ПОЛИНУКЛЕОТИДНАЯ МОЛЕКУЛА, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК-РЕГУЛЯТОР ВЫРАБОТКИ АВЕРМЕКТИНА В Streptomyces avermitilis (ВАРИАНТЫ), СОДЕРЖАЩИЕ ЕЕ ВЕКТОР КЛОНИРОВАНИЯ И ШТАММ; СПОСОБЫ СКРИНИНГА МУТАЦИИ В РЕГУЛЯТОРНОМ ГЕНЕ, ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОК И ПОВЫШЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АВЕРМЕКТИНОВ В КУЛЬТУРЕ Российский патент 2004 года по МПК C12N15/31 C12N1/21 C12P17/08 C12P1/06 C12P1/06 C12R1/465 

Описание патента на изобретение RU2221042C2

Текст описания в факсимильном виде (см. графический материал)ф

Похожие патенты RU2221042C2

название год авторы номер документа
ГЕН STREPTOMYCES AVERMITILIS И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ИЗМЕНЕНИЯ СООТНОШЕНИЯ АВЕРМЕКТИНОВ B2:B1 2003
  • Штутцман-Энгвалль Ким Джонелл
  • Густафссон Клаэс Эрик Даниэль
  • Креббер Анке
  • Райллард Сун Ай
  • Миншулл Джереми Стивен
  • Ким Серан
  • Чен Ян
RU2293117C2
ГЕНЫ И БЕЛКИ ДЛЯ БИОСИНТЕЗА ЛАНТИБИОТИКА 107891 2007
  • Донадио Стефано
  • Сосио Маргерита
  • Серина Стефания
  • Меркорилло Давиде
RU2441915C9
СЕВЕРО-АМЕРИКАНСКИЙ ВИРУС РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ (PRRS) И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ 2011
  • Уэлч Сиао-Кунь Вань
  • Кэлверт Джей Грегори
  • Слэйд Дэвид Иуэлл
RU2592667C2
ПРИМЕНЕНИЕ ЛИПОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА В ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ 2005
  • Мясников Андрей
  • Сеэ Йерн Борк
  • Миккельсен Йерн Дальгор
  • Повелайнен Мира
  • Питканен Вирве
RU2406759C2
ЛИПОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ 2010
  • Мясников Андрей
  • Сеэ, Йерн, Борк
  • Миккельсен, Йерн, Дальгор
  • Повелайнен, Мира
  • Питканен, Вирве
RU2538144C2
РЕКОМБИНАНТНЫЕ ШТАММЫ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА С МУТАЦИЯМИ В М2-2 ORF, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИМИ ДИАПАЗОН АТТЕНУИРУЮЩИХ ФЕНОТИПОВ 2016
  • Коллинз, Питер, Л.
  • Буххольц, Урсула, Дж.
  • Луонго, Синди
RU2773746C2
ПОЛУЧЕНИЕ ЛИЗОГЛИКОЛИПИДА И БИОКОНВЕРСИЯ ГЛИКОЛИПИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛИПОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА 2005
  • Мясников, Андрей
  • Сеэ, Йерн, Борк
  • Миккельсен, Йерн,Дальгор
  • Повелайнен, Мира
  • Питканен, Вирве
RU2548805C2
РЕКОМБИНАНТНЫЙ МИКРООРГАНИЗМ ДЛЯ УЛУЧШЕННОГО ПОЛУЧЕНИЯ ХИМИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ ТОНКОГО ОРГАНИЧЕСКОГО СИНТЕЗА 2014
  • Шредер Хартвиг
  • Хартман Хольгер
  • Ванг Квингжао
  • Ратани Шакир
  • Джуо Жеюан
  • Помпеюс Маркус
RU2708312C1
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЗАЩИТЫ СВИНЕЙ ОТ ИНФЕКЦИИ РРСС-ВИРУСА (ВАРИАНТЫ) И ВАКЦИНА, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННУЮ КОМПОЗИЦИЮ (ВАРИАНТЫ) 2006
  • Йо Донгван
  • Ли Чангхи
  • Калверт Джей Грегори
  • Уолч Сяо-Кун
RU2381035C2
НИТРИЛГИДРАТАЗА ИЗ Rhodococcus 2005
  • Освальд Штеффен
  • Ферзекк Штефан
  • Дайтинг Ута
  • Веккбеккер Кристов
  • Хутмахер Клаус
  • Биндер Михаэль
  • Кула Мария-Регина
  • Одендаль Конрад
RU2385932C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 221 042 C2

Реферат патента 2004 года ПОЛИНУКЛЕОТИДНАЯ МОЛЕКУЛА, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК-РЕГУЛЯТОР ВЫРАБОТКИ АВЕРМЕКТИНА В Streptomyces avermitilis (ВАРИАНТЫ), СОДЕРЖАЩИЕ ЕЕ ВЕКТОР КЛОНИРОВАНИЯ И ШТАММ; СПОСОБЫ СКРИНИНГА МУТАЦИИ В РЕГУЛЯТОРНОМ ГЕНЕ, ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОК И ПОВЫШЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АВЕРМЕКТИНОВ В КУЛЬТУРЕ

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности при получении авермектинов. Идентифицированы и охарактеризованы два новых гена (обозначены aveR1 и aveR2) Streptomyces avermitilis, кодирующих полипептиды, участвующие в регуляции экспрессии фермента авермектинполикетидсинтазы (РКS) и соответственно биосинтеза авермектинов. С помощью мутаций, приводящих к инактивации одного или обоих названных генов, получены культуры клеток Streptomyces avermitilis, характеризующиеся повышенным по сравнению со штаммами дикого типа уровнем выработки авермектинов. Использование изобретения позволяет повысить продуктивность штаммов стрептомицетов, применяемых в производстве антибиотиков. 8 с. и 13 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл.

Формула изобретения RU 2 221 042 C2

1. Выделенная полинуклеотидная молекула, кодирующая генный продукт, который регулирует выработку авермектина в Streptomyces avermitilis, включающая нуклеотидную последовательность, в соответствии с генетическим кодом определяющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, или нуклеотидную последовательность, которая более чем на 80% идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 2317-го нуклеотида, и гибридизуется в условиях высокой степени жесткости с комплементом полинуклеотидной молекулы, включающей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 2317-го нуклеотида.2. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.1, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 2317-го нуклеотида.3. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.2, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1.4. Выделенная полинуклеотидная молекула, кодирующая генный продукт, который регулирует выработку авермектина в Streptomyces avermitilis, включающая нуклеотидную последовательность, в соответствии с генетическим кодом определяющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или нуклеотидную последовательность, которая более чем на 80% идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:3 от 2314-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида, и гибридизуется в условиях высокой степени жесткости с комплементом полинуклеотидной молекулы, включающей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3 от 2314-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.5. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.4, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3 от 2314-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.6. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.4, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3.7. Выделенная полинуклеотидная молекула, кодирующая генный продукт или продукты, которые регулируют выработку авермектина в Streptomyces avermitilis, включающая нуклеотидную последовательность, в соответствии с генетическим кодом определяющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4 или нуклеотидную последовательность, которая более чем на 80% идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида, и гибридизуется в условиях высокой степени жесткости с комплементом полинуклеотидной молекулы, включающей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.8. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.7, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 2317-го нуклеотида и нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 2314-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.9. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.8, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.10. Выделенная полинуклеотидная молекула по п.9, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1.11. Рекомбинантный вектор для клонирования в клетках-хозяевах, включающий полинуклеотидную молекулу, кодирующую генный продукт, который регулирует выработку авермектина в Streptomyces avermitilis, включающую нуклеотидную последовательность, в соответствии с генетическим кодом определяющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:4, или в соответствии с генетическим кодом определяющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, при том, что полинуклеотидная молекула функционально соединена с одним или большим числом регуляторных элементов.12. Рекомбинантный вектор по п.11, дополнительно включающий нуклеотидную последовательность, кодирующую селективный маркер или продукт репортерного гена.13. Рекомбинантный вектор по п.12, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность SEQ ID NO:2 кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1 от 1112-го нуклеотида до 2317-го нуклеотида и аминокислотная последовательность SEQ ID NO:4 кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:3 от 2314-го нуклеотида до 3021-го нуклеотида.14. Рекомбинантный вектор по п.12, предназначенный для встраивания в клетку-хозяин.15. Способ скрининга мутации в гене aveR1, имеющем нуклеотидную последовательность по п.1, или в гене aveR2, имеющем нуклеотидную последовательность по п.4, или в обоих указанных генах aveRI и aveR2 Streptomyces avermitilis, которая способна обусловливать достоверное повышение содержания авермектинов, вырабатываемых клетками штамма Streptomyces avermitilis, несущими генную мутацию, по сравнению с клетками того же штамма Streptomyces avermitilis, которые не несут генную мутацию, включающий (а) получение клеток штамма Streptomyces avermitilis и измерение содержания авермектинов, вырабатываемых клетками данного штамма; (b) направленное внесение определенной мутации в последовательность гена aveRI, или гена aveR2, или обоих генов aveRI и aveR2 клеток штамма Streptomyces avermitilis согласно стадии (а); (с) сравнение содержания авермектинов, вырабатываемых клетками, несущими генную мутацию, полученную согласно стадии (b), с содержанием авермектинов, вырабатываемых клетками согласно стадии (а), которые не несут указанную мутацию; (d) признание мутации, отвечающей указанному назначению, если содержание авермектинов, вырабатываемых клетками, несущими генную мутацию, полученную согласно стадии (b), достоверно больше, чем содержание авермектинов, вырабатываемых клетками согласно стадии (а), которые не несут данной мутации.16. Способ получения генетически модифицированных клеток штамма Streptomyces avermitilis, вырабатывающих отчетливо увеличенное количество авермектинов по сравнению с немодифицированными клетками штамма Streptomyces avermitilis, включающий (а) получение клеток штамма Streptomyces avermitilis и определение содержания вырабатываемых авермектинов; (b) направленное мутирование гена aveRI, имеющего нуклеотидную последовательность по п.1, и/или гена aveR2, имеющего нуклеотидную последовательность по п.4, в клетках штамма согласно стадии (а); (с) отбор мутированных клеток, которые вырабатывают достоверно повышенное количество авермектинов, по сравнению с клетками того же штамма Streptomyces avermitilis, которые не несут генную мутацию.17. Способ по п.16, отличающийся тем, что мутацию осуществляют путем делетирования части гена aveRI или гена aveR2 или путем замещения части гена aveRI или гена aveR2 другой или гетерологичной нуклеотидной последовательностью.18. Способ по п.16, отличающийся тем, что мутацию осуществляют путем делетирования части обоих генов aveRI и aveR2 или путем замещения части обоих генов aveRI и aveR2 другой или гетерологичной нуклеотидной последовательностью.19. Способ по п.16, отличающийся тем, что мутацию осуществляют путем вставки другой или гетерологичной нуклеотидной последовательности в ген aveRI или в ген aveR2.20. Штамм Streptomyces avermitilis DML (BRL), трансформированный плазмидой pSE201 (депозитарный номер АТСС 203182), - продуцент авермектинов.21. Способ получения повышенного содержания авермектинов в культуре Streptomyces avermitilis, включающий стадии (а), (b), (с) из п.16, (d) культивирование клеток штамма Streptomyces avermitilis, отобранных на стадии (с) в культуральной среде в условиях, обеспечивающих или индуцирующих выработку авермектинов этими клетками, и (е) выделение авермектинов из культуры.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2004 года RU2221042C2

US 5292647, 08.05.1994
0
  • О. И. Лазаренко
SU391594A1
Торфодобывающая машина с вращающимся измельчающим орудием 1922
  • Рогов И.А.
SU87A1

RU 2 221 042 C2

Авторы

Статзман-Энгволл Ким Джонелл

Прайс Бренда Сью

Даты

2004-01-10Публикация

1999-09-13Подача