СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ ЗДОРОВЬЯ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ, РОДИВШИХСЯ С СИНДРОМОМ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и позволяет прогнозировать нарушения здоровья у детей первого года жизни, родившихся с синдромом задержки внутриутробного развития (СЗРП) путем определения суммарного показателя активности ядрышкообразующих районов десяти акроцентрических хромосом методом серебрения (10 Ag ЯOP) в лимфоцитах периферической крови.

Актуальность разработки заявляемого способа определяется распространенностью синдрома задержки внутриутробного развития (выявляется у 10% детей, рожденных живыми) (1), большой долей данной патологии в структуре смертности (перинатальная смертность при СЗРП в 4-8 раз выше (3)) и заболеваемости новорожденных и детей раннего возраста (4). До 50% детей с СЗРП не восстанавливают показатели физического развития к году (2). Поэтому желательно уже в ранний неонатальный период прогнозировать здоровье детей, родившихся с СЗРП, с тем чтобы своевременно провести комплекс профилактических мероприятий, направленных на предупреждение инфекционно-воспалительной патологии и летальности от нее.

Известен способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с минимальной мозговой дисфункцией (ММД) после первого года жизни путем исследования в периферической венозной крови содержания СД72+ лимфоцитов. При повышении их уровня более 20,31% прогнозируют частые острые респираторные заболевания у детей до трех лет (5).

Недостатки способа:
1. Прогнозируются только частые ОРВИ у детей с ММД.

2. Прогноз осуществляется только с возраста одного года.

3. Способ дает возможность прогнозировать частые ОРВИ, а не всю инфекционно-воспалительную патологию.

4. Показатель СД72+ является неспецифическим, его повышение может быть вызвано не только инфекционными, но и аллергическими факторами.

Наиболее близким по техническому решению является способ диагностики задержки роста плода путем исследования аллеля PL-AII гена гликопротеина IIIa в ДНК периферической крови беременных женщин, при наличии которого диагностируют задержку внутриутробного развития плода (6).

Недостатки способа:
1. По определению аллеля PL-AII гена гликопротеина IIIa в периферической крови беременных, отвечающего за синтез этого белка, выполняющего пластическую функцию в организме, можно лишь с определенной долей вероятности судить о возможности формирования задержки внутриутробного развития еще не родившегося ребенка.

2. Не дает возможности прогнозировать постнатальное развитие детей, родившихся с задержкой развития.

3. Сложная методика определения аллеля PL-AII гена гликопротеина IIIa, включающая выделение ДНК из клеток, проведение полимеразной цепной реакции с последующим разделением продуктов амплификации методом электрофореза и требующая наличия специального оборудования (амплификатора, трансиллюминатора, электрофорезной камеры).

4. Дорогостоящий метод (не менее 500 руб. за одно исследование).

5. Отсутствие данных о точности способа.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Техническим результатом заявляемого способа является прогнозирование нарушений здоровья детей первого года жизни, родившихся с синдромом задержки внутриутробного развития, путем определения суммарного показателя активности окрашенных азотнокислым серебром ядрышкообразующих районов 10 акроцентрических хромосом (10 Аg, ЯОР) в лимфоцитах периферической крови на 5 сутки жизни и при его значении менее 18 баллов у детей прогнозируют инфекционно-воспалительные заболевания и низкие показатели физического развития в течение первого года (с точностью 83,3%).

Новизна способа
Взаимосвязь суммарного показателя активности окрашенных азотнокисльм серебром ядрышкообразующих районов 10 акроцентрических хромосом (10 Аg ЯОР) в лимфоцитах периферической крови новорожденных с СЗРП и нарушением их здоровья на первом году жизни прослежена впервые.

Отличительные признаки способа
Установление в лимфоцитах новорожденных, родившихся с СЗРП, на 5 сутки жизни прогностического параметра 10 Ag ЯOP: при значениях его менее 18 баллов прогнозируются инфекционно-воспалительные заболевания и задержка физического развития на первом году, а при значениях параметра 18 баллов и выше прогнозируется отсутствие инфекционно-воспалительной патологии и восстановление показателей физического развития к году.

Ядрышкообразующими районами (ЯОР) называют участки хромосом, в которых локализованы рибосомные гены, регулирующие интенсивность белковых синтезов в клетке и, тем самым, вносящие существенный вклад в процесс роста и развития организма. Суммарный показатель 10 Ag ЯОР отражает количество активных (работающих) рибосомных генов и поэтому его уровень определяет интенсивность белкового и энергетического обмена, а также резервные, адаптационные возможности организма (10). Ранее, параметры 10 Ag ЯОР исследовались для диагностики причин спонтанных абортов (11) и для оценки адаптивных возможностей человека в возрасте 20-85 лет (12).

Способ осуществляется следующим образом
У новорожденного на 5 день жизни забирается венозная кровь в количестве 0,3 мл. Исследование осуществляется стандартным микрометодом (7). Клетки культивируют в присутствии стимулятора митозов фитогемаагглютинина (ФГА) при температуре 37^oС в течение 72 ч, а затем в присутствии колхицина, гипотонического раствора готовят клеточную суспензию, раскапывая ее на охлажденные влажные стекла.

Количество активных копий рибосомных генов (РГ) определяют с помощью метода специфической окраски цитогенетических препаратов азотнокислым серебром (Ag-окраска) по методу Howell W.M., Black D.A. (8). При этом используется балльная оценка интенсивности окрашивания ЯОР в пяти парах (13, 14, 15, 21, 22) акроцентрических хромосом и определяется суммарный показатель размера 10 Аg ЯОР. Расчет результата осуществляют визуально следующим образом: 0 - баллов окраска отсутствует, 1 балл - окраска слабая (зерно серебра меньше ширины хроматиды), 2 балла - средняя окраска (зерно серебра соответствует ширине хроматиды), 3 балла - интенсивная окраска (зерно серебра больше ширины хроматиды). В редких случаях встречались более крупные Ag ЯOP, размер которых оценивали в 4 балла. Полученные результаты по каждой паре хромосом суммируют (9).

Существо способа поясняется следующими примерами.

Пример 1
Ребенок А. , родился от 1-й беременности, осложнившейся угрозой прерывания в 1 триместре, поздним гестозом (водянка I на фоне артериальной гипертензии). Роды в 40 недель. Масса тела при рождении 2500 г, длина тела 51 см, оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. В раннем неонатальном периоде поставлен клинический диагноз: СЗРП II асимметричного типа. По заявляемому способу на 5 день жизни проведено исследование суммарного размера 10 Ag ЯOP, который составил 16,75 балла, что позволило прогнозировать возникновение инфекционно-воспалительной патологии и сохранение низких показателей физического развития на первом году жизни. В течение первого года жизни ребенок болел 5 раз ОРВИ, осложнившимися в 2 случаях острым бронхитом, в одном случае - острым двухсторонним отитом. Показатели физического развития к году не восстановились, оставаясь низкими: длина тела - 71 см, масса тела - 8,8 кг (при норме: длины тела от 73 см до 80,1 см, массы тела от 9,7 кг до 11,7 кг).

Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2
Ребенок Б., родился от 1-й беременности, осложнившейся поздним гестозом и протекавшей на фоне анемии II. Роды в 39 недель. При рождении оценка по шкале Апгар 8-9 баллов, масса тела 2700 г, длина тела 50 см. Поставлен клинический диагноз: СЗРП I асимметричного типа. По заявляемому способу в возрасте 5 дней ребенку было проведено исследование крови, суммарный параметр 10 Аg ЯОР составил 18,9 балла, что выше заявляемого параметра и предполагает благоприятный прогноз. В раннем возрасте инфекционно-воспалительной патологии не отмечено, к 1 году показатели физического развития нормальные (длина тела 78 см, масса тела 11,6 кг).

Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3
Ребенок В. , от 2-й беременности, протекавшей с осложнениями: угрозой прерывания в I триместре, сочетанным поздним гестозом (водянка I на фоне анемии I, артериальной гипертензии I ст.). Роды в 40 недель. При рождении оценка по шкале Апгар 8-9 баллов, длина тела 48 см, масса тела 2650 г, поставлен клинический диагноз: СЗРП I симметричного типа.

По заявляемому способу ребенку проведено определение суммарного показателя 10 Ag ЯOP, который составил 15,45 балла, на основании чего был дан прогноз о риске возникновения инфекционно-воспалительной патологии и сохранении низких показателей физического развития к возрасту 1 года. На 21 день жизни ребенок заболел пневмонией, которая протекала тяжело, потребовалось лечение в условиях отделения детской реанимации. На первом году жизни 6 раз перенес ОРВИ, 1 раз острый отит. Ребенок не восстановил показатели физического развития к 1 году. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Преимущества способа
1. Возможность прогнозирования нарушений здоровья детей с СЗРП с первых дней жизни, что позволит провести своевременную профилактику тяжелой, угрожающей жизни инфекционно-воспалительной патологии.

2. Распространение прогноза на первый год жизни.

3. Дешевизна (стоимость химреактивов на одного ребенка составляет 20 руб.).

4. Высокая точность прогноза 83,3%.

Заявляемым способом обследовано 60 детей, родившихся с СЗРП, результаты исследований сведены в таблицу 1.

Источники информации
1. Матеша Е.И., Молчун И.И. Синдром задержки развития плода: возможные причины, диагностика // Здравоохранение Белоруссии, 1989, 8. С.20-22.

2. Наследственная патология человека / Под ред. Ю.Е. Вельтищева, Н.П. Бочкова. - М., 1992. - T.I. - C.13-14.

3. Серов В.Н., Стрижаков А.Н., Маркин С.А. Практическое акушерство М.: Лидирия, 1989, с.250.

4. Смиян И. С., Лобода В.Ф., Федорцив О.Е. Гипотрофия. Киев: Здоровье, 1989. - С.36-39.

5. Патент 2141639. Способ прогнозирования частой заболеваемости у детей раннего возраста с минимальной мозговой дисфункцией. // Филькина О.М., Кочерова О. Ю., Шанина Т.Г., Васильев М.Д. // "Бюллетень. Изобретения", 1999. 34, ч.2, с.319.

6. Патент 2172958. Способ диагностики задержки роста плода.// Иткес А.В. , Радзинский В.Е. // "Бюллетень Изобретения", 2001. 24, ч.2, с.386.

7. Кузнецова Т.В., Логинова Ю.А., Чиреева О.Г. Цитогенетические методы. Мед. лабораторные технологии и диагностика С - Петербург: "Интермедика", 1999. 2. - С.550-578.

8. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a l-step method // Experientia, 1980. V.36. P.1014-1015.

9. Ляпунова Н.А., Кравец-Мандрон И.А., Цветкова Т.Г. Цитогенетика ядрышкообразующих районов (ЯОР) хромосом человека: выделение четырех морфофункциональных вариантов ЯОР, их межиндивидуальное и межхромосомное распределение // Генетика, 1998. Т.34, 9. С.1298-1306.

10. Вейко Н.Н., Ляпунова Н.А., Богуш А.В. и др. Определение количества рибосомных генов в индивидуальных геномах человека. Сравнение результатов молекулярного и цитогенетического анализа // Молекуляр. биология, 1997. Т. 30, вып.5. С.1076-1985.

11. Назаренко С.А., Карташова О.Г. Сравнительный анализ активности ядрышкообразующих районов хромосом у спонтанных и медицинских абортусов // Генетика, 1991. - Т.27, 6. - С.1095-1103.

12. Назаренко С.А., Карташова О.Г., Соловьева С.Ю. Транскрипционная активность рибосомных генов в пре- и постнатальном периодах развития человека // Генетика, 1992. Т.28, 6. - С.160-166.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования нарушений здоровья у детей первого года жизни, родившихся с синдромом задержки внутриутробного развития. Проводят определение суммарного показателя активности окрашенных азотнокислым серебром ядрышкообразующих районов 10 акроцентрических хромосом (10 Ag ЯОР) в возрасте 5 дней путем балльной оценки интенсивности окрашивания ЯОР в пяти парах акроцентрических хромосом и определения суммарного показателя размера 10 Ag ЯОР. При этом 0 баллов - окраска отсутствует, 1 балл - окраска слабая - зерно серебра меньше ширины хроматиды, 2 балла - средняя окраска - зерно серебра соответствует ширине хроматиды, 3 балла - интенсивная окраска - зерно серебра больше ширины хроматиды, и при его значении ниже 18 баллов прогнозируют инфекционно-воспалительные заболевания и низкие показатели физического развития в течение первого года. Способ позволяет повысить эффективность прогнозирования нарушений здоровья у детей первого года жизни, родившихся с синдромом задержки внутриутробного развития. 1 табл.

Способ прогнозирования нарушений здоровья у детей первого года жизни, родившихся с синдромом задержки внутриутробного развития, включающий исследование периферической крови, отличающийся тем, что в возрасте 5 дней определяют суммарный показатель активности окрашенных азотнокислым серебром ядрышкообразующих районов 10 акроцентрических хромосом (10 Ag ЯОР) путем бальной оценки интенсивности окрашивания ЯОР в пяти парах акроцентрических хромосом и определения суммарного показателя размера 10 Ag ЯОР, при этом 0 баллов - окраска отсутствует, 1 балл - окраска слабая - зерно серебра меньше ширины хроматиды, 2 балла - средняя окраска - зерно серебра соответствует ширине хроматиды, 3 балла - интенсивная окраска - зерно серебра больше ширины хроматиды, и при его значении ниже 18 баллов прогнозируют инфекционно-воспалительные заболевания и низкие показатели физического развития в течение первого года.