СПОСОБ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно дерматовенерологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения псориаза.

Псориаз является одним из наиболее часто встречающихся хронических рецидивирующих заболеваний кожи с неизвестной этиологией и недостаточно изученным патогенезом. Усилиями отечественных и зарубежных ученых достигнут большой прогресс в раскрытии механизмов развития этого заболевания.

В настоящее время широкое признание нашла концепция о ведущей роли иммунных нарушений в патогенезе псориаза.

Примечательно, что при различных формах псориатической болезни выявлен выраженный дисбаланс Т-хелперов и Т-супрессоров. А ряд авторов рассматривает Т-супрессорную недостаточность как ведущую в патогенезе псориаза. Усиленная активация Т-хелперов в патологических очагах, снижение количества супрессорно-цитотоксических лимфоцитов, сочетающееся с повышенным образованием иммунных комплексов, дает основание придавать в патогенезе псориаза существенное значение аутоиммунной патологии.

Специфическое удаление активированных Т-лимфоцитов из организма лиц, страдающих псориатической болезнью, позволяет улучшить состояние больного, а в ряде случаев приводит к полному затуханию патологического процесса.

Локальный запуск активных Т-лимфоцитов в коже может привести к вторичной пролиферативной активности эпидермальных кератиноцитов через общие клеточные механизмы, включающие цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8 и др.), а также факторы роста.

Данные факторы межклеточного взаимодействия, влияя на различные структуры клетки, могут регулировать продукцию внеклеточного матрикса, пролиферацию и дифференцировку клеток, а также синтез ими различных медиаторов.

Таким образом, исследование интенсивности активационных процессов в коже при псориазе позволит более точно оценить тяжесть течения псориатической болезни.

В настоящее время оценка тяжести течения псориаза осуществляется клинически с учетом общепринятого индекса его распространенности и остроты, основанного на исследовании высыпаний (характера шелушения, площади кожи, вовлеченной в патологический процесс, степени инфильтрации и эритемы) (Мордовцев В.Н. и др. Псориаз (патогенез, клиника, лечение). Кишенев, ШТИИНЦА, 1991, с.16-128).

Однако определение тяжести течения псориаза данным способом затруднено вследствие его в значительной степени субъективного характера, что приводит к высокому проценту ошибок.

Задача изобретения - повышение точности оценки тяжести течения псориаза.

Поставленная задача достигается тем, что предварительно до клинического обследования берут биоптат кожи из очага поражения, готовят криостатные срезы из нефиксированной ткани, полученный материал фиксируют холодный ацетоном, на срезы наслаивают рабочий раствор моноклональных антител к СD25-антигену, инкубируют при комнатной температуре, промывают фосфатно-солевым буфером, покрывают рабочим раствором вторичных антител, меченных изотиоцианатом флюоресцеина, инкубируют при -4^oС, повторно промывают в фосфатно-солевом буфере, заключают в раствор глицерина под покровное стекло для определения в люминесцентном микроскопе относительного числа CD25⁺-клeтoк, приходящихся на 500 кератиноцитов, и при его значении более 27,9% устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 27,9% - легкое течение.

Способ осуществляется следующим образом.

В процессе исследования берут биопсию ткани в очаге поражения. Серийные срезы толщиной не более 5-7 мкм готовят из нефиксированной ткани в криостате при -25^oС. Далее материал помещают на теплое покровное стекло и фиксируют 100%-ным холодным ацетоном в момент таяния срезов. Затем на срезы наслаивают рабочий раствор моноклональных антител к СD25-антигену и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 минут. Далее промывают фосфатно-солевым буфером при рН 7,6 и покрывают рабочим раствором вторичных антител, меченных изотиоцианатом флюоресцеина, инкубирют в течение 30 минут при -4^oС и после промывания в фосфатно-солевом буфере в течение 10 минут срезы заключают в 50% раствор глицерина под покровное стекло. Полученные препараты исследуют в люминесцентном микроскопе с объективом 90х и окуляром 7-10х. При этом подсчитывают относительное число CD25⁺-клeтoк на 500 кератиноцитов. Результаты выражают в процентах.

В качестве контроля использовали значение СD25-положительных клеток в коже здоровых людей.

В процессе изучения данного параметра установлено, что у больных псориазом относительное число СD25-положительных клеток было повышенным по сравнению с контролем. А у больных с предварительным диагнозом псориаз при значении данного показателя 27,9% и более констатировалась более тяжелая клиническая разновидность дерматоза.

Пример 1. Больной С., поступил в Нижегородский научно-исследовательский кожно-венерологический институт 30 ноября 1999 года с предварительным диагнозом псориаз. История болезни 2510. На момент поступления предъявлял жалобы на наличие высыпаний на коже верхней части головы, верхних и нижних конечностей, туловище, изменение формы и цвета ногтей. Возраст больного 35 лет. Давность псориаза 19 лет. До лечения в момент клинического обследования у больного из очага поражения была произведена биопсия кожи и методом поверхностной иммунофлюоресценции дана оценка относительного числа СD25-позитивных иммунокомпетентных клеток. Оказалось, что данный показатель был равен 16,0%.

Вывод: у больного определяется обычный распространенный псориаз. В дальнейшем он был подтвержден клинически.

Пример 2. Больная С., поступила в Нижегородский научно-исследовательский кожно-венерологический институт 1 февраля 2000 года. История болезни 259. Диагноз псориаз. Возраст больной 49 лет. Давность заболевания 40 лет. До лечения в момент клинического обследования у больной из очага поражения была произведена биопсия кожи и методом поверхностной иммунофлюоресценции дана оценка относительного числа СD25-позитивных иммунокомпетентных клеток. Оказалось, что данный показатель был равен 41,0%. Был сделан вывод, что у больной отмечается более тяжелое течение псориаза (распространенный экссудативный псориаз). Этот показатель подтвердил клиническую оценку состояния больной.

Пример 3. Больной Л., 50 лет, поступил в стационар Нижегородского НИКВИ 31 мая 1999 года с предварительным диагнозом псориаз. История болезни 1151. До лечения в момент клинического обследования у больного из очага поражения была произведена биопсия кожи и методом поверхностной иммунофлюоресценции дана оценка относительного числа СD25-позитивных иммунокомпетентных клеток. Оказалось, что данный показатель был равен 31,0%, что характеризует более тяжелое течение дерматоза. Клиническое обследование подтвердило это предположение, заключительный диагноз - распространенный вульгарный псориаз, псориатический моноартрит, артралгическая форма.

Таким образом, предложенный способ обладает преимуществом по сравнению с выявленным прототипом, что выражается в повышении объективности и точности определения тяжести течения псориатического процесса.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматовенерологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения псориаза. Способ обеспечивает повышение точности оценки тяжести течения псориаза. У больного предварительно до лечения берут биоптат кожи из очага поражения, готовят криостатные срезы из нефиксированной ткани, полученный материал фиксируют холодным ацетоном, на срезы наслаивают рабочий раствор моноклональных антител к СD25-антигену, инкубируют при комнатной температуре, промывают фосфатно-солевым буфером, покрывают рабочим раствором вторичных антител, меченных изотиоцианатом флюоресцеина, инкубируют при -4^oС, повторно промывают в фосфатно-солевом буфере, заключают в раствор глицерина под покровное стекло для исследования в люминесцентном микроскопе, определяют относительное число СD25⁺-клеток, приходящихся на 500 кератиноцитов, и при его значении более 27,9% устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 27,9% - легкое течение.

Способ оценки тяжести течения псориаза, заключающийся в обследовании больного, отличающийся тем, что предварительно до лечения берут биоптат кожи из очага поражения, готовят криостатные срезы из нефиксированной ткани, полученный материал фиксируют холодным ацетоном, на срезы наслаивают рабочий раствор моноклональных антител к СD25-антигену, инкубируют при комнатной температуре, промывают фосфатно-солевым буфером, покрывают рабочим раствором вторичных антител, меченных изотиоцианатом флюоресцеина, инкубируют при -4^oС, повторно промывают в фосфатно-солевом буфере, заключают в раствор глицерина под покровное стекло для определения в люминесцентном микроскопе относительного числа СD25⁺-клеток, приходящихся на 500 кератиноцитов, и при его значении более 27,9% устанавливают тяжелое течение псориаза, а при значении менее 27,9% - легкое течение.