СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НА ЗАРАЖЕННОСТЬ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ ИНВАЗИОННЫМИ И НЕИНВАЗИОННЫМИ ЛИЧИНКАМИ МЕТАСТРОНГИЛИД Российский патент 2012 года по МПК A61B10/00 G01N1/28 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно ветеринарной гельминтологии при ведении интенсивного хозяйства на диких копытных - кабанах. Изобретение направлено на решение проблемы методов профилактики и борьбы с легочными гельминтозами дикого кабана.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является решение комплекса эпизоотических вопросов, связанных со способами гельминтологической оценки охотничьих угодий, путем ускорения диагностики на зараженность промежуточных хозяев (различных видов дождевых червей - олигохет) инвазионными и неинвазионными личинками мегастронгилид.

Технический результат, достигаемый изобретением, состоит в повышении эффективности диагностики зараженности дождевых червей инвазионными и неинвазионными личинками мегастронгилид, за счет полного переваривания кутикулы дождевого червя и исключения раздавливания оболочки личинок мегастронгилид.

Способ прост в освоении любым практическим лабораторным работником, связанным с вопросами ветеринарной гельминтологии.

Известно, что в жизненном цикле мегастронгилид наличествует стадия развития в кровеносных сосудах пищевода, зоба, желудка - тела различных видов дождевых червей, где личинки мегастронгилид совершают линьку, достигают инвазионной (заразной) стадии и остаются в дождевых червях до попадания их в организм дикого кабана (К.И.Абуладзе, Н.В.Демидов, А.А.Непоклонов и др.; Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. - М.: Агропромиздат, 1990. - с.222-225; Я.Говорка, Л.П.Маклакова, Я.Митух и др.; Гельминты диких копытных Восточной Европы. - М.: Наука, 1998. - с.141-147).

Предлагаются простые и сложные способы диагностики зараженности дождевых червей. Тем не менее, простые сводятся к следующему «собранных червей предварительно убивают 1% раствором формалина. Затем разрезают ножницами кутикулу, отделяют пищевод, зоб, мускулистый желудок с окружающими кровеносными сосудами. Эти органы исследуют компрессорным методом под микроскопом на наличие личинок метастронгилид. Сложные методы включают переваривание червей в искусственном желудочном соке (Г.А.Котельников. Гельминтологические исследования окружающей среды. - М.: Агропромиздат, 1985. - с.186-187).

Недостатками этих способов являются: 1 - максимальная зараженность дождевых червей личинками метастронгилид не превышает 2%; 2 - собственная зараженность дождевых червей свойственными для них личинками нематод и личинками других гельминтов, где черви выступают как промежуточные и резервуарные хозяева, превышает 100 видов, что не всегда позволяет выявить личинок метастронгилид или дифференцировать их со схожими личинками; 3 - оболочки личинок очень чувствительны к сдавливанию, что не всегда позволяет уловить все переходные элементы процесса достижения инвазионного состояния; 4 - переваривание в искусственном желудочном соке требует наличие термостата и выдержки измельченного материала при определенной температуре (42-47°С) несколько часов; 5 - кутикула дождевого червя защищает его от полного переваривания в желудочном соке и в результате образуется конгломерат сегментов (фрагментов) тела, что затрудняет дифференцировку личинок метастронгилид от других личинок нематод.

С целью исключения этих недостатков предлагается способ диагностики на зараженность, включающий в себя установленный биологический факт выхода личинок метастронгилид из мест их локализации в теле червя, независимо от стадии развития при воздействии активирующей среды (рН) от 3 до 3,5 и при температуре среды от 18 до 30°С.

Возможность практического осуществления заявляемого изобретения подтверждается следующим. У червей, отобранных из исследуемого биотопа (1×1 м) в количестве не менее 50 экземпляров, без предварительной подготовки иссекают ножницами переднюю часть тела до половых сегментов, на расстоянии друг от друга 2,0-3,0 мм и помещают в сферическое металлическое ситечко с ободком диаметром 45 мм и размером ячеек 0,3×0,5 мм. Ситечки с иссеченными телами червей переносят в стандартные медицинские мензурки (стаканчики) формы усеченного конуса с делениями на 30 мл. За счет ободка ситечко удерживается на верхних кромках стаканчиков. В стаканчики, несколько выше уровня тел червей, приливают активирующую среду, составленную по следующему рецепту: кислоты соляной концентрированной - 10 мл; пепсина свиного - 4 г и дистиллированной воды объем доводят до 1000 мл. Через 30 мин содержимое стаканчиков переливают в чашки Петри и проводят микроскопию на наличие личинок метастронгилид.

Способ диагностики эффективен независимо от количества личинок в теле червя и позволяет выявить даже единичные экземпляры паразитов.

Предложенный способ диагностики на зараженность дождевых червей и определение морфологического состояния личинок имеет существенные отличия от известных как в гельминтологической, так и биологической литературе.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гельминтологии. Для диагностики на зараженность дождевых червей инвазионными и неинвазионными личинками метастронгилид проводят микроскопирование на наличие личинок метастронгилид. Отсеченные от передней части червя фрагменты, длиной 2,0-3,0 мм, до половых сегментов, заливают выше уровня фрагментов активирующей средой, содержащей кислоты соляной концентрированной - 10 мл, пепсина свиного - 4 г, воды дистиллированной до 1000 мл и создают температуру внешней среды от 18 до 30°С. Для объективности количество червей из каждого биотопа должно быть не менее 50 экземпляров. Проводят микроскопию через 30 мин после заливки активирующей среды. Личинок, имеющих на хвостовом конце утолщение в виде «пуговок», определяют как неинвазионных, а личинок, имеющих острый хвостовой конец, несущий чуть выше его кутикулярный шип, как инвазионных. Способ повышает эффективность диагностики зараженности дождевых червей инвазионными и неинвазионными личинками метастронгилид, за счет полного переваривания кутикулы дождевого червя и исключения раздавливания оболочки личинок метастронгилид.

Способ диагностики на зараженность дождевых червей инвазионными и неинвазионными личинками метастронгилид, включающий микроскопирование на наличие личинок метастронгилид, отличающийся тем, что отсеченные от передней части червя фрагменты, длиной 2,0-3,0 мм, до половых сегментов, помещают в металлические ситечки сферической формы, которые переносят в градуированные медицинские стаканчики емкостью 30 мл, имеющие форму усеченного конуса, и заливают выше уровня фрагментов активирующей средой, содержащей кислоты соляной концентрированной - 10 мл, пепсина свиного - 4 г, воды дистиллированной до 1000 мл, и создают температуру внешней среды от 18 до 30°С, для объективности количество червей из каждого биотопа должно быть не менее 50 экземпляров, затем, после удаления ситечка жидкость из стаканчика переливают в чашку Петри, и проводят микроскопию дна чашки Петри на наличие вышедших личинок метастронгилид через 30 мин после заливки активирующей среды, причем личинок, имеющих на хвостовом конце утолщение в виде «пуговок», определяют как неинвазионных, а личинок, имеющих острый хвостовой конец, несущий чуть выше его кутикулярный шип, как инвазионных.