СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И РАЗВИТИЯ ГЕСТОЗА В ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/53 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Может быть использовано в акушерстве и гинекологии для доклинической диагностики возникновения гестоза, а также повышения эффективности диагностики данного осложнения беременности при его клинических проявлениях.

Описание изобретения.

Гестоз относится к числу наиболее распространенных и наиболее тяжелых осложнений беременности и родов. Эта патология остается одной из основных причин материнской и детской заболеваемости и смертности и составляет, по данным различных авторов, от 7 до 59% от числа родов [3, 6, 12]. Значительная частота этой патологии, тяжелые осложнения у матери и плода требуют дальнейшего поиска эффективных методов доклинической диагностики, прогнозирования, профилактики и лечения гестоза. Выявление доклинической стадии гестоза определяет возможность профилактических мероприятий уже в ранние сроки беременности.

Изучение иммунных нарушений в патогенезе гестоза позволило на сегодняшний день сформулировать представление о развитии гестоза как проявлении иммунной дизадаптации, суть которой заключается в недостаточной супрессии иммунного ответа матери на антигены плода [2, 14].

Уровень техники.

Аналоги. Аналогами предлагаемого способа являются описанные в отечественной литературе способы диагностики гестоза, которые различаются в зависимости от используемых признаков. К первой группе относятся методы доклинического прогнозирования возникновения и развития гестоза на основе использования мониторинга отдельных иммунологических или биохимических показателей [3, 13]. Недостатком этого подхода является необходимость постоянного наблюдения за беременной в стационаре и многократного выполнения исследований в динамике гестационного процесса.

Ко второй группе относятся способы оценки тяжести гестоза на основе комплексного исследования констант гомеостаза и функциональных систем организма [1, 8]. Данные методы объединяет использование системного подхода с последующей математической обработкой с применением процедуры дискриминантного анализа или методов распознавания образов. Недостатком вышеуказанных способов является их трудоемкость, т.к. они включают в себя определение нескольких десятков клинических и параклинических (гемостазиологических, биохимических, биофизических) параметров и применение сложного решающего правила. Несмотря на высокую степень информативности этих методов диагностики, использование их на практике может быть ограничено в связи с отсутствием в некоторых случаях специального технического оснащения и дороговизной большого количества лабораторных исследований.

Прототип. Прототипом предложенного способа является параклинический способ диагностики гестоза в третьем триместре беременности по общему анализу крови [10]. Однако недостатком данного способа является учет только количественных показателей периферической крови, а также субъективность микроскопического учета в случае отсутствия автоматического анализатора, что придает методу описательный характер и существенно снижает его диагностическую значимость.

Сущность изобретения

Цель изобретения заключается в разработке способа прогнозирования возникновения и развития гестоза в третьем триместре беременности на основе выявления признаков активации иммунной системы, характерных для данной патологии.

Поставленная цель достигается исследованием наиболее информативных иммунологических показателей первого уровня [9] и построением на их основе прогностического решающего правила с использованием процедуры дискриминантного анализа.

Способ осуществляют следующим образом.

Исследование крови проводят натощак, в утренние часы. Осуществляют забор венозной крови в количестве 2 мл в пробирку с ЭДТА для исследования популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов крови, 2 мл в пробирку с гепарином (25 ЕД/мл) для исследования функциональной активности фагоцитов (моноцитов и нейтрофилов), 3 мл в сухую чистую пробирку для исследования циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови исследуют методом проточной цитофлюориметрии [11]. Определяют процентное содержание натуральных киллеров (CD16⁺CD56⁺) и Т-хелперов (CD4⁺).

Исследование функциональной активности моноцитов осуществляют с использованием спонтанного НСТ-теста в популяции моноцитов (спектрофотометрический вариант) [5]. Определение параметров функциональной активности нейтрофилов проводят по Н.В.Васильеву и соавт. [7] с подсчетом процента активно фагоцитирующих клеток (фагоцитарный индекс, ФИ) и общего числа поглощенных микробов, и вычислении на основе этих показателей фагоцитарного числа (ФЧ) как частного от деления общего количества поглощенных микробов на ФИ.

Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови различной молекулярной массы определяют по В.Гашковой и соавт. в модификации Ю.Гриневич [4] путем осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ, молекулярная масса 6000) с последующим измерением светорассеивания исследуемых образцов сыворотки на спектрофотометре. Иммунные комплексы, выделенные в 4% растворе ПЭГ, оценивают как содержащие крупные, средние и малые по размеру агрегаты (полный состав ЦИК). Комплексы, осажденные в 3% растворе ПЭГ, оценивают как высокомолекулярные. Уровень низкомолекулярных ЦИК определяют по разнице концентраций, полученных соответственно в 4% и 3% ПЭГ.

С использованием процедуры дискриминантного анализа было построено решающее правило прогноза развития гестоза, основанное на выявлении признаков активации иммунной системы, характерных для данной патологии, и определении диагностического индекса F:

F=0,91×X₁-0,005×Х₂+0,04×Х₃-0,006×Х₄+0,006×Х₅-5,46, где

X₁ - фагоцитарное число (среднее количество микробных тел на одну фагоцитирующую клетку);

Х₂ - показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов, у.е;

Х₃ - количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺(%);

Х₄ - количество Т-хелперов (CD4⁺) (%);

Х₅ - уровень низкомолекулярных ЦИК, у.е.

Получив F>0, делают заключение об адекватном иммунном ответе в третьем триместре беременности. При F<0 делают вывод об активации иммунной системы и формировании типа иммунореактивности, при котором высок риск развития гестоза.

Чувствительность метода составляет 82,33%, специфичность - 89,47%. Эффективность метода составляет 84,35%. Уровень значимости для построенной функции, вычисленный с использованием критерия χ², составляет 0,0055.

Пример I. Громова О.Б., беременность 32-33 недели, история родов №5873, поступила 26 февраля 2001 г. на плановое обследование в однодневный стационар второго акушерского отделения. Акушерской патологии на данный момент не выявлено, при иммунологическом обследовании получили следующие показатели:

X₁ - фагоцитарное число (среднее количество микробных тел на одну фагоцитирующую клетку) - 6,73;

Х₂ - показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов - 122 у.е.;

Х₃ - количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺ - 6%;

Х₄ - количество Т-хелперов (CD4⁺) - 45%;

X₅ - уровень низкомолекулярных ЦИК - 16 у.е.

По результатам анализов получили следующее значение функции F:

F=0,91×X₁-0,005×Х₂+0,04×Х₃-0,006×Х₄+0,006×Х₅-5,46=0,12.

Учитывая положительное значение функции, диагностируют адекватный иммунный ответ на антигенную нагрузку со стороны плода.

Пример II. Халикова М.Г., 25 л., беременность 28-29 недель, история родов №6598, поступила 23 сентября 2002 г. во второе акушерское отделение с диагнозом: O-гестоз (5-6 баллов по шкале Г.М.Савельевой), отягощенный акушерско-гинекологический анамнез, хроническая фетоплацентарная недостаточность (компенсированная форма) угроза преждевременных родов. При иммунологическом обследовании получили следующие показатели:

X₁ - фагоцитарное число (среднее количество микробных тел на одну фагоцитирующую клетку) - 5,48;

Х₂ - показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов - 511 у.е;

Х₃ - количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺ - 17%;

X₄ - количество Т-хелперов (CD4⁺) - 44%;

X₅ - уровень низкомолекулярных ЦИК - 56 у.е.

По результатам анализов получили следующее значение функции:

F=0,91×X₁-0,005×X₂+0,04×Х₃-0,006×Х₄+0,006×Х₅-5,46=-2,28.

Отрицательное значение функции указывает на процесс активации иммунной системы, характерный для иммунного ответа при гестозе, и позволяет отнести пациентку в группу риска по нарастанию тяжести данной патологии.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность выявить ранние, нередко доклинические, признаки активации иммунной системы, характерные для формирования и развития гестоза, и повысить эффективность диагностики данной патологии беременности.

Источники информации

1. Башмакова Н.В., Медвинский И.Д., Юрченко Л.Н., Севостьянова О.Ю., Якубович О.И., Мазуров А.Д. Методологические подходы к оценке тяжести гестоза // Акуш. и гин. - 1998. - №5. - С.32-35.

2. Башмакова Н.В., Черданцева ГА., Медвинский И,Д., Юрченко Л.Н., Шабунина-Басок Н.Р., Якубович О.И. К вопросу о патогенезе гестоза в свете современных представлений о синдроме системного воспалительного ответа (ССВО) // Актуальные вопросы акушерства и гинекологии. - 2001-2002. - Т1. - №1. С.4-5.

3. Василенко Л.В., Кондрашова Н.Ю., Рузмыкина Т.И. Доклиническая диагностика и лечение гестоза // Проблемы беременности. - 2000. - №1. - С.26-30.

4. Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных // Лаб. дело. - 1981. - №8. - С.493.

5. Киселева Е.П., Полевщиков А.В. Метод автоматизированного учета НСТ-теста // Клиническая лабораторная диагностика. - 1994. - №4. - С.27-29.

6. Кулаков В.И., Мурашко Л.Е. Новые подходы к терминологии, профилактике и лечению гестоза // Акуш. и гин. - 1998. - №5. - С.3-6.

7. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.

8. Медвинский И.Д., Юрченко Л.Н., Пестряева Л.А., Александрова Н.Н., Чистякова Г.Н., Королева С.В., Мазуров А.Д. Современный взгляд на концепцию развития полиорганной недостаточности при гестозе // Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного: Материалы Всероссийской научно-практической конференции (Екатеринбург, 20-21 октября 1999 г.) - Екатеринбург, 1999. - С.25-32.

9. Оценка иммуного статуса человека при массовых обследованиях: Методические рекомендации МЗ РФ / Под редакцией Р.В.Петрова, P.M.Хаитова. - М., 1992. - 20 с.

10. Пастухова И.А. Применение математических методов распознавания образов для диагностики гестоза по общему анализу крови // Медицинская и биологическая кибернетика: Материалы II Уральской научно-практической конференции. - г.Екатеринбург, 2000. - С.48-49.

11. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека: Пособие для врачей-лаборантов. - М., 2001. - 53 с.

12. Савельева Г.М., Шалина Р.И. Современные проблемы этиологии, патогенеза, терапии и профилактики гестозов // Акуш. и гин. - 1998. - №5. - С.6-9.

13. Тягунова А.В., Васильева З.В., Сластен О.П., Баранова И.Н. Диагностическая ценность некоторых показателей иммунитета в клинике гестозов // Клин. лаб. диагностика. - 1998. - №4. - С.38-40.

14. Шехтман М.М., Расуль-заде Ю.Г., Иванов В.И. и др. Липидная структура и функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у беременных с гипертонической болезнью, ассоциированной с ожирением // Иммунология. - 1998. - №5. - С.55-59.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для прогнозирования возникновения гестоза в третьем триместре беременности. Сущность изобретения состоит в том, что исследуют наиболее информативные показатели иммунного статуса (фагоцитарное число, показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов, количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺, количество Т-хелперов CD4⁺, уровень низкомолекулярных ЦИК) и вычисляют диагностический индекс (F) по предлагаемой формуле и при значении F более 0 делают заключение об адекватном иммунном ответе на антигенную нагрузку со стороны плода в третьем триместре беременности, а при значении F менее 0 прогнозируют высокий риск развития гестоза в третьем триместре беременности. Техническим результатом является разработка способа прогнозирования возникновения и развития гестоза в третьем триместре беременности на основании выявления признаков активации иммунной системы с использованием дискриминационного анализа.

Способ прогнозирования возникновения и развития гестоза в третьем триместре беременности путем выявления признаков активации иммунной системы, отличающийся тем, что исследуют наиболее информативные показатели иммунного статуса (фагоцитарное число, показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов, количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺, количество Т-хелперов CD4⁺, уровень низкомолекулярных ЦИК) и вычисляют диагностический индекс (F) по формуле

F=0,91·X₁-0,005·Х₂+0,04·Х₃-0,006·Х₄+0,006·Х₅-5,46,

где X₁ - фагоцитарное число (среднее количество микробных тел на одну фагоцитирующую клетку);

X₂ - показатель спонтанного НСТ-теста моноцитов, у.е;

Х₃ - количество натуральных киллеров CD16⁺CD56⁺ (%),

Х₄ - количество Т-хелперов (CD4⁺) (%);

X₅ - уровень низкомолекулярных ЦИК, у.е.,

и если F более 0, делают заключение об адекватном иммунном ответе на антигенную нагрузку со стороны плода в третьем триместре беременности, если же F менее 0, делают вывод об активации иммунной системы и формировании типа иммунореактивности, при котором высок риск развития гестоза.