ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИМПЛАНТИРУЕМЫЙ ПРЕПАРАТ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2003 года по МПК A61K9/22 A61K31/4045 A61K31/505 A61K47/30 A61K47/38 A61P37/04 

Изобретение относится к средствам ветеринарной медицины и может быть использовано в пушном звероводстве и животноводстве, в частности свиноводстве.

Известно применение синтетического мелатонина для регуляции биологического ритма процессов жизнедеятельности животных [Патент 78305/81 Австралия; Патент 38111/85 Австралия] . Известно также применение для этих целей ветеринарных имплантатов, содержащих мелатонин или родственные химические препараты класса индола, полимерный носитель и покрытие для имплантата из физиологически совместимого полимера [Патент 4882137 США]. Указанные имплантаты имели низкий уровень пролонгации мелатонина (не более 20 суток), многокомпонентный состав, способ изготовления их был технологически сложен. Более привлекательными являются ветеринарные препараты, разработанные в России, содержащие мелатонин и полимерную основу, способствующие ускорению созревания волосяного покрова пушных зверей [А.с. 1579489 СССР, МКИ А 01 К 67/02; Патент RU 2122787, МПК 6 А 01 К 67/02, А 61 К 31/51 // БИ 9, 1999]. Но и они не лишены некоторых существенных недостатков, а именно: содержат частично биодеструктируемую полимерную основу, что приводит к неполному "высвобождению" мелатонина; кроме этого данные препараты эффективны при обязательном включении в рацион переваримого протеина в количестве 6-8 г на 100 ккал корма.

Известно применение для выращивания пушных зверей ветеринарного имплантируемого препарата, содержащего синтетический гормон шишковидной железы, - мелатонин на полимерной основе (прототип) [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22). // БИ 32, 1997]. Применение указанного препарата в пушном звероводстве позволяет произвести забой зверей на 1,5-2 месяца раньше стандартных сроков забоя и получить пушную продукцию площадью на 10-15% больше стандартной.

Однако применение известного имплантата не всегда обеспечивает сохранность пушных зверей (как правило, больных алеутской болезнью) до убойного периода.

Основная проблема, с которой сталкиваются звероводы при разведении норок, - это поиск путей и способов защиты поголовья от заболевания вирусным плазмоцитозом или алеутской болезнью норок. Болезнь приносит огромный экономический ущерб, складывающийся из большого падения взрослых зверей (70-80%) и щенков первых двух недель жизни, значительного количества пустых (не давших приплода), неблагополучно щенящихся и малопометных самок, повышенной стерильности самцов и ухудшения качества меха [Дукур И.И. Болезни пушных зверей. - М. : Колос, 1973, с.83-94]. Источником инфекции служат больные животные, в организме которых вирус живет длительное время. Вирус локализируется в крови, головном мозге, почках, печени, селезенке, слюнных железах, мезентериальных лимфоузлах и кишечнике.

Для болезни характерно медленное, скрытое и длительное течение, вначале сопровождающееся небольшим падежом животных. По мере развития болезни и накопления больных животных происходит большой отход норок с характерной для этой болезни клиникой и патолого-анатомическими изменениями. В механизме развития болезни выделяют две стадии: инфекционную и аутоиммунную. Первая стадия характеризуется размножением вируса, образованием плазматических клеток, вырабатывающих противовирусные антитела, и формированием иммунного комплекса антиген - антитело. Вторая стадия включает в себя повреждающее действие иммунного комплекса на клетки, образование аутоантигенов и аутоантител, которые приводят к развитию иммунопатологичесrих процессов в органах и гибели животных [Karslad L. New Iork, Springer, 1967, v. 40, p. 9-21].

Известно, что использование с лечебной целью иммунoдепрессоров метатрексата и 6-меркаптурина вызывает существенное снижение митотической активности лимфоидной ткани и уменьшение плазмоклеточной инфильтрации органов. Недостатком вышеназванных соединений является их высокая токсичность. Тем не менее иммунодепрессанты, а также иммуномодуляторы (левамизол) и гормоны могут успешно применяться как лечебное средство, позволяющее продлить жизнь норок до убойного периода [Дукур И.И. и др. Болезни пушных зверей. Изд. 3-е. - М.: Колос, 1984, с.78-87].

Цель изобретения - новые имплантируемые ветеринарные препараты, обладающие иммуностимулирующим действием и расширяющие арсенал известных средств для повышения сохранности, неспецифической резистентности и продуктивности пушных зверей при ускоренном их выращивании и других сельскохозяйственных животных.

Поставленная цель достигается предлагаемыми ветеринарными композициями и применением их в пушном звероводстве и свиноводстве. Предлагаемые ветеринарные композиции представляют собой имплантат, содержащий мелатонин или мелатонин с ксимедоном, биодеструктируемую полимерную основу и технологические добавки (или пластификатор).

В качестве полимерной основы используют водорастворимые производные целлюлозы (например, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, метилгидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу, метилгидроксиэтилцеллюлозу, гидроксиэтилкарбоксиметилцеллюлозу), предпочтительно микрокристаллическую целлюлозу (МКЦ) со степенью полимеризации 150-200, с применением технологических добавок для придания композиции необходимых физико-механических и пролонгирующих свойств или биодеструктируемые полимеры на основе этилцианакрилата (циакрин-ЭО) с применением пластификаторов.

В качестве технологических добавок используют водорастворимые производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза со степенью полимеризации 150-250, карбоксиметилцеллюлоза со степенью полимеризации 400-700, либо ее натриевая соль, оксипропилцеллюлоза со степенью полимеризации 500-1000. Вышеперечисленные производные целлюлозы являются известными компонентами широко применяющихся лекарственных средств, таких как Солкосерил желе (стимулятор регенерации клеток кожи с использованием Na-соли карбоксиметилцеллюлозы), Рибоксин (для регуляции метаболических процессов, содержит метилцеллюлозу), Финлепсин, Анкир Б, Ламизин (содержат микрокристаллическую целлюлозу) [Машковский М.Д. Лекарственные средства. Вильнюс, 1993].

В качестве пластификаторов могут быть использованы эфиры (этиловый, пропиловый, бутиловый, аллиловый, фениловый) фталевой кислоты, алкилцианацетаты, триацетин. [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22) // БИ 32, 1997].

В качестве второго лекарственного компонента используют ксимедон - 1-(β-оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2- оксипиримидин. Ксимедон - перспективное лекарственное средство, хорошо зарекомендовавшее себя при лечении гнойно-воспалительных послеоперационных осложнений, является новым противоожоговым лекарственным средством, эффективным при лечении острых пневмоний, старческих, диабетических и лучевых длительно не заживающих ран [Патент RU 2019176, МКИ А 61 К 31/505 // БИ 6, 1995; Патент RU 2063752, МКИ А 61 К 31/505 // БИ 20, 1996; Патент RU 2082402, МКИ А 61 К 31/505 // БИ 18, 1997]. Приказом Минздрава Российской Федерации от 07.12.93 287 ксимедон разрешен к применению в медицине и внесен в реестр лекарственных средств при комплексной терапии ожоговых больных [Протокол 22 фармкомитета МЗ СССР от 26.12.86; Приказ 287 МЗ РФ от 07.12.93 о внесении ксимедона в Государственный Реестр лекарственных средств, разрешенных к применению в медицинской практике и к производству]. По сравнению с такими препаратами, как ретаболил, метандростенолон, левомизол, ксимедон является препаратом, обладающим комбинированным лечебным эффектом, не имеет побочных действий, не вызывает аллергических реакций, не обладает какой-либо гормональной активностью и не влияет на эндокринный гомеостаз.

Предлагаются 3 композиции ветеринарного имплантата следующего состава, мас.%:
1. Мелатонин - 5-25
Ксимедон - 5-25
Циакрин-ЭО (полимер) - 89,95-35
Пластификатор - 0,05-15
2. Мелатонин - 10-50
Производные целлюлозы - 89,95-35
Технологические добавки - 0,05-15
3. Мелатонин - 5-25
Ксимедон - 5-25
Производные целлюлозы - 89,95-35
Технологические добавки - 0,05-15
Предлагаемые композиции и их применение ранее в литературе описаны небыли.

Введение в состав биодеструктируемого полимера ксимедона наряду с мелатонином привело к неожиданному (неочевидному) результату. При имплантации препарата норкам, больным вирусным плазмоцитозом, развитие болезни приобретало характер вялотекущей субклинической инфекции без активизации аутоиммуяной фазы течения болезни, что способствовало сохранности поголовья норок до убойного периода при сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца раньше стандартных сроков и получению пушной продукции площадью на 18-20% больше по сравнению с необработанными зверями, что улучшало ранее достигнутые результаты [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22) // БИ 32, 1997]; применение заявляемых препаратов в свиноводстве привело к сохранности и существенному увеличению живой массы подсосных поросят (на 48%) и, следовательно, повышению продуктивности животных.

Введение действующих веществ ниже 5 мас.% не обеспечивает ожидаемого эффекта, выше 25 мас.% (композиции 1, 3) и 50 мас.% (композиция 2) - нецелесообразно вследствие удорожания препарата, нарушения стабильности и эффективности лекарственной формы.

Содержание полимерной основы ниже 35 мас.% и выше 89,95 мас.% не обеспечивает необходимых пролонгирующих свойств препарата. Введение пластификаторов и технологических добавок позволяет улучшить физико-механические характеристики препарата и исключить появление фазовой гетерогенности структуры лекарственной формы.

Применение пластификатора и технологических добавок выше 15 мас.% приводит к нарушению прочностных характеристик препарата, ниже 0,05 мас.% не обеспечивает необходимой пластичности и физико-механических характеристик композиции.

Лекарственной формой предлагаемых композиций являются таблетки цилиндрической формы массой 0,040±0,010 г диаметром 2,0-2,4 мм коричневого цвета (оттенки не нормируются). Приготовление препарата осуществляли аналогично [Патент RU 2122787, МКИ А 01 К 67/02, А 61 К 31/51 // БИ 9, 1999].

По сравнению с известными ветеринарными средствами на основе мелатонина предлагаемые ветеринарные препараты, содержащие мелатонин или мелатонин с ксимедоном, обладают существенными преимуществами:
1. Применение препарата, содержащего мелатонин, на основе производных целлюлозы (композиция 2) в пушном звероводстве при ускоренном выращивании норок способствует сохранности поголовья норок до убойного периода при улучшении ранее достигнутых показателей: сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца и получению пушной продукции площадью, на 18-20% большей по сравнению с необработанными зверями.

2. Применение препарата, содержащего мелатонин и ксимедон, на основе биодеструктируемого полимера (композиции 1, 3) в пушном звероводстве при ускоренном выращивании норок способствует сохранности поголовья норок, больных вирусным плазмоцитозом, до убойного периода при улучшении ранее достигнутых результатов: сокращении сроков их выращивания на 1,5-2 месяца и получению пушной продукции площадью, на 18-20% большей ею сравнению с необработанными зверями. В результате действия препарата, содержащего мелатонин и ксимедон, развитие вирусного плазмоцитоза у подопытных норок приобретает характер вялотекущей субклинической инфекции без активизации аутоиммунной фазы течения болезни.

3. Применение препаратов в свиноводстве способствует активизации анаболических процессов, приводящих к существенному увеличению живой массы подсосных поросят (до 48% по сравнению с контрольными).

4. Заявляемые препараты обладают адаптогенным и стимулирующим действием, повышают неспецифическую резистентаость организма поросят в постнатальный период развития.

Как показали клинические испытания, предлагаемые имплантируемые препараты по своему воздействию на организм животных не являются суммой терапевтических действий компонентов, а представляют собой новые лекарственные средства с неожиданно более высоким лечебным и иммуностимулирующим эффектом.

Эксперимент показал, что имплантация модельных ветеринарных композиций, содержащих в качестве активнодействующего вещества только ксимедон и биодеструктируемую полимерную основу (производные целлюлозы с технологическими добавками или полиэтилцианакрилат с пластификатором) норкам не обеспечивает ускоренного созревания волосяного покрова пушных зверей, привес живой массы и увеличение площади шкурок. Созревание меха у опытных зверей и их убой в данном случае происходили в те же сроки, что и у не обработанных препаратами норок (табл. 2).

При имплантации модельных ветеринарных композиций, содержащих только ксимедон и биодеструктируемую полимерную основу с технологическими добавками (или пластификаторами), подсосным поросятам не было отмечено существенных различий в привесе живой массы опытных животных по сравнению с контрольными.

Высокую эффективность предлагаемых ветеринарных имплантируемых препаратов подтверждают следующие примеры.

Пример 1. Оценка эффективности ветеринарного препарата, содержащего мелатонин.

Для оценки эффективности заявленных ветеринарных препаратов была изучена кинетика выделения ("высвобождения") действующих веществ из имплантата в среде кровезаменяющего раствора (жидкости ЛИПК) аналогично [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22) // БИ 32, 1997]. Исследуемый образец - Мелапол (прототип) - ветеринарный препарат по патенту [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22) // БИ 32, 1997] состава, мас.%: мелатонин - 10-40; циакрин-ЭО (полимер) - 89,95-55,5; пластификатор - 0,05-4,5 в количестве 10 мг помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, добавляли 50 мл жидкости ЛИПК с консервантом, закрывали колбу пробкой и помещали в термостат при температуре 37^oС. Пробы по 5 мл отбирали на 2, 10, 20, 30, 40, 50, 60 сутки эксперимента. После отбора каждой пробы в мерную колбу добавляли по 5 мл жидкости ЛИПК с консервантом. Содержание действующего вещества в пробах определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе фирмы "Waters" (LC/GPC-244) или любой другой модели, снабженной УФ-спектрофотометрическим детектором (длина волны 254 нм; сорбент - селикагель С₁₈ зернистостью 5-18 мкм; элюент - ацетонитрил-вода; температура 25^oС).

Пример 2. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 10
Микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) - 89,95
Технологические добавки - 0,05
Пример 3. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 10
Оксипропилцеллюлоза - 89,95
Технологические добавки - 0,05
Пример 4. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 50
МКЦ - 35
Технологические добавки - 15
Пример 5. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 50
Оксипропилцеллюлоза - 35
Технологические добавки - 15
Пример 6. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 5
Ксимедон - 5
Циакрин-ЭО (полимер) - 89,95
Пластификатор - 0,05
Пример 7. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 25
Ксимедон - 25
Циакрин-ЭО (полимер) - 35
Пластификатор - 15
Пример 8. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 5
Ксимедон - 5
Микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) - 89,95
Метилцеллюлоза (МЦ) - 0,05
Пример 9. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 25
Ксимедон - 25
МКЦ - 35
МЦ - 15
Пример 10. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 5
Ксимедон - 5
МКЦ - 89,95
Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (NaKMЦ) - 0,05
Пример 11. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали заявляемый ветеринарный препарат состава, мас.%:
Мелатонин - 25
Ксимедон - 25
МКЦ - 35
NaKMЦ - 15
Пример 12. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали образец модельной композиции состава, мас.%:
Ксимедон - 10
Циакрин-ЭО (полимер) - 89,95
Пластификатор - 0,05
Пример 13. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали образец модельной композиции состава, мас.%:
Ксимедон - 10
МКЦ - 89,95
МЦ - 0,05
Пример 14. Аналогично примеру 1 испытаниям подвергали образец модельной композиции состава, мас.%:
Ксимедон - 50
МКЦ - 35
МЦ - 15
Таким образом, были изучены образец ветеринарного препарата - прототипа, изготовленного по [Патент RU 2096044, МКИ А 61 К 47/30 (А 61 К 47/30, 38:22) // БИ 32, 1997] и образцы заявляемых ветеринарных препаратов (примеры 2-14). Все образцы помещались в кровезаменяющий раствор одновременно. Время испытаний составило 60 дней. Результаты представлены в табл. 1.

Как видно из данных, приведенных в табл. 1, биодеструктируемая полимерная основа, содержащая либо полимер циакрин-ЭО и пластификатор, либо водорастворимое производное целлюлозы с технологическими добавками (метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы), обеспечивает достаточно равномерное "высвобождение" мелатонина и мелатонина с ксимедоном в заявляемых ветеринарных препаратах, что определяет их 100% "срабатываемость" В образцах 12-14 выделение ксимедона происходило гораздо быстрее, время пролонгации составило не более 35 дней.

Пример 15. Испытания опытных образцов заявляемых ветеринарных препаратов в пушном звероводстве.

В зверохозяйстве "Кощаковский" Республики Татарстан проводились испытания опытных образцов препаратов, содержащих мелатонин, мелатонин и ксимедон, на основе микрокристаллической целлюлозы на норках. Эффективность заявляемых препаратов оценивали путем сравнения с эффективностью известного препарата Мелапол (прототип), содержащего мелатонин (составы указаны в примере 1). Для оценки эффективности заявляемых композиций испытаниям подвергли также композицию следующего состава, мас.%: ксимедон - 10, МКЦ - 89,95, МЦ - 0,05. В качестве контроля были использованы звери, не обработанные препаратом, содержащим мелатонин. Препараты вводили подкожно в область между лопатками по 1 дозе на голову. Молодняк обрабатывали в период с 25 июня по 10 июля. Побочных явлений и осложнений при применении препарата не наблюдалось. В месте имплантации препарата воспалительные процессы в наружных и внутренних слоях кожи и подкожной клетчатки отсутствовали. Изучение динамики изменения живой массы показало, что разница в привесе живой массы зверей опытных (группы 2, 3, 4) и контрольной групп составила от 18 до 20%. Звери опытных групп были убиты 22.09.01-25.09.01; звери 5 и контрольной групп - 09.11.01. Пушнина после выделки соответствовала ГОСТ 7906. Результаты испытаний приведены в табл. 2.

Пример 16. Проведение морфологических исследований характера воздействия ветеринарных препаратов, содержащих мелатонин и ксимедон на органы и ткани норок.

С целью изучения влияния разрабатываемых ветеринарных препаратов пролонгированного действия, содержащих синтетический мелатонин и ксимедон, на организм бальных алеутской болезнью норок проведены производственные испытания опытных образцов на норководческой ферме зверосовхоза "Кощаковский" Пестречинского района РТ.

Для испытаний было изготовлено 3 опытных образца препарата: 2 образца, содержащих мелатонин и ксимедон (образцы 3, 4 табл. 2); 1 образец, содержащий мелатонин, на микрокристаллической целлюлозе (образец 2 табл. 2). Эффективность опытных образцов оценивалась в сравнении с образцом прототипа (образец 1 табл. 2). В опыте было использовано 100 голов норок стандартного окраса 4-месячного возраста, разделенных на 5 групп: 1-4 группы - опытные, 6-я группа - контрольная (звери, не обработанные препаратами), табл. 2.

Испытуемые препараты были имплантированы по одной дозе (одной грануле) каждому зверю в подкожную клетчатку области между лопатками при помощи инъекционной иглы И-28 по ТУ 64-1-3177-77 с внутренним диаметром иглы 2,6 мм. Место инъекции и иглу стерилизовали 70%-ным спиртом.

Морфологическим, гистохимическим и гистохимическим исследованиям подвергали образцы тканей и органов зверей, взятых на исследования в день забоя (конец эксперимента).

Печень. Гистологические изменения в печени норок, подвергшихся пролонгированному воздействию мелатонина и ксимедона, характеризовались развитостью структурной организации органа. Гепатоциты выделялись неоднородностью по величине и структуре цитоплазмы. В цитоплазме большинства клеток паренхимы, в области перикариона располагались многочисленные мелкие вакуоли, а резко контурированная периферия гепатоцитов выделялась интенсивным насыщением ШИК - положительного мелкозернистого материала. Отмеченные изменения являлись результатом активного биосинтеза в гепатоцитах и отложения резервного гликогена в цитоплазме. Объем ядер гепатоцитов составил 152,37±4,88 мкм³, что существенно превышало средние показатели объема ядер гепатоцитов 2-го класса и свидетельствовало об их умеренно выраженной полиплоидизации. О повышении синтетической активности в ядерном аппарате гепацитов свидетельствовали также обогащение их хроматином, присутствие одного, реже нескольких, ядрышек средним объемом 4,10±0,31 мкм³ и достаточно высокие показатели ядрышко-ядерного отношения - 0,027. Как результат протективного действия синтетического мелатонина в гепатоцитах не обнаруживали проявлений процессов перекисного окисления липидов в виде деструктивных процессов, обуславливающих развитие белковой и липоидной дистрофий. Желчные протоки имели хорошо выраженный просвет. Слизистая оболочка желчных протоков была представлена одним слоем призматических эпителиальных клеток, митотическая активность в ядрах которых не обнаруживалась. Гистохимическими исследованиями в стенках сосудов печени не выявлялись отложения хромотропного вещества, проявляющего метахромазию. В стенках сосудов микроциркуляции органа не отмечены признаки дезорганизации соединительных элементов. В периваскулярной соединительной ткани, сосудов портальной системы органа отмечали присутствие единичных лимфоцитов. В умеренно кровенаполненных синусоидальных капиллярах располагались единичные лимфоциты, макрофаги.

Селезенка. Селезенка подопытных норок имела слабо выраженный рисунок фолликулярного строения. Малочисленные фолликулы отличались полиморфизмом с преобладанием компактных форм. Средняя площадь лимфатических узелков составила 105,81±7,62 у.е. Герминативные центры узелков были слабо выраженными и также отличались небольшими размерами. Средняя площадь герминативных центров составила 22,80±3,40 у.е. Клеточные элементы реактивных центров узелков были представлены набухшими ретикулярными клетками, малочисленными бластами, средними лимфоцитами. Митотическая активность в клетках зародышевых центров узелков была слабо выраженной и наблюдалась лишь в виде единичных фигур митоза. Основную массу лимфоидной ткани узелков составляли средние и малые лимфоциты, большая часть из которых сосредотачивалась по периферии, вблизи к мантийной зоне узелков. Ядра этих клеток имели большую оптическую плотность и были обогащены хроматином. Сравнительно узкая мантийная зона лимфатических узелков была представлена резко сдавленными ретикулярными волокнами, ретикулярными клетками, малыми и средними лимфоцитами. Отмечено заметное увеличение присутствия малых лимфоцитов вблизи тимусзависимой периартериальной зоне узелков. Разреженность клеточных элементов в маргинальной зоне узелков явилась следствием интенсивной миграции лимфоцитов в красную пульпу органа. Клеточные элементы маргинальной зоны лимфатических узелков были представлены в основном разреженными ретикулярными клетками, среди которых располагались малочисленные лимфоциты. Прилегающие маргинальные синусы оставались расширенными. В умеренно кровенаполненной красной пульпе органа преобладали ретикулярные клетки, малые, средние лимфоциты, встречались макрофаги и компактные разреженные скопления плазмобластов. Обнаруживали увеличение содержания мегакариоцитов, среди которых преобладали незрелые клеточные формы, выделявшиеся небольшими размерами и округлостью границ цитоплазмы и слабой сегментацией ядра. Гистохимическими исследованиями в цитоплазме большинства мегакариоцитов, ретикулярных клеток, макрофагах обнаруживали повышенное содержание ШИК - положительного материала. Эти изменения свидетельствовали о достаточном уровне фильтрации крови в органе и высокой активности лимфоидно-макрофагального звена клеточного механизма проявления иммунной реактивности организма. Это также подтверждалось высоким уровнем активности кислой фосфатазы в ретикулярных клетках, герминативных центрах узелков и особенно в малых лимфоцитах, располагающихся вблизи периартериальной зоны и вокруг эллипсоидных артериол. Обнаруженное отсутствие признаков мукоидного набухания и плазматического пропитывания в стенках трабекулярных, центральных артерий, эллипсоидных артериол, сочетаемая слабо выраженной ШИК - положительной реакцией и отсутствием отложения хромотропного вещества, проявляющего метахромазию, свидетельствовало о торможении процесса осаждения иммунных комплексов в стенке сосуда микроциркуляции органа, и, следовательно, в результате пролонгированного действия компонентов комплексного препарата, содержащего синтетический мелатонин и ксимедон, в селезенке норок, больных вирусным плазмоцитозом, происходит изменение популяционного состава клеток лимфоидной ткани за счет увеличения содержания тимусзависимых лимфоцитов. Замедляется процесс плазмоклеточной трансформации клеток лимфоидной ткани. Уменьшение размеров лимфатических узелков в селезенке подопытных норок следует интерпретировать как задержку развития иммуноморфологических изменений, вызываемых вторжением вируса в иммунокомпетентные клетки. Заметно подавлялось и даже полностью отсутствовало явление дезорганизации компонентов соединительной ткани в стенках сосудов микроциркуляции. У подопытных норок активизировались процессы тромбоцитопоэза. Развитие вирусного плазмоцитоза у подопытных норок приобретало характер вялотекущей, субклинической инфекции, выражавшейся пролиферацией ретикулярных клеток в селезенке.

Почки. Почки подопытных норок, подвергшихся воздействию комплексного препарата, имели развитую структуру коркового и мозгового вещества. Увеличенные в объеме клубочки были представлены развитой сетью резко кровенаполненных капилляров с четко очерченной линией базальной мембраны. Ядра подоцитов, эндотелиальных мезангинальных клеток выделялись насыщенностью хроматиновыми гранулами. Отмечено уменьшение содержания клеток юкстагломерулярных и юкставаскулярных клеток. Ядра этих клеток были уменьшенными в объеме и становились интенсивно базофильными, что отражало в целом процесс снижения биосинтеза ренина (вазоактивных веществ) в органе. Компенсаторной реакцией к этим процессам следует считать увеличение объема и количества мезангиальных клеток, свидетельствовавшее о компенсации возникшего дефицита синтеза вазоактивных веществ. Большинство эпительальных клеток извитых канальцев имели интенсивно окрашенную цитоплазму, без проявлений белковых, жировых дистрофий. Ядра эпителиоцитов проксимального отдела канальцевой системы органа имели средний объем 117,36±4,47 и содержали значительное количество элементов хроматина. Однослойный призматический эпителий собирательных трубочек в медуле органа отличался преобладанием светлых клеток над темными. Присутствие малочисленных интенстициальных клеток в строме пирамид органа отражало умеренный синтез простагландинов этими клетками, что, вероятно, компенсировалось большей активностью светлых элителиоцитов собирательных трубочек. Вокруг отдельных крупных сосудов коры почек у некоторых норок обнаруживали умеренно выраженный отек, а также присутствие малочисленных или единичных лимфоидных клеток, что свидетельствовало о слабой выраженности проявления начальной фазы вирусного плазмацитоза. Гистохимическими исследованиями установлено, что наибольшую ШИК - положительную реакцию проявляли базальные мембраны капилляров клубочков, канальцевой системы органа, а также в области щеточной каймы эпителиальных клеток проксимального отдела. И не было отмечено в отличие от контрольных не обработанных препаратами норок отложений мукополисахаридов в стенках сосудов. Следовательно, характер структурных изменений в почках больных норок свидетельствует о том, что инфекционный процесс приостанавливается или затягивается на стадии первичного инфекционного цикла, без активации аутоиммунной фазы течения болезни.

Желудок. Слизистая оболочка желудка подопытных норок характеризовалась целостностью фовеолярного и ямочного эпителия, клетки которых выделялись цилиндрической формой. Цитоплазма этих клеток была обогащена ШИК - положительным материалом, свидетельствовавшим об интенсивной выработке протективных мукополисахаридов. Овальные ядра этих клеток вследствие повышенного синтеза мукоп олисахаридов располагались резко базально и содержали многочисленные интенсивно окрашенные элементы хроматина, а также несколько ядрышек. Многочисленные клетки, располагавшиеся в области шейки желудочных желез, выделялись крупными ядрами и также были насыщены элементами хроматина. В отдельных клетках обнаруживали фигуры митоза. Содержание субэпителиальных лимфоцитов в апикальной части слизистой оболочки желудка достигало 7,0±0,88. Отмеченные клетки выделялись гиперхромным ядром округлой или овальной формы, располагавшимся в центре цитоплазмы, имевшей вид светлого узкого ободка. Отмеченные изменения в состоянии эпителиальной ткани слизистой оболочки желудка отражали умеренно выраженный процесс регенерации клеток и биосинтез этими клетками протективного фактора. Популяции экзокриноцитов в трубчатых железах выделялись своей дифференцированностыо и многочисленностью. В большинстве ядер этих клеток отмечали малое содержание элементов хроматина, что указывало на завершенность клеточной дифференцировки. Элементы стромы слизистой оболочки желудка были представлены малочисленными лимфоидными клетками, гистиоцитами, фибробластами, фиброцитами, малодифференцированными клетками. Сосудистая система органа отличалась развитостью капилляров, артериол, венул и лимфатических сосудов и их умеренным наполнением и отсутствием признаков дезорганизации элементов соединительной ткани в их стенках. Гистохимическими исследованиями установлен высокий уровень активности сукцинат дегидрогеназы в поверхностно-эпителиальных клетках, главных и особенно париетальных экзокриноцитах. Следовательно, состояние слизистой оболочки желудка подопытных норок характеризовалось сохранением клеточных элементов эпителиальной и соединительной ткани органа, высоким уровнем синтетической и регенераторной активности и выработки пищеварительных ферментов. Следует отметить отсутствие выявленных нарушений в сосудистой стенке, а также плазмоклеточной инфильтрации элементов стромы органа, часто обнаруживаемых в слизистой оболочке контрольных больных норок.

Таким образом, обнаруженные структурные изменения в паренхиматозных органах и слизистой оболочке желудка подопытных норок свидетельствовали о значительном снижении и даже отсутствии проявлений метаболических нарушений, возникающих при развитии вирусного плазмоцитоза. Отмечено резкое снижение выраженности плазмоклеточной реакции; отсутствие или слабовыраженное проявление нарушений транскапиллярного обмена, вызываемые дезорганизацией сосудистых стенок и отложение в них иммунных комплексов; отсутствие генерализованного характера клеточных реакций мезенхимальной ткани, ослабление митотичесхой активности в клетках лимфатических узелков селезенки и возрастание миграционной подвижности иммуннокомпетентных клеток, в первую очередь, тимусзависимых лимфоцитов и макрофагов. Отмеченные изменения связаны с ролью испытуемых препаратов в регуляции синтетических процессов, происходящих в клетках. Механизм воздействия ксимедона, на наш взгляд, основан на включении его как разновидности структурного аналога пиримидинового основания урацила в нуклеогид и, следовательно, возможном влиянии его на процесс синтеза разновидностей мРНК, что создавало препятствия для синтеза индуцированных вирусом алеутской болезни норок ранних белков (ферментов) или биосинтеза провирусных белков. В результате чего в период пролонгированного действия препарата провирусы переходили в вегетативную форму и не вызывали повреждения клетки и затем не индуцировали вторую аутоиммунную фазу развития этой болезни. Действие мелатонина способствовало сохранению структур клеточных мембран за счет торможения процессов разрушения липопротеидных комплексов.

Морфологичекие исследования были проведены в соответствии с методиками [Рапопорт Я.Л. Морфологические основы иммуногенеза (иммуноморфология) - Арх. патол., 1957, 2, с. 3-19; Фонталин Л.Н. Иммунологическая реактивность лимфоидных органов и сток. Л.: Медицина, 1967, 210 с.; Фриденштейн А.Я., Чертков И.Л Клеточные основы иммунитета. М.: Медицина, 1969, 256 с.; Барта И. Селезенка. Анатомия, физиология, патология и клиника. Будапешт: Издательство Акад. наук Венгрии, 1976, 264 с.; Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина, 1983, 367 с.; Автандилов Г.Г., Яблучанский Н.И., Губенко В.Г. Системная стереометрия в изучении патологического процесса. М.: Медицина, 1981, 192 с.; Лойда З. , Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982, 272 с.].

Пример 17. Испытания образца модельной композиции, содержащей ксимедон и биодеструктируемую полимерную основу (производные целлюлозы) с технологическими добавками, в свиноводстве.

В свиноводческом комплексе зверохозяйства "Кощаковский" проведены испытания опытного образца модельной композиции, содержащей ксимедон (образец 13, табл. 1). В опыте было использовано 8 подсосных поросят крупной белой породы (1 помет).

Всего сформировано две группы животных: опытная и контрольная. Животные обеих групп (опытной и контрольной по 4 поросенка в каждой) содержались вместе со свиноматкой в индивидуальном станке. Испытуемый препарат имплантировали подопытным поросятам в подножную клетчатку левой области паха при помощи инъекционной иглы И-28 по ТУ 64-1-3177-77, диаметр которой соответствовал диаметру гранул препарата. Место инъекции и иглу стерилизовали 70% спиртом. Имплантацию проводили двукратно по одной дозе препарата: первое введение производили поросятам в возрасте 12-14 суток, второе на 36 сутки эксперимента. В 1-, 19-, 36-, 54-е сутки эксперимента проводили взвешивание поросят опытной и контрольной групп. Разницы в привесе живой массы опытной и контрольной групп практически не наблюдалось.

Пример 18. Испытание препаратов, содержащих мелатонин и ксимедон, в свиноводстве.

В свиноводческом комплексе зверохозяйства "Кощаковский" проведаны испытания опытного образца ветеринарного препарата, содержащего мелатонин с ксимедоном. В опыте было использовано 16 подсосных поросят крупной бедой породы (2 помета).

Всего сформировано две группы животных: опытная и контрольная. Животные обеих групп (опытной и контрольной) содержались вместе со свиноматками в индивидуальных станках (2 станка). Испытуемый препарат имплантировали поросятам в подкожную клетчатку левой области паха при помощи инъекционной иглы И-28 по ТУ 64-1-3177-77, диаметр которой соответствовал диаметру гранул препарата. Место инъекции и иглу стерилизовали 70% спиртом. Имплантацию проводили двукратно по одной дозе препарата: первое введение производили поросятам в возрасте 12-14 суток, второе на 36 сутки эксперимента. В 1-, 19-, 36-, 54-е сутки эксперимента проводили взвешивание поросят опытной и контрольной групп. Результаты взвешивания представлены в табл. 3.

Динамика изменения живой массы подопытных и контрольных животных свидетельствует о стимулирующем действии препарата на темпы прироста живой массы тела животных. Подсосные поросята были переведены от свиноматок в общий загон на 54-е сутки эксперимента. К концу эксперимента (54-е сутки) масса тела подопытных поросят превышала показатели контрольных животных на 48%. Таким образом, пролонгированное действие препарата, содержащего синтетический мелатонин и ксимедон, способствует активизации анаболических процессов, приводящих к существенному увеличению живой массы подсосных поросят и, следовательно, повышению продуктивности животных.

Разрабатываемый препарат может быть рекомендован в качестве адаптогенного и стимулирующего средства, повышающего неспецифическую резистентность организма поросят в постнатальный период развития.

Таким образом, приведенные результаты демонстрируют высокую эффективность имплантируемых ветеринарных препаратов пролонгированного действия для повышения сохранности, неспецифической резистентности и продуктивности сельскохозяйственных животных.

Промышленная применимость. Заявляемые ветеринарные препараты могут найти применение в пушном звероводстве, животноводстве, ветеринарной медицине. Выпуск первых опытно-промышленных партий запланирован на IV кв. 2002 г. - I кв. 2003 г. ООО научно-производственным предприятием "Ветта" при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (ВНИВИ) г. Казань (лицензия, реестровый 001762 серия ДОО, peг. 434 от 14.06.2001 г.).

Изобретение относится к средствам ветеринарной медицины. Препарат содержит мелатонин или мелатонин с ксимедоном, биодеструктируемую полимерную основу и технологические добавки (или пластификатор). Предложены три лекарственные композиции следующего состава, мас.%: мелатонин 5-25, ксимедон 5-25, циакрин-ЭО (полимер) 89,95-35, пластификатор 0,05-15; мелатонин 10-50, производные целлюлозы 89,95-35, технологические добавки 0,05-15. Препарат повышает сохранность, неспецифическую резистентность и продуктивность при ускоренном выращивании пушных зверей и других сельскохозяйственных животных. 2 с. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Ветеринарный имплантируемый препарат иммуностимулирующего действия, содержащий мелатонин, биодеструктируемую полимерную основу - циакрин-ЭО и пластификатор, отличающийся тем, что он дополнительно содержит ксимедон при следующем соотношении компоненто, мас.%:

Мелатонин 5-25

Ксимедон 5-25

Циакрин-ЭО (полимер) 89,95-35

Пластификатор 0,05-15

Мелатонин 10-50

Производные целлюлозы 89,95-35

Технологические добавки 0,05-15

Мелатонин 5-25

Ксимедон 5-25

Производные целлюлозы 89,95-35

Технологические добавки 0,05-15