СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА, ИЛИ ИНФАРКТА МИОКАРДА И ЕГО ПОСЛЕДСТВИЙ, ИЛИ ИШЕМИИ МОЗГА, ВЫЗВАННОЙ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ ИЛИ ОСТРЫМ НАРУШЕНИЕМ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ, И ЕЕ ПОСЛЕДСТВИЙ, ИЛИ ИШЕМИИ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ, ВЫЗВАННОЙ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ Российский патент 2006 года по МПК A61K35/14 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения заболеваний, связанных с нарушением кровоснабжения тканей.

Пуповинная кровь представляет собой кровь новорожденного, остающуюся в плаценте и пуповине после родов. Эта кровь богата мононуклеарными клетками, среди которых значительную часть составляют так называемые стволовые клетки, то есть клетки, находящиеся на ранних этапах дифференцировки и дающие начало развитию многих органов и тканей. Выделение и использование этих клеток в медицине связано в первую очередь с тем, что мононуклеарные клетки пуповинной крови содержат большое количество клеток-предшественников гемопоэза - гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Фракция мононуклеарных клеток, выделенных из пуповинной крови, используется как альтернативный источник ГСК при пересадке (трансплантации) костного мозга. Клетками, ответственными за замещение больных клеток реципиента при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), считаются так называемые CD 34 - позитивные клетки, то есть клетки, содержащие на своей поверхности маркер-антиген CD 34, и обладающие наибольшим клоногенным (колониеобразующим) потенциалом. Как известно, стволовые клетки пуповинной крови морфологически относятся к так называемым мононуклеарным клеткам (МНК), которые в свою очередь являются частью пула ядросодержащих клеток (ЯСК) пуповинной крови. Мононуклеарные клетки (лимфоциты и моноциты в сумме) составляют примерно 1/3 часть от всех ядросодержащих клеток (лейкоцитов) пуповинной крови.

Пересадка (трансплантация) мононуклеарных клеток пуповинной крови применяется в медицинской практике с 80 годов XX века. Основным показанием для пересадки стволовых клеток пуповинной крови являются заболевания крови, вызванные врожденным (генетическим) дефектом поли-, плюро-, или олигопотентных клеток кровяного ростка костного мозга и/или их злокачественной трансформацией, а также преодоление последствий тяжелой миелосупрессии различного генеза. Для достижения репопуляции при пересадке пуповинных клеток донора (замещении своих больных клеток чужими здоровыми) применяются два основных приема:

- подбор пары "донор - реципиент" по совпадению антигенов основного комплекса гистосовместимости человека (HLA) и системе групп крови АВ0 и резус-фактору,

- подавление иммунологического ответа самого реципиента для приживления чужих пересаженных клеток.

Однако в случае успешной репопуляции клеток донора чужие пересаженные клетки могут вызвать тяжелые иммунопатологические явления, в частности реакцию «трансплантат против хозяина» (РТПХ).

Таким образом, подбор пары "донор - реципиент" является, с одной стороны, определяющим успех приживления, а с другой стороны, самым сложным в техническом плане, поскольку даже у идентичных по HLA типу людей может возникнуть реакция отторжения трансплантата и/или РТПХ.

Современные представления диктуют необходимость наибольшего совпадения антигенов основного комплекса гистосовместимости человека как основы эффективной трансплантации аллогенных клеток.

В течение последних лет предлагались методы лечения различных заболеваний мононуклеарными клетками пуповинной крови, основанные на замещении этими донорскими клетками погибших и/или не способных к регенерации клеток реципиента.

Известен способ лечения расстройств кровообращения, в том числе инфаркта миокарда, путем введения клеток пуповинной крови человека, US 2004/0197310 А1. В способе предложено введение «эффективных» количеств мононуклеарных клеток из пуповинной крови человека либо непосредственно в зону инфаркта, либо в системный кровоток. Лечебный эффект при этом основан на приживлении пуповинных клеток донора в организме хозяина и их дифференцировке в кардиомиоциты. Однако при этом необходима высокая степень иммунологической совместимости клеток донора с клетками реципиента, что делает способ технически малоосуществимым. Согласно US 2004/0197310 А1 рекомендуется сопровождение введения пуповинных клеток подавлением иммунного ответа реципиента.

Известен также способ лечения атеросклероза, неврологических заболеваний, аутоиммунных заболеваний, диабета, амилотрофического бокового склероза, травм и повреждений периферической и центральной нервной системы путем введения в кровь ядросодержащих стволовых клеток пуповинной крови или клеток, происходящих из пуповинной крови в количестве не менее 5×10⁹ ядросодержащих клеток, WO 2004/071283. Данный метод наиболее близок к заявляемому изобретению и принят в качестве его прототипа.

При реализации способа-прототипа не требуется предварительного подавления иммунного ответа больного, не требуется предварительного HLA-типирования (изучения гистосовместимости) донора и реципиента. Однако для его осуществления необходимы чрезвычайно большие количества клеток (не менее 5×10⁹ ядросодержащих клеток). Количество ядросодержащих клеток в порции пуповинной крови от одного новорожденного не превышает 2,8×10⁹, причем клетки собственной пуповинной крови можно взять у человека (донора) только один раз (при его рождении). Этого количества недостаточно для реализации способа-прототипа. Таким образом, реализация способа-прототипа требует не только одномоментного введения в организм значительного количества чужеродных клеток (несущих чужеродные антигены), но и клеток пуповинной крови от разных доноров, т.е сложного «коктейля» чужих антигенов. Не учитывается степень соотношения иммуногенности/иммунотолерантности вводимых клеток по отношению к пациенту, обусловленная степенью гистосовместимости тканей пациента и донора. При этом резко возрастает риск аллергических, в том числе анафилактических реакций, а также риск развития других иммунопатологических состояний, включая иммунодепрессию, вызванную атакой чужих клеток белой крови против собственной иммунной системы больного. В способе-прототипе для того, чтобы добиться клинического эффекта с помощью стволовых клеток пуповинной крови, необходимо одномоментно вводить значительное количество ядросодержащих клеток. Если же объединять стволовые клетки от разных доноров, то, во-первых, резко возрастает риск возникновения иммунопатологических реакций на такой сложный спектр антигенов, в том числе «минорных» антигенов гистосовместимости. Кроме того, одновременная иммунизация клетками (антигенами) различных доноров, как это предполагается при осуществлении способа-прототипа, приводит к невозможности повторного применения метода у того же больного. Попытки реализации способа-прототипа для лечения названных заболеваний в 5 случаях из 10 привели к токсическим и аллергическим реакциям, с развитием у всех больных иммуносупрессии в течение 7-30 дней после введения. Попытка повторного применения способа-прототипа у больных приводила к токсико-аллергическим реакциям у большинства пациентов, у которых способ-прототип уже был ранее применен.

Задачей настоящего изобретения является снижение риска токсических и иммунопатологических осложнений.

Согласно изобретению в способе лечения ишемической болезни сердца, или инфаркта миокарда и его последствий, или ишемии мозга, вызванной атеросклерозом или острым нарушением мозгового кровообращения, и ее последствий, или ишемии нижних конечностей, вызванной атеросклерозом, включающем введение в кровь мононуклеарных клеток пуповинной крови донора, указанные клетки донора имеют набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR, отличный от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR реципиента не менее чем по четырем антигенам; количество вводимых клеток составляет от 2,5 х10⁶ до 10х10⁶ клеток на кг массы тела пациента в сутки; введение таких клеток может быть повторено от 2 до 10 раз с интервалом 10-60 дней.

Система распознавания «свой - чужой» у человека представлена белками основного комплекса гистосовместимости (ОКГ), которые обозначаются в литературе аббревиатурой HLA (Human Leukocyte Antigens - система лейкоцитарных антигенов). Основной иммунологической задачей этих поверхностных белков является участие в распознавании чужеродного антигена иммунной системой организма. Белки HLA связываются с антигеном и представляют («презентируют») его на поверхности клетки. Только в таком виде Т-лимфоцит человека узнает чужой антиген. При этом индуцируется иммунный ответ, призванный элиминировать чужеродный антиген из организма. Часть белков ОКГ (так называемый класс I) представляют собой одноцепочечные аминокислотные цепи, которые прикрепляются к поверхности клетки с помощью молекулы β₂-микроглобулина. К белкам этого класса относятся белки HLA-А, HLA-В и HLA-С. Один такой белок кодирован соответственно одним геном. Другой класс белков (класс II) относится к двуцепочечным димерным молекулам, состоящим из альфа- и бета-цепей. Таким образом, для кодирования каждой молекулы II класса ОКГ требуется 2 отдельных гена. Существует также и класс белков III ОКГ. Гены, кодирующие белки основного комплекса гистосовместимости, тесно сцеплены и находятся на коротком плече 6-й хромосомы.

Белки ОГК не только отвечают за презентацию чужеродных белков защитной (иммунной) системе организма, но и сами являются сильнейшими антигенами в отношении другого организма, на которые развивается иммунный ответ при введении их в этот другой организм. Нужно подчеркнуть, что белки (антигены) ОКГ продуцируются также и самими антигенпрезентирующими клетками - В-лифоцитами, активированными макрофагами, дендритными клетками.

Гены HLA принято обозначать также, как антигены HLA. Названия генов и антигенов HLA состоят из одной или нескольких букв и цифр, например A 3, В 18, DR 13, DQ 4. Буква означает ген, а цифра означает аллель этого гена.

Гены HLA обладают высоким полиморфизмом. Вся совокупность генов HLA одного индивидуума нередко обозначается как генотип HLA. Вся совокупность антигенов HLA, представленных на поверхности клеток, обозначается как фенотип HLA.

Белки (антигены) I класса ОГК - HLA-A, HLA-B и HLA-C - кодируются тремя отдельными парами генных локусов. Белки I класса представлены на клеточной поверхности клеток практически всех тканей организма. Продукт (белок) гена четвертого локуса I класса (HLA - G) продуцируется только клетками трофобласта.

Область генома, где находятся гены, кодирующие белки ОКГ II класса, носит название D-области и подразделяется на DP, DQ и DR районы, каждый из которых кодирует двухцепочечный поверхностный белок в виде альфа- и бета-цепей. Соответственно белки (антигены), кодированные этими генами, носят название HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR и выводятся на поверхность клетки в виде DP-альфа-бета, DQ-альфа-бета и DR-альфа-бета белков.

Гены HLA наследуются кодоминантно (т.е. каждый из генов вносит вклад в появление признака, т.е. особенность соответствующего белка) и передаются потомству двумя блоками - по одному от каждого родителя. Такой блок называется гаплотипом HLA. Таким образом, все ядросодержащие клетки человека имеют четыре пары антигенов (А, В, С и D), - по 8 HLA антигенов (белков) на клетку, из которых 4 белка унаследованы от одного, а 4 от другого родителя. Локусы HLA генов расположены близко по отношению друг к другу и обычно наследуются от каждого родителя практически без рекомбинаций (реарранжировок) внутри блока (гаплотипа). Частота рекомбинаций внутри гаплотипа HLA оставляет около 1%, и поэтому среди потомства двух родителей имеется приблизительно 25% случаев полного диплоидного совпадения HLA антигенов, 50% случаев одногаплотипного сходства HLA антигенов и 25% случаев полного несоответствия HLA антигенов.

Поскольку набор антигенов (белков) ОГК главного комплекса гистосовместимости у разных индивидуумов различен, то при введении клеток одного человека (донора) в организм другого (реципиента) возникает несовместимость клеток донора с клетками реципиента. Преодоление барьера гистонесовместимости всегда являлось главным стимулом исследования генов и белков ОГК, а разработка методов ее преодоления - основным ключом к проблеме отторжения пересаженных чужеродных органов, тканей и клеток в трансплантологии и клеточной инженерии человека.

Понятно, что обеспечить полную совместимость по всем известным антигенам HLA невозможно. Однако многолетний опыт трансплантологии показал, что различия не всех антигенов (белков) имеют клиническое значение, т.е. несовпадение не по всем белкам ОКГ оказывает одинаковое влияние на вероятность приживления трансплантата. Оказалось, что порой необходимо и достаточно для успешной пересадки тканей и клеток подобрать донора и реципиента, совместимых по 3-4 антигенам системы HLA, несмотря на то, что другие антигены гистосовместимости, называемые «минорными», могут вызывать реакцию отторжения со стороны иммунной системы реципиента, хотя и менее сильную. В случае неудачного сочетания нескольких таких «минорных» антигенов может возникнуть острая реакция отторжения. Молекулярная основа несоответствия по «минорным» антигенам неизвестна, но предполагается, что она связана с полиморфизмом нормальных непатологических собственных антигенов. При пересадке чужих иммунокомпетентных клеток донора (или их предшественников) в иммунокомпрометированный организм реципиента возникает другая серьезная проблема - так называемая «реакция трансплантации против хозяина (РТПХ)». Опасность РТПХ актуальна особенно в тех случаях, когда для успешной трансплантации организм реципиента предварительно подвергается иммуносупресии. Ослабленная иммунная система реципиента не может отторгнуть иммунокомпетентные Т-клетки донора, которые приживляются и начинают вызывать собственный иммунный ответ против клеток реципиента, реагируя на различия по белкам - антигенам ОКГ. РТПХ может быть острой или хронической. Вероятность развития и течение РТПХ зависит от генетических различий между клетками донора и реципиента, количества донорских клеток и их фенотипа. Даже если донор и реципиент являются сиблингами, то есть они полностью генотипически HLA - совместимы по всем определяемым локусам, частота РТПХ остается весьма высокой (от 30-70%), что также связано с различиями по «минорным» антигенам.

Все же, в клинике максимальную тканевую совместимость удается достичь, подобрав пару донор - реципиент, идентичную по ОКГ класса II, в частности, белку HLA-DR, а также двум других белкам, относящимся к классу I, а именно HLA-А и HLA-B. Такое предварительное определение набора белков ОКГ у донора или реципиента получило название HLA-типирование. С учетом того, что каждый индивидуум имеет две разновидности каждой из этих молекул (одну от матери, другую от отца) HLA-типирование может быть представлено как определение характеристик каждого из 6-ти белков ОКГ на поверхности клеток, то есть по одной паре видов каждого из трех белков: HLA-А и HLA-B, и HLA-DR. При полном совпадении всех 6-ти антигенов донора с 6-ю антигенами реципиента пара донор - реципиент считается «совместимой по 6-ти антигенам». Соответственно, если говорить о генах, кодирующих эти белки, то в таком случае 6 аллелей донора совпадают с 6 аллелями реципиента. Если клетки донора и реципиента совпадают по 4 из 6-ти (HLA-А и HLA-B, и HLA-DR) возможных аллелей (и соответственно по 4 из 6 белков, которые эти аллели кодируют), то такие индивидуумы имеют «несовместимость по двум антигенам». Такое разнообразие вариантов наборов белков (и соответственно генов) ОКГ называется полиморфизмом ОКГ. Технологически типирование осуществляется либо серологическими методами (путем иммунологической детекции с помощью антител против конкретного белка - антигена ОКГ), либо молекулярными методами (путем распознавания самого гена, кодирующего данный белок в геноме клетки индивидуума). HLA - тип для индивидуума выражается набором букв и цифр. Сначала следует буквенное обозначение (белка) гена и затем цифровое обозначение варианта белка (аллеля этого гена), затем обозначение следующего белка (гена) и его вариантов (аллелей гена) и т.д. Например, А 2,3 В 5,15 DR 01,15. Совершенствование методов распознавания различий между белками ОКГ (и соответственно аллелей их генов) приводит к дальнейшему «дроблению» обозначений аллелей. Аллель, первоначально обозначенный и серологически определяющийся как В 15 впоследствии на самом деле оказался совокупностью двух аллелей В 62 и В 75.

После введения стволовых клеток донора в организм реципиента с одной стороны происходят процессы, направленные на интеграцию этих клеток в ткани реципиента с их дальнейшим размножением и/или дифференцировкой в функционально зрелую ткань, а с другой стороны происходит процесс, направленный на элиминацию введенных клеток из организма. При пересадке, например, чужого костного мозга донора, содержащего гемопоэтические стволовые клетки (ГСК), ставится совершенно определенная задача: новые клетки должны прижиться в новом для них организме и дать начало кроветворному ростку (репопулировать костный мозг). Результирующая этих двух процессов (репопулирования и элиминации) определяет дальнейшую судьбу введенных стволовых клеток. Сами же стволовые клетки донора, попав в организм реципиента, выделяют огромное количество факторов роста, гормонов и цитокинов, совокупность действия которых приводит к тем или иным биологическим (в том числе лечебным) эффектам.

Иммунологический ответ организма хозяина на чужие клетки вызывает выброс большого количества медиаторов иммунного ответа, то есть сами чужие стволовые клетки являются мощными иммуномодуляторами. Кроме того, стволовые клетки донора могут сами созревать до иммунокомпетентных клеток и вырабатывать собственный иммунный ответ на клетки хозяина, вызывая среди прочего иммуносупрессию. Весь комплекс многофакторных динамических взаимоотношений между клетками донора и организмом реципиента определяется в первую очередь степенью иммунологической совместимости клеток донора и клеток хозяина (реципиента). С одной стороны, чем больше стволовая клетка донора по антигенам ОКГ похожа на клетку хозяина, тем дольше она будет циркулировать в его организме и у нее больше шансов на приживление и дальнейшее размножение. С другой стороны, иммунная реакция организма реципиента на эти клетки будет невелика, что ведет к отсутствию необходимого иммуномодулирующего эффекта. Таким образом, биологический эффект от введения чужих стволовых клеток определяется параллельным развитием следующих процессов:

1. Развитие иммунного ответа реципиента на клетки донора.

2. Индукция клетками донора репопуляции собственных стволовых клеток реципиента как путем прямого контакта, так и через гуморальные воздействия на клетки реципиента.

3. Выделение введенными стволовыми клетками биологически активных веществ, в том числе факторов роста, цитокинов, тканевых гормонов, метаболитов.

4. Развитие иммунной реакции клеток донора против клеток реципиента.

5. Репопуляцией клетками донора тканей организма реципиента.

Терапия того или иного конкретного заболевания (с преобладанием конкретного патологического компонента - воспалительного, аутоиммунного, дистрофического, ишемического или фиброзного) с помощью стволовых клеток требует определенного баланса указанных процессов. Определяющими факторами при этом являются:

1. Степень несовместимости по системе ОКГ вводимых стволовых клеток донора и клеток реципиента;

2. Количество введенных чужих стволовых клеток.

Авторами настоящего изобретения обнаружено, что при высокой степени совместимости типов HLA (совпадения по многим HLA - антигенам) между донором стволовых клеток пуповинной крови и реципиентом не удается достичь необходимого терапевтического эффекта при лечении заболеваний, связанных с нарушением кровообращения в тканях. К этим заболеваниям относятся: ишемическая болезнь сердца, или инфаркта миокарда и его последствия, или ишемия мозга, вызванная атеросклерозом или острым нарушением мозгового кровообращения, и ее последствия, или ишемия нижних конечностей, вызванная атеросклерозом.

Известным компенсаторным механизмом, направленным на улучшение кровоснабжения тканей в зонах ишемии, является развитие сосудистых коллатералей. При этом иммунная система (в том числе моноциты и тканевые макрофаги) играет огромную роль в индукции дифференцировки собственных стволовых клеток организма в клетки вновь образующихся сосудистых коллатералей. При введении клеток донора, совместимых с клетками реципиента более чем по 2 антигенам (из 3 пар антигенов HLA-A, HLA-В, HLA-DR), не происходит адекватного иммунного ответа на вводимые клетки. При реализации способа-прототипа без учета соотношения потенциальной иммуногенности/иммунотолерантности (обусловленной в первую очередь антигенами ОКГ) вводится огромное число клеток, в том числе клеток-предшественников иммунокомпетентных клеток. Это неизбежно приводит либо к иммуносупрессии собственной иммунной системы реципиента, либо к возникновению иных нежелательных иммунопатологических реакций.

Как неожиданно оказалось, для достижения значимого клинического эффекта при названных заболеваниях, стволовые клетки пуповинной крови донора должны отличаться от клеток реципиента как минимум по 4 антигенам из 6 антигенов (3 пары: HLA-А и HLA-B, и HLA-DR). То есть донор и реципиент должны быть несовместимы как минимум по четырем антигенам. Серия тестов в смешанной культуре лимфоцитов, которая широко используется при выявлении совместимости тканей донора и реципиента, показала, что только при указанном антигенном различии в среде культивирования нарабатывается достаточное количество трофических и ростовых факторов, биологически активных веществ, способных влиять на образование и рост сосудов. Лимфоциты реципиента и мононуклеарные клетки пуповинной крови донора культивировали совместно при 37 градусах Цельсия 5 дней, отделяли клетки центрифугированием и определяли in vitro ангиогенную активность культуральной жидкости с использованием модели культивируемых клеток аорты быка, внедренных в фибриновый гель, поддерживаемый нейлоновой мембраной. Пробы культуральной жидкости вносились в среду культивирования клеток аорты, и определялась скорость роста сосудистого диска (пятна сосудообразования) в фибриновом геле. Ангиогенная активность культуральной жидкости смешанной культуры лимфоцитов проявлялась лишь в том случае, если клетки донора и реципиента различались как минимум по 4 антигенам из 6 антигенов (3 пары: HLA-А и HLA-B, и HLA-DR). Если клетки донора отличались от клеток реципиента только на 3, 2 или 1 антиген из 6, ангиогенный эффект не проявлялся.

При клиническом применении мононуклеарных клеток пуповинной крови лечебный эффект при вышеуказанных ишемических состояниях и их последствиях проявлялся только в том случае, если клетки донора и реципиента различались минимум по 4 антигенам из 6 антигенов. Авторами настоящего изобретения установлено, что если донор и реципиент были совместимы более чем по 2 антигенам (т.е. по 3, 4, 5 или 6 антигенам из 3 пар: HLA-А и HLA-B, и HLA-DR), то введение стволовых клеток пуповинной крови не приводило к лечебному эффекту при названных заболеваниях.

При использовании заявляемого способа эффективная доза мононуклеарных клеток пуповинной крови составляет при введении в кровоток от 2,5×10⁶ до 10×10⁶ МНК на 1 кг веса человека, что соответствует не более 1×10⁹ МНК или не более 3×10⁹ ЯСК на пациента. Таким образом, используется в 3 раза меньше клеток, чем в способе-прототипе. Это позволяет использовать для лечения клетки пуповинной крови только одного донора, так как количество пуповинной крови одного донора и соответственно количество стволовых клеток пуповинной крови одного донора ограничено.

При применении заявляемого способа ни в одном случае не возникло токсических или иммунопатологических реакций

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1. Лечение ишемической болезни сердца.

Больной П., 68 лет, поступил с жалобами на приступообразные сжимающие боли за грудиной, купирующиеся приемом нитроглицерина, а также на слабость, бессоницу. Болеет ишемической болезнью сердца (стенокардия напряжения) в течение 8 лет. Около 3 месяцев назад, несмотря на проводимое лечение (вазодилятаторы, антиагреганты, противолипидемические препараты) перенес острый инфаркт миокарда. Боли за грудиной появлялись даже при подъеме на 1-2 этаж и при ходьбе на расстояние 50-100 метров. Иногда боли появляются ночью, в покое. Боли купировались после приема нитроглицерина. В течение последних 2-х недель перед поступлением в стационар боли участились, больной также отмечал слабость, шум в ушах, снижение памяти, бессонницу. Количество приступов стенокардии составляло 5-7 в сутки. Также больной предъявлял жалобы на регулярные подъемы артериального давления до 200/100 мм рт.ст.

При поступлении в стационар состояние удовлетворительное. Положение в постели - активное, но предпочтение - лежа. АД - 176/95 мм рт. ст., ЧСС 72 уд./мин, ЧДД 24/мин, температура тела 36,6°С.

Аускультация легких: дыхание жесткое, над всей поверхностью легких выслушиваются сухие свистящие хрипы в основном в области проекции бронхов. При обследовании в тесте на велоэргометре выявлено резкое уменьшение толерантности к физической нагрузке, причиной прекращения теста служило возникновение загрудинных болей с одновременным возникновением депрессии сегмента ST на электрокардиограмме. Мощность пороговой нагрузки составила 55 Вт, время выполнения теста 6,5 минуты. При ангиографическом обследовании выявлена окклюзия главной левой коронарной артерии более чем на 60%. Клинические и биохимические показатели крови в норме. Анализ мочи без особенностей. При электрокардиографии выявлен очаговый кардиосклероз в заднеперегородочной области, местная внутрижелудочковая блокада, умеренные изменения в миокарде верхней и боковой стенки левого желудочка. При эхокардиографии выявлены очаговые изменения верхушки, дилатация верхних камер сердца с незначительным снижением сократительной функции миокарда левого желудочка, фиброз межжелудочковой перегородки, сегментарный фиброз стенок корня аорты, структур аортального и митрального клапанов, митральная недостаточность 1 ст. Несмотря на проводимую медикаментозную терапию, симптоматика ИБС не регрессировала. С учетом ангиографических данных (значительный стеноз главной левой коронарной артерии) больному было предложено аортокоронароное шунтирование, от которого пациент отказался. С согласия пациента ему было проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA - тип донора А 1,25 В 37,44 DR 01,15, а HLA - тип больного А 1,25 В 18,14 DR 08,13. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 4 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови введены в количестве 2,5×10⁶ клеток/кг массы тела однократно, путем внутривенной инфузии в течение 2 часов со скоростью 8 мл/час. В течение последующих 2 месяцев после проведенной терапии состояние больного улучшалось, количество приступов стенокардии к концу 2-го месяца снизилось до 2-3 в сутки, уменьшилась одышка, практически прекратились ночные приступы загрудинных болей. При велоэргометрическом исследовании мощность пороговой нагрузки составила 85 Вт, время выполнения теста увеличилось до 9 минут. По настоянию больного инфузия клеток была повторена (через 60 дней после первого введения). Вводились клетки пуповинной крови того же донора в количестве 5,0×10⁶ /кг массы тела. Через 1,5 месяца после второго введения клеток больной смог подниматься без болей на 3-4 этажи, приступы стенокардии ночью почти не отмечались, при велоэргометрическом исследовании мощность пороговой нагрузки составила 110 Вт, время выполнения теста увеличилось до 14 минут.

Клинический анализ крови и мочи, биохимические анализы крови без изменений. Иммунограмма в норме.

ПРИМЕР 2. Лечение острого инфаркта миокарда.

Больная, Л., 71 года. Страдает гипертонической болезнью около 12 лет, стенокардией напряжения - около 10 лет. 5-7 лет назад стали появляться приступы пароксизмальной тахикардии, которые купировались самостоятельно или после приема верапамила. В анамнезе - несколько гипертонических кризов за последние 7 лет (АД максимальное - 210/100 мм рт.ст). Поступила в стационар с жалобами на жгучие загрудинные боли, впервые возникшие за 2 дня перед госпитализацией после значительной физической нагрузки. Боли сначала купировались нитроглицерином через 30-40 минут после возникновения, повторяясь несколько раз в день. В день госпитализации боль стала особенно сильной, продолжалась более 3 часов, не купировалась нитроглицерином, иррадиировала в левую руку, плечо и в нижнюю челюсть, сопровождалась резкой слабостью. Присоединились сильные головные боли, головокружение, пелена, туман перед глазами, ощущение пульсации сосудов в затылочной и височной областях, тошнота и позывы на рвоту. Все это вынудило больную вызвать неотложную помощь. При поступлении в стационар АД 170/100 мм рт.ст., ЧСС 75, больная бледная, слегка заторможенная, выраженный цианоз губ и стоп, резкое расширение границ сердца влево, систолический шум на верхушке, проводящийся в точку Боткина-Эрба. При электрокардиографии: QRS - 0,16; RR - 0,46; QT - 0,36; PQ - 0,20; ЧСС - 70 уд./мин; ритм синусовый. Очаговые изменения задней стенки левого желудочка, острая стадия. При ультразвуковом исследовании выявлена дилатация левых отделов сердца, умеренно выраженная гипертрофия миокарда левого желудочка, сократительная способность миокарда умеренно снижена, выявлена полная блокада правой ножки пучка Гиса. В клиническом анализе крови выявлено увеличение СОЭ - 20 мм/ч, в биохимическом анализе крови выявлено повышение ферментов крови: лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - 250 нмоль/л (при норме 89-221 нмоль/л), креатинфосфаткиназы (КФК) - 575 нмоль/л (при норме 26-174 нмоль/л). Диагноз: ишемическая болезнь сердца, острый инфаркт миокарда задней стенки левого желудочка, острая стадия, коронарный атеросклероз. Блокада правой ножки пучка Гиса. Гипертоническая болезнь III стадии.

Проводимое больной лечение включало купирование болевого приступа (промедол), сосудорасширяющие средства (нитраты), снижение АД (раствор магния сульфата внутривенно, верапамил), антиагреганты (аспирин), антикоагулянты, раствор глюкозы.

В течение последующей недели отмечалась выраженная положительная динамика: прекращение загрудинных болей, неприятных ощущений в области сердца, снижение АД, заметное уменьшение слабости. Ухудшение состояния больной наблюдалось на 8-й день лечения, когда снова повысилось АД до 170/100 мм рт.ст., пульс 75 уд./мин, появилась головная боль, тошнота и рвота. На ЭКГ выявлены ишемические изменения передней стенки левого желудочка. В дополнение к проводимой лекарственной терапии больной была проведена терапия заявленным способом. Установленный HLA - тип донора А 1,25 В 18,13 DR 01,08, а HLA - тип больного А 3,28 В 7,35 DR 01,08. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 4 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки вводились в дозе 5,5×10⁶ клеток/кг массы тела однократно, путем внутривенной инфузии в течение 2 часов со скоростью 10 мл/час. В течение последующих 2 недель состояние больной улучшалось. Боли в сердце не беспокоили. При электрокардиографическом исследовании выявлено ускорение (более чем в 1,5 раза) динамики показателей ЭКГ, характерных для течения острого инфаркта миокарда. Нормализация уровней ферментативной активности крови также происходила ускоренными темпами. Введение мононуклеарных клеток пуповинной крови было повторено через 10 дней после первого введения. Установленный HLA - тип донора А 1,34 В 40,56 DR 15,13. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 6 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки вводились в дозе 5,5×10⁶ клеток/кг массы тела однократно, путем внутривенной инфузии в течение 2 часов со скоростью 10 мл/час. При ультразвуковом исследовании сердца на 20 день после второго введения клеток выявлено значительное улучшение сократительной активности миокарда, уменьшение степени дилятации отделов сердца. Побочных эффектов от применения заявленного способа не наблюдалось.

ПРИМЕР 3. Лечение последствий острого инфаркта миокарда.

Больной Н., 58 лет. В 50-летнем возрасте перенес первый инфаркт миокарда левого желудочка, по поводу чего лечился в стационаре и затем амбулаторно. Терапия в стационаре проводилась гепарином, нитроглицерином, коринфаром, аспирином. После выписки было рекомендовано постоянное применение капотена и анаприлина по ¹/₂ таблетки утром и вечером. Рекомендации больной соблюдал, но за восемь месяцев до настоящей госпитализации перенес второй инфаркт миокарда заднебоковой стенки левого желудочка. Лечился стационарно (антиагреганты, вазодилятаторы, антикоагулянты). После выписки у больного появилась и стала нарастать одышка. Одышка сначала возникала при физических нагрузках, а затем стала возникать и в покое. Возникла сначала пастозность, а затем отечность нижних конечностей. При поступлении в стационар при эхокардиографическом исследовании установлено значительное снижение сократительной способности миокарда, с участками гиподинамии в местах рубцовозамещенных тканей миокарда. Диагноз: ишемическая болезнь сердца (безболевая форма), постинфарктный кардиосклероз, полная блокада левой ножки пучка Гиса. Недостаточность кровообращения 2Б ст., ишемическая кардиомиопатия. Больному назначен фуросемид, верошпирон, пропранолол и эналаприл. Больному проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA - тип донора А 1,2 В 40,56 DR 15,13, а HLA - тип больного А 1,2 В 18,14 DR 01,08. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 4 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови вводили в количестве 8×10⁶ клеток/кг массы тела путем внутривенной инфузии. Через 30 дней после введения клеток больной отметил улучшение состояния, одышка в покое исчезла, доза диуретиков была снижена вдвое. По данным ультразвукового исследования сердца (эхокардиографии), проведенного через месяц после введения клеток, конечный диастолический объем левого желудочка уменьшился с 210 до 186 мл, фракция выброса увеличилась с 35 до 45%. Функциональный класс сердечной недостаточности по классификации Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA) изменился с III-IV на II-III.

ПРИМЕР 4. Лечение ишемии мозга, вызванной атеросклерозом.

Больная Н., 71 год, поступила в стационар с жалобами на головные боли, возникающие чаще к вечеру или ночью, разной локализации (иногда половина головы, иногда вся голова), которые пациентка снимала анальгетиками (анальгин, баралгин); головокружения. В течение многих лет страдает ортостатической гипотонией.

Был проведен комплекс лабораторных и инструментальных исследований. На ЭКГ: полугоризонтальное положение электрической оси сердца, замедление внутрипредсердного проведения, местные нарушения внутрижелудочкового проведения.

Ультразвуковое исследование сосудов выявило множественное атеросклеротическое поражение брахиоцефальных сосудов, стенозирование более 60% просвета левой внутренней сонной артерии, недостаточность кровообращения в вертебробазилярном бассейне за счет экстра- и интракраниального атеросклеротического поражения позвоночной артерии (в основном левой) и основной артерии. При компьютерной томографии мозга также выявлена аневризма правой внутренней сонной артерии. В стационаре проводилась консервативная терапия: сибазон, антиагреганты, анальгин. Прием сосудорасширяющих препаратов ввиду наличия гипотонии был противопоказан.

В результате указанного выше лечения самочувствие улучшилось незначительно, головокружения и обмороки продолжались.

С согласия пациента ему было проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA - тип донора A 3,28 В 18,13 DR 01,15, а HLA - тип больного А 3,30 В 7,40 DR 03,07. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 5 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови введены в количестве 5×10⁶ клеток/кг массы тела путем внутривенной инфузии. В течение последующих трех недель состояние больной постепенно улучшалось. Головокружения сохранялись, но обмороки прекратились. Улучшился сон, исчезли головные боли. Лабораторные исследования крови и мочи не выявили каких-либо отклонений.

ПРИМЕР 5. Лечение ишемии мозга, вызванное острым нарушением мозгового кровообращения.

Больная К., 80 лет во время привычной физической больная почувствовала сильную головную боль, головокружение. Произошло непроизвольное мочеиспускание, перестала понимать речь, потеряла способность движений в левой половине тела. При госпитализации общее состояние больной было тяжелым, положение пассивным, настроение подавленное, лицо безразличное, мышечный тонус снижен. Речевой контакт был затруднен из-за моторной афазии, больная была загружена, заторможена, мышление было замедленно, при беседе быстро уставала, говорила односложно, голос тихий, бреда и галлюцинаций не наблюдалось. Отмечалось поражение III пары нервов: ширина глазных щелей не одинакова S>D. Левый зрачок был расширен. Зрачки на свет реагировали. Двоения предметов перед глазами не было. Конвергенция зрачков была нарушена. Отмечалось поражение VII пары: больная не могла наморщить лоб, при зажмуривании глаз ресницы не скрывались в кожных складках. Носогубные складки были выражены слабо. При исследовании круговой мышцы рта выявлена слабость слева. Отмечалось поражение XII пары нервов: при высовывании языка отмечается девиация влево. Отмечалось присутствие симптомов Бабинского и Жуковского слева, кроме того, снижение поверхностной, температурной и тактильной чувствительности в левой половине тела. Активные движения были ограничены в левых конечностях. Мышечный тонус был снижен в левой руке и левой ноге. Больная была не устойчива в позе Ромберга. Пальценосовую и коленно-пяточную пробы больная выполнить не могла. Отмечались высокие сухожильные рефлексы с левосторонним преобладанием. Отмечался хоботковый рефлекс с обеих сторон. В крови отмечался нейтрофильный лейкоцитоз и увеличение СОЭ. Крови в ликворе не обнаруживалось, геморрагических очагов в головном мозге при исследовании на компьютерном томографе не выявлено. Диагноз: нарушение мозгового кровообращения по ишемическому типу в бассейне правой средней мозговой артерии с левосторонним гемипарезом и гемигипостезией. Гипертоническая болезнь III степени. Атеросклероз сосудов головного мозга.

В течение 2-х недель в стационаре больная получала антиагреганты, антикоагулянты, антигипертензивные, ноотропные препараты, а также витаминотерапию и препараты, улучшающие мозговое кровообращение, однако положительная динамика почти не отмечалась. Больной проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA - тип донора А 1,34 В 40,56 DR 01,08, а HLA - тип больного A 3,28 В 7,40 DR 01,03. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 4 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови донора ввели в количестве 10×10⁶ мононуклеарных клеток/кг массы тела путем внутривенной инфузии. В течение последующего месяца состояние больной значительно улучшилось. Восстановилась чувствительность в левой половине тела, регрессировали признаки поражения II и III пары нервов. Стали выполняться пальценосовая и коленно-пяточная пробы. Больная стала легко вступать в речевой контакт, заторможенность не отмечалась.

ПРИМЕР 6. Лечение последствий ишемии мозга, вызванной острой недостаточностью мозгового кровообращения.

Больной Ф., 60 лет, поступил в стационар в порядке плановой госпитализации с жалобами на слабость и ограничение движений в правых руке и ноге, отечность в них. Болен около года, когда после принятия значительно количества алкоголя, проснувшись утром, обнаружил, что не может двигать правой рукой и ногой, не может осуществлять движения мимической мускулатуры правой половины лица, при этом была затруднена речь. Больной был экстренно госпитализирован в неврологический стационар, где был поставлен диагноз ишемического инсульта в бассейне левой средней мозговой артерии с правосторонней гемиплегией. После проведенного лечения (вазодилятаторы, антиагреганты) явления правосторонней гемилегии в значительной степени уменьшились, и больной был выписан в удовлетворительном состоянии с остаточными явлениями в виде правостороннего гемипареза. За период до момента данной госпитализации ухудшения или улучшения состояния больной не отмечал. При неврологическом обследовании выявлено снижение силы в правой руке и правой ноге, чувство онемения в правой руке и снижение кожной чувствительности на обеих руках. На стороне пареза резко повышены глубокие рефлексы, имеется клонус стопы и надколенника. Сила кистей рук: справа 27 кг, слева 42 кг. Мышечная сила ног: слева 2 балла, справа 3 балла при максимуме шкалы 5 баллов (чем выше балл, тем больше сила). Больному проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA - тип донора А 1,25 В 7,35 DR 15,13, a HLA - тип больного А 1,34 В 37,41 DR 02,07. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 5 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки пуповинной крови вводили в количестве 10×10⁶ клеток/кг массы тела путем внутривенной инфузии. Проведенное через 3 недели после этого исследование неврологического статуса показало уменьшение неврологического дефицита. Исчезло онемение в правой руке, улучшилась координация движений, повысилась чувствительность кожи рук. Клонуса стопы и надколенника не отмечается, глубокие рефлексы близки к норме. Сила кистей рук после лечения заявленным способом: справа 42 кг, слева 42 кг, а мышечная сила ног: слева 3 балла, справа 4 балла.

ПРИМЕР 7. Лечение ишемии нижних конечностей, вызванной атеросклерозом.

Пациент А., 71 год. Симптомы заболевания появились около 2 лет назад, когда при ходьбе появились боли в икроножных мышцах. Проведено лечение (трентал, пармидин) с незначительным эффектом: боли незначительно уменьшились, но не исчезли. В то же время перенес инфаркт миокарда. Спустя 2 года на фоне того же лечения боли вновь стали нарастать. К моменту поступления в стационар боли в левой икроножной мышце возникали при прохождении около 50 метров. Принимал постоянно трентал, пармидин.

При обследовании пульс на лучевых артериях хорошего наполнения, ритм правильный, ЧСС 92 уд./мин., АД 160/95 мм рт.ст. Пульсация на общих сонных, височных, плечевых артериях, брюшной аорте сохранена. При аускультации сонных артерий, брюшной аорты сосудистые шумы не выявляются. Пульсаций на правой бедренной, правой подколенной, правой и левой задних большеберцовых артериях, правой дорсальной артерии стопы не определяется. На левой подколенной артерии и левой дорсальной артерии стопы пульсация резко ослаблена. В левой паховой области в проекции левой бедренной артерии аускультативно определяется грубый систолический шум. Пробы Гольдфлама, Самюэлса, коленный феномен Панченко, симптом сдавления ногтевого ложа и симптом плантарной ишемии (Оппеля) положительны. Симптом Гоманса отрицательный. При ангиографическом обследовании выявлено нарушение проходимости поверхностной бедренной артерии слева.

Кожа голеней и стоп истонченная, цианотичная, сухая, шелушится, имеются трещины. На коже стоп - выраженный гиперкератоз. Отмечается деформация ногтевых пластинок пальцев стоп, нарушение волосяного покрова кожи стоп и голеней. Подкожная жировая клетчатка нижних конечностей истончена. Мышцы обеих бедер, голеней и стоп атрофичны;

мышечный тонус и сила мышц нижних конечностей снижены.

Проведено ангиографическое обследование, а также и лазерная доплерография тканевого кровотока нижних конечностей. Для изучения мышечного кровотока в асептических условиях на уровне границы средней и нижней третей левой голени в медиальную головку икроножной мышцы путем пункции была установлена одноразовая игла, по внутреннему просвету которой провели датчик лазерного флуометра. Лазерная доплерография выявила снижение тканевого кровотока в мышце левой голени до 0,72 мл/мин/100 г ткани мышцы (при норме 6,5 мл/мин/100 г ткани мышцы).

В связи с исчерпанием возможности консервативного лечения (вазодилятаторы, антиагреганты, витаминотерапия) больному была предложено оперативное лечение. От реконструктивно-пластического (шунтирующего) оперативного лечения больной отказался. С согласия пациента ему было проведено лечение заявленным способом. Установленный HLA тип донора А 1,2 В 37,41 DR 01,03, a HLA - тип больного А 3,28 В 7,35 DR 08,13. Таким образом, набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR клеток донора отличался от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR пациента (реципиента) по 6 антигенам из 6 антигенов. Мононуклеарные клетки вводились в дозе 7,5×10⁶ клеток/кг массы тела однократно, путем внутривенной инфузии в течение 2 часов со скоростью 10 мл/час. Через 3 месяца после проведенной терапии расстояние, на которое проходил больной без возникновения болей в икроножных мышцах, увеличилось в 3 раза. Показатель тканевого кровотока по данным лазерной флоуметрии вырос до 3,5 мл/мин/100 г ткани. Улучшились показатели трофики нижних конечностей - исчезло шелушение кожи голеней, улучшился тонус икроножных мышц. Показатели крови до начала лечения заявленным способом: гемоглобин - 156,0 г/л; лейкоциты - 4,7×10%; нейтрофилы: палочкоядерные - 3%, сегментоядерные - 54%, эозинофилы - 4%; лимфоциты - 39%; моноциты - 6%; СОЭ - 2 мм/ч. Общий анализ мочи до начала воздействия способом лечения: цвет соломенно-желтый, количество - 240 мл, относительная плотность - 1015; реакция щелочная; белок - следы; глюкозы нет; лейкоциты - 4-5 в поле зрения, эритроциты - единичные в поле зрения; цилиндры - гиалиновые. Общий анализ крови после проведенной терапии предлагаемым способом: гемоглобин - 148 г/л; лейкоциты - 4,8×10⁹/л; нейтрофилы: палочкоядерные - 13%, сегментоядерные - 59%; лимфоциты - 27%; моноциты - 4%; СОЭ - 7 мм/ч. Биохимический анализ крови до начала лечения: общий белок 69 г/л, мочевина 5,5 ммоль/л, креатинин 68 ммоль/л, общий билирубин 10,5 мкмоль/л, АЛТ 85 нмоль/с × л, ACT 82 нмоль/с × л, α-амилаза 14 мкг/с × л, щелочная фосфатаза 2,3 нмоль/с × л, глюкоза 4,61 ммоль/л, тимоловая проба 2. Биохимический анализ крови после лечения: общий белок 70 г/л, мочевина 4,2 ммоль/л, креатинин 65 ммоль/л, общий билирубин 41,3 мкмоль/л, прямой билирубин 15,4 мкмоль/л, АЛТ 72 нмоль/с × л, ACT 104 нмоль/с × л, α-амилаза 7 мкг/с × л, глюкоза 5,52 ммоль/л, тимоловая проба 2. ЭКГ до начала лечения: ритм синусовый, синусовая тахикардия (ЧСС 105 уд/мин); единичные желудочковые экстрасистолии. Вертикальное положение электрической оси сердца. Рубцовые изменения на задней и передней стенках левого желудочка. Гипертрофия левого желудочка. ЭКГ после лечения: ритм синусовый, синусовая тахикардия (ЧСС 95 уд./мин). Единичные желудочковые экстрасистолии. Вертикальное положение электрической оси сердца. Рубцовые изменения на задней и передней стенках левого желудочка. Гипертрофия левого желудочка.

Каких-либо нежелательных, в том числе отсроченных, явлений при применении заявленного способа не наблюдалось. Иммунограмма в норме.

ПРИМЕР 8. Лечение ишемии, вызванной атеросклерозом, в частности ишемии нижних конечностей при курсовом многократном введении мононуклеарных клеток.

Больной Ф., 52 лет, находится в стационаре, поступил с жалобами на чередующиеся боли в нижних конечностях, возникающие при ходьбе, зябкость и покалывание в пальцах ног, боли в правой половине стопы, усиливающиеся при ходьбе. Характер болей характеризовался как колющие и тянущие, без иррадиации. Болен в течение 5 лет, когда появились впервые боли при ходьбе, проходящие в состоянии покоя. Наблюдался у терапевта. Периодически принимал вазодилятаторы и антикоагулянты (трентал). При обследовании больного обнаружены язвенно-некротические изменения дистальных отделов пятого пальца правой ноги, выявлено нарушение роста ногтей. Нарушено оволосение на голенях. Кожа цианотичная, есть нарушения пигментации ("мраморная" кожа или кожа цвета "слоновой кости". Наблюдалась гипотрофия мышц голеней). Стопы холодные, пульсация на артериях стопы и подколенной артерии правой ноги отсутствует. На бедренной артерии правой ноги пульсация ослаблена; на бедренной, подколенной и артериях стопы левой ноги удовлетворительная. При доплерографическом исследовании обнаружены выраженные нарушения кровотока в бедренных и подвздошных артериях, больше справа. Клинические и биохимические анализы крови и мочи не выявили отклонений о нормы, за исключением повышенного уровня липопротеидов низкой плотности. Расстояние безболевой ходьбы на тредмиле составило 82 метра. На основании инструментального и физикального обследований поставлен диагноз облитерирующий атеросклероз нижних конечностей, ишемия IIIб, окклюзия бедренно-подколенного сегмента справа III ст., синдром Лериша, язвенно-некротические изменения 5-го пальца правой стопы. Больному была назначена молочно-растительная диета с ограничением жирной, соленой и острой пищи, баротерапия (8 сеансов), реополиглюкин, ксантинола никотинат, трентал, местное применение спиртового раствора фурацилина на язвенное поражение стопы. Несмотря на проводимое в течение 2 недель лечение, состояние больного не улучшалось. Толерантность к ходьбе не увеличилась, а глубина язвенного поражения стопы имела тенденцию к увеличению. С согласия больного ему был проведен курс лечения заявленным способом. Установленный HLA - тип больного А 1,3 В 7,8 DR 01,02. Введение клеток повторяли несколько раз следующим образом (см. Таблицу):

ТаблицаДоза клеток (× 10 ⁶/кг массы тела)HLA - тип клеток донораИнтервал после предыдущего введения, дниКоличество отличных антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR донора и реципиента7,5А 3,11 В 14,44 DR 02,07-4 из 62,5A 2,11 В 08,13 DR 02,15104 из 65,6A 2,3 В 39,44 DR 08,15144 из 65,2A 1,2 В 2,14 DR 07,15145 из 66,3A 11,30 В 2,17 DR 02,07205 из 610,0A 1,3 В 13,35 DR 01,07325 из 610,0А 1,2 В 13,14 DR 01,07604 из 69,1А 1,2 В 14,44 DR 01,15144 из 65,3А 2,11 В 17,27 DR 08,15146 из 64,7А 2,11 В 14,44 DR 02,07275 из 6

Взвесь мононуклеарных клеток пуповинной крови вводили путем внутривенной инфузии.

Уже через 2 недели от начала терапии больной отметил уменьшение интенсивности перемежающейся хромоты. Это подтвердилось при проведении тредмил-теста и доплерографического исследования. Расстояние безболевой ходьбы увеличилось до 112 м. Увеличилась и скорость магистрального кровотока в артериях стоп и голеней: средняя скорость кровотока с 0,77 см/с (до начала лечения) до 1,11 см/с, а скорость линейного кровотока с 5,43 см/с до 5,96 см/с. Уровень систолического и диастолического артериального давления практически не изменился. На 8 неделе лечения язва на стопе практически полностью эпителизовалась. Через 10 недель лечения положительная динамика в клинической картине стала еще более выраженной: продолжало увеличиваться расстояние безболевой ходьбы, достигло 119 м, увеличились средняя скорость кровотока и линейная скорость кровотока. Окончательная оценка эффективности лечения больных через 2 недели по окончании курса. Средняя скорость кровотока увеличилась до 1,59 см/с, скорость линейного кровотока до 6,12 см/с, что практически составляет показатели, характерные для здоровых лиц. Расстояние безболевой ходьбы достигло 150 м. Биохимические и клинические лабораторные показатели находились в пределах возрастной нормы. Таким образом, заявленный способ высокоэффективен в его варианте курсового лечения ишемических нарушений, вызываемых атеросклерозом, в частности ишемических нарушений в нижних конечностях.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения заболеваний, связанных с нарушением кровоснабжения тканей. Способ включает введение в кровь мононуклеарных клеток пуповинной крови донора. При этом указанные клетки донора имеют набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR, отличный от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR реципиента не менее чем по четырем антигенам. Количество вводимых клеток составляет от 2,5×10⁶ до 10×10⁶ на кг массы тела в сутки. Введение повторяют от 2 до 10 раз с интервалом 10-60 дней. Способ обеспечивает замещение погибших и/или не способных к регенерации клеток реципиента указанными донорскими клетками и позволяет уменьшить частоту иммунопатологических реакций при снижении количества вводимых мононуклеарных клеток донора. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ лечения ишемической болезни сердца, или инфаркта миокарда и его последствий, или ишемии мозга, вызванной атеросклерозом или острым нарушением мозгового кровообращения, и ее последствий, или ишемии нижних конечностей, вызванной атеросклерозом, включающий введение в кровь мононуклеарных клеток пуповинной крови донора, отличающийся тем, что указанные клетки донора имеют набор антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR, отличный от набора антигенов HLA-A, HLA-B, HLA-DR реципиента не менее чем по четырем антигенам.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что количество вводимых клеток составляет от 2,5·10⁶ до 10·10⁶ на кг массы тела в сутки.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что введение мононуклеарных клеток пуповинной крови донора повторяют от 2 до 10 раз с интервалом 10-60 дней.