СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНВАЗИОННЫХ ЛИЧИНОК МЮЛЛЕРИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской гельминтологии. Изобретение направлено не решение проблемы профилактики гельминтозов у животных и человека.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является значительное ускорение получения инвазионных личинок, необходимых для экспериментального заражения и раскрытия биологического цикла. Так же задачей является выявление способов передачи и профилактики паразитов животных - мюллериоза, локализующихся в половозрелом состоянии в легких, нервной ткани и мышцах. Задачей является выявление у человека ангиостронгилеза и других опасных паразитов этой группы, вызывающих менингоэнцефалит. Способ прост в освоении любым практическим и научным работником, связанным с вопросами ветеринарной и медицинской гельминтологии.

Существуют способы определения зараженности легочных наземных моллюсков, спонтанно проникающих в них личинок метастронгилид при контакте с фекальными массами продуктивных животных и крыс. Эти способы требуют дополнительной работы, связанной с компрессионным исследованием органов моллюсков - промежуточных хозяев (Е.Е. Шумакович. "Гельминтозы жвачных животных", М., Колос, 1968; К.И. Скрябин, А.М. Петров. "Основы ветеринарной нематодологии", М. , Колос, 1964; К.И. Абуладзе и др. "Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных", Агропромиздат, 1990; В.В.Горохов "Экологические основы борьбы с вредными моллюсками", Всесоюзн. акад. с.-х. наук им. Ленина. - М., Колос, 1983).

Сущность заявляемого изобретения заключается в следующем. В процессе исследования авторами установлено, что если культуру личинок метастронгилид, полученную по методу Бермана - Орлова с выдержкой фекалий не более 5 мин, взятых желательно не позже 8-10 ч, инъецировать без соблюдения стерильности наземному моллюску с хорошо развитой мантийной складкой, выполняющей роль легкого, например, виноградной улитки, то на 8-е сутки личинки в стадии завершения первой линьки оказываются локализованными на внутренней поверхности легкого зараженного моллюска. С 18-го дня после заражения происходит вторая, основная линька и к 26-му дню личинки достигают инвазионной (заразной) стадии. С этого времени около 20% от общего количества инъецированных личинок через дыхательное отверстие выходят наружу. Остальная же масса личинок остается в легком до конца жизни моллюска.

Возможность практического осуществления заявляемого изобретения подтверждается следующим. Культуру личинок метамтронгилид после набора в шприц 2 мл под МБС-9 (8*2) инъецируют, отступя 3-5 мм от края и 1-2 мм от педальной железы. Глубина погружения иглы составляет не менее половины толщины ноги с расчетом, чтобы культура личинок от 40 и более экземпляров и объемом жидкости не более 2 мл, введенная в 4-5 точек, оказалась в полости педальных венозных синусов.

После достижения инвазионного состояния у живых улиток удаляют раковину, вырезают лоскут мантии (легкое моллюска) без сердца и почки. Помещают его на предметном стекле на столик МБС-9 (8*2) и соскабливают поверхностный слой, обнаруживая в соскобе спирально свернутые личинки группы метастронгилид, характерной особенностью которых является наличие на хвостовом конце острия и короткого шипа. Полученных личинок используют для экспериментального заражения животных.

Таким образом, предложенный способ заражения моллюсков группы метастронгилид имеет существенные отличия от известных как в гельминтологической, так и биологической, в т.ч. медицинской литературе.

Способ включает получение личинок I стадии по методу Бермана-Орлова с выдержкой фекалий не более 5 мин, которые инъецируют в ногу моллюска. Через 26 дней у живых моллюсков удаляют раковину, вырезают лоскут мантии и из поверхностного слоя выделяют инвазионные личинки. Способ прост в исполнении и позволяет быстро получить инвазионные личинки мюллерия.

Способ получения инвазионных личинок мюллерия, заключающийся в том, что берут фекалии не позже 8-10 ч после выделения их инвазированными животными и по методу Бермана-Орлова с выдержкой фекалий не более 5 мин получают личинок I cтадии, которых инъецируют без соблюдения стерильности в количестве не менее 40 экземпляров в объеме жидкости не более 2 мл в ногу моллюска с отступом 3-5 мм от края и 1-2 мм от педальной железы, на глубину не менее половины толщины ноги в 4-5 точек, затем через 26 дней у живых моллюсков удаляют раковину, вырезают лоскут мантии и соскабливают поверхностный слой, из которого и выделяют инвазионных личинок мюллерия.