СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА Российский патент 2004 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии. Проблема ишемического инсульта является глубоко актуальной в современной клинической неврологии. В России ежегодно регистрируются на каждые 100 тыс. 250-300 случаев инсульта среди городского и 170 среди сельского населения. Третья часть перенесших инсульт составляют лица трудоспособного возраста. Лишь пятая часть возвращается к труду. Показатель смертности за последнее время остается на прежнем уровне, а в некоторых странах, в частности в России, имеет тенденцию к росту. Поэтому прогнозирование степени тяжести ишемического инсульта и проведение соответствующего адекватного лечения имеет большое значение в практической неврологии, что позволит своевременно вносить коррекцию в лечение острой цереброваскулярной патологии и тем самым добиться уменьшения летальности и инвалидизации.

В качестве прототипа авторы предлагают “Способ прогнозирования течения ишемического инсульта” (патент №2195672 от 30.03. 2001, БИ №36 от 27.12.2002. М.М. Герасимовой, Г.Н. Жданова и Ю.В. Антипиной), заключающийся в определении в сыворотке крови больных с ишемическим инсультом уровня анти-ДНК способом иммуноферментного анализа. Способ заключается в определении уровня анти-ДНК в единицах оптической плотности (ед. ОП) в сыворотке крови больных. Показатель анти-ДНК возрастал с увеличением тяжести состояния больных и составил в 1-е сутки у больных с легкой степенью тяжести 0,268±0,02 ед. ОП, со средней степенью тяжести - 0,383±0,03 ед. ОП, у больных с тяжелым течением - 0,601±0,04 ед. ОП.

Некоторым недостатком этого способа является малодоступность и дороговизна приборов и тест-систем.

Авторы предлагают способ диагностики степени тяжести ишемического инсульта способом иммуннофенотипирования лимфоцитов. Лимфоциты выделяют из гепаринизированной крови центрифугированием на градиенте фиколл-верографин (плотность 1,077 г/мл). 1 мл лимфоцитов в объеме 50 мкл вносят в центрифужные пробирки и добавляют 5 мкл тестируемого моноклонального антитела CD-95 с последующим инкубированием в течение 30 мин. Затем добавляют 150 мкл раствора Хенкса и центрифугируют 5 мин при 200 g, удаляют супернатант, затем опять вносят 150 мкл раствора Хенкса, суспендируют и центрифугируют повторно. К осадку добавляют 50 мкл фрагментов овечьих антител, меченных ФИТЦем, с последующим суспендированием и инкубированием. Дважды отмытые клетки готовы для просмотра в флюоресцентном микроскопе. Для диагностики степени тяжести используют уровень антигенпозитивных клеток (CD95 - лимфоцитов). Их количество определяют как процент флюоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флюоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля (приложение к лицензии №42/ 98-065-0509 от 06.05.1998. “Перечень медицинских изделий, разрешенных к использованию обществу с ограниченной ответственностью (OOO) Сорбент, г. Подольск Московской области). Полученный результат сравнивают с результатом контрольной группы, который составил 7,2±2,8% (n=30).

В условиях клиники обследовано 47 больных: 26 мужчин и 21 женщина в остром периоде ишемического инсульта. В соответствии со шкалой Глазго, из них было выделено 3 группы (табл. 1).

4-я группа - контрольная, которую составили 30 здоровых человек.

У всех больных был произведен забор венозной крови на 1-й день заболевания и было установлено повышение уровня CD95 относительно контрольной группы, в которой уровень CD-95 составил 7,2±2,8%.

В 1-й группе уровень CD-95 - 9,6±3,65%, во 2-й группе уровень CD-95 - 16,8±2,7%, в 3-й группе - 28,1±3,2%. Выявлена положительная существенная связь r = +0,8 между степенью тяжести течения ишемического инсульта и уровнем CD95 - лимфоцитов.

Наглядно полученные данные представлены в таблице 2.

Достоверность р≤0,05

Предлагаемый способ не требует дорогостоящего оборудования и позволяет достоверно определять тяжесть ишемического инсульта и проводить адекватную терапию, что позволит снизить показатели инвалидизации и смертности.

Клинический пример

Больная Травкина Т.И., 58 лет, и/б 381.

Дs: ишемический инсульт в бассейне вертебробазилярных артерий при гипертонической болезни.

Уровень CD95 - 25%, что соответствует тяжелой степени тяжести ишемического инсульта. Средний балл по шкале Глазго - 11%, что соответствует средней степени тяжести. У больной отмечалась отрицательная динамика течения усугубления неврологической симптоматики с угнетением сознания, в последующем наступлением летального исхода.

Таким образом, из приведенного примера видно, что уровень CD95 - лимфоцитов в периферической крови больных в 1-е сутки более точно отражает степень тяжести ишемического инсульта.

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для диагностики степени тяжести ишемического инсульта и заключается в том, что на 1-й день в венозной крови способом иммунофенотипирования определяют уровень антигенпозитивных клеток (CD95-лимфоцитов) как процент флюоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флюоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. При повышении значения CD95-лимфоцитов до 9,6±3,65% диагностируют ишемический инсульт в легкой степени тяжести. При повышении значения CD95-лимфоцитов до 16,8±2,7% - ишемический инсульт в средней степени тяжести. При повышении значения CD95-лимфоцитов до 28,1±3,2% - ишемический инсульт в тяжелой степени тяжести. Способ позволяет снизить показатели инвалидизации и смертности за счет повышения достоверности определения тяжести ишемического инсульта и обеспечения возможности проведения своевременной адекватной терапии. 2 табл.

Способ диагностики степени тяжести ишемического инсульта, включающий исследование крови, отличающийся тем, что на 1-й день в венозной крови способом иммунофенотипирования определяют уровень антигенпозитивных клеток (CD95-лимфоцитов, %) как процент флюорисцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флюорисцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля и при повышении значения СD95-лимфоцитов до (9,6±3,65)% диагностируют ишемический инсульт в легкой степени тяжести, при повышении значения CD95-лимфоцитов до (16,8±2,7)% - ишемический инсульт в средней степени тяжести, а при повышении значения CD95-лимфоцитов до (28,1±3,2)% - ишемический инсульт в тяжелой степени тяжести.