СПОСОБ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА Российский патент 2004 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности дерматовенерологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения псориаза.

Псориаз является хроническим заболеванием кожи с разнообразными клиническими проявлениями. Причины возникновения псориаза до сих пор остаются невыясненными.

В настоящее время псориаз рассматривается как системное заболевание, в котором важную роль играет иммунная система организма (Мордовцев В.П., Мушет Г.В., Альбанова В.И. Псориаз (патогенез, лечение, клиника). - Кишенев: ШТИИНЦА, 1991).

В последние годы появились данные, что в реализации иммунного ответа принимают участие растворимые формы мембранных антигенов иммунокомпетентных клеток (Новиков В.В. Растворимые формы дифференцировочных антигенов гемопоэтических клеток // Гематология и трансфузиология. 1996, №6, С.40-43). Было установлено, что человеческие лимфоциты при активации секретируют значительные количества растворимой формы молекул HLA I класса (sHLA-I). Физиологическая концентрация sHLA-I значительно повышается в процессе воспаления. Это говорит о том, что sHLA-I может служить маркером патологических изменений в организме (Голенков А.К., Митина Т.А., Новиков В.В. и др. Клиническое значение растворимых молекул адгезии (sCD50 - ICAM-3), апоптоза (sCD95) и sHLA класса I при лимфопролиферативных заболеваниях // Российский биотерапевтический журнал, 2002, №1, С.60-64).

Попытка выделить специфические для псориаза нарушения иммунной системы до сих пор не увенчались успехом, а выявленные изменения находятся в рамках иммунного ответа при воспалительной реакции на повреждение (В.Н.Шилов. Псориаз - решение проблемы. - М., 2001).

В настоящее время оценка тяжести течения псориаза осуществляется клинически с помощью расчета индекса распространенности и остроты процесса (индекс PASI), основанного на определении шелушения, площади пораженной кожи, степени инфильтрации и эритемы (Frederiksson, T.Pettersson, V.Dermatologika, 1978, 157; Мордовцев В.Н. и др. Псориаз (патогенез, клиника, лечение). - Кишинев: ШТИИНЦА, 1991, с.16-128).

Однако, определение тяжести течения псориаза данным способом затруднено из-за субъективности оценки.

Задача данного изобретения - повышение точности оценки тяжести течения псориаза.

Поставленная задача решается тем, что у больного путем забора крови из периферической вены получают сыворотку, определяют в ней содержание растворимой формы антигена HLA I класса и при повышении уровня HLA I класса более 2000 ЕД/мл устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 2000 ЕД/мл - легкое течение.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного путем забора 1 мл крови из периферической вены получали сыворотку. В качестве первых антител, сорбируемых на твердую фазу (лунки планшета для ИФА), использовали моноклональные антитела ИКО-53. Антитела предварительно очищали риванольным методом по общепринятой методике. Применяемые в качестве вторых антител МКА ИКО-216 конъюгировали с пероксидазой хрена перийодатным методом (Вязьмина Е.С., 2002). Использовали разборные полистироловые планшеты производства "Медполимер", модифицированные ультрафиолетовым облучением.

Моноклональные антитела ИКО-53 разводили 0,85%-ным раствором NaCl и вносили в лунки планшетов по 100 мкл в каждую. Планшеты инкубировали 24 ч при комнатной температуре, затем 5-6 раз отмывали забуференным фосфатами физиологическим раствором рН 7,4 (ФСР-Т).

Сыворотку крови больного, разведенную предварительно в соотношении 1:10 раствором ФСР-Т, вносили в лунки планшетов в обьеме 100 мкл и инкубировали 24 ч при комнатной температуре. Затем планшеты отмывали как описано выше и в лунки вносили по 100 мкл коньюгата моноклональных антител ИКО-216 с пероксидазой хрена в рабочем разведении. Планшеты инкубировали 45 мин при температуре 37°С и после отмывки в лунки вносили по 100 мкл раствора субстратной смеси, содержащей 0,01% ортофенилендиамина и 0,05% Н₂О₂ в цитратном буфере. Планшеты инкубировали 10 мин при комнатной температуре, затем добавляли в лунки по 50 мкл 0,1 М раствора H₂SO₄. Учет результатов проводили при длине волны 492 нм с использованием фотометра АИФ-М/340.

Содержание растворимых молекул HLA I класса оценивали в условных единицах (ЕД/мл) и при повышении уровня HLA I класса более 2000 ЕД/мл устанавливали тяжелое течение псориаза, а при значении менее 2000 ЕД/мл - легкое течение.

Обследовано 90 больных псориазом. В процессе изучения данного параметра установлено, что у больных псориазом статистически достоверно повышено содержание растворимых молекул HLA I класса до 2072±285 ЕД/мл. У здоровых доноров содержание растворимых молекул HLA I класса равнялось 1012±36 Ед/мл.

В стационарной стадии наблюдалось увеличение уровня сывороточной формы молекул HLA I класса до 1816±268 ЕД/мл по сравнению с контрольной группой (1012±36 ЕД/мл). В прогрессирующей стадии заболевания уровень молекул HLA I класса повышался в большей степени и достигал концентрации, равной 2764±354 Ед/мл.

Полученные данные свидетельствуют о том, что сывороточный уровень растворимой формы молекул HLA β₂ I класса ассоциирован с тяжестью течения псориаза.

У больных при значении данного показателя выше 2000 ЕД/мл констатировалось тяжелое течение псориаза.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1. Больная Г., поступила в клинику Нижегородского научно-исследовательского кожно-венерологического института 16.04.02 г. с предварительным диагнозом псориаз. История болезни №892. Возраст - 30 лет. На коже туловища, разгибательных поверхностей верхних и нижних конечностей наблюдались высыпания в виде характерных псориатических бляшек. До лечения проведено исследование содержания растворимых молекул HLA I класса. Оказалось, что данный показатель равен 835 ЕД/мл.

Вывод: у больной определяется легкое течение псориаза. Клинический диагноз - распространенный псориаз, стационарная стадия. Последующее наблюдение подтвердило вышеуказанный вывод (стандартное лечение, выписка из стационара на 20 день).

Пример 2. Больной Ч., поступил в клинику Нижегородского научно-исследовательского кожно-венерологического института 21.01.02 г. с предварительным диагнозом псориаз. История болезни №153. Возраст - 59 лет. На коже туловища, разгибательных поверхностей верхних и нижних конечностей наблюдались высыпания в виде характерных псориатических бляшек. До лечения проведено исследование содержания растворимых молекул HLA I класса. Оказалось, что данный показатель равен 4590 ЕД/мл.

Вывод: у больной определяется тяжелое течение псориаза. Клинический диагноз - распространенный псориаз, прогрессирующая стадия. Последующее наблюдение подтвердило вышеуказанный вывод (метотрексат в комплексной терапии, продолжительность лечения 34 дня).

Пример 3. Больная Ш., поступила в клинику Нижегородского научно-исследовательского кожно-венерологического института 17.04.02 г. с предварительным диагнозом псориаз. История болезни №908. Возраст - 48 лет. На коже туловища, разгибательных поверхностей верхних и нижних конечностей наблюдались высыпания в виде характерных псориатических бляшек. До лечения проведено исследование содержания растворимых молекул HLA I класса. Оказалось, что данный показатель равен 6020 ЕД/мл.

Вывод: у больной определяется тяжелое течение псориаза. Клинический диагноз - распространенный псориаз, прогрессирующая стадия. Последующее наблюдение подтвердило вышеуказанный вывод (метотрексат в комплексной терапии, продолжительность лечения 38 дней).

Таким образом, предложенный способ обладает преимуществом по сравнению с выявленным прототипом, что выражается в повышении точности и объективности определения тяжести течения псориатического процесса.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения псориаза. Сущность изобретения состоит в определении в сыворотке крови содержания растворимой формы антигена HLA I класса и при повышении уровня HLA I класса более 2000 ЕД/мл устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 2000 ЕД/мл - легкое течение. Техническим результатом является повышение точности оценки тяжести течения псориаза.

Способ оценки тяжести течения псориаза, заключающийся в обследовании больного, отличающийся тем, что путем забора крови из периферической вены получают сыворотку, определяют в ней содержание растворимой формы антигена HLA I класса и при повышении уровня HLA I класса более 2000 ЕД/мл устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 2000 ЕД/мл - легкое течение.