х600 до 600х600 dpi и по ее величине оценивают результаты анализа.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2217756C2

US 5408535, 05.04.1995
US 4710031, 01.12.1987
УСТРОЙСТВО ДЛЯ УСТАНОВКИ ПЛАНШЕТА В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗАТОРЕ 1993
  • Аутеншлюс Александр Исаевич
  • Шелепов Иван Александрович
RU2080585C1

RU 2 217 756 C2

Авторы

Зарайский Е.И.

Маркин А.В.

Даты

2003-11-27Публикация

2001-05-23Подача