СПОСОБ ЛАБОРАТОРНОГО НЕИНВАЗИВНОГО ПОДТВЕРЖДЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИН-E (IGE)-ЗАВИСИМОГО ГЕНЕЗА СЕЗОННОГО РИНОКОНЪЮНКТИВИТА (СРК) У ДЕТЕЙ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к медицине, в частности к области аллергологии, и может использоваться для подтверждения атопического генеза СРК у детей. Известен способ подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей по сыворотке крови (Йегер Л. (ред.) Клиническая иммунология и аллергология в 3 томах. - М.: “Медицина”, 1990, т. 2. - с.50-51, 58-59; Hamilton R.G., N.Franklin Adkinson Jr. Assessment of human allergic diseases. In book Clinical immunology: principals and practice. - ed. - in chief R.Rich, ed. T.A.Fleisher, B.D.Schwartz, W.T.Shearer, W.Strober. - 1996. - vol. 2. - St. Louis, Mosby. - P.2176). Известно, что повышение уровня общего IgE в сыворотке крови подтверждает диагноз атопического заболевания, хотя нормальный уровень общего IgE не исключает его. Примерно у 50% больных с аллергическим ринитом с сезонными обострениями определяется нормальный уровень сывороточного общего IgE (Отчет о международном консенсусе по диагностике и лечению ринита // Российская ринология. - 1996. - № 4. - С.21). Определение уровня общего IgE в сыворотке крови показано при проведении дифференциального диагноза аллергического ринита с другими его формами (Лолор Г. (ред.) Клиническая иммунология и аллергология. - М.: “Практика”, 2000. - С.54). Известно около 18 методов и их модификаций определения общего IgE в сыворотке крови (Hamilton R.G., N. Franklin Adkinson Jr. Assessment of human allergic diseases. In book Clinical immunology: principals and practice. - ed. - in chief R.Rich, ed. T.A.Fleisher, B.D.Schwartz, W.T.Shearer, W.Strober. - 1996. - vol. 2. - St. Louis, Mosby. -Р.2176). При этом имеет место инвазивный характер взятия материала для исследования.

Известный способ подтверждения IgE - зависимого генеза СРК у детей по сыворотке крови, в частности метод иммуноферментного анализа (ИФА) (Hamilton R.G., N.Franklin Adkinson, Jr. Assessment of human allergic diseases. In book Clinical immunology: principals and practice. - ed. - in chief R.Rich, ed. T.A.Fleisher, B.D.Schwartz, W.T.Shearer, W.Strober. - 1996. - vol. 2. - St. Louis, Mosby. - P.2176), выбран в качестве прототипа.

Известный способ заключается в том, что берут кровь из вены, отделяют сыворотку и в ней методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяют уровень общего IgE. Значения общего IgE, превышающие нормальные показатели, подтверждают IgE-зависимый генез СРК у детей. Недостатки известного способа заключаются в том, что для подтверждения диагноза нужно брать кровь из вены, что причиняет боль, вызывает у ребенка страх перед исследованием, является причиной своеобразной психологической травмы у пациента, требует определенных технических навыков у медицинского персонала, имеет потенциальный риск инфицирования, то есть имеет недостатки инвазивного характера взятия материала. Кроме того, уровень общего IgE сыворотки крови дает оценку системного иммунитета, в то время как патогенез заболевания СРК связан преимущественно с локальными изменениями продукции IgE на уровне слизистых мембран верхних дыхательных путей, в связи с чем уровень IgE в слюне может иметь большее диагностическое значение.

Целью, на достижение которой направлен заявляемый способ, является исключение недостатков инвазивного характера взятия материала, то есть исключение у больного страха, боли, риска инфицирования, а также повышение точности диагностики локального накопления IgE на уровне мукозоассоциированной лимфоидной ткани, за счет перехода на неинвазивный способ подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей.

Поставленная цель достигается тем, что в заявляемом способе лабораторного неинвазивного подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей у пациента берут материал для исследования и определяют в нем уровень общего IgE методом ИФА с помощью стандартной коммерческой тест-системы для определения IgE в сыворотке (плазме) крови и амниотической жидкости и при значениях выше нормальных делают вывод об IgE-зависимом генезе СРК у детей, при этом согласно изобретению в качестве материала для исследования используют слюну.

Использование в качестве материала для исследования слюны позволяет безболезненно для ребенка проводить обследование, не травмируя его психику. При этом нет ограничения объема исследуемого материала, проще получить необходимый объем. Полученные результаты исследования слюны позволяют оценить локальное накопление IgE.

Заявляемый способ обладает новизной в сравнении с прототипом, отличается от него тем, что в качестве материала для исследования используют слюну, что позволяет оценить локальное накопление IgE при использовании той же тест-системы, которая применяется при исследовании крови.

Заявителю не известны способы подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей по слюне, поэтому он считает, что заявленное техническое решение соответствует критерию “изобретательского уровня”.

Заявляемый способ лабораторного неинвазивного подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей может широко использоваться в медицине, а именно в аллергологии, а поэтому соответствует критерию “промышленного применения”.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом: у ребенка берут слюну, в ней методом ИФА определяют уровень общего IgE с помощью набора "IgE - ИФА - БЕСТ - стрип" реагентов для количественного определения общего IgE в сыворотке, плазме крови и амниотической жидкости (АО "Вектор - БЕСТ", Новосибирская область, п. Кольцово) согласно инструкции к набору реагентов.

Принцип метода ИФА описан (Hamilton R.G., N. Franklin Adkinson, Jr. Assessment of human allergic diseases. In book Clinical immunology: principals and practice. - ed. - in chief R.Rich, ed. T.A.Fleisher, B.D.Schwartz, W.T.Shearer, W.Strober. - 1996. - vol. 2. - St. Louis, Mosby. - P.2176). Исследование слюны проводится в соответствии с инструкцией к набору реагентов "IgE - ИФА - БЕСТ - стрип" для количественного определения общего IgE в сыворотке, плазме крови и амниотической жидкости АО "Вектор - БЕСТ", Новосибирская область, п. Кольцове. Используемый твердофазный метод иммуноанализа основан на принципе "сэндвича". Анализ проводится в две стадии. На первой стадии калибровочные пробы с известной концентрацией IgE и исследуемые образцы инкубируются в лунках стрипированного планшета с иммобилизованными моноклональными антителами (МКАТ) к IgE. Затем планшет отмывается. На второй стадии связавшийся в лунках IgE обрабатывают конъюгатом МКАТ к IgE с пероксидазой (конъюгат МКАТ и иммобилизованные в лунках планшета МКАТ специфичны к разным участкам молекулы IgE). После отмывания избытка конъюгата образовавшиеся иммунные комплексы “иммобилизованные МКАТ - IgE - конъюгат” выявляют ферментативной реакцией пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена (орто-фенилендиамина). Интенсивность окраски хромогена пропорциональна концентрации IgE в анализируемом образце. После остановки реакции стоп-реагентом результаты учитываются фотометрически. Измерение уровня общего IgE в МЕ/мл проводят на планшетном фотометре Multiscan plus (Labsystems), фильтр 492 нм. Значения общего IgE в слюне выше 1,0 МЕ/мл свидетельствуют в пользу наличия IgE-зависимого генеза СРК у детей. Обследованы дети 7-16 лет. Авторами установлено, что в слюне здоровых детей уровень общего IgE не превышает 1,0 МЕ/мл, а в слюне больных СРК детей уровень общего IgE достоверно повышен как в периоде ремиссии, так и обострении заболевания (таблица 1) по сравнению со здоровыми детьми этого возраста, диагностическим значимым уровнем являются значения больше 1,0 МЕ/мл.

Показатели значимости диагностического способа подтверждения IgE-зависимого генеза СРК у детей представлены в таблице 2, где приведены значения чувствительности, специфичности, эффективности диагностического теста, а также прогностическая ценность положительных и отрицательных тестов. Способ позволяет подтвердить IgE-зависимый путь развития СРК неинвазивным методом в периоде ремиссии и обострения заболевания. Способ не уступает по своей чувствительности и специфичности общепринятому методу определения уровня общего IgE в сыворотке крови в диагностике СРК (таблица 3).

В сравнении с прототипом заявляемый способ имеет преимущества неинвазивного метода, то есть является безболезненным, не вызывает страха перед обследованием у ребенка, не имеет потенциального риска инфицирования, обладает простотой в получении необходимого материала, достаточного объема материала для исследования, позволяет оценить локальное накопление IgE на уровне мукозоассоциированной лимфоидной ткани.

Изобретение относится к медицине, в частности к области аллергологии, и может использоваться для подтверждение IgE-зависимого генеза СРК у детей. Заявляемый способ осуществляется следующим образом: у ребенка берут слюну, в ней методом ИФА определяют уровень общего IgE с помощью набора реагентов для количественного определения общего IgE в сыворотке, плазме крови и амниотической жидкости и при значениях общего IgE в слюне выше 1,0 МЕ/мл диагностируют наличие IgE-зависимого генеза СРК у детей. Преимущество изобретения заключается в том, что использование в качестве материала для исследования слюны позволяет безболезненно для ребенка проводить обследование, не травмируя его психику. 3 табл.

Способ лабораторного неинвазивного подтверждения иммуноглобулин Е(YgE) - зависимого генеза сезонного риноконьюнктивита (СРК) у детей, заключающийся в том, что у больного берут материал для исследования и определяют в нем уровень общего YgE методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью стандартной коммерческой тест-системы для определения YgE, отличающийся тем, что в качестве материала для исследования используют слюну и при значениях выше 1,0 МЕ/мл делают вывод об YgE - зависимом генезе СРК у детей.