СРЕДСТВО ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СУБКЛИНИЧЕСКОГО МАСТИТА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2005 года по МПК G01N33/50 A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для диагностики субклинического мастита у коров.

Известно средство диагностики субклинического мастита путем определения лизоцима в молоке. Оно основано на способности лизоцима молока задерживать рост тест-микроба (золотистый стафилококк штамма ВМ). По зоне задержки роста судят о титре лизоцима в молоке и здоровье молочной железы (3).

Использование этого средства диагностики в условиях хозяйства практически осуществить трудно, так оно требует специально оборудованной лаборатории и определенных навыков в проведении микробиологических исследований, требуется культура микроорганизма.

Известно средство определения количества хлоридов в молоке как индикатора наличия субклинического мастита. В молоке здоровой коровы содержится 0,08-0,14% хлоридов. При маститах их количество в содержимом вымени увеличивается. В пробирки вносят по 5 мл 1,5%-ного раствора азотнокислого серебра, по 2 капли 10%-ного водного раствора хромовокислого калия и добавляют по 1 мл исследуемого молока. Содержимое пробирок перемешивают. Если в исследуемом молоке количество хлоридов превышает 0,14%, смесь приобретает желтую окраску (2).

Недостатком этого средства является то, что в молоке не всегда создается необходимая для определения концентрация ионов хлора.

Известно средство диагностики субклинического мастита, основанное на определении хлор-сахарного числа (соотношение хлоридов и лактозы). Лактозу (молочный сахар) определяют йодометрическим методом (5).

Недостатком данного средства является то, что это хлор-сахарное число может изменятся и при других заболеваниях, в том числе и при кетозе, и тем самым приводить к искаженным результатам.

Известно средство диагностики субклинического мастита путем измерения рН молока. Если молоко здорового животного имеет рН в среднем 6,3-6,9, то при патологических состояниях реакция среды сдвигается в щелочную сторону - 7,0 и выше. Для этого на белую фарфоровую пластинку наносят 2-4 капли исследуемого молока и добавляют к ним 1-2 капли 0,2%-ного спиртового (на 65-градусном спирте) раствора бромтимоловой сини. Окрашивание молока в желтый или зеленовато-желтый цвет принимается за показатель нормального молока; сине-зеленое или зелено-желтое окрашивание пробы - признак субклинического мастита (4).

Недостатком данного средства диагностики является то, что секрет молочной железы обладает высокой буферной емкостью и нейтрализует водородные ионы, препятствуя индикации изменившегося рН.

Известны средства диагностики субклинического мастита, основанные на обнаружении кровяных пигментов в молоке. Для этого в пробирку вносят 5 мл 3-процентного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. Содержимое пробирки тщательно взбалтывают и затем по каплям вносят в пробирку исследуемое молоко (2-10 капель). По количеству капель молока, внесенного в пробирку, при котором появилась положительная реакция, можно ориентировочно судить о количестве кровяных пигментов в молоке. При положительной реакции содержимое пробирки вначале приобретает зеленоватый цвет, а через 5-10 минут оно становится темно-синим. При отрицательной реакции - содержимое светлое, на дне пробирки появляется беловатый хлопьевидный осадок (1, 4).

Недостатком этого средства является то, что в начальных стадиях субклинического мастита реакция на кровяные пигменты не всегда является достоверным признаком развивающегося заболевания, в то время как при некоторых физиологических и патологических состояниях вымени, не связанных с маститами, они будут положительными.

Известны средства диагностики субклинического мастита, основанные на комбинированном применении поверхностно-активных веществ и индикаторов. На основе этого принципа используется такой препарат как димастин, выбранный нами в качестве прототипа. Диагностика этими средствами основана на образовании сгустка из ядер соматических клеток, количество которых увеличивается в молоке при маститах, и изменении его цвета (изменение рН и как следствие изменение окраски индикатора). При диагностике мастита 5% раствором димастина реакцию учитывают по следующим показателям: отрицательная реакция (нет мастита) - при смешивании 1 мл 5%-ного раствора димастина с 1 мл молока образуется однородная жидкость, цвет - оранжевый, оранжево-красный. Сомнительная реакция - следы образования желе, цвет - красный. Положительная реакция - ясно видимый сгусток, который наполовину или целиком выбрасывается из луночки палочкой при перемешивании, цвет: алый, пунцовый, малиновый (3).

Достоинством этих средств является то, что их можно использовать в любом хозяйстве, не предпринимая затрат на дорогостоящее оборудование.

Недостатками этих препаратов являются то, что, во-первых, их состав не учитывает высокой буферной емкости молока и индикатор начинает изменять свою окраску при значительном сдвиге реакции среды; во-вторых, индикаторы, входящие в их состав, например феноловый красный в димастине, начинает изменять свою окраску при значении рН=7,2 и выше, в то время как при субклиническом мастите изменение рН, свидетельствующее о начале заболевания, происходит с 7,0 и выше.

Целью изобретения является средство диагностики субклинического мастита у коров, позволяющего регистрировать это заболевание на более ранней стадии.

Поставленная цель достигается тем, что при разработке средства диагностики субклинического мастита используют особенности секрета вымени при данном заболевании содержать повышенное количество соматических клеток и иметь водородный показатель выше 7,0. Для этого средство содержит (мас.%): сульфонол технический 4,75-4,77, нейтральный красный 0,001-0,003, метиленовый синий 0,001-0,003, едкий калий 0,09-0,11 для снижения буферной емкости молока.

Для индикации повышенного количества соматических клеток в молоке используют их свойство образовывать желеобразный сгусток при контакте с поверхностно-активным веществом (ПАВ). ПАВ, разрушая ядра соматических клеток, образует комплексы с их белками и вытесняет ДНК из связанного (с белком) в свободное полимерное состояние, в котором она из-за своеобразной структуры макромолекулы (удлиненная) является вязкой.

В качестве ПАВ используют сульфонол технический. Из него приготавливают раствор, в 100 г которого содержится 5 г порошка. Раствор используют после 3-дневной экспозиции.

Для регистрации изменения рН мы выбрали индикатор, состоящий из равных частей 0,1%-ного водного раствора нейтрального красного и 0,1%-ного раствора метиленового синего. Данная смесь отличается четким переходом окраски при изменении рН. В кислой среде он имеет сине-фиолетовую окраску, а при рН=7,0 и выше она переходит в зеленую.

Способ подготовки реактива (реактив именуется в дальнейшем Троицкий маститный тест (ТМТ)): индикатор смешивают с раствором сульфонола 1:20, добавляют едкий калий 0,1 г на 100 г раствора.

Сопоставимый анализ заявляемого и известных средств диагностики позволяет выявить признаки, отличающие предлагаемое техническое решение от прототипа: синергетическое использование в смеси едкого калия, наличие которого позволяет снизить высокую буферную емкость молока, и индикатора, регистрирующего за счет этого более раннее изменение рН.

Таким образом, заявленное средство диагностики субклинического мастита крупного рогатого скота соответствует критерию "новизна".

Авторы предлагают для диагностики субклинического мастита использовать реактив следующим образом: в лунки мелочно-контрольной пластинки из каждой четверти надаивать 1 мл молока последней порции (альвеолярного молока). Затем исследуемое молоко смешивать с 1 мл реактива в лунке молочно-контрольной пластинки.

Учет реакции вести через 4 секунды по степени образовавшегося желе (сгустка) и изменения цвета индикатора.

Реакция считается:

- отрицательной (нет мастита), если в лунке находится однородная жидкость фиолетового цвета;

- сомнительной, если в лунке отмечаются следы образования желе, которое при перемешивании стеклянной или деревянной палочкой тянется за ней в виде тонких нитей, цвет смеси - фиолетовый;

- положительной, если образовался густой сгусток, который при перемешивании легко выбрасывается из лунки стеклянной палочкой, цвет смеси - фиолетовый, или если образовался гутой сгусток, а смесь окрасилась в зеленоватый или ярко-зеленый цвет.

Пример:

- для реализации предлагаемого средства и способа диагностики субклинического мастита был проведен научно-производственный опыт.

В условиях ОАО "Щелкунское" Сысертского района Свердловской области было происследовано 100 коров черно-пестрой породы димастиновой пробой, которая выявила 8 голов, больных субклиническим маститом, или 8%. Затем те же коровы были исследованы на наличие у них субклинического мастита реактивом ТМТ. Исследования им полностью подтвердили результаты димастиновой пробы. Дополнительно было выявлено 7 голов. Общее число животных, больных субклиническим маститом, составило 15 голов или 15%.

1. Результаты исследований на субклинический мастит

Количество животных, голВыявлено больных коров димастиновой пробой, голВыявлено больных коров пробой "ТМТ", голДополнительно выявлено больных пробой "ТМТ", гол1008157

Молоко от больных коров было доставлено в ветеринарную лабораторию, где из него были выделены Е. coli, Str. uberis, St. epidermidis - возбудители субклинического мастита.

Таким образом, для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота можно применять предложенное нами средство, позволяющее повысить чувствительность определения, снизить затраты на профилактическую и лечебную работу, повысить производительность труда.

Препарат представляет собой пенящуюся жидкость зеленого цвета. Срок годности - 1 год.

Список использованной литературы

1. Алексеев, И.А., Миролюбов, М.Г. Опыт борьбы с маститами в молочных комплексах. - Чебоксары: Чувашское книжное издательство, 1984. - 48 с.

2. Валюшкин, К.Д., Медведев, Г.Ф. Акушерство и биотехника размножения животных: Учебник, 2-е изд., перераб. и доп. - Мн.: Ураджай, 2001. - 869 с.

3. Ивашура, А.И. Система мероприятий по борьбе с маститами коров. - М:. Росагропромиздат, 1991. - 240 с.

4. Ильина А.И., Поспелов А.И. Болезни вымени. Л.-М., Сельхозгиз, 1961, 152 с.

5. Карташова, В.М., Ивашура, А.И. Маститы коров. - М.: Агропромиздат, 1988. - 256 с.

Изобретение относится к ветеринарии. Средство для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота, содержащее сульфонол и индикатор, отличающееся тем, что в качестве индикатора используют нейтральный красный, метиленовый синий и оно дополнительно содержит едкий калий при следующем соотношении компонентов, мас.%: сульфонол технический 4,75-4,77, нейтральный красный 0,001-0,003, метиленовый синий 0,001-0,003, едкий калий 0,09-0,11, вода - остальное. Средство позволяет диагностировать субклинический мастит у крупного рогатого скота на более ранней стадии заболевания. 1 табл.

Средство для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота, содержащее сульфонол и индикатор, отличающееся тем, что в качестве индикатора используют нейтральный красный, метиленовый синий и оно дополнительно содержит едкий калий при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сульфонол технический4,75-4,77Нейтральный красный0,001-0,003Метиленовый синий0,001-0,003Едкий калий0,09-0,11Вода Остальное