Изобретение относится к пищевой, косметической, биотехнологической и медицинской промышленности, в частности используется для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.
В связи с неблагоприятными экологическими условиями, стрессами, длительной антибактериальной, лучевой и химиотерапией, дисбиозами, возникающими вследствие перенесенных заболеваний, увеличивается количество людей, страдающих нарушениями нормальной микрофлоры организма. Для лечения и профилактики этих нарушений все большее внимание уделяется как препаратам, обладающим пробиотическим действием, так и пищевым продуктам, содержащим бифидобактерии.
В кишечнике человека встречаются 5 видов бифидобактерий: B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, B.breve и B.infantis. С наибольшей частотой в биоценозе обнаруживаются виды B.bifidum, B.longum и B.adolescentis (39-75%), причем два последних преобладают у взрослых людей, а виды B.breve и B.infantis - преимущественно у детей грудного возраста (17-36%)
Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, B.breve (патент 2336886, патент 2411008, Франция; патент 637297, Швейцария; патент 2134179, патент 2421066, ФРГ; патент 05227946, патент 0430642, Япония; патент 4645667, США).
У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B.bifidum №1; 791; ВКПМ S-1257, Ac-1578; B.longum B379M; B.adolescentis MC-42, Г 7513; В.breve 79-119, B.infantis 79-43 (авторское свидетельство №343588, патент РФ 1347221, патент 849779, патент РФ 2108383, патент РФ 2152993, патент 863639, патент РФ 2120991, патент РФ 2078814, патент РФ 2111248).
Качество лечебных продуктов и препаратов во многом обусловлено свойствами штамма-продуцента - его специфической активностью и технологичностью. Большой ассортимент биологически активных и технологичных штаммов бифидобактерий делает возможной разработку новых моно- и комплексных продуктов лечебного питания и бакпрепаратов, способных обеспечивать высокую колонизационную резистентность кишечника человека, восстановить его нормальную микрофлору и снизить заболеваемость различными кишечными инфекциями.
Задачей настоящего изобретения является получение штамма микроорганизмов вида B.bifidum 79-37 с высокой биологической активностью, устойчивостью к условиям внешней среды, обладающего стабилизирующим кислотообразованием во всем температурном диапазоне развития клеток, хорошо сквашивающего молоко и быстро размножающегося на искусственных питательных средах.
Штамм Bifidobacterium bifidum 79-37 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка и депонирован в музее микроорганизмов ГУ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского под №182.
Заявляемый штамм может быть использован при производстве кисломолочной продукции, ферментированных пищевых продуктов, например квас, пиво и т.п., неферментированных пищевых продуктов, например соки, напитки и т.п., заквасок для приготовления кисломолочной продукции и биологически активных добавок к пище. Так же штамм Bifidobacterium bifidum 79-37 может широко использоваться для производства гигиенических и косметических средств, например кремов, лосьонов, салфеток, мыла, присыпок, тампонов, питательных масок, гелей, женских прокладок, косметического молочка, различных пудр и т.д.
Кроме того, штамм Bifidobacterium B.bifidum 79-37 может быть использован и при производстве бактериальных препаратов, в виде свечей, пероральных и других средств.
Техническим результатом заявленного изобретения является получение штамма Bifidobacterium B.bifidum 79-37, который может быть использован в качестве биологически активного вещества в составе кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов. Штамм Bifidobacterium B.bifidum 79-37 обладает биологически и технологически значимыми свойствами, такими как высокая кислотообразующая активность и способность наращивать микробную биомассу в короткие сроки культивирования. Это позволит использовать его при производстве различных пробиотических средств, обеспечивающих нормализацию микробиоценозов организма человека, в т.ч. желудочно-кишечного и мочеполового трактов, кожных и слизистых покровов, и расширит арсенал аналогичных средств.
Культурально-морфологические свойства штамма
Клетки представляют собой гр+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2-х концах, в жидких питательных средах растут по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза. Отдельно выросшие колонии на печеночной питательной среде имеют кометообразную форму колоний. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 12-24 часам.
Физико-биохимические свойства штамма
Бесспоровый, неподвижный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37-39 градусов по Цельсию. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислот, без образования газа, закисляя среду выращивания до рН 4,1-3,9. Ферментирует лактозу, фруктозу, галактозу, сахарозу, вариабельно: мальтозу, мелибиозу. Не ферментирует сорбит, арабинозу, салицин, инозит, инулин, целлобиозу, ксилозу, маннозу, манит. Штамм сквашивает молоко к 12-18 ч с образованием сгустка.
Штамм активно наращивает микробную массу при росте на гидролизатно-молочной среде (ГМ), Бифидум-среде (БФ), продуцируя кислоты (см. таблицу).
Штамм максимально накапливает микробную массу к 12-24 часам, достигая в 1 мл lg 8-9 микробных клеток, активно продуцирует кислоту.
Таким образом, предлагаемый штамм В. bifidum 79-37 технологичен, поскольку активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие, 12-24 ч, сроки культивирования с высокой концентрацией бифидобактерий; обладает кислотообразующей активностью, способен заквашивать молоко в короткие сроки культивирования (12-18 ч).
Кисломолочные, ферментированные, неферментированные пищевые продукты, гигиенические, косметические средства, биологически активные добавки и бактерийные препараты, содержащие штамм В.bifidum 79-37, могут найти широкое применение в пищевой, медицинской, биотехнологической и косметической промышленности.
Способность штамма В.bifidum 79-37 наращивать биомассу в питательной среде в короткие сроки культивирования, кислотообразующая активность, а также и другие полезные для организма человека свойства, делают возможным использование штамма в составе различных корригирующих средств лечебно-профилактического назначения.
Пример 1. Использование штамма В.bifidum 79-37 в составе биологически активных добавок
1 пассаж: лиофилизированный штамм В.bifidum 79-37 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10-9. Инкубируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию до образования видимого роста в последних разведениях.
2 пассаж: выросшую культуру из 10-7-9 разведений в объеме до 10% вносят в питательную среду и культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию в течение 12-24 ч до образования густого роста с видимой зоной аэробиоза.
3 пассаж: полученную биомассу в количестве до 10% объема вносят в среду накопления и культивируют 12-24 ч при 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 108/мл.
В результате получают биологически активную добавку, которая представляет собой жидкий концентрат с высоким, не менее 108/мл, содержанием бифидобактерий.
Пример 2. Использование штамма В.bifidum 79-37 для приготовления ферментированных и неферментированных пищевых продуктов
1 пассаж: лиофилизированный штамм В.bifidum 79-37 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10-9. Инкубируют при 37-38 градусов по Цельсию до образования видимого роста в последних разведениях.
2 пассаж: выросшую культуру из 10-7-9 разведений в объеме до 10% вносят в питательную среду и культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию в течение 12- 24 ч до образования густого роста с хорошо видимой зоной аэробиоза.
3 пассаж: полученную биомассу в количестве до 10% объема вносят в среду накопления и культивируют 12-24 ч при 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 108/мл.
Получение ферментированного или неферментированного пищевого продукта: выросшую биомассу вносят в пищевое сырье (молоко, соки, пиво, квас и пр.), перемешивают и разливают в емкости. В результате получают продукт с концентрацией живых бифидобактерий не менее 106/мл.
Пример 3. Использование штамма В.bifidum 79-37 для приготовления кисломолочного продукта
1 пассаж: лиофилизированный штамм вносят в среду культивирования и титруют методом десятикратных разведений до 10-9. Инкубируют при 37-38 градусов по Цельсию до образования видимого роста в последних разведениях. Или сухую лиофилизированную биомассу бифидобактерий вносят в количестве 1-2 дозы в пробирку с 30 мл питательной среды. Культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы с содержанием живых бифидобактерий не менее 107/мл.
2 пассаж: выросшую культуру штамма В.bifidum 79-37 из последних разведений или из пробирки с выросшей биомассой вносят в среду накопления объемом до 10% и культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы с содержанием бифидобактерий не менее 108/мл.
3 пассаж: полученную биомассу штамма В.bifidum 79-37 в объеме до 10% вносят в стерильное молоко, культивируют до образования сгустка (кисломолочный продукт). Количество пассажей №2 может быть увеличено в зависимости от объема производства.
Пример 4. Использование штамма В.bifidum 79-37 для получения бактерийных препаратов
Культуру штамма 1-го или 2-го пассажа (пример 1) вносят в питательную среду, культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы бифидобактерий с содержанием живых клеток не менее 108 в 1 мл. К полученной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахарозо-желатиновая среда, обезжиренное молоко). Полученную суспензию разливают в ампулы, флаконы и другие емкости, замораживают при температуре минус 35-45 градусов по Цельсию и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит не менее 107 живых клеток бифидобактерий. Данное содержание бифидобактерий согласуется с научно-технической документацией на аналогичный бифидосодержащий препарат - бифидумбактерин сухой (ФС 42 132 ВС-94) и является достаточным для использования полученного средства в качестве препарата - эубиотика.
Пример 5. Использование штамма В.bifidum 79-37 для получения гигиенических и косметических средств
Культуру штамма 1-го или 2-го пассажа (пример 1) вносят в питательную среду, культивируют при температуре 37-38 градусов по Цельсию до получения биомассы бифидобактерий с содержанием живых клеток не менее 108 в 1 мл.
Полученную биомассу бифидобактерий штамма В.bifidum 79-37 вводят в состав гигиенического или косметического средства.
Изобретение относится к пищевой, косметической, биотехнологической и медицинской промышленности. Штамм Bifidobacterium bifidum 79-37 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка и депонирован в музее микроорганизмов ГУ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского. Штамм активно размножается в питательной среде с накоплением производственной биомассы в короткие, 12-24 ч, сроки культивирования с высокой концентрацией бифидобактерий; обладает кислотообразующей активностью. Изобретение обеспечивает повышение биологической активности и устойчивости штамма к условиям внешней среды, обладает стабилизирующим кислотообразованием во всем температурном диапазоне развития клеток. Использование штамма обеспечивает нормализацию микробиоценозов организма человека, в т.ч. желудочно-кишечного и мочеполового трактов, кожных и слизистых покровов, а также расширение арсенала аналогичных средств. 1 табл.
Штамм Bifidobacterium bifidum 79-37 (коллекционный №182 государственной коллекции микрофлоры человека ГКНМ ГУ МНИИЭМ МЗ РФ им. Г.Н.Габричевского), используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.
