СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРИРОДНОГО ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА Российский патент 2004 года по МПК C07K16/00 C12N15/13 C12N15/63 C12N15/64 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)а

Изобретение относится к иммунологии. Предложен способ получения гуманизированного антитела, в котором присутствуют искусственные замещения одного или нескольких аминокислотных остатков в FR области. Так как большая часть гуманизированного антитела получена от антитела человека, а CDR проявляет низкую антигенность, полученное антитело обладает низкой антигенностью и поэтому является весьма многообещающим при лечении. 3 з.п.ф-лы, 33 ил., 9 табл.

1. Способ получения природного гуманизированного антитела, включающий I) получение первичного антитела, представляющего собой гуманизированное антитело, полученное путем CDR-переноса и искусственного замещения одного или более аминокислотных остатков в FR; II) поиск гомологии FR последовательности природного антитела человека и FR первичного антитела с использованием базы данных последовательностей; III) составление списка последовательностей FR природного антитела, имеющего высокую степень гомологии с FR первичного антитела; IV) отбор из списка, полученного на стадии III) FR природного антитела человека, в котором природный FR содержит один или более аминокислотных остатков, искусственно введенных на стадии I) путем замещения аминокислот, причем аминокислотная последовательность FR в этом антителе является такой же или имеет высокую степень гомологии с FR первичного антитела; V) если FR в первичном антителе имеет одну или более аминокислот, которые отличаются от соответствующих аминокислот в FR, выбранном на стадии IV), то указанные отличающиеся аминокислоты замещают в FR соответствующими аминокислотами в природном FR, выбранном на стадии IV); VI) конструирование экспрессирующего вектора, включающего ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность антитела, полученного на стадии V); VII) культивирование штамма клеток, включающих экспрессирующий вектор, сконструированный на стадии VI), и VIII) выделение из культуральной жидкости природного гуманизированного антитела, включающего природный FR антитела человека.2. Способ по п.1, в котором первичное антитело содержит CDR, полученные от животного первого вида, и FR, полученные от животного второго вида, имеющие искусственные аминокислотные остатки.3. Способ по п.2, в котором животным первого вида является крыса, а животным второго вида является человек.4. Способ по любому и пп.1-3, в котором искусственные аминокислотные остатки происходят от FR антитела, не принадлежащего человеку.