ПИРАЗОЛБЕНЗОДИАЗЕПИНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ CDK2, ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ИХ СОДЕРЖАЩАЯ Российский патент 2005 года по МПК C07D487/04 C07D243/22 A61K31/5517 A61P35/00 

Настоящее изобретение относится к новым пиразолбензодиазепинам, обладающим способностью ингибировать циклинзависимые киназы (CDK), прежде всего CDK2. Эти соединения и их фармацевтически приемлемые соли, а также пролекарства указанных соединений представляют собой антипролиферативные агенты, которые могут применяться для лечения или приостановления развития болезней, связанных с пролиферацией клеток, прежде всего рака. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к способам лечения и/или предупреждения рака, прежде всего для лечения или приостановления развития солидных опухолей. Предпочтительно соединения по изобретению могут применяться для лечения или приостановления развития опухолей грудной железы, ободочной кишки, легкого или предстательной железы. Изобретение относится также к промежуточным продуктам, которые могут применяться для получения указанных выше антипролиферативных агентов.

Неконтролируемая пролиферация клеток является отличительным признаком рака. Клетки раковых опухолей обычно характеризуются определенной формой нарушения генов, которые прямо или косвенно регулируют цикл клеточного деления.

Циклинзависимые киназы (CDK) представляют собой ферменты, которые имеют решающее значение для контроля клеточного цикла. Эти ферменты регулируют переходы между различными фазами клеточного цикла, например переход от фазы G₁ к фазе S (период активного синтеза ДНК) или переход от фазы G₂ к фазе М, при которой происходит активный митоз и деление клеток.

CDK состоят из каталитической субъединицы CDK и регуляторной циклиновой субъединицы. Циклиновая субъединица является наиболее важным регулятором активности CDK, при этом каждая CDK взаимодействует с определенным поднабором циклинов: например, с циклином A (CDK1, CDK2). Различные пары киназа/циклин регулируют прохождение через определенные стадии клеточного цикла.

Нарушения системы контроля клеточного цикла приводят к неконтролируемому росту раковых клеток. Имеется обширная литература, посвященная применению соединений, обладающих способностью ингибировать CDK, в качестве антипролиферативных терапевтических агентов.

Настоящее изобретение относится к пиразолбензодиазепинам, обладающим способностью ингибировать активность одной или нескольких CDK, прежде всего CDK2. Такие соединения могут применяться для лечения рака, прежде всего твердых опухолей. В частности, соединения по настоящему изобретению предпочтительно могут применяться для лечения или приостановления развития опухолей грудной железы, ободочной кишки, легкого и предстательной железы. Изобретение относится также к промежуточным соединениям, которые могут применяться при получении вышеуказанных пиразолбензодиазепинов.

Соединения по настоящему изобретению имеют формулу I, приведенную ниже

где

R¹ означает водород, -NO₂, -CN, галоид, -OR⁵, -R⁶OR⁷, -COOR⁷, -CONR⁸R⁹, -NR¹⁰R¹¹, -NHCOR¹², -NHSO₂R¹³ или линейный (низш.)алкил, который необязательно замещен гидроксигруппой и/или галоидом;

R² и R⁴ каждый независимо друг от друга означает водород, галоид, -NO₂, -СF₃ или линейный (низш.)алкил;

R³ означает водород, циклоалкил, арил, гетероциклил, гетероарил, -COOR⁷, -CN, алкенил, -CONR⁸R⁹, алкинил или (низш.)алкил, который необязательно замещен гидроксигруппой, OR⁹, F и/или арилом;

R⁵ означает (низш.)алкил, который необязательно замещен галоидом;

R⁶ означает (низш.)алкил;

R⁷ означает водород или (низш.)алкил;

R⁸ и R⁹ каждый независимо друг от друга означает водород или (низш.)алкил, которые необязательно замещены гидроксигруппой и/или -NH₂; альтернативно R⁸ и R⁹ могут образовать пяти- или шестичленный гетероцикл, который необязательно замещен гидроксигруппой, -NH₂ и/или (низш.)алкилом;

R¹⁰, R¹¹ и R¹² каждый независимо друг от друга означает водород или (низш. )алкил;

R¹³ означает (низш.)алкил, который необязательно замещен галоидом и/или -NR¹⁴R¹⁵; и

R¹⁴ и R¹⁵ каждый независимо друг от друга означает водород или (низш.)алкил, который необязательно замещен галоидом, или альтернативно -NR¹⁴R¹⁵ означает гетероциклил.

Кроме того, изобретение относится к пролекарствам и фармацевтически активным метаболитам соединений формулы I и к фармацевтически приемлемым солям упомянутых выше соединений.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединений формулы I или пролекарств и фармацевтически активных метаболитов соединений формулы I и фармацевтически приемлемых солей упомянутых выше соединений в качестве медикаментов; и к фармацевтическим композициям, включающим фармацевтически эффективное количество одного или нескольких вышеописанных соединений или фармацевтически приемлемую соль пролекарства и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

Настоящее изобретение направлено также на применение соединений формулы I, пролекарств или фармацевтически активных метаболитов соединений формулы I или фармацевтически приемлемых солей упомянутых выше соединений в производстве препарата для лечения солидных опухолей, в частности опухолей грудной железы, ободочной кишки, легкого и предстательной железы, более конкретно опухолей грудной железы и ободочной кишки.

В контексте настоящего изобретения следующие термины будут иметь следующие значения.

Термин “арил” означает ароматическую группу, содержащую 6-10 атомов углерода и состоящую из 1 или 2 колец. Примеры арильных групп включают фенил и 1- или 2-нафтил.

Термин “алкенил” означает линейный или разветвленный замещенный или незамещенный алифатический ненасыщенный углеводород, имеющий 2-6, предпочтительно 2-4, атомов углерода и содержащий двойные связи. Типичные алкенильные группы включают этиленовую, пропиленовую, изопропиленовую, бутиленовую и тому подобное. Предпочтительные алкенильные группы являются линейными.

Термин “алкинил” означает линейный или разветвленный замещенный или незамещенный алифатический ненасыщенный углеводород, имеющий 2-6, предпочтительно 2-4 атомов углерода и содержащий тройные связи. Типичные алкинильные группы включают ацетиленовую группу и тому подобное. Предпочтительные алкинильные группы являются линейными.

Термин “циклоалкил” означает неароматическую, частично или полностью насыщенную циклическую алифатическую углеводородную группу, содержащую 3-8 атомов. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин “эффективное количество” означает количество по меньшей мере одного соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства или метаболита, которое значительно подавляет пролиферацию опухолевых клеток, включая линии человеческих опухолевых клеток.

Термин “галоид” означает фтор, хлор, бром или йод. Предпочтительными галоидами являются фтор и хлор.

Термин “гетероарильные” группы означает ароматические группы, имеющие 5-10 атомов, один или 2 кольца и содержащие один или несколько гетероатомов. Примерами гетероарильных групп являются 2-, 3- или 4-пиридил, тетразолил, оксадиазолил, пиразинил, хинолил, пирролил и имидазолил.

Термин “гетероатом” означает атом, выбранный из N, О и S.

Термин “гетероциклил” означает 3-10-членную неароматическую, частично или полностью насыщенную углеводородную группу, такую как тетрагидрохинолил, которая содержит одно или два кольца и по меньшей мере один гетероатом.

Термин “IC₅₀” относится к концентрации конкретного пиразолобензодиазепина, необходимой для ингибирования 50% специфической измеряемой активности. Величина IС₅₀ может быть измерена, среди прочего, как описано в примере 4 ниже.

Термин “(низш.)алкил” означает линейный или разветвленный, замещенный или незамещенный, насыщенный алифатический углеводород, содержащий 1-6, предпочтительно 1-4, атомов углерода. Типичные (низш.)алкильные группы включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет.-бутил, 2-бутил, пентил, гексил и тому подобное.

Термин “фармацевтически приемлемая соль” относится к обычным кислотно-аддитивным солям или к солям присоединения оснований, сохраняющим биологическую эффективность и свойства соединений формулы I и полученным из приемлемых нетоксичных органических или неорганических кислот либо органических или неорганических оснований. Пример кислотно-аддитивных солей включает соли, полученные из неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, фосфорная кислота и азотная кислота, и соли, полученные из органических кислот, таких как n-толуолсульфокислота, салициловая кислота, метансульфокислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, яблочная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота и тому подобное. Пример солей присоединения оснований включает соли, полученные из гидроксидов аммония, калия, натрия и четвертичного аммония, такие как, например, гидроксид тетраметиламмония.

Термин “фармацевтически приемлемый”, такой как фармацевтически приемлемые носитель, наполнитель, пролекарство и т.д., означает фармакологически приемлемые и фактически нетоксичные для субъекта, которому вводится отдельное соединение.

Термин “фармацевтически активный метаболит” означает продукт метаболизма соединения формулы I, который является фармацевтически приемлемым и эффективным.

Термин “пролекарство” относится к соединению, которое в физиологических условиях или путем сольволиза может превращаться в любое из соединений формулы I или в фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I. Пролекарство может быть неактивным при введении субъекту, но in vivo превращаться в активное соединение формулы I.

Термин “замещенный”, как в замещенном алкиле, означает, что замещение может проходить по одному или нескольким положениям и что заместители в каждом положении замещения являются выбранными независимо друг от друга из определенных вариантов, если не указано иначе.

Соединения

В одном варианте воплощения настоящее изобретение направлено на соединения, имеющие формулу:

и пролекарства и фармацевтически активные метаболиты соединений формулы I и фармацевтически приемлемые соли упомянутых выше соединений, где R¹ и R¹⁵ имеют описанные выше значения.

В предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R¹ означает водород, -NO₂, -CN, -CONH₂, галоид или незамещенный (низш.)алкил. Предпочтительными (низш.)алкилами являются метил и этил. Более предпочтительно R¹ означает -NO₂, -CN или -CONH₂. Предпочтительно R¹ находится в положении 7 или 8.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R² находится в положении 2' и означает водород или галоид.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R³ означает незамещенный (низш.)алкил, гидрокси(низш.)алкил, циклоалкил, гетероциклил или гетероарил. Предпочтительными (низш.)алкильными группами являются метил, этил и гидроксиметил. Предпочтительными циклоалкильными группами являются незамещенные группы С₃-C₅.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R⁴ находится в положении 4' и означает водород или галоид, наиболее предпочтительно R⁴ означает водород.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R⁵ и R⁶ означают независимо друг от друга метил, этил, каждый из которых необязательно может быть замещен галоидом. Более предпочтительно R⁵ означает трифторметил.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R⁷ означает водород, метил или этил.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R⁸ и R⁹ означает каждый независимо друг от друга водород, метил, этил или гидроксиэтил. Когда R⁸ и R⁹ образуют гетероцикл, предпочтительными гетероциклическими группами являются 6-членные незамещенные группы, которые наиболее предпочтительно включают два гетероатома. Наиболее предпочтительные гетероатомы выбирают из О и N.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R¹⁰, R¹¹ и R¹² означает каждый независимо друг от друга водород, метил или этил.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R¹³ означает (низш.)алкил, который необязательно может быть замещен водородом, наиболее предпочтительно R¹³ означает метил, этил или трифторметил.

В другом предпочтительном варианте воплощения соединений формулы I R¹⁴ и R¹⁵ означает каждый независимо друг от друга водород, метил, этил или гетероцикл. Предпочтительными гетероциклами являются 3-7-членные кольца, которые включают по меньшей мере один азот.

Следующие промежуточные производные являются также примерами дополнительных предпочтительных соединений по настоящему изобретению:

где

R¹, R² и R⁴ имеют приведенные выше значения;

и

где в каждой из непосредственно предшествующих формул каждый из R¹, R², R³ и R⁴ имеет значения, приведенные в описании ранее. Эти промежуточные производные применимы в синтезе соединений формулы I.

Соединения, раскрываемые в описании и защищаемые вышеприведенными формулами, могут обладать таутомерией или структурной изомерией. Предполагается, что изобретение охватывает любую таутомерную или изомерную структурную форму этих соединений или смеси этих форм и не ограничено какой-либо одной таутомерной или структурной изомерной формой, использованной выше при написании формул.

Синтез соединений формулы I

Соединения по изобретению могут быть получены способами, известными в этой области. Соответствующие способы синтеза этих соединений приведены в примерах. Как правило, эти соединения можно получать в соответствии с приведенными ниже схемами.

Схема 1

R³=H

а) реагент Лоуссона (известная реакция для большинства замещений);

б) реакция с Me₂N-CH(OEt)₂;

в) реакция с гидразином.

Соединение 1 или является коммерчески доступным, или его синтезируют способами, известными специалистам.

Схема 2

R³ не означает H

а) реагент Лоуссона (известная реакция для большинства замещений);

г) реакция с R³-CHO в присутствии основания, предпочтительно пиперидина;

в) реакция с гидразином;

д) окисление дигидропиразола в пиразол (в присутствии воздуха в ДМСО, от КТ до 150° С или в присутствии воздуха и основания (Cs₂CO₃/ДMФ).

Схема 3

Альтернативная схема, когда R³ не означает Н

а) реагент Лоуссона (известная реакция для большинства замещений);

е) реакция с R³-CHO в присутствии основания, предпочтительно диазабициклоундекана или 2,2,6,6-тетраметилпиперидина;

ж) дегидратация путем обработки слабой кислотой (пиридиниевой солью n-толуолсульфокислоты, пиридиниевой солью уксусной кислоты и т.д.);

в) реакция с гидразином;

д) окисление дигидропиразола в пиразол (в присутствии воздуха в ДМСО, от КТ до 150° С или в присутствии воздуха и основания (Сs₂СО₃/ДМФ).

Схема 4

Трансформация функциональных групп R¹ или R³

где R^1' может иметь любое из приведенных выше значений для R¹, и подобным образом R^3' может иметь любое из приведенных выше значений для R³.

Некоторые замещения могут быть осуществлены химической модификацией имеющихся функциональных групп с использованием известных способов, как представлено выше на схеме 4. Например, если требуемый R¹=NH₂, такое замещение может быть осуществлено восстановлением соответствующей нитрогруппы. Аналогично, если требуемый R¹=NHR' (где R' означает -COR¹², -SO₂R¹³ или -R¹⁰R¹¹), это замещение может быть осуществлено взаимодействием соответствующего соединения, в котором R¹=NH₂, с хлорангидридом или ангидридом кислоты. Если требуемый R¹=CONRR'' (где R означает водород или (низш.)алкил и R'' означает (низш.)алкил), это замещение может быть осуществлено взаимодействием соответствующего соединения, в котором R¹ означает йод, с моноксидом углерода и первичным или вторичным амином в присутствии палладиевого катализатора.

Кроме того, если R³ в исходном веществе означает -CO₂Et, может быть использована стандартная химическая модификация для получения соединений, содержащих следующие соответствующие группы R³:

-СН₂OН (восстановление); -СНО (частичное восстановление); -CH₂NMe₂ (восстановительное аминирование альдегида); -CH₂OMe (алкилирование спирта); -СН=СН₂ (олефинирование альдегида); -CONRR'' (где R означает Н или (низш.)алкил и R'' означает Н или (низш.)алкил, аминолиз с соответствующим амином HNRR'', в котором R означает Н или (низш.)алкил и R'' означает Н или (низш.)алкил); -CONHNHR (где R означает Н, (низш.)алкил или арил, гидразинолиз - реакция с гидразином); -CN (дегидратация амида -CONH₂).

В предшествующих схемах соединение 1 или является коммерчески доступным, например от фирмы Sigma, или может быть легко синтезировано способами, известными специалистам. Так, соединение 2 получают из соответствующего лактама (соединение 1) по способу Sternbach et al., J. Org. Chem., 29:231 (1964) или взаимодействием с реагентом Лоуссона.

Композиции/препаративные формы

В альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим по крайней мере одно соединение формулы I или его пролекарство или фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I или пролекарство такого соединения.

Такие фармацевтические композиции могут вводиться перорально, например в форме таблеток, филмтаблеток, драже, желатиновых капсул с твердым или мягким покрытием, растворов, эмульсий или суспензий. Они могут вводиться также ректально, например в форме суппозиториев, или парентерально, например в форме растворов для инъекций.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, включающие соединения формулы I, пролекарства таких соединений или их соли, могут быть получены известным в данной области методом, например с помощью общепринятых процессов смешения, калсулирования, растворения, гранулирования, эмульгирования, включения, дражирования или лиофилизации. Такие фармацевтические композиции могут быть приготовлены с использованием терапевтически инертных неорганических или органических носителей. В качестве таких носителей для таблеток, филмтаблеток, драже и желатиновых капсул с твердым покрытием могут применяться лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли. Приемлемые носители для желатиновых капсул с мягким покрытием включают растительные масла, воски и жиры. В зависимости от природы действующего вещества в случае желатиновых капсул с мягким покрытием обычно не требуется никакого носителя. Пригодными носителями для изготовления растворов и сиропов являются вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар и глюкоза. Пригодными носителями для растворов для инъекций являются вода, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла, фосфолипиды и поверхностно-активные вещества. Пригодными носителями для суппозиториев являются природные или гидрогенизированные масла, воски, жиры и полужидкие полиолы.

Фармацевтические композиции могут содержать также консерванты, солюбилизирующие агенты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подслащивающие вещества, красители, корригенты, соли для изменения осмотического давления, буферы, агенты для нанесения покрытия или антиоксиданты. Они могут содержать также другие обладающие терапевтической активностью вещества, включая дополнительные действующие вещества, отличные от соединений формулы I.

Дозы

Как было указано выше, соединения формулы I, их пролекарства и их соли, а также композиции, содержащие эти соединения, могут применяться для лечения или приостановления развития болезней, связанных с пролиферацией клеток, прежде всего онкологических болезней. Эти соединения и композиции, содержащие эти соединения, предпочтительно могут применяться для лечения или приостановления развития твердых опухолей, таких как, например, опухоли молочной железы и ободочной кишки.

В контексте настоящего изобретения понятие “терапевтически эффективное количество соединения” обозначает количество соединения, которое является эффективным в отношении предупреждения, облегчения или улучшения симптомов болезни или увеличивает выживаемость пациента, подвергающегося лечению. Определение терапевтически эффективного количества находится в компетенции специалиста в данной области.

Терапевтически эффективное количество или доза соединения формулы I может варьироваться в широких пределах, и они должны быть выбраны в соответствии с индивидуальными требованиями в каждом отдельном случае. В целом для перорального или парентерального введения взрослым людям весом приблизительно 70 кг может использоваться суточная доза от приблизительно 10 мг до приблизительно 10000 мг, предпочтительно от приблизительно 200 мг до приблизительно 1000 мг, хотя верхний предел может быть превышен при соответствующих показаниях. Суточная доза может вводиться в виде одной дозы или в виде разделенных доз, или в случае парентерального введения она может вводиться путем непрерывной инфузии.

Пример 1: пиразолы, полученные в соответствии со схемой 1

Этап а: реакция лактама (соединения 1) с реагентом Лоуссона с образованием тиолактама (соединения 2)

1.1 Соединение A1: R¹=H, R²=F, R⁴=H

К раствору 5,085 г (20 ммолей) лактама 1 (где R¹=H, R²=F и R⁴=H) в 50 мл диметоксиэтана при 75° С прибавляли 8,9 г (22 ммоля) реагента Лоуссона (2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфида; Pedersen B.S., Schheibye S., Nilsson N.H., Lawesson S.-O., Bull. Soc. Chim. Belg., 1978, 87:223). Смесь перемешивали в течение 30 минут, охлаждали и затем выливали в 10% водный раствор бикарбоната натрия. Водную смесь экстрагировали хлористым метиленом, экстракты промывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовали из смеси хлористый метилен-метанол, получая 4,0 г соединения A1 (тиолактам 2).

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,56 (s, 1Н, NH), 7,10-7,65 (m, 8H), 4,59 (s, 2H).

1.2 Соединение А2: R¹ =F, R²=R⁴=H

Соединение А2 получали тем же способом, который описан выше для соединения A1. ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,50 (s, 1H, NH), 7,37-7,56 (m, 7H), 7,06 (dd, J=3,9 Гц, 1H), 4,60 (уш. s, 2H).

Этап б: реакция тиолактама 2 с ацеталем ДМФ с образованием диметиламинометиленового производного 3

1.3 Соединение A3: R¹=Сl, R²=Cl, R⁴=H

Раствор 0,999 г (3,1 ммоля) тиолактама 2 (R¹=Cl, R²=Cl, R⁴=H), 10 мл безводного тетрагидрофурана и 10 мл диэтилацеталя диметилформамида перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, получая остаток красно-оранжевого цвета. Кристаллизация из смеси гексан-этилацетат дала 0,716 г соединения A3 (производное 3, где R¹=Cl, R²=Cl, R⁴=H) в виде красного твердого вещества, t_пл 196-198° C.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 10,21 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,43-7,56 (m, 4H), 7,32 (dd, J=3,9 Гц, 1H), 7,00 (d, J=9 Гц, 1H), 6,60 (d, J=3 Гц, 1Н), 3,27 (s, 6H).

Этап в: превращение диметиламинометиленового производного 3 в пиразол 4

1.4 Соединение А4: R¹=Cl, R²=Cl, R³=R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

К раствору 0,265 г (0,71 ммоля) в 10 мл безводного метиленхлорида прибавляли примерно 39,8 мкл (1,27 ммоля) безводного гидразина. Смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 85 минут, затем растворяли в метиленхлориде и промывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 0,219 г соединения А4 (пиразол 4, где R¹=Cl, R²=Cl, R³=R⁴=H) в виде желтовато-коричневого твердого вещества. Аналитический образец фильтровали через невысокий слой силикагеля, элюируя этилацетатом, и затем перекристаллизовали из этилацетата, t_пл>300° C.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,07 (s, 1H, NH), 8,03 (s, 1H, NH), 7,58 (s, 1H), 7,4-7,5 (m, 4H), 7,17 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 6,79 (d, J=9 Гц, 1Н), 6,25 (s, 1H).

Следующие пиразолы (соединение 4) получали в соответствии со схемой 1 и как описано выше в этапах а-в.

1.5 Соединение А5: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=H, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

 ¹Н-ЯМР (AMCO-d₆, 300 МГц): 9,16 (s, 1H, NH), 7,90 (dd, J=2,8 Гц, 1H), 7,4-7,6 (m, 5Н), 7,08 (d, J=2 Гц, 1H), 6,75 (d, J=8 Гц, 1Н).

1.6 Соединение А6: R¹=Cl, R²=H, R³=H, R⁴=H

5-фенил-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 200 МГц): 7,97 (s, 1H, NH), 7,62 (s, 1 H), 7,35-7,60 (m, 5H), 7,29 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 6,93 (d, J=9 Гц, 1H), 6,60 (d, J=2 Гц, 1H).

1.7 Соединение А7: R¹=Cl, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 12,10 (s, 1H, NH), 8,01 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,18-7,33 (m, 3H), 6,83 (d, J=8 Гц, 1H), 6,47 (s, 1H).

1.8 Соединение А8: R¹=Cl, R²=Cl, R³=H, R⁴=Cl

5-(2,4-дихлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 12,09 (s, 1H, NH), 8,05 (s, 1H, NH), 7,68 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,52 (d, J=10 Гц, 1H), 7,48 (d, J=10 Гц, 1H), 7,19 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 6,78 (d, J=9 Гц, 1H), 6,27 (d, J=2 Гц, 1H).

1.9 Соединение А9: R¹=H, R²=H, R³=H, R⁴=H

5-фенилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,04 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,32-7,47 (m, 5H), 7,22 (dt, J=2, 8 Гц, 1H), 6,92 (d, J=8 Гц, 1H), 6,76 (d, J=8 Гц, 1H), 6,67 (dd, J=1, 8 Гц, 1H).

1.10 Соединение А10: R¹=H, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 200 МГц): 12.00 (s, 1H, NH), 7,79 (s, 1H), 7,32-7,56 (m, 3H), 7,00-7,32 (m, 3H), 6,78 (d, J=6 Гц. 1H), 6,48 (d, J=6 Гц, 1H).

1.11 Соединение A11: R¹=F, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆, 200 МГц): 12,10 (s, 1H, NH), 7,85 (s, 1H), 7,4-7,7 (m, 3H), 7,18-7,39 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 6,86 (m, 1H), 6,26 (уш. d, J=8 Гц, 1H).

1.12 Соединение А12: R¹=СН₃О, R²=Cl, R³=H, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-метоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 200 МГц): 12,00 (s, 1H, NH), 7,35-7,60 (m, 5H), 6,81 (d, J=8 Гц, 1H), 6,75 (d, J=8 Гц, 1H), 5,89 (s, 1H), 3,46 (s, 3H).

1.13 Соединение А13: R¹=NO₂, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,14 (s, 1H, NH), 9,06 (s, 1H, NH), 7,89 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,4-7,5 (m, 2H), 6,76 (d, J=9 Гц, 1Н).

1.14 Соединение А14: R¹=СН₃SO₂, R²=H, R³=H, R⁴=H

5-фенил-7-метансульфопилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,18 (s, 1H, NH), 8,54 (s, 1 H, NH), 7,72 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,43 (m, 5H), 7,14 (d, J=2 Гц, 1Н), 7,06 (d, J=9 Гц, 1H), 3,01 (s, 3H).

1.15 Соединение А15: R¹=CN, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-цианопиразоло[3,3][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,16 (s, 1H, NH), 8,63 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4-7,58 (m, 3H), 7,2-7,37 (m, 2H), 6,82 (dd, J=2,8 Гц, 1Н), 6,78 (s, 1H).

1.16 Соединение А16: R¹=NO₂, R²=H, R³=H, R⁴=H

5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,19 (s, 1H, NH), 8,96 (s, 1H, NH), 8,03 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,35-7,5 (m, 6Н), 6,94 (d, J=9 Гц, 1Н).

1.17 Соединение А17: R¹=NO₂, R²=CF₃, R³=H, R⁴=H

5-(2-трифторметилфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,12 (s, 1H, NH), 9,18 (s, 1H, NH), 7,45-7,9 (m, 6H), 7,00 (s, 1H), 6,71 (d, J=9 Гц, 1Н).

1.18 Соединение А18: R¹=CO₂CH₃, R²=H, R³=H, R⁴=H

5-фенил-7-карбометоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,15 (s, 1H, NH), 8,42 (s, 1H, NH), 7,78 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,35-7,45 (m, 5H), 7,29 (d, J=2 Гц, 1H), 6,93 (d, J=9 Гц, 1H), 3,66 (s, 3H).

1.19 Соединение А19: R¹=I, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-иодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹H-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,09 (s, 1H, NH), 7,99 (s, 1H, NH), 7,58 (s, 1H), 7,4-7,55 (m, 3H), 7,19-7,35 (m, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,62 (d, J=8 Гц, 1Н).

1.20 Соединение А20: R¹=CO₂Et, R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-карбоэтоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,08 (s, 1H, NH), 8,50 (s, 1H, NH), 7,62 (d, J=8 Гц, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,4-7,5 (m, 2H), 7,18-7,35 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 6,80 (d, J=8 Гц, 1Н), 4,15 (q, J=6 Гц, 2Н), 1,17 (t, J=6 Гц, 3Н).

1.21 Соединение A21: R¹=H, R²=Cl, R³=H, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 11,95 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,38-7,48 (m, 4H), 7,09 (t, J=8 Гц, 1H), 6,78 (t, J=8 Гц, 1H), 6,61 (t, J=8 Гц, 1H), 6,34 (d, J=8 Гц, 1H).

Пример 2: превращение тиолактама 2 в замещенный пиразол 7 в соответствии со схемами 2 и 3

2.1 Соединение Б1: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=2-пирролил, R⁴=H (схема 2)

3-(2-пирролил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Смесь 0.995 г (3 ммоля) тиолактама 2 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=2-пирролил, R⁴=H), 0,571 г (6 ммолей) пиррол-2-карбоксальдегида, 0,383 г (4,5 ммоля) пиперидина (Aldrich) и 10 мл диметоксиэтана перемешивали под аргоном в течение 2 часов. Смесь растворяли в этилацетате и промывали последовательно 0,1 М серной кислотой, водой, затем насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соответствующий олефин 5 выделяли хроматографией на силикагеле (элюирование смесью гексан/этилацетат (1:1)) в виде красного твердого вещества (0,309 г) и непосредственно использовали на следующем этапе. Олефин 5 (0,309 г) растворяли в 6 мл диметилсульфоксида и вводили в реакцию с 72,5 мг (2,2 ммоля) гидразина в атмосфере аргона. Через 20 мин смесь растворяли в этилацетате и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая смесь дигидропиразолов 6 (0,296 г). Смесь соединений 6 растворяли в диметилсульфоксиде и нагревали в присутствии воздуха при 130°С в течение 2 часов, охлаждали, растворяли в этилацетате и промывали последовательно водой и затем насыщенным раствором соли. Экстракт сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт 7 (соединение Б1) очищали хроматографией на силикагеле (элюирование смесью гексан-этилацетат, 25/75).

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,12 (s, 1Н, NH), 10,39 (s, 1H, NH), 9,07 (s, 1H, NH), 7,96 (dd, J=2, 8 Гц, 1H), 7,45-7,65 (m, 4H), 7,15 (d, J=2 Гц, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,79 (d, J=8 Гц, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,12 (d, J=2 Гц, 1H).

2.2 Соединение Б2: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CO₂Et, R⁴=H (схема 3)

3-карбоэтокси-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Смесь 5,0 г (15,1 ммоля) тиолактама 2 (R¹=NO₂, R²=Cl), 6 мл 50% раствора этилового эфира глиоксалевой кислоты в толуоле, 4,5 мл (31 ммоль) диазабициклоундекана и 100 мл диметоксиэтана перемешивали в атмосфере аргона в течение 30 минут при комнатной температуре. Смесь подкисляли 0,005 М серной кислотой, экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Альдольный аддукт 8 получали в виде смеси диастереомеров (5,6 г) с помощью хроматографии на силикагеле (элюирование смесью гексан-этилацетат, 60/40).

Смесь 4,7 г (10,8 ммоля) альдольного аддукта 8, полученного выше, 100 мл пиридина и 6,9 мл (54,4 ммоля) триметилхлорсилана перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре и затем нагревали при 120° С в течение 1,5 часа. Смесь охлаждали, растворяли в 1 л этилацетата и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли, органический слой сушили над безводным сульфатом натрия. После фильтрации и упаривания летучих веществ при пониженном давлении неочищенный остаток фильтровали через слой силикагеля, элюируя смесью гексан-этилацетат (1:1), получали 4,3 г олефина 5.

Раствор 4,3 г олефина 5, полученного выше, в 210 мл дихлорметана перемешивали с 0,68 мл (21,6 ммоля) безводного гидразина в течение 30 минут. Затем смесь распределяли между водой и дихлорметаном, водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при уменьшенном давлении. Остаток, который содержал смесь дигидропиразолов 6, растворяли в 50 мл диметилсульфоксида и нагревали при 130° С в присутствии воздуха в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали, растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гексан-этилацетат (40/60), получали 0,580 г соединения Б2 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CO₂Et₂, R⁴=H).

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 13,33 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 8,02 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,46-7,55 (m, 4H), 7,18 (d, J=2 Гц, 1H), 6,89 (d, J=9 Гц, 1 Н), 4,25 (q, J=7 Гц, 2Н), 1,27 (t, J=7 Гц, 3Н).

Следующие пиразолы (соединение 7) получены в соответствии со схемой 2 или 3, как описано выше.

2.3 Соединение Б3: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,85 (s, 1H, NH), 9,04 (s, 1H, NH), 7,83 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,39-7,52 (m, 4H), 7,05 (d, J=2 Гц, 1Н), 6,69 (d, J=9 Гц, 1Н), 1,98 (s, 3H).

2.4 Соединение Б4: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=СН₂СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-этил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,91 (s, 1H, NH), 9,05 (s, 1H, NH), 7,85 (dd, J=2,8 Гц, 1H), 7,35-7,58 (m, 4H), 7,04 (d, J=2 Гц, 1H), 6,71 (d, J=8 Гц, 1H), 2,41 (q, J=7 Гц, 2Н), 1,06 (t, J=7 Гц, 3Н).

2.5 Соединение Б5: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂CH₂Ph, R⁴=H (схема 2)

3-(2-фенилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 200 МГц): 11,95 (s, 1H, NH), 9,05 (s, 1H, NH), 7,82 (dd, J=2,8 Гц, 1H), 7,05-7,60 (m, 10Н), 6,70 (d, J=8 Гц, 1H), 2,82 (m, 2Н), 2,64 (m, 2H).

2.6 Соединение Б6: R²=NO₂, R²=Cl, R³=i-Pr, R⁴=H (схема 2)

3-(1-метилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,90 (s, 1H, NH), 9,02 (s, 1H, NH), 7,84 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,35-7,55 (m, 4H), 7,04 (d, J=2 Гц, 1H), 6,74 (d, J=9 Гц, 1H), 2,86 (sept, J=9 Гц, 1H), 1,14 (d, J=9 Гц, 6Н).

2.7 Соединение Б7: R¹=CN, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбонитрил.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,05 (s, 1H, NH), 8,55 (s, 1H, NH), 7,45 (m, 3Н), 7,25 (m, 2H), 6,78 (d, J=8 Гц, 1H), 6,71 (s, 1H), 2,03 (s, 3Н).

2.8 Соединение Б8: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂Ph, R⁴=H (схема 2)

3-(фенилметил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,08 (s, 1H, NH), 9,08 (s, 1H), 7,85 (d, J=9 Гц, 1H), 7,40-7,56 (m, 4H), 7,16-7,34 (m, 5Н), 7,06 (уш. s, 1 Н), 6,71 (d, J=9 Гц, 1Н), 3,71 (s, 2H).

2.9 Соединение Б9: R¹=CO₂Et, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-карбоэтоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): R^l=CO₂Et, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-карбоэтоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,81 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,59 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,39-7,51 (m, 2H), 7,16-7,31 (m, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,74 (d, J=9 Гц, 1H), 4,08 (q, J=7 Гц, 2H), 2,04 (s, 3Н), 1,12 (t, J=7 Гц, 3Н).

2.10 Соединение Б10: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=5-(4-Ме)пиразолил, R⁴=H (схема 2)

3-(4-метилпиразол-5-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 12,58 (s, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,75 (уш. s, 1H), 7,95 (d, J=8 Гц, 1H), 7,42-7,6 (m, 5H), 7,12 (s, 1H), 6,81 (d, J=8 Гц, 1H), 2,32 (s, 3Н).

2.11 Соединение Б11: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂-iPr, R⁴=H (схема 2)

3-(2-метилпропил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 11,91 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,87 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,4-7,56 (m, 4H), 7,08 (d, J=2 Гц, 1H), 6,74 (d, J=9 Гц, 1H), 2,28 (d, J=7 Гц, 2H), 1,89 (d, J=7 Гц, 1H), 0,88 (d, J=7 Гц, 6Н).

2.12 Соединение Б12: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=СF₃, R⁴=H (схема 3)

3-трифторметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (CDCl₃+ДMCO-d₆, 300 МГц): 7,98 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,2-7,6 (m, 6H), 7,02 (уш. s, 1H), 6,62 (d, J=9 Гц, 1H).

2.13 Соединение Б13: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=1-тиазолил, R⁴=H (схема 3)

3-(1-тиазолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 13,08 (s, 1H), 9,21 (s, 1H), 7,88-7,92 (m, 2H), 7,84 (d, J=3 Гц, 1H), 7,42-7,62 (m, 4H), 7,12 (d, J=2 Гц, 1H), 6,79 (d, J=8 Гц, 1H).

2.14 Соединение Б14: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=4-имидазолил, R⁴=H (схема 2)

3-(4-имидазолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,33 (s, 1H), 12,29 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 7,90 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,44-7,63 (m, 4H), 7,35 (s, 1H), 7,11 (d, J=2 Гц, 1H), 6,78 (d, J=9 Гц, 1Н).

2.15 Соединение Б15: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=2-пиpaзoлил, R⁴=H (схема 2)

3-(2-пиразолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 13,11 (s, 1H), 12,48 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 7,93 (d, J=9 Гц, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,39-7,60 (m, 4H), 7,11 (с, 1Н), 6,78 (d, J=9 Гц, 1H), 6,59 (s, 1H).

2.16 Соединение Б16: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=3-пиразолил, R⁴=H (схема 2)

3-(3-пиразолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 13,09 (s, 1H), 12,31 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 7,80-8,05 (m, 4H), 7,40-7,62 (m, 3Н), 7,13 (s, 1H), 6,78 (d, J=9 Гц, 1Н).

2.17 Соединение Б17: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH(Me)CH₂Me, R⁴=H (схема 2)

3-(1-метилпропил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 11,90 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 7,85 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,38-7,55 (m, 4H), 7,05 (d, J=2 Гц, 1H), 6,72 (d, J=9 Гц, 1H), 2,65 (m, 1H), 1,52 (m, 2H), 1,13 (d, J=7 Гц, 3Н), 0,79 (t, J=8 Гц, 3Н).

2.18 Соединение Б18: R¹=MeO, R²=Cl, R³=CH₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-метоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 11,69 (s, 1H), 7,34-7,50 (m, 5H), 6,77 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 6,72 (d, J=9 Гц, 1H), 5,86 (d, J=9 Гц, 1H), 5,85 (d, J=2 Гц, 1H), 3,44 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

2.19 Соединение Б19: R¹=Cl, R²=H, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенил-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 11,85 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,46-7,52 (m, 2H), 7,39-7,44 (m, 3Н), 7,29 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 6,92 (d, J=9 Гц, 1Н), 6,62 (d, J=2 Гц, 1H), 2,16 (s, 3Н).

2.20 Соединение Б20: R¹=Cl, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,78 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,38-7,55 (m, 4H), 7,17 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 6,75 (d, J=9 Гц, 1Н), 6,22 (d, J=2 Гц, 1Н), 2,03 (s, 3H).

2.21 Соединение Б21: R¹=H, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,75 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,36-7,52 (m, 2H), 7,04-7,30 (m, 3H), 6,77 (d, J=8 Гц, 1H), 6,63 (t, J=8 Гц, 1Н), 6,50 (d, J=8 Гц, 1H), 2,07 (s, 3H).

2.22 Соединение Б22: R¹=F, R²=H, R³=CH₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенил-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 11,85 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,46-7,55 (m, 2H), 7,35-7,43 (m, 2H), 7,11 (dt, J=3, 9 Гц, 1H), 6,92 (dd, J=5,9 Гц, 1H), 6,41 (dd, J=3, 10 Гц, 1H), 2,14(s, 3H).

2.23 Соединение Б23: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=фенил, R⁴=H (схема 2)

3-фенил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,65 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 7,95 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,78 (d, J=8 Гц, 2H), 7,32-7,63 (m, 7H), 7,14 (d, J=2 Гц, 1H), 6,85 (d, J=9 Гц, 1H).

2.24 Соединение Б24: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=н-пропил, R⁴=H (схема 2)

3-пропил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 11,91 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,86 (d, J=8 Гц, 1H), 7,41-7,53 (m, 4H), 7,08 (s, 1H), 6,72 (d, J=8 Гц, 1H), 2,38 (t, J=8 Гц, 2H), 1,54 (tq, J=8, 7 Гц, 2H), 0,88 (t, J=7 Гц, 3Н).

2.25 Соединение Б25: R¹=NO₂, R²=Cl, R³-циклопропил, R⁴=H (схема 2)

3-циклопропил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 400 МГц): 11,72 (s, 1H), 9,05 (s, 1 Н), 7,87 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,41-7,55 (m, 4H), 7,08 (d, J=2 Гц, 1H), 6,72 (d, J=9 Гц, 1H), 1,79 (p, J=7 Гц, 1H), 0,88 (d, J=7 Гц, 4Н).

2.26 Соединение Б26: R¹=F, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,82 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,41-7,58 (m, 2H), 7,18-7,35 (m, 2H), 7,05 (dt, J=3, 9 Гц, 1H), 6,84 (dd, J=6,9 Гц, 1H), 6,25 (dd, J=3,9 Гц, 1H), 2,08 (s, 3H).

2.27 Соединение Б27: R¹=NO₂, R²=H, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Соединение Б28: R¹=H, R²=H, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,78 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 3Н), 7,20 (dt, J=1,8 Гц, 1Н), 6,88 (d, J=8 Гц, 1Н), 6,75 (t, J=8 Гц, 1H), 6,68 (dt, J=1,8 Гц, 1H), 2,14 (s, 3Н).

2.29 Соединение Б29: R¹=I, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-йодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,81 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,39-7,57 (m, 3Н), 7,18-7,36 (m, 2H), 6,75 (s, 1H), 6,59 (d, J=9 Гц, 1H), 2,07 (s, 3Н).

2.30 Соединение Б30: R¹=H, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

2.31 Соединение Б31: R¹=NO₂, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,90 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 7,87 (dd, J=3,9 Гц, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,18-7,32 (m, 3Н), 6,73 (d, J=9 Гц, 1H), 2,02 (s, 3Н).

2.32 Соединение Б32: R¹=Cl, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,81 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,40-7,55 (m, 2H), 7,17-7,32 (m, 3Н), 6,79 (d, J=9 Гц, 1H), 6,42 (s, 1H), 2,08 (s, 3Н).

Соединение БЗЗ: R¹=I, R²=H, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенил-7-йодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,82 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,36-7,55 (m, 6H), 6,91 (d, J=2 Гц, 1H), 6,70 (d, J=9 Гц, 1H), 2,15 (s, 3Н).

2.34 Соединение Б34: R¹=Br, R²=H, R³=СН₃, R⁴=H (схема 2)

3-метил-5-фенил-7-бромпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 7,89 (s, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,38 (m, 4H), 6,85 (d, J=9 Гц, 1H), 6,74 (d, J=2 Гц, 1H), 2,15 (s, 3Н).

2.35 Соединение БЗЗ: R¹=CN, R²=F, R³=CH₂OH, R⁴=H (схема 3)

3-гидроксиметил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбонитрил.

Пример 3: модификация функциональных групп в соответствии со схемой 4

Как упомянуто выше со ссылкой на схему 4, некоторые соединения могут быть легко получены трансформацией имеющихся функциональных групп. Некоторые из этих трансформаций дополнительно приведены ниже в виде примеров.

А. Замещение йода карбонилом: R¹=I в R¹=CONRR'

3.1 Соединение B1: R¹=CONC(-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-), R²=F, R³=H, R⁴=H

5-(2-фторфенил)-7-морфолинилкарбонилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Смесь 0,0712 г (0,17 ммоля) пиразола 4 (R¹=I, R²=F, R³=H, R⁴=H), 0,0082 г (0,0012 ммоля) катализатора дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия, 1 мл морфолина перемешивали и нагревали (75° С) в атмосфере моноксида углерода в течение 90 минут. Смесь охлаждали и затем очищали хроматографией на обращенной фазе силикагеля (градиентное элюирование смесью вода-ацетонитрил), получая 0,06 г соединения B1 (пиразол 4, в котором R¹=CON(-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-), R²=F, R³=H, R⁴=H).

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,02 (s, 1H, NH), 8,18 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4-7,5 (m, 2H), 7,18-7,35 (m, 3H), 6,84 (d, J=9 Гц, 1Н), 3,25 (m, 8H).

Следующие соединения получены с использованием приведенного выше метода А.

3.2 Соединение В2: R^l=CONHCH₂CH₂OH, R²=F, R³=H, R⁴=H

N-(2-гидроксиэтил)-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,08 (s, 1H, NH), 8,20 (s, 1H, NH), 8,16 (m, 1H, NH), 7,61 (d, J=9 Гц, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,4-7,5 (m, 2H), 7,14-7,3 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,89 (d, J=9 Гц, 1H), 4,63 (m, 1H, ОН), 3,40 (m, 2H), 3,18 (m, 2H).

3.3 Соединение В3: R¹=CON(CH₂CH₂OH)₂, R²=F, R³=H

N,N-бис(2-гидроксиэтил)-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,10 (s, 1H, NH), 8,11 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4-7,52 (m, 2H), 7,15-7,3 (m, 3H), 6,80 (d, J=9 Гц, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,65 (m, 2H, ОН), 3,30 (m, 8H).

Б. Восстановление нитрогруппы в аминогруппу: R¹=NO₂ в R¹=NH₂

3.4 Соединение В4: R¹=NH₂, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Раствор 0,20 г (0,57 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H) в 8 мл этанола перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода с Ni-Ренея (0,5 мл 5-% суспензии в воде, промытой этанолом непосредственно перед использованием). Через 4 часа смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 0,177 г соединения В4 (аминопроизводного 7, в котором R¹=NH₂, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H), t_пл 260-263° С.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,62 (s, 1H), 7,38-7,47 (m, 4H), 7,07 (s, 1H), 6,53 (d, J=8 Гц, 1H), 6,38 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 5,74 (d, J=2 Гц, 1Н), 4.52 (s, 2H), 2,06 (s, 3Н).

Следующие соединения получены с использованием приведенного выше метода Б.

3.5 Соединение В5: R¹=NH₂, R²=Cl, R³=H, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (CD₃OD, 300 МГц): 7,35-7,55 (m, 5H), 6,72 (dd, J=3,7 Гц, 1H), 6,62 (d, J=7 Гц, 1H), 6,13 (d, J=3 Гц, 1H).

3.6 Соединение В6: R¹=NH₂, R²=Cl, R³=i-Pr, R⁴=H

3-(1-метилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,65 (s, 1H), 7,38-7,4 (m, 4H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, J=8 Гц, 1H), 6,39 (dd, J=2, 8 Гц, 1H), 5,74 (d, J=2 Гц, 1Н), 2,98 (sept, J=7 Гц, 1H), 1,18 (d, J=7 Гц, 6Н).

В. Превращение аминосоединений в производные: R¹=NH₂ в R¹=NHR' (как показано выше на схеме 4)

3.7 Соединение В7: R¹=NHAc, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)ацетамид.

Суспензию 0,323 г (1 ммоль) пиразола 7 (R¹=NH₂, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H) в 20 мл дихлорметана вводили в реакцию с 0,112 г (1,1 ммоля) уксусного ангидрида в инертной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем смесь разбавляли этилацетатом и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли. Водные слои экстрагировали этилацетатом, объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гексан-этилацетат (30/70), получали 0,175 г соединения В7.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,71 (s, 1H), 9,56 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,38-7,57 (m, 5H), 6,67 (d, J=8 Гц, 1H), 6,57 (d, J=2 Гц, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,83 (s, 3H).

Следующие соединения получены аналогично соединению В7 в соответствии с описанным выше методом В.

3.8 Соединение В8: R¹=акрилоил-NН, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)-2-пропенамид.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,71 (s, 1H), 9,78 (s, 1H), 7,63 (s, 1 Н), 7,52 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,35-7,50 (m, 4H), 6,71 (d, J=9 Гц, 1H), 6,69 (d, J=2 Гц, 1H), 6,23 (dd, J=10,18 Гц, 1H), 6,08 (dd, J=2,18 Гц, 1H), 5,60 (dd, J=2,10 Гц, 1H), 2,05 (s, 3H).

3.9 Соединение В9: R¹=СН₃SO₂NН, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)метансульфонамид.

Смесь 0,323 г (1 ммоль) пиразола 7 (R¹=NH₂, R²=Cl, R³=СН₃, R⁴=H), 0,122 г (1 ммоль) 4-диметиламиноиридина и 5 мл тетрагидрофурана перемешивали в инертной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь разбавляли этилацетатом и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли при повторной экстракции водных слоев этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гексан-этилацетат (10/90), получали 0,244 г соединения В9 (пиразол 7, в котором R¹=СН₃SO₂NН, R²=Сl, R³=СН₃, R⁴=H) (перекристаллизация из этилацетата), t_пл 196-198° С.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,74 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,36-7,46 (m, 4H), 6,94 (dd, J=2, 8 Гц, 1H), 6,72 (d, J=8 Гц, 1H), 6,31 (d, J=2 Гц, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

Г. Аминолиз R³=CO₂Et в R³=CONRR'

3.10 Соединение B10: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CONH₂, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксамид.

Перемешивали 0,15 г (0,36 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CO₂Et, R⁴=H) с раствором аммиака (15 мл) в этаноле (50 мл) при комнатной температуре в течение 48 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, продукт очищали хроматографией на силикагеле. Элюирование смесью этилацетат-изопропанол (95/5) дало 0,074 г соединения В 10 (пиразол 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CONH₂, R⁴=H) в виде твердого вещества, t_пл&γτ;_{340° C (перекристаллизация из этилацетата).}

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 400 МГц): 12,95 (уш. s, 1H), 9,23 (уш. s, 1H), 7,92 (d, J=8 Гц, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,45-7,61 (m, 4H), 7,21 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, J=8 Гц, 1H).

Следующие соединения получены аналогично соединению В10 с использованием приведенного выше метода Г.

3.11 Соединение В11: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CONMe₂, R⁴=H

N,N-диметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксамид

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,65 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 7,91 (d, J=9 Гц, 1H), 7,41-7,55 (m, 4H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, s=9 Гц, 1H), 3,01 (s, 3H).

3.12 Соединение В12: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CONHNH₂, R⁴=H

N-амино-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксамид.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 13,02 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,58 (t, J=5 Гц, 1H), 7,91 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,41-7,62 (m, 4H), 7,09 (d, J=2 Гц, 1Н), 6,75 (d, J=9 Гц, 1H), 4,54 (d, J=5 Гц, 2Н).

Д. Восстановление R¹=CO₂Et в R³=CHO и R³=СН₂ОН

3.13 Соединение В13: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CHO, R⁴=H; и

Соединение В14: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂OH, R⁴=H

Смесь 0,48 г (1,17 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CO₂Et, R⁴=H) и 30 мл тетрагидрофурана при -15° С в инертной атмосфере обрабатывали 1,52 мл 1 M раствора алюмогидрида лития в тетрагидрофуране в течение 30 минут. Затем смесь разбавляли этилацетатом, промывали последовательно водным раствором сульфата калия и насыщенным раствором соли, повторно экстрагируя промывки этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистка хроматографией на силикагеле при элюировании смесью гексан-этилацетат дала 0,21 г соединения В 13 (пиразол 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=СНО, R⁴=Н) в виде красного твердого вещества и 0,11 г соединения В 14 (пиразол 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂OH, R⁴=H) также в виде красного твердого вещества.

Соединение В13:

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксальдегид.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 13,29 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 9,27 (s, 1 Н), 7,96 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,45-7,59 (m, 4H), 7,13 (d, s=2 Гц, 1H), 6,79 (d, J=9 Гц, 1Н).

Соединение В14:

3-гидроксиметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,11 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,85 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,41-7,50 (m, 4H), 7,06 (d, J=2 Гц, 1H), 6,71 (d, J=9 Гц, 1H), 5,23 (t, J=5 Гц, 1H), 4,27 (d, J=5 Гц, 1H), 4,27 (d, J=5 Гц, 2Н).

Е. Восстановительное аминирование альдегида: R³=CHO в R³=CH₂NR²

3.14 Соединение В15: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂NMe₂, R⁴=H

3-(N,N-диметиламинометил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Суспензию 0,142 г (0,39 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CHO, R⁴=H), 0,0631 г (0,78 ммоля) гидрохлорида диметиламина, 0,11 мл (0,78 ммоля) триэтиламина, 0, 165 (1 ммоль) триацетоксиборгидрида натрия, 0,2 г молекулярных сит и 20 мл дихлорметана перемешивали в инертной атмосфере в течение 3 часов. Смесь фильтровали, разбавляли этилацетатом и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли, повторно экстрагируя водные слои этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистка хроматографией на обращенной фазе силикагеля (градиентное элюирование смесью вода-ацетонитрил-трифторуксусная кислота) дала 0,147 г соединения В 15 (пиразол 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂NMe₂, R⁴=H) в виде соли с трифторуксусной кислотой.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12.54 (s, 1Н), 9,92 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 7,91 (dd, J=2,8 Гц, 1H), 7,45-7,55 (m, 4H), 7,10 (d, J=2 Гц, 1H), 6,76 (d, J=8 Гц, 1H), 4,08 (s, 2H), 2,75 (s, 6H).

Ж. Алкилирование спиртов: R³=CH₂OH в R³=СН₂ОСН₃

3.15 Соединение В16: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂OCH₃, R⁴=H

3-метоксиметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

Смесь 0,075 г (0,2 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂OH, R⁴=H), 0,2 г силикагеля и 20 мл тетрагидрофурана перемешивали с раствором диазометана в эфире (50 мл, примерно 9,2 ммоля). Через 2 часа смесь фильтровали, концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на силикагеле, элюируя смесью гексан-этилацетат, получали соединение В 16 (пиразол 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CH₂OCH₃, R⁴=H) в виде красного твердого вещества.

 ¹Н-ЯМР (ДMCO-d₆, 300 МГц): 12,27 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 7,86 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,43-7,50 (m, 4H), 7,06 (d, J=2 Гц, 1H), 6,72 (d, J=9 Гц, 1Н), 4,20 (s, 2H), 3,25 (s, 3H).

З. Метиленирование альдегида: R³=CHO в R³=CHCH₂

3.16 Соединение В17: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CHCH₂, R⁴=H

3-этенил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

К раствору метилентрифенилфосфорана, полученного взаимодействием 0,109 г (0,31 ммоля) бромида метилтрифенилфосфония в 5 мл тетрагидрофурана и 0,29 мл 1 М раствора трет.-бутоксида калия в тетрагидрофуране при -78° С в инертной атмосфере прибавляли 0,080 г (0,22 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CHO, R⁴=H). Смесь нагревали до кипения и перемешивали в течение ночи, после чего смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли. Органический экстракт сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистка хроматографией на силикагеле при элюировании смесью гексан-этилацетат (70/30) дала 0,043 г соединения В 17 (пиразола 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CHCH₂, R⁴=H) в виде красного твердого вещества.

 ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 12,33 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 7,88 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,40-7,50 (m, 4H), 7,08 (d, J=2 Гц, 1H), 6,74 (d, J=9 Гц, 1H), 6,40 (dd, J=12,18 Гц, 1H), 5,85 (d, J=18 Гц, 1H), 5,36 (d, J=12 Гц, 1Н).

И. Дегидратация амида: R³=CONH₂ в R³=CN

3.17 Соединение В18: R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CN, R⁴=H

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбонитрил.

Смесь 0,47 г (1,23 ммоля) пиразола 7 (R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CONH₂, R⁴=H), 0, 34 г (2,46 ммоля) карбоната калия, 0,94 г (6,15 ммоля) хлорокиси фосфора и 20 мл ацетонитрила нагревали при кипении в течение 4 часов в инертной атмосфере. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и промывали последовательно насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором соли, дополнительно экстрагируя водные слои этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле, элюируя смесью гексан-этилацетат (70/30), получали 0,24 г соединения В 18 (пиразола 7', в котором R¹=NO₂, R²=Cl, R³=CN, R⁴=H) в виде оранжевого твердого вещества (перекристаллизация из дихлорметана), t_пл 193-196° С.

ИК-спектр (КBr): 2240 см^-1. ¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 9,36 (s, 1H), 7,96 (dd, J=2, 9 Гц, 1H), 7,48-7,58 (m, 4H), 7,11 (d, J=2 Гц, 1H), 6,77 (d, J=9 Гц, 1H).

К. Гидролиз нитрила: R¹=CN в R¹=CONH₂

3.18 Соединение В19: R¹=CONH₂, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H 3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид.

К раствору 0,5 г (1,6 ммоля) пиразола 7 (R¹=CN, R²=F, R³=СН₃, R⁴=H) в 79 мл диметилсульфоксида прибавляли 47 мл охлажденной льдом перекиси водорода (30% водный раствор) и 24 мл 1 М раствора гидроксида натрия. После завершения реакции смесь экстрагировали этилацетатом, экстракты промывали последовательно водой, насыщенным раствором соли и затем сушили над безводным сульфатом натрия. Смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистка хроматографией на силикагеле (элюирование смесью этилацетатметанол (95/5)) дала 0,5 г соединения В 19 (пиразол 7, в котором R¹=CONH₂, R²=F, R³=CH₃, R⁴=H) в виде желтого твердого вещества, t_пл 323-324° С.

 ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц): 11,79 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,58 (dd, J=2,9 Гц, 1H), 7,38-7,52 (m, 2H), 7,02-7,30 (m, 4H), 6,73 (d, J=9 Гц, 1H), 2,05 (s, 3Н).

Дополнительные соединения, конкретно не внесенные выше в примеры 1-3, получены с применением методов, описанных выше. Данные соединения, обозначенные буквой “Г”, включены ниже в таблицы I-IV.

Пример 4. Антипролиферативная активность

Ниже приведены данные, характеризующие антипролиферативную активность соединений по изобретению. Представленные результаты свидетельствуют о том, что соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения рака, прежде всего твердых опухолей, таких как опухоли молочной железы и ободочной кишки.

Определение активности CDK2 с использованием планшета для экспресс-анализа

Для определения ингибирования активности CDK2 очищенным рекомбинантным протеином ретинобластомы (Rb) сенсибилизировали лунки 96-луночных планшетов для экспресс-анализа (фирма New England, Бостон, штат Массачусетс). Rb представляет собой природный субстрат для фосфорилирования с помощью CDK2 (см. Herwig и Strauss, Eur. J. Biochem., том 246, стр.581-601 (1997) и приведенные в работе ссылки). Рекомбинантные комплексы человеческий циклин E/CDK2 частично очищали из экстрактов клеток насекомых. Комплексы активный циклин E/CDK2 добавляли к сенсибилизированным с помощью Rb планшетам для экспресс-анализа в сочетании с ³³Р-АТФ и соответствующими разведениями тестируемых соединений. Планшеты инкубировали при встряхивании в течение 25 мин при комнатной температуре, затем промывали и подсчитывали радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика типа Topcount (фирма Packard Instrument Co., Даунерс Гров, штат Иллинойс). Разведения тестируемых соединений оценивали в каждом анализе с дублированием. Процент ингибирования фосфорилирования с помощью Rb, являющийся мерой ингибирования активности Rb, определяли с помощью следующей формулы:

где “тест. соедин.” обозначает среднее количество импульсов в минуту в опытах с дублированием, “неспециф.” обозначает среднее количество импульсов в минуту для варианта, когда не добавляли комплекс циклин E/CDK2, а "общ." обозначает среднее количество импульсов в минуту для варианта, когда не добавляли соединение.

Результаты описанных выше экспериментов in vitro представлены ниже в таблицах IA-IB.

В остальных таблицах положения заместителей R¹, R², R³ и R⁴ соответствуют таковым, указанным выше в таблице IA.

Таблица IБИнгибирование активности CDK2 - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 1-9,99 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴А6ClHHHА7ClFHHА9HHHHА10HFHHА11FFHHА14СН₃SO₂HHHА18СO₂СН₃HHHА19IFHHБ2NO₂ClCO₂EtHБ5NO₂ClCH₂CH₂PhHБ8NO₂ClCH₂PhHБ11NO₂ClСН₂-изо-PrHБ33IHСН₃HВ3CON(CH₂CH₂OH)₂FHHВ5NH2ClHH

В11NO₂ClCONMe₂HГ19NO₂Cl2-бензофуранилHГ20NO₂Cl2-индоилилHГ21NO₂Cl2-N-Me-пирролилHГ22CO₂HFHHГ23NO₂ClМета-ОН-PhHГ24NO₂ClПара-MePhHГ25NO₂ClМета-CNPhHГ26NO₂Cl2-(5-Ме)-тиофенилHГ27NO₂H3-пиридинилHГ28NO₂ClПара-
Me₂NPhHГ29NO₂ClОрто-CNPhHГ30NO₂ClМета-MePhHГ31NO₂ClМета-ЕtO-PhHГ32NO₂Cl2-(5-Et)-фуранилHГ33NO₂Cl2-нафтилHГ34NO₂H2-имидазолилHГ35CO₂NaHHHГ37NO₂ClОрто-MePhH

Анализ с использованием клеток

Негативную в отношении рецептора эстрогена линию клеток эпителиальной карциномы молочной железы (MDA-MB-435) получали из Американской коллекции типовых клеточных культур (АТСС, Роквилл, штат Мэриленд) и выращивали в среде, рекомендованной АТСС. Для анализа влияния тестируемых соединений на рост этих клеток клетки высевали в 96-луночные планшеты для культур ткани в количестве 2000 клеток на лунку и инкубировали в течение ночи при 37° С в атмосфере, содержащей 5% СO₂. На следующий день тестируемые соединения растворяли в 100%-ном диметилсульфоксиде (ДМСО), получая 10 мМ маточный раствор. Каждое соединение разводили стерильной средой до 1 мМ в количестве, достаточном для получения конечной концентрации 120 мкМ. Затем соединения серийно разводили средой с добавлением 1,2% ДМСО. Одну четвертую часть конечного объема разведенных соединений переносили в 96-луночные планшеты. Тестируемые соединения анализировали с дублированием. В ряд лунок, содержащих "контрольные клетки", добавляли ДМСО в таком количестве, чтобы конечная концентрация ДМСО в каждой лунке была равна 0,3%. Лунки, в которые не вносили клетки, служили в качестве "чистого контроля". Лунки, в которые не добавляли ингибитор, служили в качестве "контроля без ингибитора". Планшеты вновь помещали в термостат и через 5 дней после добавления тестируемого соединения проводили анализ согласно описанному ниже методу.

В каждую лунку добавляли бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия (тиазолиловый голубой; МТТ), получая конечную концентрацию в каждой лунке 1 мг/мл. Затем планшеты инкубировали в течение 3 ч при 37° С. Планшеты центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин перед аспирацией содержащей МТТ среды. Затем содержащую МТТ среду удаляли и в каждую лунку добавляли по 100 мкл 100%-ного этанола для того, чтобы растворить образовавшийся формазановый метаболит. Для того чтобы гарантировать полное растворение, планшеты встряхивали в течение 5 мин при комнатной температуре. С помощью планшет-ридера для титрационных микропланшетов (фирма Molecular Dynamics) измеряли величины абсорбции при длине волны 570 нм, используя в качестве эталонной длину волны 650 нм. Процент ингибирования вычисляли путем вычитания из величин абсорбции, измеренных для всех лунок, величин абсорбции, измеренных для лунок чистого контроля (не содержащих клеток), и последующего вычитания из 1,00 коэффициента, полученного делением средней величины абсорбции для каждых двух повторностей опыта на среднюю величину абсорбции, измеренной для контролей. Ингибирующие концентрации (IC₅₀) получали методом линейной регрессии с использованием графика зависимости логарифма концентрации от процента ингибирования.

Результаты описанного выше анализа с использованием клеток линии MDA-MB-435 представлены ниже в таблицах IIA-IIB.

Таблица IIААнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии MDA-MB-435 (карцинома молочной железы) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 0,01-1 мкМСоед.№R¹R²R³R⁴Б3NO₂ClСН₃HБ4NO₂ClСН₂СН₃HБ6NO₂ClИзо-PrHБ7CNFСН₃HБ22FHСН₃HБ25NO₂ClЦиклопропилHБ29NO₂HСН₃HБ31NO₂FСН₃HБ35CNFСН₂OНHВ4NH₂ClСН₃HВ7AcNHClСН₃HВ8Акрилоил-NHClСН₃HВ9MsNHClСН₃HВ13NO₂ClСНОHВ14NO₂ClСН₂OНHВ17NO₂ClСН=СН₂HГ3Me₂NSO₂NHClСН₃H

Таблица IIБАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии MDA-MB-435 (карцинома молочной железы) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 1,1-9,99 мкМСоед.№R¹R²R³R⁴А15CNFHHБ9Co₂EtFСН₃HБ10NO₂Cl5-(4-Ме)пиразолHБ12NO₂ClСF₃HБ14NO₂Cl4-имидазолилHБ16NO₂Cl3-пиразолилHБ18MeOClСН₃HБ19ClHСН₃HБ20ClClСН₃HБ21HFСН₃HБ30HClСН₃HВ6NH₂ClИзо-PrHВ16NO₂ClСН₂OmeHГ4ClCH₂NHSO₄NHClСН₃HГ5Морфолинил-SO₂NHClСН₃HГ51CON-морфолинамидFСН₃HГ52CONHCH₂CH₂ОНFСН₃HГ53CONHCH₂CH₂-N-морфолинилFСН₃H

Таблица IIBАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии MDA-MB-435 (карцинома молочной железы) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 10-30 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴А5NO₂ClHHА13NO₂FHHБ2NO₂ClCO₂EtHБ5NO₂ClCH₂CH₂PhHБ8NO₂ClCH₂PhHБ13NO₂Cl1-тиазолилHБ15NO₂Cl2-пиразолилHБ24NO₂ClПропилHВ5NO₂ClHHВ10NO₂ClCONH₂HВ15NO₂ClCH₂NMe₂HВ18NO₂ClCNHВ38NO₂Cl1-оксадиазолилH

Линию клеток аденокарциномы ободочной кишки SW480 и линию клеток карциномы ободочной кишки НСТ-116 получали также от АТСС и тестировали согласно такому же протоколу, который описан выше для анализа с использованием линии клеток MDA-MB-435, со следующими модификациями. Линию клеток SW480 высевали в количестве 1000 клеток на лунку и анализировали через 6 дней после добавления тестируемого соединения. Клетки линии НСТ-116 высевали в количестве 1000 клеток на лунку и анализировали через 4 дня после добавления тестируемого соединения.

Результаты указанного выше анализа с использованием линий клеток SW480 (аденокарцинома ободочной кишки) и НСТ-116 (карцинома ободочной кишки) представлены ниже в таблицах IIIA-IIIB и IVA-IVB соответственно.

Таблица IIIAАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии SW480 (аденокарцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 0,01-1 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴Б3NO₂ClСН₃НБ4NO₂ClСН₂СН₃НБ6NO₂ClИзо-PrНБ7CNFСН₃НБ10NO₂Cl5-(4-Ме)пиразолилНБ21HFСН₃НБ26FFСН₃НБ27NO₂HСН₃НБ31NO₂FСН₃НБ35CNFCH₂OHНB1CON-морфолинамидFННВ4NH₂ClСН₃НВ7AcNHClСН₃НВ8Акрилоил-NHClСН₃НВ9MsNHClСН₃НВ14NO₂ClCH₂OHНВ19CONH₂FСН₃НГ2NO₂CFsСН₃НГ51CON-морфолинамидFСН₃НГ52CONHCH₂CH₂OHFСН₃НГ53CONHCH₂CH₂-N-морфолинилFСН₃Н

Таблица IIIБАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии SW480 (аденокарцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 1,1-9,99 мкМСоед.№R¹R²R³R⁴А5NO₂ClHНА13NO₂FHНА15CNFHНБ1NO₂Cl2-пирролилНБ9CO₂EtFСН₃НБ18MeoClСН₃НБ19ClHСН₃НБ20ClClСН₃НБ22FHСН₃НБ25NO₂ClЦиклопропилНБ29IFСН₃НБ30HClСН₃НБ32ClFСН₃НГ3Me₂NSO₂NHClСН₃НГ4ClCH₂NHSO₄NHClСН₃НГ5Морфолинил-SO₄-NHClСН₃НГ50CONH₂FННТаблица IIIBАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии SW480 (аденокарцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 10-30 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴А9ННННА10НFННA11FFННА21НClННБ5NO₂ClCH₂CH₂PhНБ8NO₂ClCH₂PhНБ23NO₂ClPhНБ24NO₂ClПропилНБ33IНСН₃НВ5NH₂ClННВ12NO₂ClCONHNH₂НГ6NO₂Cl2-тиофенилН

Г7NO₂Cl2-фуранилНГ9NO₂Cl3-пиридинилНГ10NO₂Cl4-пиридинилНГ20NO₂Cl2-индолилНГ34BrHСН₃НГ37NO₂ClОрто-MePhНГ40NO₂ClОрто-СF₃PhНГ48NO₂Cl1-нафтилНТаблица IVAАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии НСТ 116 (карцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 0,01-1 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴Б3NO₂ClСН₃НБ4NO₂ClСН₂СН₃НТаблица IVБАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии НСТ 116 (карцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 1,1-9,99 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴А15CNFHНБ1NO₂Cl2-пирролилНБ6NO₂ClИзо-PrНБ7CNFСН₃НБ9CO₂EtFСН₃НБ10NO₂Cl5-(4-Ме)пиразолилНБ25NO₂ClЦиклопропилНВ12NO₂ClCONHNH₂НГ50CONH₂FНН

Таблица IVBАнализ антипролиферативной активности с использованием клеток линии НСТ 116 (карцинома ободочной кишки) - соединения, для которых значение IC₅₀ находится в диапазоне 10-30 мкМСоед. №R¹R²R³R⁴А5NO₂ClННА9ННННА10НFННА13NO₂FННА14СН₃SO₂НННА16NO₂НННА21НClННБ5NO₂ClCH₂CH₂PhНБ8NO₂ClCH₂PhНБ23NO₂ClPhНБ24NO₂ClПропилНВ1CON-морфолинамидFННВ2CONHCH₂CH₂OНFННВ5NH₂ClННГ6NO₂ClНилНГ7NO₂Cl2-фуранилНГ8NO₂Cl2-(3-Ме)тиофенилНГ9NO₂Cl3-пиридинилНГ10NO₂Cl4-пиридинилНГ11NO₂ClПара-MeSPhНГ12NO₂ClПара-СF₃ОPhНГ13NO₂ClОрто, мета-метилендиокси-PhНГ14NO₂ClПара-ОН-орто-MeOPhНГ18NO₂НЦиклопропилНГ19NO₂Cl2-бензофуранилНГ20NO₂Cl2-индоилилНГ37NO₂ClОрто-MePhНГ42NO₂ClМета-СF₃PhНГ43NO₂Cl4-N-пирролил-PhНГ48NO₂Cl1-нафтилНГ49NO₂Cl4-изохинолинилН

Пример 5: Состав таблеток

№ИнгредиентыМг/таблетку1Соединение 1*5251002505007502Безводная лактоза10383351938573Кросскармелоза натрия6681632484Повидон КЗО5561224365Стеарат магния111369 Общая масса120120150300600900*соединение 1 представляет собой соединение по изобретению

Процедура изготовления:

1. Смешивают ингредиенты 1, 2 и 3 в пригодном смесителе в течение 15 мин.

2. Гранулируют порошкообразную смесь, полученную на стадии 1 вместе с 20%-ным раствором повидона КЗО (ингредиент 4).

3. Гранулят, полученный на стадии 2, сушат при 50° С.

4. Гранулят, полученный на стадии 3, пропускают через пригодное устройство для размалывания.

5. К размолотому грануляту, полученному на стадии 4, добавляют ингредиент 5 и смешивают в течение 5 мин.

6. Прессуют гранулят, полученный на стадии 5, с помощью пригодного пресса.

Пример 6: Состав капсул

№ИнгредиентМг/капсулу1Соединение 1*5251002505002Безводная лактоза159123148--3Кукурузный крахмал25354035704Тальк10151012245Стеарат магния12236 Общая масса наполнителя200200300300600*соединение 1 представляет собой соединение по изобретению

Процедура изготовления:

1. Смешивают ингредиенты 1, 2 и 3 в пригодном смесителе в течение 15 мин.

2. Добавляют ингредиенты 4 и 5 и смешивают в течение 3 мин.

3. Полученным продуктом заполняют пригодную капсулу.

Пример 7: Состав раствора/эмульсии для инъекций

№ИнгредиентМг/мл1Соединение 1*1 мг2ПЭГ 40010-50 мг3Лецитин20-50 мг4Соевое масло1-5 мг5Глицерин8-12 мг6Водаq.s. 1 мл* соединение 1 представляет собой соединение по изобретению

Процедура изготовления:

1. Ингредиент 1 растворяют в ингредиенте 2.

2. Добавляют ингредиенты 3, 4 и 5 к ингредиенту 6 и смешивают до получения дисперсии, после чего гомогенизируют.

3. К смеси, полученной на стадии 2, добавляют раствор, полученный на стадии 1, и гомогенизируют до получения полупрозрачной дисперсии.

4. Продукт стерилизуют путем фильтрации через фильтр с размером пор 0,2 мкм и продуктом заполняют пузырьки.

Пример 8: Состав раствора/эмульсии для инъекций

№ИнгредиентМг/мл1Соединение 1*1 мг2Гликофурол10-50 мг3Лецитин20-50 мг4Соевое масло1-5 мг5Глицерин8-12 мг6Водаq.s. 1 мл* соединение 1 представляет собой соединение по изобретению

Процедура изготовления:

5. Ингредиент 1 растворяют в ингредиенте 2.

6. Добавляют ингредиенты 3, 4 и 5 к ингредиенту 6 и смешивают до получения дисперсии, после чего гомогенизируют.

7. К смеси, полученной на стадии 2, добавляют раствор, полученный на стадии 1, и гомогенизируют до получения полупрозрачной дисперсии.

8. Продукт стерилизуют путем фильтрации через фильтр с размером пор 0,2 мкм и продуктом заполняют пузырьки.

Хотя изобретение было описано со ссылкой на конкретные и предпочтительные варианты осуществления, специалистам в данной области должно быть очевидно, что с помощью стандартных экспериментов и опытов могут быть разработаны другие варианты и модификации. Таким образом, подразумевается, что объем изобретения не ограничивается приведенным выше описанием, а определяется приведенными ниже пунктами формулы изобретения и их эквивалентами.

Настоящее изобретение относится к новым пиразолобензодиазепинам, имеющим формулу:

где R¹ означает водород, -NO₂, -CN, галоид, -OR⁵, -COOR⁷, -CONR⁸R⁹, -NR¹⁰R¹¹, -NHCOR¹², -NHSO₂R¹³; R² и R⁴ каждый независимо друг от друга означает водород, галоид, -NO₂, -CF₃; R³ означает водород, циклоалкил, содержащий 3-8 атомов углерода, арил, представляющий собой ароматическую группу, содержащую 6-10 атомов углерода и состоящую из 1 или 2 колец, гетероарил, имеющий 5-10 атомов, 1 или 2 кольца и содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, -COOR⁷, -CN, алкенил, имеющий 2-6 атомов углерода, -CONR⁸R⁹, или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен группой OR⁹, F или вышеуказанным арилом; R⁵ означает алкил, имеющий 1-6 атомов углерода; R⁷ означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода; R⁸ и R⁹ каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен гидроксигруппой или NH₂; альтернативно R⁸ и R⁹ могут образовать морфолиногруппу; R¹⁰, R¹¹ и R¹² каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода; R¹³ означает алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен галоидом или -NR¹⁴R¹⁵; R¹⁴ и R¹⁵ каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен галоидом, или альтернативно -NR¹⁴R¹⁵ означает морфолиногруппу; или фармацевтически приемлемым солям упомянутых выше соединений. Кроме того, изобретение относится к определенным производным пиразолобензодиазепина, промежуточным тиолактамам для получения соединений формулы (I) и фармацевтической композиции на их основе. Соединения согласно изобретению и фармацевтическая композиция их содержащая ингибируют циклинзависимые киназы CDK2. Они являются антипролиферативными агентами, применяемыми в лечении или контроле нарушений клеточной пролиферации, в частности опухолей грудной железы, ободочной кишки, легкого и предстательной железы. 5 н. и 15 з.п. ф-лы, 16 табл.

1. Пиразолобензодиазепины формулы

где R¹ означает водород, -NO₂, -CN, галоид, -OR⁵, -COOR⁷, CONR⁸R⁹, -NR¹⁰R¹¹, -NHCOR¹², -NHSO₂R¹³;

R² и R⁴ каждый независимо друг от друга означает водород, галоид, -NO₂, -СF₃;

R³ означает водород, циклоалкил, содержащий 3-8 атомов углерода, арил, представляющий собой ароматическую группу, содержащую 6-10 атомов углерода и состоящую из 1 или 2 колец, гетероарил, имеющий 5-10 атомов, 1 или 2 кольца и содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, -COOR⁷, -CN, алкенил, имеющий 2-6 атомов углерода, -CONR⁸R⁹, или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен группой OR⁹, F или вышеуказанным арилом;

R⁵ означает алкил, имеющий 1-6 атомов углерода;

R⁷ означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода;

R⁸ и R⁹ каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен гидроксигруппой или NH₂; альтернативно R⁸ и R⁹ могут образовать морфолиногруппу;

R¹⁰, R¹¹ и R¹² каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода;

R¹³ означает алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен галоидом или -NR¹⁴R¹⁵;

R¹⁴ и R¹⁵ каждый независимо друг от друга означает водород или алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, который необязательно замещен галоидом, или альтернативно -NR¹⁴R¹⁵ означает морфолиногруппу,

или фармацевтически приемлемые соли упомянутых выше соединений.

5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-фенил-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-хлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2,4-дихлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-фенилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-хлорфенил)-7-метоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)-7-цианопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(3-нитрофенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-трифторметил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-фенил-7-карбометоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

натриевая соль (5-фенилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)карбоновой кислоты,

5-(2-фторфенил)-7-йодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-фторфенил)-7-карбоэтоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

N-(2-гидроксиэтил)-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид,

5-(2-фторфенил)-7-морфолинилкарбонилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

N,N-бис(2-гидроксиэтил)-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид,

(5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)карбоновая кислота,

5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид или

5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

3-этил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-фенилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1-метилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1-метилэтил)-5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-фенилметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-карбоэтоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-метилпропил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-трифторметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-гидроксиметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

N-(2-гидроксиэтил)-3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид,

3-(1-метилпропил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метоксиметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-этенил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-метоксипиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-аминопиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-фенил-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-хлорфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)ацетамид,

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)метансульфонамид,

3-метил-5-фенил-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-йодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-морфолинилкарбонилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-фенилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-хлорпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-трифторметилфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-фенил-7-йодпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-фенил-7-бромпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-метил-5-(2-фторфенил)-7-фторпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-циклопропил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-циклопропил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин или

3-пропил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

3-карбоэтокси-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксамид,

N,N-диметил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксамид, или

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбонитрил.

3-(4-метилфенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-диметиламинофенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-цианофенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-метилфенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-нитрофенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-трифторметилфенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-трифторметилфенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1-нафтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-метоксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-(метилтио)фенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-трифторметоксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-гидрокси-2-метоксифенил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-гидроксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-((1,1'-бифенил)-4ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-нитрофенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-феноксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-цианофенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-этоксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-метилфенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин

или

3-(2-фторфенил)-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

3-фенил-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин

или

3-(2-нафтил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

3-(4-метилпиразол-5-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1-тиазолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-имидазолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-пиразолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-пиразолил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-тиенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-фуранил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-метилтиен-2-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(индол-2-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1-метил-1Н-пиррол-2-ил)5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-пиридинил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-пиридинил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-(1-пирролил)фенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-пирролил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(4-изохинолинил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-бензофуранил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-тиенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(5-метилтиен-2-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2-имидазолил)-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(3-пиридинил)-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4] [1,4]бензодиазепин,

3-(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ил)-5-фенил-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(2,3-метилендиоксифенил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин или

3-(5-этилфуран-2-ил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин.

5-фенил-7-метансульфонилпиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

3-(N,N-диметиламинометил)-5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин,

N-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)-2-пропенамид,

N-[2-(4-морфолинил)этил]-3-метил-5-(2-фторфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-карбоксамид,

5-(2-хлорфенил)-7-нитропиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-3-карбоксальдегид,

N'-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)-N,N-диметиламинсульфонамид,

N'-(3-метил-5-(2-хлорфенил)пиразоло[3,4][1,4]бензодиазепин-7-ил)-N,N-хлорметиламинсульфонамид,

N'-(3-мeтил-5-(2-xлopфeнил)пиpaзoлo[3,4][l,4]бeнзoдиaзeпин-7-ил)-4-морфолинсульфонамид или

N-aминo-5-(2-xлopфeнил)-7-нитpoпиpaзoлo[3,4][l,4]бeнзoдиaзeпин-3-карбоксамид.

или

где R² и R⁴ имеют значения, как указано в п.1;

R¹ обозначает Н, -NO₂, -CN, галоген, -OR⁵ или -COOR⁷;

R⁵ и R⁷ имеют значения, указанные в п.1;

R³ имеет значения; как в п.1, за исключением группы -CONR⁸R⁹.