БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ Российский патент 2004 года по МПК A61K7/48 A61K35/62 

Изобретение относится к области медицины, а именно к косметологии, и может быть использовано при производстве биологически активного сырья для косметических средств с лечебно-профилактическими свойствами.

Известно, что в процессе жизнедеятельности медицинская пиявка (Hirudo medicinaus) вырабатывает комплекс биологически активных веществ (БАВ), в зависимости от способов обработки медицинской пиявки и выделения того или иного комплекса БАВ могут быть получены препараты с различными свойствами, обеспечивающими направленное воздействие на организм человека.

Известна биологически активная добавка (БАД) для косметических средств [1], полученная из медицинской пиявки, представляющая собой надосадочную жидкость экстракта из порошка лиофильно высушенных медицинских пиявок. Известная БАД оказывает некоторое влияние на белково-липидный обмен в коже и в то же время обладает значительным протеолитическим действием, что вызывает снижение собственной ферментативной активности клетки кожи, и может вызывать аллергический ответ.

Процесс производства исходного сырья для получения известной БАД включает лиофильное высушивание пиявок и измельчение лиофилизата до порошообразного состояния, что не способствует высвобождению и сохранению БАВ, которые вместе с балластными веществами при экстрагировании переходят в осадок. И, как следствие, полученная известным способом БАД не обладает достаточной степенью активности из-за низкого содержания антиоксидантов, а также веществ, обеспечивающих стимуляцию белково-липидного обмена в коже и подкожной клетчатке.

Наиболее близкой из известных к описываемому изобретению является биологически активная добавка для лечебных и косметических средств [2], в виде надосадочной жидкости экстракта из секрета слюнных желез медицинских пиявок.

Известная БАД, представляющая собой препарат из нативного секрета слюнных желез живой медицинской пиявки включает комплекс биологически активных соединений, обеспечивающих некоторое стимулирование белкового обмена и увеличение содержания суммарных липидов, противовоспалительное, незначительное антиоксидантное, фагоцитарное и антистрессорное действие.

Использование известной БАД не позволяет получить желаемый эффект как средство, обеспечивающее активное вмешательство в процессы старения кожи, из-за недостаточного уровня стимуляции фагоцитоза и белково-липидного обмена, а также низкой активности антиоксидантов и изопептидазы и полного отсутствия эффекта суперметилирования ДНК. Кроме того, наличие ферментного потенциала известной БАД имеет отрицательное проявление на клетках стареющей кожи, поскольку протеолитическая активность кожи в таком состоянии значительна.

Кроме того, “живые” БАВ сохраняют свою активность лишь незначительный срок. Поэтому препараты на основе экстрактов непосредственно из медицинских пиявок или их частей имеют крайне ограниченное применение как в лечебных, так и в косметических средствах.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации описываемого изобретения состоит в повышении эффективности замедляющего процессы старения кожи действия за счет усиления стимуляции белкового обмена, избирательного гидролиза изопептидных связей высокомолекулярных белковых соединений (образующихся при старении клеток) и снижения содержания суммарных липидов, а также в повышении антионсидантной активности и активизации суперметилирования ДНК, при отсутствии протеолитической активности целевого продукта.

Указанный технический результат достигается тем, что биологически активная добавка для косметических средств, полученная из медицинской пиявки, представляет собой продукт, полученный в результате смешивания секрета слюнных желез и содержимого пищевода медицинских пиявок.

Биологически активная добавка для косметических средств, полученная в соответствии с настоящим изобретением содержит следующие ингредиенты: гиалуронидазу, гирудин, липосому, изопептидаза, антноксиданты, стабильный аналог простациклина (6-keto-PGF_1α) ингибиторы трипсина, плазмина, тромбина, химотрипсина, эластазы и катепсина G, субтилизина и акрозина, липаза, холестерин-эстераза и индуктор суперметилирования ДНК (протектор генома от воздействия мутагенов).

Полученная композиция БАВ позволяет эффективно стимулировать белковый обмен в коке, обладает выраженным антиоксидантным, изопептидазным и фагоцитарным действием, снижает уровень суммарных липидов, стимулирует суперметилированые ДНК, не проявляя при этом раздражающего или аллергезирующего действия.

Описываемую БАД для косметических средств получают следующим образом.

Каждую пиявку фиксируют головной частью тела вверх. По спинной и брюшной стороне от передней присоски проводят ватным тампоном, смоченным в спиртовом растворе, и в момент сокращения мышц в ротовую полость вводят две микропипетки, одной из которых производят отбор секрета на уровне челюстного аппарата, а другой (заостренной) - проникают через межчелюстное отверстие в начальную часть пищевода и собирают равный объем жидкости. Содержимое обеих пипеток объединяют, и полученный продукт используют в качестве биологически активной добавки для косметических средств.

Полученный в результате смешивания секрета слюнных желез и содержимого пищевода медицинской пиявки может быть разбавлен водным раствором в 2±3 раза и после инкубации в течение 3±10 часов при комнатной температуре также может быть использован в качестве биологически активной добавки.

Установлено, что естественной средой для разрушения комплексов, связывающих БАВ слюны, является плазма крови - единственный источник питания пиявок. Содержимое начальной части пищевода является источником проферментов и предшественников ингибиторов в водной среде. При добавлении его к секрету слюнных желез стимулируется процесс конкурентного ингибирования, то есть активные формы БАВ вытесняются из комплексов неактивными веществами, в результате чего активность описываемого продукта по сравнению с активностью секрета слюнных желез увеличивается в 2-3 раза.

Сущность изобретения поясняется конкретными примерами реализации описываемого изобретения, где приведена экспериментальная оценка эффективности полученных БАД.

Пример 1. Изучение раздражающего и аллергезирующего действия БАД, ее подострой токсичности, влияния накожных длительных аппликаций препаратов на морфологические структуры кожи и печени экспериментальных животных по методу Е. Иевливой.

Исследования проводились на 90 половозрелых морских свинках, находящихся на обычном рационе питания. Подученную по описанному способу жидкую БАД наносили на кожу морских свинок ежедневно в течение 15 дней в концентрации 0,01% (n=30) и 0,1% (n=30). В качестве контроля животным апплицировали 0,85%-ный раствор NaCl (физиологический раствор; n=15).

Установлено, что БАД, полученная в соответствии с настоящим изобретением, не обладает раздражающим и аллергезирующим действием на кожу, не оказывает отрицательного действия на морфологические структуры кожи и печени, не вызывает общетоксического действия на организм подопытных животных. Животные не отставали в прибавлении веса от контрольных, были активны, подвижны, имели блестящую шерсть, хороший аппетит.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии отрицательного воздействия полученного комплекса БАВ на состояние кожи экспериментальных животных.

Пример 2. Изучение содержания общего растворимого белка в коже

Исследования проводились по стандартному методу Д.Бейли.

Полученный по описанному способу жидкий продукт наносили на кожу 90 половозрелых морских свинок ежедневно в течение 15 дней в концентрации 0,01% (n=30) и 0,1% (n=25). В качестве контроля животным апплицировали 0,85%-ный раствор NaCl (физиологический раствор; n=15).

Установлено, что полученная БАД увеличивает содержание общего белка: в концентрации 0,01% на 21,2%, в концентрации 0,1% на 63,4%, 0,01%-ный раствор известной БАД увеличивает содержание общего белка на 12,5%.

У животных, получающих физиологический раствор, этот показатель не изменялся.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности изучаемого препарата в стимулировании белкового обмена.

Пример 3. Изучение суммарных липидов в коже

Воздействие полученным препаратом на исследуемых животных проводили по методике, аналогичной описанной в примере 2, содержание суммарных липидов определялось по общепринятой методике Хуэрго.

Установлено, что содержание суммарных липидов после воздействия 0,01%-ного раствора описываемого комплекса БАВ снижается на 17%, после воздействия 0,1%-ного раствора - на 44,2%.

При использовании экстракта секрета из слюнных желез содержание суммарных липидов увеличилось на 13,7%. При использовании физиологического раствора этот показатель увеличился на 3,1%.

Полученные результаты свидетельствуют об усилении метаболизма липидов под воздействием БАД, полученной согласно изобретению, т.е. имеет место усиление обмена липидов и выведения их из тканей кожи. Применение же препарата непосредственно из секрета слюнных желез (по прототипу) приводит к аккумуляции липидов в коже, что является отрицательным свойством препарата направленного антигериатрического действия.

Пример 4. Изучение содержания малонового диальдегида

Исследования проводились по стандартному методу В. Стальной.

Постановка эксперимента проводилась по методике, аналогичной примеру 2. Установлено, что содержание малонового диальдегида снижается при использовании 0,01%-ного раствора жидкой БАД на 37,5%, при использовании 0,1%-ного раствора - на 51,3%. При использовании физиологического раствора содержание малонового диальдегида практически не изменялся.

Достоверное снижение уровня малонового диальдегида является показателем антиоксидантной (антипротеазной) активности исследуемого комплекса БАВ.

Пример 4. Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов

Исследование иммуномодулирующего действия описываемой БАД проводилось по известному методу Е.Чернушенко [3].

БАД, полученную в соответствии с настоящим изобретением, наносили на кожу 40 половозрелых нелинейных крыс-самцов, находящихся на обычном рационе питания, ежедневно в течение 45 дней в концентрации 0,01 (n=10) и 0,1% (n=10). В качестве контроля животным апплицировали 0,85%-ный раствор NaCl (физиологический раствор; n=10). По истечении указанного срока у животных производился отбор крови и исследовалась фагоцитарная активность нейтрофилов. Анализу подвергались фагоцитарный индекс (ФИ) и процент фагоцитоза (Ф). ФИ при использовании 0,01%-ного водного раствора описываемой БАД составил 7,9±0,3, 0,1%-ного раствора - 23,5±0,8, в контроле - 1,8±0,7.

Процент фагоцитоза при использовании 0,01%-ного водного раствора БАД, полученной в соответствии с настоящим изобретением, составил 78,5±6,3, при использовании 0,1%-ного раствора - 95,7±4,6, в контроле - 45,4±6,3.

Показатель фагоцитоза лейкоцитов является одним из критериев оценки уровня сопротивляемости организма инфекциям. Фагоциты - важнейшая составляющая иммунной защиты организма. Таким образом, описываемая БАД, повышая фагоцитарный индекс и процент фагоцитоза, демонстрирует иммуностимулирующее действие.

Пример 5. Изучение суперметидирования ДНК

Исследования проводились по определению содержания 5-метилцитозина в ДНК печени крыс по методике Васильева В.К. [4]. Извлеченную после забоя животных печень замораживали в жидком азоте, растирали в тонкий порошок и выделяли из него ДНК по методу Мармура.

Водный 0,1%-ный (n=10) раствор исследуемой БАД наносили на кожу 20-ти половозрелых крыс-самцов линии Вистар, находящихся на обычном рационе питания в течение 45 дней. В качестве контроля животным аплицировали 0,85%-ный раствор NaCl (физиологический раствор; n=10).

После воздействия описываемой БАД у всех животных устойчиво наблюдалось увеличение m⁵С на 24% относительно контрольного значения, что свидетельствует о положительном влиянии полученного продукта на экспрессию генов, в регуляции которой важная роль принадлежит суперметилированию ДНК [5].

Таким образом, комплексный продукт, полученный от взаимодействия секрета слюнных желез и содержимого пищевода медицинской пиявки в значительной степени стимулирует белковый обмен, снижает содержание суммарных липидов в коже, обладает выраженным антиоксидантным действием, обладает способностью стимулировать фагоцитоз и суперметилирование ДНК, не проявляя раздражающего и аллергезирующего действия на ножу. Предназначен для использования в качестве биологически активной добавки для косметических средств антигериатрического действия.

Источники информации

1. Патент РФ № 2113843, МКИ А 61 К 7/48, опубл. 1998 г.

2. Патент РФ № 2153325, МКИ А 61 К 7/48, опубл. 2000.

3. Чернушенко Е.Ф., Колосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. Киев, 1978.

4. Васильев В.К. Определение нуклеотидного состава ДНК с помощью тонкослойной хромагографии на ДЭАЭ-целлюлозе. Биологические науки, 1977, 2.118-120.

5. Ванюшин Б.Ф., Бердышев Г.Д. Молекулярно-генетические механизмы старения. М.: Медицина, 1977.

Изобретение относится к области медицины, а именно косметологии, и может быть использовано при производстве биологически активного сырья для косметических средств с лечебно-профилактическими свойствами. Биологически активная добавка (БАД) для косметических средств представляет собой продукт, полученный в результате смешивания в равных объемах секрета слюнных желез и содержимого пищевода медицинских пиявок. Такая БАД в значительной степени стимулирует белковый обмен, снижает содержание суммарных липидов в коже, обладает выраженным антиоксидантным и антигериартрическим действием, обладает способностью стимулировать фагоцитоз и суперметилирование ДНК, не проявляя при этом раздражающего и аллергизирующего действия на кожу.

Биологически активная добавка для косметических средств, полученная из медицинской пиявки, отличающаяся тем, что она представляет собой продукт, полученный в результате смешивания в равных объемах секрета слюнных желез и содержимого пищевода медицинских пиявок.