СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ НЕМЕДЛЕННОГО ТИПА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/536 

Изобретение относится к области аллергологии и может быть использовано в диагностике аллергии немедленного типа и в целях профотбора для работы с аллергенами.

Известен способ диагностики немедленного типа путем определения концентрации общего иммуноглобулина E(JgE) в сыворотке крови радиоиммунологическим методом.

Недостатком способа является его низкая надежность, трудоемкость (на исследование требуется более 4 ч), необходимость наличия дорогостоящих реактивов и специального оборудования.

Известен также способ определения иммунных комплексов путем их преципитации полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000 кД (ПЭГ₆₀₀₀), используемый для определения активности процесса и контроля за эффективностью терапии при иммунокомплексных болезнях.

Цель патентуемого способа повышение надежности, сокращение затрат и упрощение способа диагностики аллергии немедленного типа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики аллергии определяют концентрацию крупных и мелких иммунных комплексов добавлением к сыворотке крови соответственно 3% и 6% ПЭГ₆₀₀₀ с последующей инкубацией и фотометрией полученных смесей, и при значении соотношения мелких иммунных комплексов к крупным более 3 диагностируют аллергию.

Способ осуществляют следующим образом. Сыворотку получают из венозной крови больного. В первую опытную пробирку вносят 0,1 мл исходной сыворотки крови 2 мл 3% ПЭГ₆₀₀₀, растворенного в забуференном физиологическом растворе с pH 7,2 (ЗФР) (для определения крупных иммунных комплексов), во вторую опытную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови, разведенной 1:4 в ЗФР, и 2 мл 6% ПЭГ₆₀₀₀, растворимого в ЗФР (для определения суммарного количества крупных и мелких иммунных комплексов). В две контрольные пробирки вносят по 0,1 мл сыворотки крови в тех же концентрациях, что и в опытных пробах, и по 2 мл ЗФР. Пробирки инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем пробы переносят в кюветы прямоугольные кварцевые для слоя жидкости толщиной 10 мм (К 10) и определяют оптическую плотность первой (ОП₁) и второй (ОП₂) опытных проб против соответствующих контрольных при длине волны 450 нм. Результаты учитывают в ОП. При этом ОП, полученную при исследовании второй опытной пробы, содержащей 6% ПЭГ₆₀₀₀, умножают на 4 (для учета разведения сыворотки крови). Количество мелких иммунных комплексов оценивают как разность между суммарным количеством ИК (4•(ОП₂) и количеством крупных иммунных комплексов (ОП₁).

Расчет конечного результата проводят путем определения соотношения мелких иммунных комплексов к крупным:

где ОП₁ оптическая плотность первой опытной пробы,
ОП₂ оптическая плотность второй опытной пробы.

В случае увеличения соотношения мелких ИК к крупным ИК более 3 диагностируют немедленную аллергию.

Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в сыворотке крови исследуют соотношение мелких иммунных комплексов к крупным и при возрастании этого показателя более 3 диагностируют аллергию, что, видимо, обусловлено снижением количества Т-супрессоров у больных аллергией, вследствие чего увеличивается синтез низкоавидных антител, образующих с антигенами преимущественно мелкие иммунные комплексы.

Пример 1. Больной Ч. 16 лет, поступил во Всесоюзный микологический цент по глубоким микозам с жалобами на периодически возникающий отек век, слезотечение, водянистые выделения из носа, не связанные с простудными заболеваниями. Впервые вышеописанные явления появились год назад. Для выявления у больного аллергии исследовали соотношение мелких иммунных комплексов (ИК) к крупным ИК в сыворотке крови путем добавления к ней ПЭК₆₀₀₀. При добавлении к сыворотке крови 3% ПЭГ₆₀₀₀ оптическая плотность с учетом разведения сыворотки крови составила 0,11 ед. ОП, при добавлении 6% ПЭГ₆₀₀₀ 0,168 ед. ОП. Соотношение мелких иммунных комплексов к крупным составило

что свидетельствовало о наличии у больного аллергии, (т.е. показатель превышал 3,0). Действительно, при аллергообследовании у больного была выявлена аллергия к домашней и библиотечной пыли. Клинико-лабораторное обследование больного подтвердило диагноз аллергического рино-конъюктивита.

Пример 2. Больная Д. 31 год, поступила в клинику Всесоюзного микологического центра С-Пб ГИДУВа с жалобами на периодические мелкоточечные зудящие высыпания на коже. Результаты объективного исследования свидетельствовали о наличии у больной холецистита. Внутрикожные пробы были положительными на бытовые аллергены (библиотечная и домашняя пыль, дерматофагоидный клещ, перо подушки), пищевые аллергены (рыба, молоко, яйцо, свинина, кура, говядина) и пыльцевые аллергены (полынь, овсяница, одуванчик, тимофеевка, ежа сборная). Для выявления аллергии исследовали соотношение мелких циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) к крупным. Для этого определяли оптическую плотность сыворотки крови при добавлении 3% и 6% ПЭГ₆₀₀₀. В первом случае оптическая плотность с учетом разведения сыворотки крови составила 0,148 ед. ОП, во втором 0,096 ед. ОП. Соотношение мелких иммунных комплексов к крупным составило

что свидетельствовало об отсутствии аллергии. Действительно, на основании объективного обследования и лабораторных тестов, включая пробу по определению кинетики общего билирубина до и после 3-х дневного голодания (Пыцкий В.И. 1988 г.), больной был поставлен диагноз лямблиозного холецистита, псевдоаллергической крапивницы. Действительно, нормализация функции печени в результате комплексной терапии привела к улучшению общего состояния и отсутствию рецидивов заболевания (срок наблюдения 9 месяцев).

Предлагаемый способ апробирован на 20 здоровых лицах, 30 больных различной соматической патологией без признаков аллергии и 40 больных аллергическими заболеваниями, протекающими преимущественно по типу немедленной аллергии, вне обострения (бронхиальная астма, рецидивирующий отек Квинке, аллергический ринит и риноконъюктивит, крапивница). Была проведена сравнительная оценка надежности диагностики предлагаемого способа (определением соотношения концентрации мелких иммунных комплексов к крупным) в сравнении с прототипом (определение концентрации общего JgE) (табл. 1). При этом оценку надежности способа проводили по количеству реакций, совпадающих с диагнозом, выраженную в процентах от числа обследованных каждой группы.

Как показали исследования, эффективность диагностики аллергии предлагаемым способом оказалась выше у всех групп обследованных по сравнению с прототипом.

При диагностике аллергии предлагаемым способом не требуется дорогостоящего оборудования, затраты времени на постановку реакции оставляют не более 2 часов (при использовании способа, принятого за прототип, необходимо дорогостоящее оборудование, а время определения Jg E более 4 ч).

Таким образом, предлагаемый способ повышает надежность, сокращает затраты и упрощает диагностику аллергии немедленного типа.

Использование: медицина, аллергология для диагностики аллергии немедленного типа. Сущность изобретения: исследуют концентрацию крупных и мелких иммунных комплексов их преципиентацией 3% и 6% полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000 кД. При значении соотношения мелких иммунных комплексов к крупным более 3 диагностируют аллергию. Способ позволил повысить надежность, сократить затраты и упростить диагностику аллергии немедленного типа.

Способ диагностики аллергии немедленного типа, путем лабораторного анализа сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови осуществляют преципитацию крупных ЦИК 3% ПЭГ₆₀₀₀ и мелких ЦИК 6% ПЭГ₆₀₀₀ при соотношении сыворотки крови, разведенной по объему 1:4 забуференным физиологическим раствором рН 7,2 к ПЭГ₆₀₀₀ 0,1:2,0, и при значении соотношении мелких иммунных комплексов к крупным более 3 диагностируют аллергию немедленного типа.