АРИЛ- И ГЕТЕРОАРИЛЗАМЕЩЕННЫЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ МОЧЕВИНЫ, СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ КИНАЗЫ RAF И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2005 года по МПК C07D231/38 C07D307/66 C07D333/36 C07D403/12 C07D405/04 C07D401/14 C07D401/12 C07D409/12 A61K31/341 A61K31/381 A61K31/4155 A61K31/44 A61P35/00 

Настоящее изобретение относится к применению производных группы арилмочевины для лечения заболеваний, опосредованных киназой raf, и фармацевтических композиций для проведения такой терапии.

Уровень техники

Онкоген р21^ras вносит основной вклад в развитие и прогрессию солидных опухолей человека и мутирован в 30% всех опухолей в организме человека (см. статьи Bollton с соавт. Ann. Rep. Med. Chem., 1994, т.29, стр. 165-74; Bos. Cancer Res., 1989, т.49, стр. 4682-9). В нормальной, немутированной форме белок ras является ключевым элементом каскада трансдукции сигнала, управляемого рецепторами ростового фактора практически во всех тканях (см. статью Avruch с соавт. Trends Biochem. Sci., 1994, т.19, стр. 279-83). В биохимическом отношении ras представляет собой гуаниннуклеотид-связывающий белок, а взаимопревращение между ГТФ-связанной активированной формой и ГДФ-связанной инактивированной формой строго контролируется эндогенной ГТФазной активностью ras и другими регуляторными белками. Мутантные формы ras, присутствующие в опухолевых клетках, характеризуются сниженной эндогенной ГТФазной активностью, и, следовательно, этот белок осуществляет передачу неконтролируемых ростовых сингналов опосредованным с ним эффекторам, например, такому ферменту, как киназа raf. Это приводит к опухолевой трансформации клеток, несущих мутантные формы ras (см. статью Magnuson с соавт. Semin. Cancer Biol., 1994, т.5, стр. 247-53). Показано, что ингибирующее действие активной формы ras путем ингибирования сигнального пути с участием киназы raf введением инактивирующих антител против киназы raf или за счет совместной экспрессии доминантной негативной киназы raf или доминантной негативной формы МЕК, субстрата киназы raf, приводит к реверсии трансформированных клеток в нормально растущий фенотип (см. статьи Daum с соавт. Trends Biochem. Sci., 1994, т.19, стр. 474-80; Fridman c соавт. J. Biol. Chem., 1994, т.269, стр. 30105-8). Кроме того, в статье Kolch с соавт. (Nature, 1991, т.349, стр. 426-28) показано, что ингибирование экспрессии киназы raf с помощью антисмысловой ДНК блокирует пролиферацию клеток, вызванную мембранно-ассоциированными онкогенами. Аналогично, ингибирование киназы raf (антисмысловыми олигонуклеотидами) коррелирует in vitro и in vivo с ингибированием роста различных типов опухолей человека (см. статью Monia с соавт. Nat. Med., 1996, т.2, стр. 668-75).

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые являются ингибиторами фермента киназы raf. Поскольку этот фермент является эффектором p21^ras, ингибиторы быстрого действия могут найти применение в фармацевтических композициях для лечения человека или для применения в ветеринарии, если показано ингибирование raf киназного пути, например, при лечении опухолей и/или опухолевого роста клеток, опосредованного киназой raf. Прежде всего, такие соединения применимы при лечении человека или животных, например, опухолей у мышей, поскольку прогрессия таких опухолей зависит от каскада трансдукции сигнала белком ras и, следовательно, чувствительна к воздействиям, прерывающим этот каскад, например, путем ингибирования киназы raf. Соответственно, соединения по изобретению могут найти применение при лечении солидных опухолей, например таких, как карциномы (например, легких, поджелудочной железы, щитовидной железы, мочевого пузыря или толстой кишки, заболеваний спинного или костного мозга, например, лейкозе, или аденомы, например, ворсинчатой опухоли (полип толстой кишки).

Настоящее изобретение представляет соединения, которые обычно носят название производные арилмочевины, включая как арил-, так и гетероарилзамещенные аналоги, которые ингибируют путь передачи сигнала с участием киназы raf. Изобретение также предлагает способ лечения заболеваний человека или млекопитающих, опосредованных киназой raf. Таким образом, изобретение относится к соединениям и способам подавления роста опухолевых клеток, опосредованного киназой raf, включающим введение соединения формулы I:

где В обычно означает незамещенный или замещенный арильный или гетероарильный остаток, вплоть до трициклического, включающий до 30 углеродных атомов, содержащий по крайней мере одну 5- или 6-членную ароматическую группу, содержащую 0-4 атомов, которые выбирают из группы, включающей атомы азота, кислорода и серы. А означает гетероарильный остаток, который более подробно описан ниже.

Арильный или гетероарильный остаток В может включать отдельные циклические структуры, а также комбинацию арильных, гетероарильных и циклоалкильных структур. Заместители в этих арильных или гетероарильных остатках могут варьировать в широком диапазоне и включают галоген, водород, гидросульфид, циано, нитро, амины и различные углеродсодержащие остатки, включая такие, которые содержат один или более атомов серы, азота, кислорода и/или галогена. Строение заместителей более подробно описано ниже.

Пригодные арильные или гетероарильные остатки для группы В в формуле 1 включают, не ограничиваясь перечисленным, ароматические циклические структуры, содержащие 4-30 атомов углерода и 1-3 кольца, из которых по крайней мере одно является 5-6-членным ароматическим кольцом. В одном или более этих колец 1-4 атома углерода могут быть заменены атомами кислорода, азота и/или серы.

Примеры подходящих ароматических циклических структур включают фенил, пиридинил, нафтил, пиримидинил, бензотиазолил, хинолин, изохинолин, фталимидинил и их сочетания, такие, как дифениловый эфир (фенилоксифенил), дифениловый тиоэфир (фенилтиофенил), дифениламин (фениламинофенил), фенилпиридиниловый эфир (пиридинилоксифенил), пиридинилметилфенил, фенилпиридиниловый тиоэфир (пиридинилтиофенил), фенилбензотиазолиловый эфир (бензотиазолилоксифенил), фенилбензотиазолиловый тиоэфир (бензотиазолилтиофенил), фенилпиримидиниловый эфир, фенилхинолиновый тиоэфир, фенилнафтиловый эфир, пиридинилнафтиловый эфир, пиридинилнафтиловый тиоэфир и фталимидилметилфенил.

Примеры подходящих гетероциклических групп включают, не ограничиваясь перечисленным, ароматические кольца, содержащие 5-12 атомов углерода, или циклические системы, содержащие 1-3 кольца, из которых по крайней мере одно является ароматическим, в которых один или более, например, 1-4 углеродных атома в одном или более колец могут быть заменены на атомы кислорода, азота или серы. Обычно каждое кольцо содержит 3-7 атомов.

Например, В может означать 2- или 3-фурил, 2- или 3-тиенил, 2- или 4-триазинил, 1-, 2- или 3-пирролил, 1-, 2-, 4- или 5-имидазолил, 1-, 3-, 4- или 5-пиразолил, 2-, 4- или 5-оксазолил, 3-, 4- или 5-изоксазолил, 2-, 4- или 5-тиазолил, 3-, 4- или 5-изотиазолил, 2-, 3- или 4-пиридил, 2-, 4-, 5- или 6-пиримидинил, 1,2,3-триазол-1-, -4- или -5-ил, 1,2,4-триазол-1-, -3- или -5-ил, 1 - или 5-тетразолил, 1,2,3-оксадиазол-4- или -5-ил, 1,2,4-оксадиазол-3- или -5-ил, 1,3,4-тиадиазол-2- или -5-ил, 1,2,4-оксадиазол-3- или -5-ил, 1,3,4-тиадиазол-2- или -5-ил, 1,3,4-тиадиазол-3- или -5-ил, 1,2,3-тиадиазол-4- или -5-ил, 2-, 3-, 4-, 5- или 6-2Н-тиопиранил, 2-, 3- или 4-4Н-тиопиранил, 3- или 4-пиридазинил, пиразинил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензофурил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензотиенил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-индолил, 1-, 2-, 4- или 5-бензимидазолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензопиразолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензоксазолил, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензизоксазолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензотиазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензизотиазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бенз-1,3-оксадиазолил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хинолинил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-изохинолинил, 1-, 2-, 3-, 4- или 9-карбазолил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- или 9-акридинил или 2-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хиназолинил, или дополнительно по выбору замещенные фенил, 2- или 3-тиенил, 1,3,4-тиадиазолил, 3-пиррил, 3-пиразолил, 2-тиазолил или 5-тиазолил и т.п. Например, В может означать 4-метилфенил, 5-метил-2-тиенил, 4-метил-2-тиенил, 1-метил-3-пиррил, 1-метил-3-пиразолил, 5-метил-2-тиазолил или 5-метил-1,2,4-тиадиазол-2-ил.

Подходящие алкильные группы и алкильная часть в заместителях, например, в алкоксигруппе и т.п., включают метил, этил, пропил, бутил и т.п., включая все линейные и разветвленные изомеры, такие как изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и т. п.

Подходящие арильные группы включают, например, фенил и 1- и 2-нафтил.

Подходящие циклоалкильные группы включают циклопропил, циклобутил, циклогексил и т.п. Термин "циклоалкил", используемый в тексте зявки, означает циклические структуры, имеющие или не имеющие алкильных заместителей, причем, например, "C₄циклоалкил" включает как циклопропильные группы, замещенные метильной группой, так и циклобутильные группы. Кроме того, термин "циклоалкил" включает насыщенные гетероциклические группы.

Подходящие галогены включают F, Cl, Br и/или I, причем возможны группы, содержащие от одного заместителя до полностью замещенных (когда все атомы водорода в группе замещены на атом галогена), кроме того возможны остатки со смешанным замещением различными галогенами.

Как показано выше, эти кольцевые системы могут содержать или не содержать заместители, такие как галоген, вплоть до полного замещения галогенами. Другие подходящие заместители в группе В включают алкил, алкокси, карбокси, циклоалкил, арил, гетероарил, циано, гидрокси и амино. Эти заместители, обычно обозначаемые в тексте заявки Х и X', включают -CN, -CO₂R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -C(O)R⁵, -NO₂, -OR⁵, -SR⁵, -NR⁵R^5', -NR⁵C(O)OR^5', -NR⁵C(O)R^5', С₁-С₁₀алкил, С₂-С₁₀алкенил, С₁-С₁₀алкокси, С₃-С₁₀циклоалкил, C₆-С₁₄арил, С₇-С₂₄алкарил, С₃-С₁₃гетероарил, С₄-С₂₃алкгетероарил, замещенный С₁-С₁₀алкил, замещенный С₂-С₁₀алкенил, замещенный С₁-С₁₀алкокси, замещенный С₃-С₁₀циклоалкил, замещенный С₄-С₂₃алкгетероарил и -Y-Ar.

Если заместитель Х или X' представляет собой замещенную группу, то предпочтительно он имеет один или более заместителей, которые независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R⁵, -C(O)R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -OR⁵, -SR⁵, -NR⁵R^5', -NO₂, -NR⁵C(O)R^5', -NR⁵C(O)OR^5' и галоген вплоть до полного замещения галогеном.

Группы R⁵ и R^5' предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₂-С₁₀алкенил, С₃-С₁₀циклоалкил, С₆-С₁₄арил, С₃-С₁₃гетероарил, С₇-С₂₄алкарил, С₄-С₂₃алкгетероарил, галогенированный вплоть до полного замещения С₁-С₁₀алкил, галогенированный вплоть до полного замещения С₂-С₁₀алкенил, галогенированный вплоть до полного замещения С₃-C₁₀циклоалкил, галогенированный вплоть до полного замещения C₆-С₁₄арил, галогенированный вплоть до полного замещения С₃-С₁₃гетероарил.

Мостиковая группа Y предпочтительно означает -O-, -S-, -N(R⁵)-, -(CH₂)_m-, -С(O)-, -СН(ОН)-, -(СН₂)_mO-, -(CH₂)_mS-, -(CH₂)_mN(R⁵)-, -O(CH₂)_m-, -CHX^a-, -CX^a ₂, -S-(CH₂)_m- и -N(R⁵)(CH₂)_m-, где m=1-3, а X^a означает галоген.

Группа Ar предпочтительно означает 5- 10-членное ароматическое кольцо, содержащее 0-4 атома, которые выбирают из группы, включающей азот, кислород и серу, и которое может быть незамещенным или замещенным галогеном вплоть до полного замещения и по выбору замещенным группой Z_n1, где n1=0-3.

Каждый заместитель Z предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -C(O)NR⁵, -NO₂, -OR⁵, -SR⁵, -NR⁵R^5', -NR⁵C(O)OR^5', -C(O)R⁵, -NR⁵C(O)R^5', С₁-С₁₀алкил, С₃-С₁₀циклоалкил, C₆-С₁₄арил, С₃-С₁₃гетероарил, С₇-С₂₄алкарил, С₄-С₂₃алкгетероарил, замещенный С₁-С₁₀алкил, замещенный С₃-C₁₀циклоалкил, замещенный С₇-С₂₄алкарил и замещенный С₄-С₂₃алкгетероарил. Если Z является замещенной группой, то эта группа имеет один или более заместителей, которые независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -OR⁵, -SR⁵, -NO₂, -NR⁵R^5', -NR⁵C(O)R^5' и -NR⁵C(O)OR^5'.

Арильные и гетероарильные остатки в группе В формулы I предпочтительно выбирают из группы, включающей

,

и

замещенные или незамещенные галогеном вплоть до полного замещения. Х имеет значения, указанные выше, а n=0-3.

Более предпочтительно арил и гетероарил в группе В имеют формулу

где Y выбирают из группы, включающей -О-, -S-, -CH₂-, -SCH₂-, -CH₂S-, -СН(ОН)-, -С(O)-, -CX₂ ^a, -CX^aH-, -CH₂O- и -ОСН₂-, а X^a означает галоген.

Q означает шестичленное ароматическое кольцо, содержащее 0-2 атома азота, замещенное или незамещенное галогеном вплоть до полного замещения, а Q¹ означает моно- или бициклическую ароматическую структуру, содержащую от 3 до 10 углеродных атома и 0-4 атома, которые выбирают из группы, включающей N, О и S, незамещенную или замещенную галогеном вплоть до полного замещения. X, Z, n и n1 имеют значения, указанные выше, a s=0 или 1.

В предпочтительных вариантах воплощения изобретения Q означает фенил или пиридинил, незамещенный или замещенный галогеном вплоть до полного замещения, а Q¹ выбирают из группы, включающей фенил, пиридинил, нафтил, пиримидинил, хинолин, изохинолин, имидазол и бензотиазолил, замещенные или незамещенные галогеном вплоть до полного замещения, или Y-Q¹ означает фталимидинил, замещенный или незамещенный галогеном вплоть до полного замещения. Z и Х предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей -R⁶, -OR⁶, -SR⁶ и -NHR⁷, где R⁶ означает водород, С₁-С₁₀алкил или С₃-С₁₀циклоалкил, а R⁷ предпочтительно выбирают из группы, включающей водород, С₃-С₁₀алкил, С₃-С₆циклоалкил и C₆-С₁₀арил, где R⁶ и R⁷ могут быть замещены галогеном вплоть до полного замещения.

Гетероарильный остаток А в формуле I предпочтительно выбирают из группы, включающей

и

где R¹ предпочтительно выбирают из группы, включающей С₃-С₁₀алкил, С₃-С₁₀-циклоалкил, галогензамещенный С₁-С₁₀алкил вплоть до полного замещения и галогензамещенный С₃-С₁₀циклоалкил вплоть до полного замещения, и R² означает C₆-C₁₄арил, С₃-С₁₄гетероарил, замещенный C₆-C₁₄-арил или замещенный С₃-С₁₄гетероарил.

Если R² означает замещенную группу, заместители предпочтительно выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V_n, где n=0-3.

Каждый V предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей -CN, -OC(O)NR⁵R^5', -CO₂R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -OR⁵, -SR⁵, -NR⁵R^5', -C(O)R⁵, -NR⁵C(O)OR^5', -SO₂R⁵, -SOR⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, С₃-С₁₀-циклоалкил, С₆-С₁₄арил, С₃-С₁₃гетероарил, С₇-С₂₄алкарил, С₄-С₂₄-алкгетероарил, замещенный С₁-С₁₀алкил, замещенный С₃-С₁₀циклоалкил, замещенный C₆-C₁₄арил, замещенный С₃-С₁₃гетероарил, замещенный С₇-С₂₄-алкарил, замещенный С₄-С₂₄алкгетероарил.

Если V означает замещенную группу, V предпочтительно замещена одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения, -CN, -CO₂R⁵, -C(O)R⁵, -C(O)NR⁵R^5', -NR⁵R^5', -OR⁵, -SR⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NR⁵C(O)OR^5' и -NO₂.

Каждый из заместителей R⁵ и R^5' предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₃-С₁₀циклоалкил, C₆-C₁₄арил, С₃-С₁₃-гетероарил, С₇-С₂₄алкарил, С₄-С₂₃алкгетероарил, галогензамещенный С₁-С₁₀алкил вплоть до полного замещения, галогензамещенный С₃-С₁₀-циклоалкил вплоть до полного замещения, галогензамещенный С₆-С₁₄арил вплоть до полного замещения, галогензамещенный С₃-С₁₃гетероарил вплоть до полного замещения.

R² предпочтительно означает замещенный или незамещенный фенил или пиридинил, где заместители R² выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V_n ¹, где n=0-3.

Каждый V¹ предпочтительно независимо выбирают из группы, включающей замещенные или незамещенные С₁-С₆алкил, С₃-С₁₀циклоалкил, С₆-С₁₀арил, -NO₂, -NH₂, -С(O)-С_1-6алкил, -С(O)N-(С_1-6алкил)₂, -C(O)NH-C_1-6алкил-O-C_1-6-алкил, -NHC(O)H, -NHC(O)OH, -N(С_1-6алкил)С(O)-С_1-6алкил, -N-(C_1-6-алкил)С(O)-С_1-6алкил, -NHC(O)-С_1-6алкил, -ОС(O)NH-С_6-14арил, -NHC(O)O-С_1-6-алкил, -S(O)-С_1-6алкил и -SO₂-С_1-6алкил. Если V¹ означает замещенную группу, V¹ предпочтительно замещен одним или более атомами галогена вплоть до полного замещения.

Наиболее предпочтительно R² выбирают из замещенного или незамещенного фенила или пиридинила, в которых заместители означают галоген или W_n (n=0-3).

W предпочтительно выбирают из группы, включающей -NO₂, -С_1-3алкил, -NH(O)СН₃, -CF₃, -ОСН₃, -F, -Cl, -NH₂, -ОС(O)NH-фенил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -SO₂СН₃, пиридинил, фенил, галогензамещенный фенил вплоть до полного замещения, С_1-6алкил замещенный фенил.

Изобретение также относится к соединениям в объеме общей формулы I, описанной выше. Более конкретно эти соединения включают производные пиразолилмочевины формулы

фурилмочевины формулы

и тиенилмочевины формулы

где R¹, R² и В имеют значения, указанные выше.

Настоящее изобретение относится также к фармацевтически приемлемым солям формулы I. Подходящие фармацевтически приемлемые соли хорошо известны специалистам в данной области техники и включают соли оснований с неорганическими и органическими кислотами, такими, как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, метансульфоновая кислота, сульфоновая кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, щавелевая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, фенилуксусная кислота и миндальная кислота. Кроме того, фармацевтически приемлемые соли включают соли неорганических оснований, такие, как соли с катионами щелочных металлов (например, Li⁺, Na⁺ или K⁺), щелочно-земельных металлов (например, Mg⁺², Са⁺² или Ва⁺²), аммонийным катионом, а также кислотные соли органических оснований, включая алифатические и ароматические замещенные аммонийные катионы и четвертичные аммонийные катионы, образующиеся при протонировании или пералкилировании триэтиламина, N,N-диэтиламина, N,N-дициклогексиламина, пиридина, N,N-диметиламинопиридина (DMAP), 1,4-диазабицикло[2,2,2]октана (DABCO), 1,5-диазабицикло-[4,3,0]нон-5-ена (DBN) и 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ена (DBU).

Ряд соединений формулы I имеют асимметрические атомы углерода и, следовательно, могут существовать в виде рацематов и оптически активных форм. Способы разделения смесей энантиомеров и диастереомеров хорошо известны специалистам в данной области техники. Настоящее изобретение включает любую выделенную рацемическую или оптически активную форму соединений, описанных формулой I, которая является ингибитором киназы raf.

Соединения формулы I получают с использованием известных химических реакций и методик, некоторые из которых являются пригодными для применения в промышленности. Тем не менее, здесь представлены следующие общие препаративные методы, чтобы специалисты в данной области техники могли использовать их для синтеза ингибиторов, причем более подробное описание методик приводится в экспериментальной части, посвященной синтезу конкретных соединений.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Общие препаративные методы

Гетероциклические амины синтезируют по известным методикам [см. в книгах Katritzky с соавт. Comprehensive Heterocyclic Chemistry (Химия гетероциклических соединений), Permagon Press: Oxford, UK (1984); March, Advanced Organic Chemistry (Органическая химия), 3^ье изд., John Wiley:New York (1985)].

Например, как показано на схеме I, 5-аминопиразолы, замещенные в положении N-1 арильными или гетероарильными остатками, можно синтезировать путем взаимодействия α-цианокетонов (2) с соответствующим арил- или гетероарилгидразином (3, R²=арил или гетероарил). Цианокетон (2), в свою очередь, можно получить с помощью взаимодействия иона ацетамидата с соответствующим ацилпроизводным, таким как сложный эфир, галогенид кислоты или ангидрид кислоты. В случае, если остаток R¹ требует стабилизации подходящим анионом, 2-арил- и 2-гетероарилфураны могут быть синтезированы по реакции Мицунобу путем взаимодействия цианокетона 2 со спиртом 5 с последующей циклизацией енольного простого эфира 6 в присутствии катализатора-основания с образованием фуриламина 7.

Схема I

Некоторые общие методы синтеза гетероциклических аминов

Замещенные анилины получают по стандартным методам [см. в книгах March, Advanced Organic Chemistry (Органическая химия), 3^ье изд., John Wiley:New York (1985); Larock, Comprehensive Organic Transformations (Превращения органических соединений), VCH Publishers: New York (1989)]. Как показано на схеме II, ариламины обычно синтезируют восстановлением нитроарилов с использованием металлических катализаторов, таких как Ni, Pd или Pt, и H₂ или переносчиков гидрида, таких как формиат, циклогексадиен или боргидрид [см. в книге Rylander, Hydrogenation Methods (Методы гидрирования), Academic Press: London, UK (1985)]. Нитроарилы можно также восстанавливать непосредственно с использованием эффективных источников гидрида, такого как LiAIH₄ [см. в книге Seyden-Penne, Reduction by the Alumino- and Borohydrides in Organic Synthesis (Восстановление алюмо- и боргидридами в органическом синтезе), VCH Publishers: New York (1991)], или при использовании металлов с нулевой валентностью, таких как Fe, Sn или Са, в большинстве случаев в кислой среде. Существует множество методов синтеза нитроарилов [см. в книгах March, Advanced Organic Chemistry (Органическая химия), 3^ье изд., John Wiley:New York (1985); Larock, Comprehensive Organic Transformations (Превращения органических соединений), VCH Publishers:New York (1989)].

Схема II Восстановление нитроарилов в ариламины

Нитроарилы обычно получают электрофильным ароматическим нитрованием с использованием HNO₃ или альтернативного источника NO₂ ⁺. Перед восстановлением нитроарилы могут быть модифицированы.

Таким образом нитроарилы, замещенные потенциально удаляемой группой (F, Cl, Br и т.п.), могут вступать в реакции замещения при взаимодействии с нуклеофилами, такими как тиолат (как показано на схеме III) или феноксиды. Нитроарилы можно также вводить в реакцию конденсации типа реакции Ульмана (Ullman) (см. схема III).

Схема III

Некоторые реакции нуклеофильного ароматического замещения с использованием нитроарилов

Как показано на схеме IV, мочевину можно получать при взаимодействии гетероарилизоцианата (12) с ариламином (11). Гетероарилизоцианат можно синтезировать из гетероариламина обработкой фосгеном или аналогами фосгена, такими как трихлорметилхлорформиат (дифосген), бис(трихлорметил)карбонат(трифосген) или N,N'-карбонилдиимидазол(CDI). Изоцианат можно также получить из производных гетероциклической карбоновой кислоты, таких как эфир, ацилгалогенид или ангидрид, с помощью перегруппировки Курциуса. Таким образом, реакция производного кислоты 16 с источником азида и последующая прегруппировка приводят к образованию изоцианата. Соответствующая карбоновая кислота (17) также может быть подвергнута перегруппировке Курциуса с использованием дифенилфосфорилазида (DPPA) или подобного реагента. Кроме того, мочевина может быть получена по реакции арилизоцианата (20) с гетероциклическим амином.

Схема IV Некоторые методы синтеза мочевины (Het=гетероцикл)

В конечном итоге, производные мочевины могут быть модифицированы далее с использованием методов, известных специалистам в данной области техники. Например, 2-арил- и 2-гетероарилтиенилмочевины можно получить из соответствующих 2-галогентиенил производных мочевины по реакции перекрестного сочетания с использованием переходного металла (как описано для 2-бромтиофена 25, схема V). Таким образом, взаимодействие нитрила 20 с эфиром α-тиоацетата приводит к образованию 5-замещенного-3-амино-2-тиофенкарбоксилата 21 (Ishizaki и соавт., Патент Японии 6025221). Декарбоксилирование эфира 21 можно проводить путем защиты аминогруппы, например, как в трет-бутокси(ВОС)карбамате (22), с последующим омылением и обработкой кислотой. Если в качестве защитной группы используют ВОС-группу, декарбоксилирование может сопровождаться удалением защитной группы с образованием замещенной 3-тиофенаммонийной соли (23). По альтернативному способу аммонийную соль 23 можно получить непосредственно путем омыления сложного эфира 21 с последующей обработкой кислотой.

После завершения синтеза мочевины, описанного выше, последующее бромирование мочевины приводит к образованию предпоследнего промежуточного производного галогентиофена (25). Затем реакция перекрестного сочетания тиофена 25 с соответствующим трибутил- или триметилоловом (R²=арил или гетероарил) в присутствии палладия приводит к образованию требуемой 2-арил- или 2-гетероарилтиенилмочевины.

Схема V Синтез и взаимопревращения производных мочевины

Изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы 1 и физиологически приемлемый носитель.

Соединения можно вводить перорально, местно, парентерально, ингаляцией или в виде аэрозоля или под язык, ректально или вагинально с использованием композиций, содержащих унифицированные дозы. Термин "введение путем инъекции" включает внутривенные, внутримышечные, подкожные и парентеральные инъекции, а также использование метода вливания. Кожное введение может включать местную аппликацию или чрескожное введение. Одно или несколько соединений можно использовать в сочетании с одним или несколькими нетоксичными фармацевтически приемлемыми носителями и, если необходимо, с другими активными комопонентами.

Композиции, предназначенные для перорального применения, получают по любому известному специалистам способу получения фармацевтических композиций. Для придания приятного вкуса такие композиции могут включать один или несколько агентов, которые выбирают из группы, включающей разбавители, подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты. Таблетки содержат активный компонент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, пригодными для изготовления таблеток. Например, такими наполнителями могут быть инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие или дезинтегрирующие агенты, например, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; и связующие агенты, например, стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без оболочки или могут быть покрыты известными методами с целью замедлить дезинтеграцию и всасывание в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение определенного времени. Например, может использоваться материал, обеспечивающий замедленное действие, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Эти соединения можно также получить в твердой, быстро рассасывающейся форме.

Композиции для перорального применения погут быть получены в виде твердых желатиновых капсул, где активный компонент смешан с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, где активный компонент смешан с водой или масляной средой, например, арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Жидкие суспензии содержат активные компоненты в смеси с наполнителями, пригодными для получения водных суспензий. Такими наполнителями являются суспендирующие агенты, например, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, камедь трагаканта и аравийская камедь; диспергирующими и смачивающими агентами могут быть природные фосфатиды, например, лецитин или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например, полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации этиленоксида с высшими алифатическими спиртами, например, гептадекаэтиленоксиэтанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами сорбита с жирными кислотами, такие как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами ангидросорбита с жирными кислотами, например, полиэтиленангидросорбитмоноолеат. Водные суспензии могут также содержать один или несколько консервантов, например, этил- или н-пропил-пара-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Диспергируемые порошки и гранулы, пригодные для приготовления водной суспензии путем добавления воды, содержат активный компонент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Примером пригодных диспергирующих или смачивающих агентов являются описанные выше компоненты. Кроме них в композиции могут присутствовать дополнительные наполнители, например, подсластители, ароматизаторы и красители.

Соединения можно также использовать для получения неводных композиций, например, масляных суспензий, которые можно получить суспендированием активных компонентов в растительном масле, например, арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или масле ореха арахис, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загустители, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Для придания приятного вкуса в композиции для перорального применения можно добавить подсластители, упоминавшиеся выше, и ароматизаторы. Эти композиции могут быть защищены добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Фармацевтические композиции по изобретению могут быть изготовлены в форме водно-масляных эмульсий. В качестве масляной фазы может использоваться растительное масло, например, оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, например, вазелиновое масло, или их смеси. Подходящими эмульгирующими агентами могут быть природные камеди, например, аравийская камедь или камедь трагаканта, природные фосфатиды, например, соевые бобы, лецитин, и эфиры или неполные эфиры ангидросорбита с жирными кислотами, например, ангидросорбит моноолеат, и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсии также могут содержать подсластители и ароматизаторы.

Сиропы и эликсиры могут быть приготовлены с подсластителями, например, глицерином, пропиленгликолем, сорбитом и сахарозой. Такие композиции могут также содержать средство, снижающее раздражение, консервант, ароматизатор и краситель.

Соединения по изобретению можно также использовать в форме суппозиториев для ректального или вагинального применения. Эти композиции получают путем смешивания лекарственного средства с подходящим, не вызывающим раздражения наполнителем, который является твердым при обычной температуре, но становится жидким при температуре тела, т.е. будет плавиться при ректальном или вагинальном введении с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают кокосовое масло и полиэтиленгликоли.

Соединения по изобретению можно вводить чрескожно с использованием способов, известных специалистам в данной области [см., например, в книге Chien, Transdermal Controlled Systemic Medications (Трансдермально-регулируемое системное медикаментозное лечение), Marcel Dekker, Inc., (1987); Lipp с соавт., публикация международной патентной заявки WO 94/04157, 3.03.94]. Например, раствор или суспензия соединения формулы I в подходящем летучем растворителе по выбору, содержащий агенты, способствующие проникновению, объединяют с другими добавками, известными специалистам в данной области, такими как материалы матрицы и бактерицидные средства. После стерилизации полученную смесь можно переработать по известной технологии в лекарственные формы. Кроме того, после обработки эмульгирующими агентами и водой из раствора или суспензии соединения формулы 1 можно получить лосьон или мазь.

Подходящие растворители для приготовления систем чрескожной доставки известны специалистам в данной области, они включают низшие спирты, такие как этанол или изопропиловый спирт, низшие кетоны, такие как ацетон, эфиры низших карбоновых кислот, такие как этилацетат, полярные простые эфиры, такие кактетрагидрофуран, низшие углеводороды, такие как гексан, циклогексан или бензол, или галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ, трихлортрифторэтан или трихлорфторэтан. Подходящие растворители могут также включать смеси одного или нескольких соединений, которые выбирают из низших спиртов, низших кетонов, эфиров низших карбоновых кислот, полярных простых эфиров, низших углеводородов, галогенированных углеводородов.

Подходящие способствующие проникновению агенты для систем чрескожной доставки известны специалистам в данной области, они включают, например, моногидрокси- или полигидроксиспирты, такие как этанол, пропиленгликоль или бензиловый спирт, насыщенные или ненасыщенные жирные С₈-С₁₈спирты, такие как лауриловый спирт или цетиловый спирт, насыщенные или ненасыщенные жирные С₈-С₁₈кислоты, такие как стеариновая кислота, насыщенные или ненасыщенные жирные сложные эфиры, содержащие до 24 атомов углерода, такие как метиловый, этиловый, пропиловый, изопропиловый, н-бутиловый, втор-бутиловый, изобутиловый, трет-бутиловый или моноглицериновый эфиры уксусной кислоты, капроновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, стеариновой кислоты и пальмитиновой кислоты, или диэфиры насыщенных или ненасыщенных дикарбоновых кислот, содержащие до 24 углеродных атомов, такие как диизопропиладипат, диизобутиладипат, диизопропилсебацат, диизопропилмалеат или диизопропилфумарат. Дополнительные материалы, способствующие проникновению, включают фосфатидилпроизводные, такие как лецитин или кефалин, терпены, амиды, кетоны, мочевину и их производные, а также простые эфиры, такие как диметилизосорбит и моноэтиловый эфир диэтиленгликоля. Подходящие композиции, способствующие проникновению, могут также включать смеси одного или нескольких агентов, которые выбирают из группы: моногидрокси- или полигидроксиспирты, насыщенные или ненасыщенные жирные С₈-С₁₈спирты, насыщенные или ненасыщенные жирные С₈-С₁₈кислоты, насыщенные или ненасыщенные жирные сложные эфиры, содержащие до 24 атомов углерода, диэфиры насыщенных или ненасыщенных дикарбоновых кислот, содержащие до 24 углеродных атомов, фосфатидилпроизводные, такие как лецитин или кефалин, терпены, амиды, кетоны, мочевину и их производные, и простые эфиры.

Подходящие связующие материалы для систем чрескожной доставки известны специалистам в данной области, они включают, например, полиакрилаты, силиконы, полиуретаны, блокполимеры, сополимеры стирола и бутадиена, природные и синтетические смолы. В качестве компонентов матрицы могут также использоваться эфиры целлюлозы, производные полиэтилена и силикаты. Для повышения вязкости матрицы могут быть добавлены дополнительные материалы, такие как вязкие смолы или масла.

Для всех схем применения, заявленных в описании для соединений формулы I, суточная пероральная доза предпочтительно составляет от 0,01 до 200 мг/кг веса тела. Суточная доза для введения путем инъекции, включая внутривенные, внутримышечные, подкожные и парентеральные инъекции, и использование метода вливания, предпочтительно составляет от 0,01 до 200 мг/кг веса тела. Суточная ректальная доза предпочтительно составляет от 0,01 до 200 мг/кг веса тела. Суточная вагинальная доза применения лекарственного средства предпочтительно составляет от 0,01 до 200 мг/кг веса тела. Суточная местная доза предпочтительно составляет от 0,1 до 200 мг при введении от одного до четырех раз в день. При чрескожном введении концентрация предпочтительно должна обеспечивать суточную дозу от 0,01 до 200 мг/кг. При ингаляции суточная доза предпочтительно составляет от 0,01 до 10 мг/кг веса тела.

Для специалиста в данной области техники представляется очевидным, что конкретный способ введения зависит от ряда факторов, каждый из которых при назначении лекарственного средства рассматривается в установленном порядке. Однако следует также полагать, что индивидуальный уровень доз для данного пациента зависит от множества факторов, включающих активность конкретного используемого соединения, возраст пациента, вес тела пациента, общее состояние здоровья пациента, пол пациента, диету пациента, время введения, схемы введения, скорости выведения лекарственного средства, сочетания лекарственных средств, тяжести заболевания, подлежащего терапевтическому лечению.

Для специалиста в данной области представляется также очевидным, что оптимальный курс лечения, т.е. схема лечения и суточное число доз соединения формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли в течение определенного времени, может быть установлено специалистом в данной области на основании обычных медицинских анализов.

Все заявки, патенты и публикации, цитированные выше и далее по тексту, включены в качестве ссылки в текст заявки, включая предварительную заявку на выдачу патента Attorney Docket BAYER 9 V1, поданную 22 декабря, 1997 г. под серийным №08/996181, преобразованную 22 декабря, 1998 г.

Соединения получают из известных соединений (или из исходных материалов, которые, в свою очередь, получают из известных соединений) с использованием общих препаративных методов, приведенных ниже. Активность конкретного соединения в отношении ингибирования киназы raf определяют общепринятым способом по методике, описанной ниже. Последующие примеры даны для иллюстрации сущности изобретения и ни в коей мере не ограничивают объем изобретения.

Примеры

Все реакции проводят в стеклянной посуде, высушенной в пламени или в сушильном шкафу, при избыточном давлении сухого аргона или сухого азота и, если не указано иное, при перемешивании на магнитной мешалке. Чувствительные (к кислороду или влаге) жидкости и растворы переносят с помощью шприца или канюли и вносят в реакционные сосуды через резиновые прокладки. Если не указано иное, термин "концентрирование при пониженном давлении" относится к использованию роторного испарителя Бюхи при давлении приблизительно 1,99 кН/м² (15 мм рт. ст.).

Все значения температур приводятся в градусах Цельсия (°С) без поправки. Если не указано иное, все доли и проценты указаны по массе.

Все реагенты и растворители товарного качества используют без дополнительной очистки. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводят на стеклянных пластинках (фирмы Whatman^®), покрытых слоем силикагеля 60А F-254 толщиной 250 мкм. Проявление хроматограмм проводят по одному или нескольким следующим способам: (а) при освещении УФ-светом, (б) экспозицией в парах иода, (в) погружением пластинок в 10%-ный раствор фосфорномолибденовой кислоты в этаноле с последующим нагреванием, (г) погружением пластинок в раствор сульфата церия с последующим нагреванием, и/или (д) погружением пластинок в раствор 2,4-динитрофенилгидразина в подкисленном этаноле с последующим нагреванием. Хроматографию на колонке (экспресс-хроматографию) проводят на силикагеле с размерами частиц 230-400 меш (фирмы ЕМ Science^®).

Температуру плавления (т.пл) определяют на приборе Thomas-Hoover или на приборе Mettler FP66 и приводят без поправки. Инфракрасные спектры с Фурье-преобразованием снимают на спектрофотометре Mattson 4020 Galaxy Series. Протонные спектры (¹Н) ядерного магнитного резонанса (ЯМР) снимают на спектрометре General Electric GN-Omega 300 (300 МГц) с использованием в качестве стандартов Me₄Si (δ 0,00) или остаточно протонированный растворитель (CHCl₃ δ 7,26; МеОН δ 3,30; ДМСО δ 2,49). Спектр углерода ¹³С снимают на спектрометре General Electric GN-Omega 300 (75 МГц) с использованием в качестве стандарта растворителя (CDCl₃ δ 77,0; MeOD-d₃ δ 49,0; ДМСО-d₆ δ 39,5). Масс-спектры низкого разрешения (MS) и масс-спектры высокого разрешения (HRMS) получают как в виде спектров ионизации электронным ударом (EI), так и в виде спектров ионизации быстрыми атомами (FAB). Спектры ионизации электронным ударом (EI-MS) получают на масс-спектрометре Hewlett Packard 5989A, снабженном блоком для ввода образца с десорбцией химической ионизацией (фирмы Vacumetrics). Источник ионов имеет температуру 250°С. Ионизацию электронным ударом проводят при энергии электронов 70 эВ и токе в ловушке 300 мкА. Масс-спектры вторичных ионов с захватом цезия (FAB-MS), современный вариант метода с ионизацией быстрыми атомами, получают на спектрометре Kratos Concept 1-H. Масс-спектры с химической ионизацией (CI-MS) получают на приборе Hewlett Packard MS-Engine 5989A с метаном в качестве газа-реагента (133,32×10^-4 - 333,3×10^-4 (1×10^-4 - 2,5×10^-4 торр). Блок прямого ввода образца десорбцией с химической ионизацией (фирмы Vaccumetrics, Inc.) (DCI) функционирует при перепаде давления от 0-147,1 кН/м² (0-1,5 ат.), а затем в течение 10 с при 980,6 кН/м² (10 ат.), пока не исчезают все следы образца (˜1-2 мин). Спектр сканируют в диапазоне от 50-800 единиц атомной массы (одно сканирование в течение 2 с). ВЭЖХ-масс-спектр с электроспреем (HPLC ES-MS) получают на приборе Hewlett Packard 1100 HPLC, снабженном четырехканальным насосом, детектором с переменной длиной волны, колонкой С-18 и масс-спектрометром с ионной ловушкой фирмы Finnigan LCQ с ионизацией электроспреем. Спектр сканируют в диапазоне от 120-800 единиц атомной массы с использованием переменного времени счета числа ионов в источнике. Газово-хроматографический - ион селективный масс-спектр (GC-MS) получают на газовом хроматографе Hewlett Packard 5890, снабженном HP-1 метилсиликоновой колонкой (25 м × 0,2 мм; пропитка 0,33 мМ) и масс-селективным детектором Hewlett Packard 5971 (с энергией ионизации 70 эВ).

Элементный анализ выполняют в лаборатории Robertson Microlit Labs, Madison NJ. Все соединения мочевины охарактеризованы спектрами ЯМР, масс-спектрами низкого разрешения (MS) и элементными анализами или масс-спектрами высокого разрешения (HRMS), которые соответствуют приведенным структурам.

Список сокращений

АсОНуксусная кислотаВОСтрет-бутоксикарбонилDMPU1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинонДМФN,N-диметилформамидДМСОдиметилсульфоксидDPPAдифенилфосфорилазидEtOAcэтил ацетатEtOHэтанол (100%)Et₂Oдиэтиловый эфирEt₃Nтриэтиламинm-СРВА3-хлорпероксибензойная кислотаМеОНметанолпет. эфир (pet ether)петролейный эфир (температура кипения 30-60°С)ТГФтетрагидрофуранТФУтрифторуксусная кислотаTfтрифторметансульфонилacetoneацетонhexaneгексанСН₂C_l2хлористый метиленCHCl₃хлороформt-Buтрет-бутил

А. Общие методы синтеза гетероциклических аминов

А1. Общий метод получения N'-арил-5-аминопиразолов

N'-(4-метоксифенил)-5-амино-3-трет-бутилпиразол: Смесь гидрохлорида 4-метоксифенилгидразина (3,5 г), 4,4-диметил-3-оксопентаннитрил (2,5 г), ЕЮН (30 мл) и АсОН (1 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, охлаждают до комнатной температуры и выливают в смесь Et₂O (100 мл) и 10% раствора Na₂CO₃ (100 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Твердый остаток промывают пентаном, при этом получают требуемый пиразол в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (4,25 г): ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,18 (s, 9H), 3,78 (s, 3H), 5,02 (ушир. s, 2H), 5,34 (s, 1H), 6,99 (d, J=8 Гц, 2H), 7,42 (d, J=8 Гц, 2Н).

A2. Общий метод синтеза 2-арил-З-аминофуранов на основе реакции Мицунобу (Mitsunobu)

Стадия 1. 4,4-диметил-3-(4-пиридинилметокси)-2-пентеннитрил:

Раствор трифенилфосфина (2,93 г, 11,2 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) обрабатывают диэтилазодикарбоксилатом (1,95 г, 11,2 ммоль) и 4-пиридинилметанолом (1,22 г, 11,2 ммоль), затем перемешивают в течение 15 мин. Полученную суспензию белого цвета обрабатывают 4,4-диметил-3-оксопентаннитрилом (1,00 г, 7,99 ммоль), затем перемешивают в течение 15 мин. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией (30% EtOAc/70% гексан), при этом получают требуемый нитрил в виде твердого вещества желтого цвета (1,83 г, 76%): ТСХ (20% EtOAc/80% гексан) R_f 0,13; ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 1,13 (s, 9H), 4,60 (s, 1 H), 5,51 (s, 2H), 7,27 (d, 5,88 Гц, 2H), 8,60 (d, J=6,25 Гц, 2Н); ¹³С-ЯМР (CDCl₃) δ 27,9 (3С), 38,2, 67,5, 70,8, 117,6, 121,2 (2С), 144,5, 149,9 (2С), 180,7; CI-MS m/z (отн. масса) 217 ((М+Н)⁺ 100%).

Стадия 2. 3-амино-2-(4-пиридинил)-5-трет-бутилфуран: Раствор 4,4-диметил-3-(4-пиридинилметокси)-2-пентеннитрила (1,55 г, 7,14 ммоль) в безводном ДМСО (75 мл) обрабатывают третбутоксидом калия (0,88 г, 7,86 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Полученную смесь обрабатывают EtOAc (300 мл), затем последовательно промывают водой (2×200 мл) и насыщенным раствором NaCl (100 мл). Объединенные водные фазы экстрагируют EtOAc (100 мл). Объединенные органические фазы сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией (градиент от 30% EtOAc/70% гексан до 100% EtOAc), при этом получают требуемый продукт в виде масла оранжевого цвета (0,88 г, 57%): ТСХ (40% EtOAc/60% гексан) R_f 0,09; ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 1,28 (s, 9H), 3,65 (ушир. s, 2H), 5,79 (s, 1H), 7,30 (d, J=6,25 Гц, 2H), 8,47 (d, J=6,25 Гц, 2H); EI-MS m/z (отн. масса) 216 (M⁺ 30%).

A3. Синтез 3-амино-5-алкилтиофенов из N-BOC эфиров 3-амино-5-алкил-2-тиофенкарбоксилатов

Стадия 1. Метил 3-(трет-бутоксикарбониламино)-5-трет-бутил-2-тиофенкарбоксилат; К раствору метил 3-амино-5-трет-бутил-2-

тиофенкарбоксилата (150 г, 0,70 моль) в пиридине (2,8 л) при 5°С добавляют ди-трет-бутил-дикарбонат (171,08 г, 0,78 моль, 1,1 эквивалент), N,N-диметиламинопиридин (86 г, 0,70 моль, 1,00 эквивалент), и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 7 дней. Полученный темный раствор концентрируют при пониженном давлении (приблизительно 53,328 Н/м²) при приблизительно 20°С. Полученное твердое вещество красного цвета растворяют в CH₂Cl₂ (3 л) и последовательно промывают 1 М раствором Н₃PO₄ (2×750 мл), насыщенным раствором NaHCO₃ (800 мл) и насыщенным раствором NaCl (2×800 мл), сушат (Na₂SO₄), концентрируют при пониженном давлении. Полученное твердое вещество оранжевого цвета растворяют в абс. EtOH (2 л) при нагревании при 49°С, затем обрабатывают водой (500 мл), при этом получают требуемый продукт в виде твердого вещества серо-белого цвета (163 г, 74%). ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 1,38 (s, 9H), 1,51 (s, 9H), 3,84 (s, 3Н), 7,68 (s, 1H), 9,35 (ушир. s, 1H); FAB-MS m/z (отн. масса) 314 ((М+Н)⁺; 45%).

Стадия 2. 3-(трет-Бутоксикарбониламино)-5-трет-бутил-2-тиофенкарбоновая кислота: К раствору метил 3-(трет-бутоксикарбониламино)-5-трет-бутил-2-тиофенкарбоксилата (90,0 г, 0,287 моль) в ТГФ (630 мл) и МеОН (630 мл) добавляют раствор NaOH (42,5 г, 1,06 мл) в воде (630 мл). Полученную смесь нагревают при 60°С в течение 2 ч, концентрируют до приблизительно 700 мл при пониженном давлении и охлаждают до 0°С. Величину рН раствора доводят 1,0 н. раствором HCl (приблизительно 1 л) до приблизительно 7 при внутренней температуре приблизительно 0°С. Полученную смесь обрабатывают EtOAc (4 л). Величину рН раствора доводят 1 н. раствором HCl (500 мл) до приблизительно 2. Органическую фазу промывают насыщенным раствором NaCl (4×1,5 л), сушат (Na₂SO₄) и концентрируют до приблизительно 200 мл при пониженном давлении. Остаток обрабатывают гексаном (1 л), при этом получают твердое вещество светло-розового цвета (41,6 г). При повторной обработке маточного раствора с использованием концентрирования -осаждения поуказаной выше методике получают дополнительное количество продукта (38,4 г, общий выход 93%): ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 1,94 (s, 9H), 1,54 (s, 9H), 7,73 (s, 1H), 9,19 (ушир. s, 1H); FAB-MS m/z (отн. масса) 300 ((М+Н)⁺; 50%).

Стадия 3. Хлорид 5-трет-бутил-З-тиофенаммония: Раствор 3-(трет-бутоксикарбониламино)-5-трет-бутил-2-тиофенкарбоновой кислоты (3,0 г, 0,010 моль) в диоксане (20 мл) обрабатывают раствором HCl (4,0 М в диоксане, 12,5 мл, 0,050 моль, 5,0 эквивалента) и полученную смесь нагревают при 80°С в течение 2 ч. Полученный мутный раствор охлаждают до комнатной температуры, при этом происходит выделение некоторого количества осадка. Полученную суспензию разбавляют EtOAc (50 мл) и охлаждают до -20°С. Полученное твердое вещество собирают и сушат в течение ночи при пониженном давлении, при этом получают требуемую соль в виде твердого вещества серо-белого цвета (1,72 г, 90%). ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,31 (s, 9Н), 6,84 (d, J=1,48 Гц, 1Н), 7,31 (d, J=1,47 Гц, 1Н), 10,27 (ушир. s, 3Н).

В. Общие методы синтеза замещенных анилинов

В1. Общий метод синтеза замещенного анилина с использованием нуклеофильного замещения ароматического производного с использованием галогенпиридина

3-(4-пиридинилтио)анилин: К раствору 3-аминотиофенола (3,8 мл, 34 ммоль) в безводном ДМФ (90 мл) добавляют гидрохлорид 4-хлорпиридина (5,4 г, 35,6 ммоль), затем добавляют K₂СО₃ (16,7 г, 121 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч, затем разбавляют EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Водный слой экстрагируют EtOAc (2×100 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным раствором NaCl (100 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток фильтруют через слой силикагеля (градиент от 50% EtOAc/50% гексан до 70% EtOAc/30% гексан) и полученный материал растирают со смесью Et₂О/гексан, при этом получают требуемый продукт (4,6 г, 66%): ТСХ (100% этилацетат) R_f 0,29; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 5,41 (s, 2H), 6,64-6,74 (m, 3H), 7,01 (d, J=4,8 Гц, 2H), 7,14 (t, J=7,8 Гц, 1Н), 8,32 (d, J=4,8 Гц, 2H).

С. Общие методы получения мочевины

С1а. Реакция гетероциклического амина с арилизоцианатом

N-(1-(4-метоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина: К раствору 1-(4-метоксифенил)-3-трет-бутил-5-аминопиразола (0,342 г, 1,39 ммоль) в безводном толуоле (9 мл) при перемешивании добавляют 2,3-дихлорфенилизоцианат (0,276 мл, 2,09 ммоль). Раствор герметически закрывают и перемешивают в темноте в течение 96 ч при 60°С. Затем реакционную смесь разбавляют EtOAc (200 мл). Полученную смесь последовательно промывают 1 М раствором HCl (2×125 мл) и насыщенным раствором NaCl (50 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией (20% EtOAc/80% гексан), при этом получают требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (0,335 г, 56%): ТСХ (20% EtOAc/80% гексан) R_f 0,22; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,24 (s, 9H), 3,79 (s, 3H), 6,33 (s, 1H), 7,05 (d, J=9 Гц, 2Н), 7,28 (m, 2H), 7,38 (d, J=9 Гц, 2Н), 8,05 (dd, J=3; 6 Гц, 1H), 8,75 (s, 1H), 9,12 (s, 1H); FAB-MS m/z 433 ((M+H)⁺).

C1b. Реакция гетероциклического амина с арилизоцианатом

N-(2-(4-пиридинил)-5-трет-бутил-3-фурил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина: Раствор 3-амино-2-(4-пиридинил)-5-трет-бутилфурана (метод А2, 0,10 г, 0,46 ммоль) и 2,3-дихлорфенилизоцианата (0,13 г, 0,69 ммоль) в CH₂Cl₂ перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов, затем обрабатывают 2-(диметиламино)этиламином (0,081 г, 0,92 ммоль) и перемешивают в течение дополнительных 30 мин. Полученную смесь разбавляют EtOAc (50 мл), затем последовательно промывают 1 н. раствором HCl (50 мл), насыщенным раствором NaHCO₃ (50 мл) и насыщенным раствором NaCl (50 мл), сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией (градиент от 10% EtOAc/90% гексан до 40% EtOAc/60% гексан), при этом получают требуемое соединение в виде твердого вещества белого цвета (0,12 г, 63%): т.пл. 195-198°С; ТСХ (60% EtOAC/40% гексан); R_f 0,47; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,30 (s, 9H), 6,63 (s, 1H), 7,30-7,32 (m, 2H), 7,58 (dm, J=6,62 Гц, 2H), 8,16 (dd, J=2,57, 6,99 Гц, 1H), 8,60 (dm, J=6,25 Гц, 2H), 8,83 (s, 1H), 9,17 (s, 1H); ¹³С-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 28,5 (3С), 32,5, 103,7, 117,3 (2С), 119,8, 120,4, 123,7, 125,6, 128,1, 131,6, 135,7, 136,5, 137,9, 150,0 (2С), 152,2, 163,5; CI-MS m/z (отн. масса) 404 ((М+Н)⁺, 15%), 406 ((М+Н+2)⁺, 8%).

С1с. Реакция гетероциклического амина с изоцианатом

N-(5-трет-бутил-3-тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина: Пиридин (0,163 мл, 2,02 ммоль) добавляют к суспензии хлорида 5-третбутилтиофенаммония (метод А4с, 0,30 г, 1,56 ммоль) и 2,3-дихлорфенилизоцианата (0,32 мл, 2,02 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) для осветления раствора и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток распределяют между EtOAc (15 мл) и водой (15 мл). Органический слой последовательно промывают насыщенным раствором NaHCO₃ (15 мл), 1 н. раствором HCl (15 мл), насыщенным раствором NaCl (15 мл), сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Часть остатка очищают препаративной ВЭЖХ (Колонка С-18, 60% ацетонитрил/40% вода/0,05% ТФУ), при этом получают требуемую мочевину (0,180 г, 34%): т.пл. 169-170 °С; ТСХ (20% EtOAC/80% гексан); R^f 0,57; 1H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1, 31 (s, 9H), 6,79 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,24-7,33 (m, 2H), 8,16 (dd, J=1,84, 7,72 Гц, 1Н), 8,35 (s, 1H), 9,60 (s, 1H); ¹³С-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 31,9 (3С), 34,0, 103,4, 116,1, 119,3, 120,0, 123,4, 128,1, 131,6, 135,6, 138,1, 151,7, 155,2; FAB-MS m/z (отн. масса) 343 ((М+Н)⁺, 83%), 345 ((М+Н+2)⁺, 56%), 347 ((М+Н+4)⁺, 12%).

С2. Реакция замещенного анилина с N,N'-карбонилдиимидазолом с последующей реакцией с гетероциклическим амином

N-(1-Фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)-фенил)мочевина: Раствор 4-(4-пиридинилметил)анилина (0,25 г, 1,38 ммоль) и N,N'-карбонилдиимидазола (0,23 г, 1,42 ммоль) в CH₂Cl₂ (11 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, затем обрабатывают 5-амино-1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолом (0,30 г, 1,38 ммоль) и полученную смесь перемешивают при 50°С в течение ночи. Полученную смесь разбавляют EtOAc (25 мл), затем последовательно промывают водой (30 мл), насыщенным раствором NaCl (30 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией (градиент от 100% СН₂Cl₂ до 30% ацетон/70% CH₂Cl₂), и полученный материал перекристаллизовывают (EtOAc/Et₂O), при этом получают требуемое соединение с содержанием кристаллогидратной воды 0,25 эквивалента (0,30 г): ТСХ (60% ацетон/40% СН₂Cl₂); R_f 0,56; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,25 (s, 9H), 3,86 (s, 2Н), 6,34 (s, 1H), 7,11 (d, J=8,82 Гц, 2Н), 7,19 (dm, J=6,25 Гц, 2Н), 7,31 (d, J=1,84 Гц, 2Н), 7,35-7,51 (m, 5H), 8,34 (s, 1H), 8,42 (dm, J=5,98 Гц, 2Н), 8,95 (s, 1H); FAB-MS m/z (отн. масса) 426 ((M+H)⁺, 100%).

D. Взаимопревращения производных мочевины

D1. Общий метод электрофильного галогенирования арилмочевин

N-(2-бром-5-трет-бутил-3-тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина: К суспензии N-(5-трет-бутил-3-тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевины (метод С1с; 3,00 г, 8,74 ммоль) в CHCl₃ (200 мл) при комнатной температуре медленно добавляют раствор Br₂ (0,46 мл, 1,7 ммоль) в CHCl₃ (150 мл) через капельную воронку в течение 2,5 ч, при этом реакционная смесь становится гомогенной. Перемешивание продолжают в течение 20 мин, после чего данные ТСХ указывают на завершение реакции. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, остаток растирают (Et₂О/гексан) и полученное твердое вещество промывают (гексан), при этом получают бромированный продукт в виде порошка розового цвета (3,45 г, 93%): т.пл. 180-183°С; ТСХ (10% EtOAC/90% гексан); R_f 0,68; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,28 (s, 9H), 7,27-7,31 (m, 2H), 7,33 (s, 1H), 8,11 (dd, J=3,3, 6,6 Гц, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,12 (s, 1H); ¹³С-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 31,5 (3С), 34,7, 91,1, 117,9, 120,1, 120,5, 123,8, 128,0, 131,6, 135,5, 137,9, 151,6, 155,3; FAB-MS m/z (отн. масса) 421 ((М+Н)⁺, 7%), 423 ((М+2+Н)⁺, 10%).

D2. Общий метод проведения реакций перекрестного сочетания, инициированного металлами с использованием галогензамещенных производных мочевин

N-(2-фенил-5-трет-бутил-3-тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина: К раствору N-(3-(2-бром-5-трет-бутил)тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевины (0,50 г, 1,18 ммоль) и фенилтриметилолова (0,21 мл, 1,18 ммоль) в ДМФ (15 мл) добавляют Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0,082 г, 0,12 ммоль) и полученную суспензию нагревают при 80°С в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют EtOAc (50 мл) и водой (50 мл) и органический слой последовательно промывают водой (3×50 мл) и насыщенным раствором NaCl (50 мл), затем сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают MPLC (Biotage ™; градиент от 100% гексан до 5% EtOAc/95% гексан), затем очищают препаративной ВЭЖХ (колонка С-18, 70% СН₃CN/30% Н₂O/0,05% ТФУ). Фракции, полученные в результате ВЭЖХ, концентрируют при пониженном давлении и полученную водную смесь экстрагируют EtOAc (2×50 мл).

Объединенные органические слои сушат (Na₂SO₄) и концентрируют при пониженном давлении, при этом получают смолообразное полутвердое вещество, которое растирают с гексаном, при этом получают требуемый продукт в виде твердого вещества белого цвета (0,050 г, 10%): т.пл. 171-173°С; ТСХ (5% EtOAc/95% гексан); R_f 0,25; ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 1,42 (s, 9H), 6,48 (ушир. s, 1Н), 7,01 (s, 1H), 7,10-7,18 (m, 2H), 7,26-7,30 (m, 1H), 7,36 (app. t, J=7,72 Гц, 2H), 7,39 (ушир. s., 1H), 7,50 (dm, J=6,99 Гц, 2H), 7,16 (dd, J=2,20, 7,72 Гц, 1H); ¹³С-ЯМР (CDCl₃) δ 32,1 (3С), 34,8, 118,4, 118,8, 120,7, 121,1, 124,2, 127,7, 127,9, 128,2 (2С), 128,5, 129,0 (2С), 132,4, 132,5, 136,9, 153,1, 156,3; FAB-MS m/z (отн. масса) 419 ((М+Н)⁺, 6%), 421 ((М+Н+2)⁺, 4%).

D3. Общие методы восстановления нитросодержащих арилмочевин

N-(1-(3-Аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилтио)фенил)мочевина: Раствор N-(1-(3-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилтио)фенил)мочевины (полученной аналогичным способом, как описано в методах А1 и С1а (0,310 г, 0,635 ммоль) в уксусной кислоте (20 мл), помещают в атмосферу аргона по методике дегазирования в вакууме и продувки аргоном. К полученному раствору добавляют воду (0,2 мл), затем добавляют порошкообразное железо (325 меш; 0,354 г, 6,35 ммоль). Реакционную смесь интенсивно перемешивают в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 18 ч, после чего данные ТСХ указывают на отсутствие в растворе исходного вещества. Реакционную смесь фильтруют и твердое вещество обильно промывают водой (300 мл). Значение рН полученного раствора оранжевого цвета доводят до 4,5 добавлением гранул NaOH (образуется белый осадок). Полученную суспензию экстрагируют Et₂O (3×250 мл), объединенные органические слои промывают насыщенным раствором NaHCO₃ (2×300 мл) до исчезновения пены. Полученный раствор сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Полученное твердое вещество белого цвета очищают колоночной хроматографией (градиент от 30% ацетон/70% CH₂Cl₂ до 50% ацетон/50% CH₂Cl₂), при этом получают продукт в виде твердого вещества белого цвета (0,165 г, 57%): ТСХ (50% ацетон/50% CH₂Cl₂) R_f 0,50; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,24 (s, 9H), 5,40 (ушир. s, 2Н), 6,34 (s, 1H), 6,57 (d, J=8 Гц, 2Н), 6,67 (s, 1Н), 6,94 (d, J=6 Гц, 2Н), 7,12 (арр. t=8 Гц, 1H), 7,47 (d, J=9 Гц, 2Н), 7,57 (d, J=9 Гц, 2Н), 8,31 (d, J=6 Гц, 2Н), 8,43 (s, 1H), 9,39 (s, 1H); FAB-MS m/z 459 ((M+H)⁺).

D4. Общие методы ацилирования амин-содержащих арилмочевин

N-(1-(3-ацетамидофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-феноксифенил)мочевина: К раствору N-(1-(3-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-феноксифенил)мочевины (полученной аналогичным способом, как описано в методах А1, С1а и D3; 0,154 г, 0,349 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) добавляют пиридин (0,05 мл), затем добавляют ацетилхлорид (0,030 мл, 0,417 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего данные ТСХ указывают на отсутствие исходного вещества. Реакционную смесь разбавляют CH₂Cl₂ (20 мл) и затем полученный раствор последовательно промывают водой (30 мл) и насыщенным раствором NaCl (30 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией (градиент от 5% EtOAc/95% гексан до 75% EtOAc/25% гексан), при этом получают продукт в виде твердого вещества белого цвета (0,049 г, 30%): ТСХ (70% EtOAc/30% гексан) R_f 0,32; ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 1,26 (s, 9H), 2,05 (s, 3Н), 6,35 (s, 1H), 6,92-6,97 (m, 4H), 7,05-7,18 (m, 2H), 7,32-7,45 (m, 5H), 7,64-7,73 (m, 2H), 8,38 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 10,16 (s, 1H); FAB-MS m/z 484 ((M+H)⁺)

Следующие соединения синтезируют согласно общим методам, описанным выше (см. табл. 1-5).

Примеры биологических испытаний

Анализ киназы raf in vitro

При анализе киназы in vitro киназу raf инкубируют с белком МЕК в 20 мМ трис-HCl буферном растворе, рН 8,2, содержащем 2 мМ 2-меркаптоэтанола и 100 мМ NaCl. Затем готовят концентрированный 10 мМ раствор (исходный раствор) соединений в ДМСО. К 20 мкл раствора белков raf+MEK добавляют 5 мкл воды или разбавленный водой исходный раствор соединения. Киназную реакцию инициируют добавлением 25 мкл [γ-³³P]АТФ (1000-3000 расп.в мин./пмоль) в 80 мМ трис-HCl буферном растворе, рН 7,5, содержащем 120 мМ NaCl, 1,6 мМ ДТТ, 16 мМ MgCl₂. Реакционную смесь инкубируют при 32°С обычно в течение 22 мин. Затем реакционную смесь наносят на фосфоцеллюлозные фильтры, отмывают свободную метку 1%-ным раствором фосфорной кислоты и включение ³³P в белок определяют количественно в жидком сцинтилляторе. Для высокоэффективного анализа большого числа образцов используют 10 мкМ раствор АТФ и 0,4 мкМ раствор МЕК. В некоторых экспериментах киназную реакцию останавливают добавлением равного количества буфера Лэммли. Образцы кипятят в течение 3 мин и белки разделяют электрофорезом в 7,5%-ном геле по методу Лэммли. Гели фиксируют, сушат и помещают на фотопластинку (фирмы Fuji). Степень фосфорилирования определяют, используя аналитическую систему Fujix Bio-lmaging.

Все приведенные в качестве примеров соединения имеют значения IC₅₀ в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ.

Анализ роста клеток in vitro

Для анализа роста in vitro линии опухолевых клеток человека, включая НСТ116 и DLD-1, но не ограничиваясь перечисленным, содержащие мутантные гены K-ras, используют в стандартных анализах пролиферации при росте на якорной подложке на пластике или при безъякорном росте на мягком агаре. Линии опухолевых клеток человека получают на фирме АТСС (Rockville MD) и поддерживают в среде RPMI с 10%-ной инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой и 200 мМ глутамином. Культуральную среду и добавки получают на фирме Gibco/BRL (Gaitherburg, MD) за исключением эмбриональной телячьей сыворотки (фирма JRH Biosciences, Lenexa, KS). В стандартном анализе пролиферации при росте на якорной подложке клетки (3×10³) высевают в 96-луночные планшеты для клеточных культур и для закрепления в лунках оставляют на ночь при 37°С в термостате с 5%-ным СО₂. Соединения раститровывают в среде методом разведения и добавляют в лунки 96-луночного планшета с клеточными культурами. Обычно клетки оставляют расти в течение 5 суток с подачей свежего раствора соединения на третий день. Пролиферацию контролируют измерением метаболической активности стандартным колориметрическим анализом ХТТ (фирма Boehringer Mannheim) с использованием стандартного ридера для планшетов для ИФА (ELISA plate reader) при OD 490/560 или определением включения в ДНК ³H-тимидина у 8 ч культуры с использованием ³H-тимидина (1 мкКи), например, перенесением клеток сборщиком клеток на стекловолоконные фильтры с последующим измерением включения ³H-тимидина по числу импульсов в жидком сцинтилляторе.

Для безъякорного роста клетки в 0,4%-ной агарозе (Seaplaque) в полной среде RPMI в количестве от 1×10³ до 3×10³ помещают в 24-луночные планшеты, наслаивая на донный слой, содержащий только 0,64%-ный агар в полной среде RPMI. Затем добавляют растворы анализируемых соединений, полученные методом серийных разведений на полной среде, и инкубируют при 37°С в термостате с 5%-ным CO₂ в течение 10-14 суток с подачей свежей среды, содержащей анализируемое соединение с интервалом 3-4 дня. Количество и средний размер колоний регистрируют с использованием компьютерного анализа изображения и специальных программ (Image Pro Plus, media Cybernetics).

В таблице 6 приведены данные о биологической активности соединений из таблиц 3-5.

Таблица 6.Данные о биологической активности соединений.Поз.IC₅₀, мкМПоз.IC₅₀, мкМПоз.IC₅₀, мкМПоз.IC₅₀, мкМ42<161<180от 1 до 599<143<162<181<1100<144от 5 до 1063от 1 до 58210101от 5 до 1045<164от 5 до 1083101021046<165108410103от 1 до 547<166от 5 до 108510104от 5 до 1048<167от 1 до 58610105от 5 до 1049<168от 1 до 58710106от 5 до 1050<169от 1 до 588от 1 до 5107от 1 до 551<170от 1 до 589от 5 до 10108<152<171от 1 до 59010109от 1 до 553<172от 1 до 59110110<154<1731092<1111от 5 до 10551074<193от 1 до 5112<1561075от 1 до 594<1113от 1 до 557<176от 1 до 595<1114от 5 до 1058<177<196от 1 до 5115<159от 1 до 578<197от 1 до 5116от 1 до 560<179от 1 до 598от 5 до 10117от 1 до 5

Данные анализа показывают, что соединения формулы 1 обладают активностью, как ингибиторы киназы raf и ингибиторы роста опухолевых клеток.

Анализ in vivo

Анализ in vivo ингибирующего воздействия соединений на опухоли (например, солидные опухоли), опосредованные raf киназой, проводят по следующей методике.

Мышам линии CDI nu/nu (возрастом 6-8 недель) вводят подкожно в бок 1×10⁶ клеток аденокарциномы толстой кишки человека. Начиная примерно с 10 дня, когда размер опухоли составляет 50-100 мг, животным вводят внутрибрюшинно, внутривенно или перорально определенными дозами по 10, 30, 100 или 300 мг/кг соединения по изобретению. В течение 14 дней вводят определенные дозы один раз в день; размер опухоли замеряют кронциркулем дважды в неделю.

Кроме того, ингибирующее действие соединений на киназу raf и, следовательно, на опухоли (например, солидные опухоли), опосредованные киназой raf, можно продемонстрировать in vivo по методу, описанному в статье Monia с соавт. (Nat. Med., 1996, т.2, стр. 668-75).

Вышеприведенные примеры можно повторить с тем же результатом, заменяя описанные в общем виде или более конкретно реагенты и/или условия (реакции) по настоящему изобретению на соединения или условия, описанные в предшествующих примерах.

Из вышеприведенного описания специалист в данной области техники может легко установить характерные особенности настоящего изобретения и, не выходя за пределы объема и сущности изобретения, может создать различные варианты и модификации изобретения для того, чтобы адаптировать его к разнообразным задачам и условиям.

Изобретение относится к новым производным мочевины формулы I:

где А означает гетероарил, который выбирают из группы, включающей

и

где радикалы В, R¹ и R² имеют значения, указанные в описании. Эти соединения обладают способностью ингибировать фермент киназы RAF и ингибировать рост опухолевых клеток. Изобретение также относится к способу ингибирования киназы RAF в организме млекопитающего, а также к фармацевтическим композициям на основе соединений формулы I. Технический результат - получение новых производных мочевины, обладающих ценными фармацевтическими свойствами. 5 н. и 20 з.п. формулы, 6 табл.

1. Соединение формулы I

где А означает гетероарил, который выбирают из группы, включающей

и

В означает замещенный или незамещенный фенил, нафтил, пиридинил, пиримидинил или индолил, причем если В означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-3 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей С₁-С₁₀алкил, -CN, -NO₂, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, С₁-С₁₀алкокси, фенил, пиридинил и Y-Ar, при этом Y означает -O-, -S-, -N(R⁵)-, -(СН₂)_m-, -(СН₂)_mO-, -O(CH₂)_m-, -(СН₂)_mS- и -S-(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает 5-10-членную ароматическую структуру, содержащую 0-2 атома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, которая является незамещенной или замещенной галогеном вплоть до полного замещения, или по выбору замещенной Z_n1, где n1 равно от 0 до 2 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, -NR^5aC(O)R^5a', C₁-C₁₀алкил, фенил, пиридинил и С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₂-С₃алкенил, фенил, пиридинил, метилфенил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, фенил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения,

R¹ выбирают из группы, включающей С₃-С₁₀алкил, С₃-С₅циклоалкил и трифторметил, и

R² означает C₆-C₁₄ арил, -CH₂-C₆-C₁₄ арил, замещенный C₆-C₁₄ арил, замещенный -CH₂-C₆-C₁₄ арил, пиридил или замещенный пиридил, где если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V_n, где n=0-3 и каждый V независимо выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R^5', -OC(O)NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил и С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, где каждый R⁵ и R^5' независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₆-С₁₄арил, С₆-С₁₄арил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, пиридил и метилпиридил,

или фармацевтически приемлемые соли соединения формулы I.

или

которые замещены или не замещены галогеном вплоть до полного замещения, и Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-С₁₀алкил, -CF₃, фенил, пиридинил и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S-, -NH-, -NCH₃-, -NC₂H₅-, -CH₂-, -CH₂O-, -CH₂S-, -OCH₂-, или -SCH₂- и Ar означает фенил, пиридинил, пиримидинил, нафтил, хинолинил, изохинолинил, бензотиазолил, тиазолил, имидазолил, тиофенил или фталимидинил, которые являются незамещенными или замещенными галогеном вплоть до полного замещения или могут быть по выбору замещены Z_n1, где п1 означает от 0 до 3 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, -OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, -NR^5aC(O)R^5a', C₁-С₁₀алкил, фенил и C₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н и С₁-С₆алкил.

где Y выбирают из группы, включающей -O-, -S-, -CH₂-, -SCH₂-, -CH₂S-, -СН₂О- и -OCH₂,

Q означает фенил или пиридинил, замещенный или не замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и

Q¹ выбирают из группы, включающей фенил, пиридинил, нафтил, пиримидинил, хинолинил, изохинолинил, имидазолил и бензотиазолил, незамещенные или замещенные галогеном вплоть до полного замещения, X, Z, n и n1 определены в п.1.

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(4-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(2-метилфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(2-пиридинил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(5-трифторметил-2-пиримидинил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-фторфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(4-хлорфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил) мочевина;

N-(1-(4-метансульфоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(4-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-метоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-трифторфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(4-метоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(4-изопропилфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(3-трифтор, 4-хлорфенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-трифторфенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,4-дифторфенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(3-фторфенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(3-цианофенил)мочевина;

N-(1-фенил-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-нитрофенил)мочевина;

N-(1-(3-ацетамидофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-феноксифенил)мочевина;

N-(1-(3-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-феноксифенил)мочевина;

N-(1-(3-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-феноксифенил)мочевина;

N-(1-фенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(4-пиридинил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(2,5-дихлорфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(4-фторфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(2-метилфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(3-фторфенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(4-метансульфоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(4-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(3-метоксифенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил) фенил)мочевина;

N-(1-(3-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил) фенил)мочевина;

N-(1-(3-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилметил)фенил)мочевина;

N-(1-(3-аминофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилтио)фенил)мочевина;

N-(1-(3-нитрофенил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(4-(4-пиридинилтио)фенил)мочевина;

N-(1-(3-(2,3-дихлорфеноксиациламино)фенилметил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(1-(3-гидроксифенилметил)-3-трет-бутил-5-пиразолил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

N-(2-фенил-5-трет-бутил-3-тиенил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина;

и

N-(2-(4-пиридинил)-5-трет-бутил-3-фурил)-N'-(2,3-дихлорфенил)мочевина.

где В означает фенил, пиридинил или пиримидинил, замещенные одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-2 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-10алкил, С_1-10алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S- и -(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает фенил или пиридинил, которые являются незамещенными или замещенными галогеном вплоть до полного замещения или могут быть по выбору замещены Z_n1, где n1 означает от 0 до 3 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -СО₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, -OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, -NR^5aC(O)R^5a', С₁-С₁₀алкил, фенил и С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н и С₁-С₆алкил; и

R² означает фенил, замещенный фенил, пиридинил, замещенный пиридинил, пиримидинил или замещенный пиримидинил, причем если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V, где V выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R⁵', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, C₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -OC(O)NH фенил, где каждый из R⁵ и R^5' независимо означает Н или С₁-С₁₀алкил,

или его фармацевтически приемлемые соли.

где В означает фенил, пиридинил или пиримидинил, замещенные одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-2 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-10алкил, С_1-10алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S- и -(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает фенил или пиридинил;

R² означает фенил, замещенный фенил, пиридинил, замещенный пиридинил, пиримидинил или замещенный пиримидинил, причем если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V, где V выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, C₁-С₁₀алкил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -ОС(O)NH фенил, где каждый из R⁵ и R^5' независимо означает Н или С₁-С₁₀алкил,

или его фармацевтически приемлемые соли.

где В означает фенил, пиридинил или пиримидинил, замещенные одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и X_n, где n равно 0-2 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-10алкил, С_1-10алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S- и -(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает фенил или пиридинил;

R² означает фенил, замещенный фенил, пиридинил, замещенный пиридинил, пиримидинил или замещенный пиримидинил, причем если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V, где V выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -ОС(O)NH фенил, где каждый из R⁵ и R^5' независимо означает Н или С₁-С₁₀алкил,

или его фармацевтически приемлемые соли.

где А означает гетероарил, который выбирают из группы, включающей

и

В означает замещенный или незамещенный фенил, нафтил, пиридинил, пиримидинил или индолил, причем если В означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-3 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С₁-С₁₀алкил, С₁-С₁₀алкокси, замещенный галогеном вплоть до полного замещения С₁-С₁₀алкил, фенил, пиридинил и Y-Ar; при этом Y означает -O-, -S-, -N(R⁵)-, -(CH₂)_m-, -(CH₂)_mO-, -(CH₂)_mS-, -O(СН₂)_m-, -S-(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает 5-10-членную ароматическую структуру, содержащую 0-2 атома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, которая является незамещенной или замещенной галогеном вплоть до полного замещения или по выбору замещенной Z_n1, где n1 равно от 0 до 3 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, -OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, -NR^5aC(O)R^5a', C₁-С₁₀алкил; замещенный галогеном вплоть до полного замещения С₁-С₁₀алкил; фенил, пиридинил, где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₂-С₃алкенил, фенил, пиридинил, метилфенил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, фенил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения,

R¹ выбирают из группы, включающей С₃-С₁₀алкил, С₃-С₅циклоалкил и трифторметил, и

R² означает С₆-С₁₄арил, замещенный -CH₂-С₆-С₁₄арил, замещенный -СН_2-С₆-С₁₄арил, пиридил или замещенный пиридил, где если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V_n, где n=0-3 и каждый V независимо выбирают из группы, включающей -CN, -OR⁵, -NR⁵R^5', -OC(O)NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения С₁-С₁₀алкил, где каждый R⁵ и R^5' независимо выбирают из группы, включающей Н, С₁-С₁₀алкил, С₆-С₁₄арил, С₆-С₁₄арил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, пиридил и метилпиридил,

или фармацевтически приемлемой соли соединения формулы I.

которые замещены или не замещены галогеном вплоть до полного замещения, и Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_-1С₁₀алкил, -CF₃, фенил, пиридинил и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S-, -NH-, -NCH₃-, NC₂H₅-, -CH₂-, -CH₂O-, -CH₂S-, -OCH₂-или -SCH₂- и Ar означает фенил, пиридинил, пиримидинил, нафтил, хинолинил, изохинолинил, бензотиазолил, тиазолил, имидазолил, тиофенил или фталимидинил, которые являются незамещенными или замещенными галогеном вплоть до полного замещения или могут быть замещены Z_n1, где n1 означает от 0 до 3 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, -OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, -NR^5aC(O)R^5a', C₁-С₁₀алкил, фенил и C₁-С₁₀алкйл, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н и С₁-С₆алкил.

где Y выбирают из группы, включающей -O-, -S-, -СН₂-, -SCH₂-, -CH₂S-, -CH₂O- и -OCH₂,

Q означает фенил или пиридинил, замещенный или не замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и

Q¹ выбирают из группы, включающей фенил, пиридинил, нафтил, пиримидинил, хинолинил, изохинолинил, имидазолил и бензотиазолил, замещенные или не замещенные галогеном вплоть до полного замещения, X, Z, n и n1 определены в п.1.

или

где В означает фенил, пиридинил или пиримидинил, замещенные одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-2 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-10алкил, С_1-10алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S- и -(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает фенил или пиридинил, которые являются не замещенными или замещенными галогеном вплоть до полного замещения, или могут быть по выбору замещены Z_n1, где n1 означает от 0 до 3 и каждый Z независимо выбирают из группы, включающей -CN, -CO₂R^5a, -C(O)NR^5aR^5a', -NO₂, -OR^5a, -SR^5a, -NR^5aR^5a', -C(O)R^5a, NR^5aC(O)R^5a', С₁-С₁₀алкил, фенил и С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, где R^5a и R^5a' независимо выбирают из группы, включающей Н и С₁-С₆алкил; и

R² означает фенил, замещенный фенил, пиридинил, замещенный пиридинил, пиримидинил или замещенный пиримидинил, причем если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V, где V выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -ОС(O)NH фенил, где каждый из R⁵ и R^5' независимо означает Н или С₁-С₁₀алкил,

или его фармацевтически приемлемую соль.

где В означает фенил, пиридинил или пиримидинил, замещенные одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и Х_n, где n равно 0-2 и каждый Х независимо выбирают из группы, включающей -CN, -NO₂, С_1-10алкил, С_1-10алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, и -Y-Ar, где Y означает -O-, -S- и -(CH₂)_m-, m=1-3 и Ar означает фенил или пиридинил; и

R² означает фенил, замещенный фенил, пиридинил, замещенный пиридинил, пиримидинил или замещенный пиримидинил, причем если R² означает замещенную группу, то она замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, включающей галоген вплоть до полного замещения и V, где V выбирают из группы, включающей -OR⁵, -NR⁵R^5', -SO₂R⁵, -NR⁵C(O)R^5', -NO₂, С₁-С₁₀алкил, С₁-С₁₀алкил, замещенный галогеном вплоть до полного замещения, -ОС(O)NH фенил, где каждый из R⁵ и R^5' независимо означает Н или С₁-С₁₀алкил,

или его фармацевтически приемлемую соль.