СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ПРОВЕДЕНИЮ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ ПРИ ОФТАЛЬМОГЕРПЕСЕ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/53 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины - офтальмологии и предназначено для выработки лабораторных объективных показаний к лечению офтальмогерпеса интерфероном-альфа.

Известно, что интерферон-альфа обладает выраженным противовирусным действием, подавляя репликацию вируса и препятствуя инфицированию здоровых клеток.

В настоящее время препараты интерферона-альфа наряду с индукторами интерферона широко используются для лечения вирусных заболеваний глаз, в частности герпесвирусной этиологии. Показанием для назначения интерферона-альфа является наличие клинических симптомов герпетической болезни глаз (Майчук Ю.Ф., Казаченко М.А., Токарев Д.Е., Щипанова А.И., Яни Е.В. «Противовирусный препарат локферон в лечении герпетических кератитов и аденовирусных конъюнктивитов». Русский офтальмологический журнал, 2001. №1, стр.41-43). Однако по данным этих авторов, несмотря на высокий процент излечения (80%) в группе больных древовидным герпетическим кератитом с поражением стромы, получавших локферон - новую лекарственную форму лейкоцитарного очищенного интерферона-альфа высокой концентрации, у 12,5% пациентов терапевтический эффект достигнут не был, а у 7,5% наступило ухудшение.

Для повышения эффективности интерферонотерапии апробированы различные пути введения лекарства в глаз. Майчук Ю.Ф. и соавторы предложили использовать магнитофорез при инстилляциях локферона в конъюнктивальный мешок (Майчук Ю.Ф., Ларина Л.А., Токарев Д.Е. «Способ лечения герпетического кератита с изъязвлением» RU 2164106, 20.03.01). Однако не у всех пациентов с клиническими проявлениями офтальмогерпеса интерферонотерапия оказывается достаточно эффективной.

Эффективность лечения офтальмогерпеса во многом зависит от адекватности выбранного способа патогенетическим особенностям заболевания глаз у конкретного больного В основе патогенеза отдельных клинических форм офтальмогерпеса лежат различные механизмы. Литературные и собственные данные свидетельствуют о выраженных индивидуальных отличиях в продукции эндогенного интерферона-альфа у больных офтальмогерпесом: от гиперпродукции у единичных больных до полного подавления образования интерферона у части пациентов. Имеющиеся в литературе сообщения о продукции интерферона-альфа у больных офтальмогерпесом и у практически здоровых людей весьма противоречивы. По данным Быковской Г.Н. (Быковская Г.Н. «Значение иммунологических факторов в патогенезе двусторонних и односторонних увеитов». Канд. дисс... М. 2000, стр. 62-64) интерферон-альфа в слезной жидкости больных герпетическими увеитами выявлен всего у 16% больных и ни в одном случае в контрольной группе. Напротив, Кетлинская О.С. (Кетлинская О.С. «Провоспалительные цитокины в патогенезе офтальмогерпеса. Автореф... дисс. канд. С.-П.1995, стр. 8, 9, 15) отмечает высокий уровень интерферона-альфа в слезе практически здоровых лиц при отсутствии его в сыворотке крови. Но мнению Кетлинской О.С. интенсивное местное интерферонообразование обусловлено частыми контактами слизистой глаза с вирусами внешней среды и обеспечивает в норме противовирусную защиту органа зрения. Но ее данным, хотя у больных офтальмогерпесом повышалось системное образование интерферона-альфа, однако в слезе количество интерферона-альфа было всегда выше, чем в сыворотке.

Учитывая способность интерферона-альфа подавлять репликацию вируса и препятствовать заражению новых клеток, его наибольшую терапевтическую эффективность можно ожидать при тех формах офтальмогерпеса, в патогенезе которых ведущую роль играет активная вирусная инфекция. Несмотря на иммуномодулирующее действие, интерферон-альфа может оказаться неэффективным у больных с неактивной герпесвирусной инфекцией, у которых основные клинические проявления заболевания связаны с иммунопатологическими реакциями. Вряд ли целесообразно использование экзогенного интерферона у пациентов с высоким уровнем собственного интерферона-альфа.

Индивидуальная оценка местной продукции интерферона-альфа и активности герпесвирусной инфекции у больных офтальмогерпесом позволяет обоснованно назначать препараты интерферона-альфа больным, нуждающимся в усилении естественной противовирусной резистентности. К этой категории относятся пациенты с активной стадией хронической герпесвирусной инфекции и дефицитом местного интерферонообразования.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение эффективности интерферонотерапии больных офтальмогерпесом.

Технический результат достигается за счет выявления дефицита местного интерферонообразования путем определения его уровня в слезе и за счет выявления активной репликации вируса простого герпеса путем определения гуморальных антител к неструктурным ранним вирусным антигенам.

Способ осуществляется следующим образом. При первом обращении к врачу у пациента берут кровь из локтевой вены в объеме 3 мл и слезную жидкость из нижнего конъюнктивального свода больного глаза в объеме не менее 0,12 мл. Сыворотку крови, полученную стандартным способом, и слезу до проведения исследования хранят при -20°С.

Количественное определение интерферона-альфа в слезной жидкости осуществляют, например, в твердофазном иммуноферментном анализе с помощью набора реагентов ProCon IF2 plus производства ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург. Постановку иммуноферментного анализа осуществляют в соответствии с инструкцией производителя. Учет результатов реакции производят с использованием фотометра для микропланшетов при длине волны 450 нм.

Маркерами активной стадии ВПГ-инфекции были сывороточные антитела к неструктурным ранним ДНК-связывающим антигенам ВПГ 1 и 2 типа. Эти вирусные антигены играют регуляторную роль и появляются только в период репликации вируса, они не входят в структуру покоящегося вириона и не персистируют в хронической сгадии инфекции, поэтому антитела к ним выявляются только в активной стадии инфекции (первичной или активной фазе латентной).

Исследование сывороток крови на антитела к неструктурным ранним антигенам вируса простого герпеса 1 и 2 типов проводят в твердофазном иммуноферментном анализе с наборами «ВПГ-контроль» производства ПКБ им.Мечникова, Москва согласно инструкции производителя.

Учет реакции осуществляют фотометрически при длине волны 492 нм.

За положительный результат принимают показатели разницы оптической плотности (Δ ОП) исследуемой сыворотки с вирусным антигеном и контрольным антигеном, равные или превышающие 0.350.

Результаты клинических наблюдений.

Как видно из таблицы 1, местное применение интерферона-альфа способствовало подавлению активной репликации вируса простого герпеса, что видно из диагностически значимого снижения титров антител к неструктурным ранним вирусным антигенам.

Титры антител к неструктурным ранним антигенам вируса простого герпеса снижались уже через неделю после начала лечения интерфероном-альфа (№4), однако наиболее наглядно снижение титров определялось через 3-4 недели, что характерно для динамики гуморального ответа на инфекцию у выздоравливающего пациента.

Таблица 1
Динамика показателей активности герпесвирусной инфекции у больных с древовидными кератитами, получавшими местно препараты интерферона-альфа.№Уровень интерферона-альфа в слезе при поступленииАнтитела к неструктурным антигенам ВПГ(ΔОП^)Интервал между
двумя анализамидо леченияпосле лечения1не обнаружен*2.2211.67421 день2не обнаружен1 1240.53130 дней3не обнаружен0.451отр22 дней4не обнаружен1.1451.1247 дней5не обнаружен2.2532.00614 дней*<10 пкг/мл. ^-разница в оптической плотности исследуемой сыворотки с антигеном ВПГ и контрольным антигеном.

Пример 1

Больная 3. 39 лет. Обратилась в МНИИ ГБ им. Гельмгольца на 10 сутки после впервые остро возникшего заболевания левого глаза. При поступлении острота зрения 0,2; дефект эпителия роговицы в виде веточки составляет 1/5 площади и располагается в оптической части роговицы, окрашивается флуоресцеином. Клинически диагностирован герпетический древовидный кератит. Лабораторное обследование выявило антитела к неструктурным антигенам ВПГ 1 типа в крови в высоком титре (ΔОП 1.124), в слезе левого глаза интерферон-альфа не обнаружен (<10 пкг/мл). Назначен препарат интерферона-альфа в виде инстилляций в конъюнктивальную полость 6 раз в день. Начальные признаки эпителизации наблюдались на 3 день, полная эпителизация отмечена на 7 день после начала интерферонотерапии. К 10 дню наступило клиническое выздоровление. Острота зрения OS 0,6 б/к. Исследование сыворотки крови через 30 дней после обращения пациента в институт в период установившейся ремиссии выявило значительное снижение титров антител к неструктурным антигенам ВПГ 1 (ΔОП 0,531), что свидетельствовало о купировании активной фазы герпесвирусной инфекции и подавлении репликации вируса простого герпеса.

Пример 2

Больной В., 19 лет. Страдает рецидивирующим герпетическим кератитом ОИ. Впервые оба глаза заболели одновременно 2 года назад после ОРВИ. При обследовании в МНИИ ГБ им.Гельмгольца острота зрения на ОИ - 0,2 не корригируется. Глазные щели сужены, веки отечны, конъюнктива ОИ гиперемирована, дефект эпителия роговицы составляет 1/4 ее площади, окрашивается флуоресцеином. Зрачок в лекарственном мидриазе. Влага передней камеры прозрачна. Радужка структурна. Диагностирован герпетический картообразный кератит ОИ. В сыворотке крови выявлены антитела к неструктурным вирусным антигенам ВПГ 1 в высоком титре. В слезах ОИ интерферон-альфа не обнаружен. Назначены инстилляции препарата интерферона-альфа. Первые признаки эпителизации роговицы отмечены на 3 сутки, полная эпителизация на 7-8 сутки.

В 2000 г. рецидив герпетического кератита ОД, лечился по месту жительства. В декабре 2003 г. обратился в МНИИ ГБ им.Гельмгольца по поводу обострения герпетического кератита на ОИ.

При поступлении диагностирован рецидив картообразного герпетического кератита на обоих глазах. Повторно назначен препарат интерферона-альфа в виде инстилляций 8 раз в день. При лабораторном обследовании серологических признаков активизации хронической гернесвирусной инфекции не выявлено: антитела к неструктурным анигенам ВПГ не обнаружены. Иптерферонотерапия эффекта не дала (через 2 педели после начала лечения не наступило полной эпителизации роговицы).

Таким образом, предложенный способ позволяет определить объективные (лабораторные) показания к назначению интерферона-альфа при герпетической болезни глаза, что способствует более эффективному лечению больных, нуждающихся в усилении противовирусной резистентности.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения показаний к проведению интерферонотерапии при офтальмогерпесе. Сущность изобретения состоит в том, что в сыворотке крови определяют антитела к неструктурным ранним ДНК-связывающим белкам вируса простого герпеса 1 и 2 типа и интерферон-альфа в слезной жидкости больного глаза и при наличии антител в сыворотке крови к неструктурным ранним ДНК-связывающим вирусным антигенам и отсутствии интерферона-альфа в слезной жидкости больного глаза определяют показания к проведению терапии препаратами интерферона-альфа. Техническим результатом является повышение эффективности лечения офтальмогерпеса. 1 табл.

Способ определения показаний к проведению интерферонотерапии при офтальмогерпесе, отличающийся тем, что определяют в сыворотке крови антитела к неструктурным ранним ДНК-связывающим белкам вируса простого герпеса 1 и 2 типа и интерферон-альфа в слезной жидкости больного глаза и при наличии антител в сыворотке крови к неструктурным ранним ДНК-связывающим вирусным антигенам и отсутствии интерферона-альфа в слезной жидкости больного глаза определяют показания к проведению терапии препаратами интерферона-альфа.