СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ У КОРОВ Российский патент 2006 года по МПК A61K31/375 A61K31/194 A61P39/06 A61P37/04 

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа иммунокоррекции у коров, направленного на предотвращение (профилактику) различных нарушений воспроизводительной функции коров в послеотельный период.

Ослабление защитно-адаптационных механизмов организма - основной предрасполагающий фактор в этиопатогенезе послеродовых заболеваний у коров.

Постоянство клеточного и гуморального состава (гомеостаз) организма контролируется иммунной системой. Работа иммунной системы определяется иммунокомпетентными клетками, из которых основными являются лейкоцит во всем многообразии его популяций и субпопуляций и тканевые макрофаги. Все иммунокомпетентные клетки действуют комплексно (клеточная кооперация) в соответствии с их функцией. Так, фагоциты (моноциты, нейтрофилы и тканевые макрофаги) обеспечивают киллинг и элиминацию чужеродного агента, развитие вспомогательных процессов и запуск многих механизмов специфических реакций, активизирующих или подавляющих иммунный ответ, Т-лимфоциты - клеточный, а макрофаги и В-лимфоциты - гуморальный иммунитет. Под воздействием различного рода иммунодепрессантов развивается недостаточность механизмов иммунитета (клеточного или гуморального или отдельных его звеньев) [1, 2].

Для восполнения иммунологической недостаточности применяют различные группы препаратов - неспецифических иммуностимуляторов (корпускулярные иммуностимуляторы: липосомы, латекс, микроцеллюлоза и др.; препараты микробного, вирусного происхождения и их синтетические аналоги: продигиозан, зимозан, ликопид и др.; препараты из тканей человека и животных и их синтетические аналоги: тимоген, спленин, пантокрин, препараты из крови и сыворотки и др.; препараты растительного происхождения: чайного дерева, лимона, чеснока, эхинацеи и др.; синтетические иммуномодуляторы: дибазол, метилурацил, левамизол и др.; гормоны: эстрадиол, синэстрол, тироксин, тиреоидин и др.; витамины, микроэлементы и их соли) [3]. Многие витамины и микроэлементы участвуют в иммунологических реакциях, активизируя (или супрессируя) действия различных ферментов, например соединения селена, в частности натрий селенит [4], барий селенистокислый [5], селенопиран [6].

В основе механизмов действия каждого иммуностимулятора лежат особенности его химического строения, в зависимости от которых активизируется та или иная система организма. В то же время патогенез различных болезней не одинаков, поэтому при выборе иммуностимулятора необходимо иметь четкое представление о том, какие системы наиболее задействованы в данной патологии и какие он может активизировать.

Совокупность неблагоприятно воздействующих организационно-технологических факторов с физиологическими изменениями повышает окислительную нагрузку на организм отельных коров, что вызывает окислительный стресс. В предварительных исследованиях нами установлена взаимосвязь между окислительным стрессом и иммунобиохимическим гомеостазом у стельных коров, указывающая на то, что в этиопатогенезе массовых послеродовых патологий лежит состояние стрессовой дезадаптации. У коров с акушерской патологией отмечали нарушение иммунобиохимического гомеостаза за 15 дней до отела (снижение показателей гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, Т- и В-лимфоцитов, общего белка сыворотки крови (ОБС), нарушение межфракционных соотношений, повышение уровня общих липидов и холестерина, снижение уровня общих иммуноглобулинов, витамина Е, лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов) при значительном по сравнению с коровами с нормальным течением родов и послеродового периода повышении продуктов перекисного окисления (ПОЛ), в частности малонового диальдегида. Следовательно, накопление в организме высокоактивных продуктов ПОЛ является одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологической резистентности организма, т.е. иммунологической недостаточности (таблица 1).

Техническим результатом изобретения является разработка способа иммунокоррекции у сухостойных коров с одновременной профилактикой нарушений воспроизводительной функции коров в послеродовом периоде.

Технический результат достигается тем, что в способе иммунокоррекции, включающем введение биологически активных веществ, в качестве биологически активных веществ используют антиоксиданты, в качестве которых используют янтарную и аскорбиновую кислоты, при этом янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в виде смеси в соотношении 1:1, а введение осуществляет per os в течение 20-25 дней до отела и 20-25 дней после отела. Кроме того, в данном способе смесь антиоксидантов вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.

Сравнение заявленных технических решений с известными позволило выявить отличные от них признаками, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "новизна".

Таблица 1.Показатели иммунобиохимического гомеостаза коров за 15 дней до отелаПоказателиНормаГруппы коровс нормальным течением послеродового периодас послеродовой патологиейГемоглобин, г/л99,0-129,0101.0±1,589,5±1,8Эритроциты, 10¹²/л5,0-8,06,1±0,24,7±0.1Лейкоциты, 10⁹ л4,5-12,07,7±0,45,0±0,5Т-лимфоциты, %45-6042.9±0,531,2±1,9В-лимфоциты, %8-1512,8±0,87,4±0,6Иммуноглобулины общие, г/л15-2518,9±0,315,5±0.2Бактерицидная активность сыворотки крови, %65-8566,8±0,760,2±1,1Лизоцимная активность сыворотки крови, %6-96,9±0,74,9±0,5Фагоцитарная активность нейтрофилов крови, %50-6051,2±1,545,2±1,4Общий белок сыворотки крови, г/л72-8676,0±1,572,2±1,7Альбумины, %40 (30-50)46,0±1,541,2±1,4Глобулины, %60  - альфа17(12-20)13,7±0,912,1±0,6- бета13(10-16)14,9±1,113,2±0,8- гамма30(25-40)25,4±1,333,5±1,5Глюкоза, ммоль/л2,2-3,32,24±0,22,09±0,1Общие липиды, г/л3,5-4,54,0±0,45,9±0,6Общий холестерин, ммоль/л2,34-4,684,03±0,0212,9±0,02Витамин Е, мкм/л14-3325,2±1,212,9±1,1Малоновый диальдегид, мкм/л0,59-0,950,89-0,031,79±0,02

Анализ технических решений показал, что заявленная совокупность существенных признаков неизвестна из уровня техники, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "изобретательский уровень".

Осуществимость и эффективность способа иммунокоррекции определяли в научно-производственных экспериментах на сухостойных коровах черно-пестрой породы с молочной продуктивностью 3500-3800 кг в условиях хозяйства с высокой (более 90%) заболеваемостью репродуктивных органов после отела. Состояние иммунобиохимического гоместаза оценивали по уровню следующих показателей: гемоглобина, эритроцитов, ОБС, общих иммуноглобулинов (определяли общепринятыми методами), глюкозы (определяли ортотолуидиновым методом), общих липидов (определяли по Криницкому в модификации Волгина,1969), продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты и кетодиены (определяли по Плацерту,1976), малоновый диальдегид (определяли с тиобарбитуровой кислотой), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определяли по B.C.Гостеву).

Результаты исследований подвергали биометрической обработке и корреляционному анализу с применением компьютерной программы.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 как иммунокорректора изучали на 5 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В течение 20-25 дней до предполагаемого отела и 20-25 дней после отела коровам опытных групп применяли внутрь янтарную кислоту и смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 по следующей схеме: первая группа - янтарная кислота в дозе 1,0 г на голову в сутки; вторая, третья и четвертая группы: смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 0,5, 1,0 и 1,5 г на голову в сутки соответственно. Перед проведением опыта и на 2-3 день после отела брали кровь для изучения иммунобиохимического гомеостаза. Результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2.Иммунокорригирующая эффективность янтарной и аскорбиновой кислот (1:1)ПОКАЗАТЕЛИГруппы коров1-ая2-ая3-ая4-ая5-аяЯнтарная кислота 1,0 г на голову в суткиСмесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1), г на голову в суткиКонтроль (без препаратов) 0,51,01,5 Гемоглобин, г/л93,7±2,094,4±1,995,0±2,593,9±2,595,7±3,0 112,0±2,5114,0±1,1119,0±2,0119,0±2,098,0±2,0Эритроциты, 10¹²/л5,4±0,255,4±0,15,2±0,255.2±0.255,2±0,24 5,9±0,36,1±0,26,0±0,26,0±0,15,3±0,15ОБС, г/л72,0+1,372.3+1.570,7±1,172,0±1,472,2±1,5 76,7±1,477,3±1,779,0±1,279,0±1,273,0±1,1Гамма-глобулины, %23,1±1,623.5±1,223,0±2,022,9±1,523,9±1,7 28,0±1,328,5±1,229,9±1,329,8±2,021,0±1,4Глюкоза, м моль/л2,03±0,32.01±0.22,09±0,22,05±0,22,15±0,3 2,45±0,22,46±0,12.64±0,22,58±0,21,13±0,4Общие липиды, г/л5.69±0.55.70±0.55.61+0.35.65±0.55.72±0.5 4,98±0,54,99±0,44,87±0,54,93±0,45,96±0,6Лизоцимная3,3±0,13,5+0,23,6+0,13,4±0,33,5±0,3активность, %4,2±0,24,4±0,24,8±0,24,4±0,22,0±0,2Бактерицидная64,4±1,764,0±1,663,0±1,564,5±1,865,5±1,7активность, %73,0±1,774,2±1,779,7±1,879,0±1,960,7±1,6Фагоцитарная активность45,7±1,845,0±1,443,5±1,344,0±1,545,8±1,5нейтрофилов, %49,0±0,251,0±1,552,2±1,551.5±1,638,9±1,4Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела; в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Полученные данные подтвердили стимулирующее действие янтарной кислоты и смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 на показатели иммунобиохимического гомеостаза, которое было наиболее выраженным при применении смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1, причем оно оказалось дозозависимым. Так, средняя доза (1,0 г на голову в сутки) обеспечивала максимальные показатели иммунной активности. Максимальная доза (1,5 г на голову в сутки) обеспечивала показатели выше минимальной (0,5 г на голову в сутки), но ниже или на уровне средней дозы, что делало повышение дозы нецелесообразным. Результаты, полученные при испытании граничных значений доз, позволили рекомендовать дозу 1,0 г на голову в сутки как оптимальную для применения на практике.

Пример 2. Профилактическую эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в сравнении с известными способами изучали на 4 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В 1-й группе коровам за 20-25 дней до отела вводили внутримышечно однократно 0,5% раствор селенита натрия (способ-аналог), во 2-й группе коровам за 20-25 дней до и в первые 20 дней после отела вводили внутримышечно тетравит один раз в 10 дней (базовый способ), в 3-й группе коровам в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела давали внутрь смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 1,0 г на голову в сутки. За животными вели наблюдения, отмечали характер течения предродового, родов и послеродового периодов, проводили клинико-гинекологические обследования коров, учитывали количество заболевших животных, сроки инволюции репродуктивных органов и осеменения. Состояние иммунобиохимического гомеостаза определяли, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 3, 4.

Таблица 3.Состояние иммунобиохимического гомеостазаПоказателиГруппы коров1-я2-я3-я4-яПримененный способАналог: натрия селенит внутримышечноБазовый: тетравит внутримышечноЗаявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1) внутрьБез препаратовГемоглобин, г/л93,7±2,094,0±2,295,0±2,595,7±3,0 112,0±2,5101,0±2,0119,0±2,098,0±2,0Эритроциты,5,4±0,255,2±0,35,2±0,255,2±0,2410¹²/л5,9±0,35,7±0,26,0±0,25,3±0,15Общий белок72,0±1,371,0±1,270,7±1,172,2±1,5сыворотки, г/л76,7±1,475,2±1,579,0±1,273,0±1,1Гамма-глобулины,23.1±1.622.8±1.323.0±2.023,9±1.7%28,0±1,326,2±1,529,9±1,321,0±1,4Глюкоза, ммоль/л2,03±0,32.20±0.42,09±0,22,15±0,3 2,45±0,22,87±0.32,64±0,21,13±0,4Лизоцимная3,3±0,13,4±0,33,6±0,13,5±0,3активность, %4,2±0,24,0±0.14,8±0.22,0±0,2Бактерицидная64,4±1,766,3±1,663,0±1,565,5±1,7активность, %73,0±1,775,5±1,779,7±1,860,7±1,6Фагоцитарная45,7±1,844.8±1.443.5±1.345,8±1.5активность нейтрофилов, %49,0±0,249,2±1,552,2±1,538,9±1,4Диеновые конъюгаты,0,24±0,020,24±0,020,23±0,030,22±0,03ед. А/мл0,28±0,020,32±0,030,24±0,010,36±0,04Кетодиены, ед. А/мл0.055±0.0010.055±0.0010.056±0.0010,056±0,001 0,065±0,0020,065±0,0020,061±0,0020,098±0,001Малоновый2,72±0,032,73±0,0022,74±0,022,72±0,03диальдегид, мкмоль/л2,76±0,023,00±0,032,76±0,023,60±0,03

Таблица 4.Сравнительная эффективность способов профилактики послеродового эндометрита коровПоказателиГруппы коров1-я2-я3-я4-яАналог: натрия селенитБазовый: тетравитЗаявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1)Без препаратовКоличество коров, подвергнутых профилактической обработке, гол.32273310Заболело послеродовым эндометритом, гол.1116310Профилактическая эффективность, %65,640,790,90Сроки инволюции половых органов, дни26,7±2,534,2±4,523,3±1,949,7±5,0Период от отела до осеменения, дни64,4±3,272,2±3,748,2±2,593,5±8,5

Иммунобиохимический статус коров за 20-25 дней до отела характеризовался низкими показателями гемоглобина (на 3,3-5,6% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), эритроцитов (на 10-13% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), ОБС (на уровне нижней границы физиологической нормы), гамма-глобулинов (на 4,4-8,8% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), глюкозы (на уровне нижней границы физиологической нормы), лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов крови (на уровне нижней границы физиологической нормы) на фоне высокого уровня продуктов ПОЛ: диеновых конъюгатов (в 1,59-1,74 раза выше физиологической нормы), кетодиенов (в 1,08-1,1 раза выше физиологической нормы), малонового диальдегида (в 4,59-4,64 раза выше физиологической нормы). После отела у коров контрольной группы отмечалось дальнейшее снижение показателей иммунологической реактивности (лизоцимная активность сыворотки крови понизилась на 42,9%, бактерицидная активность сыворотки крови - на 7,3%, фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 15%) при более выраженном, чем в опытных группах, повышении показателей продуктов ПОЛ. Так, уровень диеновых конъюгатов повысился на 63,6% по сравнению с 16,7% (способ-аналог), 33,3% (базовый способ) и 4,4% (заявленный способ), уровень кетодиенов - на 75,0% по сравнению с 18,2% (способ-аналог), 54,2% (базовый способ), 8,9% (заявленный способ), уровень малонового диальдегида - на 32,4% по сравнению с 1,5% (способ-аналог), 9,9% (базовый способ) и 0,7% (заявленный способ). Во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиохимических показателей. Более ярко выраженные изменения нормализующего характера установлены в третьей опытной группе (заявленный способ). Так, лизоцимная активность сыворотки крови повысилась на 33,3% по сравнению с 21,9% (способ-аналог) и 17,7% (базовый способ), бактерицидная активность сыворотки крови - на 26,5% по сравнению с 14,8% (способ-аналог) и 13,9% (базовый способ) и фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 20% по сравнению с 8% (способ-аналог) и 9,8% (базовый способ) (таблица 3). Эффективность профилактики послеродового эндометрита у коров в третьей группе составила 90,9% по сравнению с 65,6% в первой группе (способ-аналог), 40,7% во второй группе (базовый способ) и 0% в четвертой группе (таблица 4).

Результаты проведенных исследований подтвердили, что при реализации заявленной совокупности существенных признаков достигается технический результат - иммунокоррекция у сухостойных коров, проявляющаяся нормализацией основных показателей иммунобиохимического гомеостаза, включая показатели естественной резистентности, что обеспечивает нормальное течение родов и послеродового периода.

Источники информации

1. Притулин П.И., Калмыкова Т.П. Инфекционные проблемы иммунодефицита животных //Вестник сельскохозяйственной науки. - 1989. - №2. - С.95-100.

2. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможности управления. - М.: Время, 2002. - 350 с.

3. Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве, Киров, 6-7 октября 1998 г.: Тез. докл. науч. конф. Киров, 1998. - 98 с.

4. Соколов В.Д. Фармакология, 2-е изд., исправленное и дополненное. М.: Колос, 2000. - С.360-361.

5. RU 2201237 C2, 27.03.2003.

6. RU 2212888 C2, 07.09.2003.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу иммунокоррекции у коров, включающему введение смеси янтарной и аскорбиновой кислоты в соотношении 1:1 в дозе от 0,5 до 1,5 г на голову в сутки per os в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела. Технический результат изобретения - иммунокоррекция у сухостойных коров с одновременной профилактикой нарушений воспроизводительной функции у коров в послеродовом периоде. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ иммунокоррекции у коров, включающий введение смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе от 0,5 до 1,5 г на голову в сутки per os в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.