СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ЗАБОРА КОСТНОГО МОЗГА У ЖИВОТНЫХ Российский патент 2006 года по МПК A61B17/00 

Изобретение относится к области животноводства и ветеринарии, может быть использовано для морфологических, гистологических, цитологических и других исследований.

Одной из причин контроля костного мозга у животных является изучение влияния уровня кормления и окружающих условий на продуктивность сельскохозяйственных животных. Параметрами, информирующими о полноценности питания и здоровье животных, являются показатели крови и костного мозга. Костно-мозговое кроветворение - одна из наиболее рано возникающих функций организма. Согласно унитарной теории кроветворения все форменные элементы крови имеют общее происхождение. Их родоначальником является крупная клетка - гемоцитобласт. Во внутриутробный период образование и развитие эритроцитов, зернистых лейкоцитов и мегакариоцитов происходит в печени. В конце внутриутробного периода кроветворение в печени прекращается и единственным органом образования этих клеток становится костный мозг. Качество кормов и кормление животных в целом, а также экологические аспекты ведения животноводства требуют проводить детальное изучение организма животного, в частности его иммунной системы при проведении комплексных исследований. Поэтому изучение морфологического состава костного мозга крайне необходимо и важно, так как способствует диагностике и прогнозированию последовательного формирования иммунного статуса организма животных. Знание возрастных иммунобиологических особенностей животных помогает в профилактике болезней и повышении продуктивности животных за счет организации научно-обоснованного кормления и экологического благополучия среды обитания.

Известные в качестве изобретения способы забора костного мозга из туш животных с разным привлечением тех или иных технических средств не предъявляют требований к малой травматичности донора и не пригодны для применения к животным, которым следует жить, развиваться и быть и в последующем объектами подобных экспериментов. Поэтому из всех способов отбора проб они исключаются как неподходящие аналоги для использования в материале данной заявки.

Известен также способ прижизненного получения трепаната костного мозга из грудной кости крупных животных [Светличный С.И. - Ветеринария, 1976, №2, с.77-78 и Светличный С.И. «Модификации иглы-трепана и некоторые приемы получения костного мозга» - приложение №1]. Однако данный способ травматичен и сложен в силу большого объема хирургии грудного отдела животного, требует длительного времени выздоровления животного, которое и после выздоровления не может быть сравнимым со здоровыми животными, и поэтому целесообразнее таких животных подвергнуть убою. Последнее не желательно, если здоровые животные участвуют в научно-хозяйственном опыте по изучению влияния кормления на продуктивность животных в течение длительного времени, находясь в естественных экологических условиях пастбищ или ферм. При исследовании вопросов, связанных с новыми кормами, новыми их соотношениями, а также с введением в рацион биологически активных добавок и наблюдением за их влиянием на уровень продуктивности животных в процессе их жизни, необходимо, чтобы животные были клинически здоровыми как можно дольше, чтобы на протяжении длительных исследований у них можно было взять несколько проб костного мозга, например у свиней, с периодичностью 2 месяца. Взятие проб костного мозга из грудной кости несколько раз за жизнь у животных проблематично, потому что с возрастом костная ткань твердеет, происходит увеличение мышечной массы и избыточное развитие подкожно-жировой клетчатки, которая осложняет доступ к кости и попадает в пробу при отборе костного мозга.

Известен также способ отбора костного мозга путем пункции грудной кости у овец прижизненно или после забоя животных [Жапбасов Р., Мурмазадиев А., Абишев Б. Изучение полиплоидных клеток костного мозга овец. - «Известия АН КазССР. Сер. биол.», 1973, №6, с.64-70; Жапбасов Р., Абишев Б. К методике изучения хромосомного комплекса овец. - В кн.: Материалы научной конференции молодых ученых Алма-Аты. Алма-Ата, 1972, с.408-409; Мурзамадиев А.М., Абишев Б., Жапбасов Р. Некоторые вопросы кариотипа овец. - В кн.: генетика и селекция сельскохозяйственных животных и растений. Алма-Ата, 1974 - приложение №2].

Однако пункция грудной кости и получение пунктата в мазках имеет ряд существенных недостатков: так, например, не всегда удается получить пунктат («пустой» пунктат), в мазках пунктата нет соответствия с истинным соотношением клеток костного мозга со стромой его. Кроме того, в стернальном пунктате всегда имеется примесь крови, в связи с чем количественное определение клеток пунктата недостаточно и не соответствует истинному содержанию клеточного состава костного мозга. Поэтому некоторые авторы [Теодорович В.П., Абдулкадыров К.М. Трепанобиопсия костного мозга при некоторых гематологических заболеваниях. Л., «Медицина», 1977, 96 с., стр.5 - приложение №3] настоятельно рекомендуют наряду с мазками собирать более плотные кусочки костного мозга, имеющиеся в пунктате, и подвергнуть их обычной гистологической обработке и детальному изучению. В последнем случае, как полагают авторы данного аналога, можно получить более полное представление о состоянии костномозговой ткани. Однако здесь также отмечается нарушение истинного соотношения между клеточным составом и его стромой [Закржевский Е.Б., Чистович А.Н. Пункционные биопсии костного мозга. - Труды ВМОЛА имени С.М.Кирова, там же, с.4 - приложение №3].

Другой способ отбора костного мозга свободен от этих недостатков, но несколько более сложен - трепанобиопсия. Ее предлагалось производить в области гребня подвздошной кости - на 2-3 см сзади от верхней ее ости [Болдырева О.Д., Макаров М.С. Вариант костномозговой пункции - там же, с.5], в то время как американские авторы используют заднюю верхнюю ость ее. К недостаткам этого способа можно отнести осложнения в виде ретроперитонеальных гематом, которые снижают качество и товарный вид туш.

В практике взятия костного мозга использовался также метод стернальной пункции [Аринкин М.И. К методике исследования при жизни костного мозга у больных с заболеваниями кроветворных органов - там же, стр.6]. Этот метод в ряде случаев не дает возможности получить удовлетворительный ответ в исследованиях костного мозга, так как костномозговая взвесь, полученная этим способом, содержит значительную примесь периферической крови.

Задачей изобретения является разработка способа прижизненного взятия проб костного мозга с уменьшением стресса, травматичности, быстрым заживлением раны животного, а также с возможностью повторения отбора проб у данных животных в последующем.

Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что в способе прижизненного отбора проб костного мозга у животного, согласно изобретению осуществляют нейролептоаналгезию, помещение животного в боковое положение, фиксацию животного с обеспечением свободного доступа к внутренней поверхности голени, на которой готовят операционное поле в области дистального отдела большеберцовой кости в средней трети диафиза, после обнажения большеберцовой кости выполняют трепанацию, формируют отверстие через первый кортикал, не нарушая целостности второго, отбирают костный мозг, ушивают операционную рану послойно и дезинфицируют наружный шов.

Технический результат заявляемого способа заключается в его технологичности несмотря на то, что решение относится к медицинской технологии отбора проб. В настоящее время отбор проб костного мозга у животных осуществляют не только для диагностики их заболеваний, но и для оценки продуктивности скота, а также для всесторонней оценки их уровня кормления. Поэтому периоды питания животных с теми или иными изменениями, введением биологически активных веществ подлежат контролю, причем прижизненный более предпочтителен, так как исследователям на протяжении жизни животных приходится отбирать у них не одну пробу костного мозга с этой целью. Динамика оценки проб костного мозга ценна именно в течение длительного периода и не предполагает убой животных после этой манипуляции. Поэтому чем меньше отверстие для отбора проб и чем технически дальше оно удалено от жизненно важных органов, тем животные быстрее восстанавливаются и адаптируются к привычной жизни. У них не формируется физического дефекта, они не теряют силы и аппетита в отличие от животных с соответствующими манипуляциями в области грудной кости для аналогичной задачи. Максимально щадящее техническое проникновение в кость связано с малой травматизацией всего одной из конечностей и, следовательно, с минимальным риском для здоровья экспериментальных животных. Выбор технического осуществления места проникновения внутрь кости с внутренней стороны голени дает результат более быстрого заживления раны, чем доступ с наружной стороны, где не исключаются болезненные касания раны, а также нападения окружающих животных, например свиней, в результате их реакции на кровь около раны экспериментальных животных.

Способ поясняется с помощью фиг.1-4, где фиг.1, иллюстрирующая место доступа на большей берцовой кости, фиг.2, 3, иллюстрирующие место взятия пробы [получены с использованием схем из [Бобова Л.П. и др. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза: Учебное пособие. - М., Издательство Новая Волна, 2003. - 157 с., ил. - приложение 4], фиг.4 - приспособление для укладки животного на время выполнения манипуляций, на фиг.1-3 позициями обозначены:

1 - большая берцовая кость,

2 - место забора костного мозга,

3 - трепан.

Способ осуществляют следующим образом.

Отбирают животное, выполняют премедикацию 0,1% раствором атропина сульфата в дозе 1 мл на 20 кг живой массы тела, через 15 мин проводят нейролептоаналгезию рометаром 2% из расчета 0,2 мл/кг. Через 10-15 мин животное укладывают на поверхность, например, приспособления фиг.4, разработанного в процессе проведения способа, и фиксируют в боковом положении, располагая конечности таким образом, чтобы имелся свободный доступ к внутренней поверхности голени. При необходимости фиксируют туловище и голову. На внутренней стороне голени путем пальпации находят большеберцовую кость (с целью исключения ошибочного места) для доступа к ней и готовят операционное поле по Н.И.Пирогову. Рассекают кожный покров в области дистального отдела большеберцовой кости в средней трети диафиза и разъединяют подлежащие ткани ножницами Купера и гемостатическими зажимами. После обнажения большеберцовой кости выполняют трепанацию, для этого просверливают отверстие диаметром 4 мм через первый кортикал, не проходя через второй. Затем с помощью толстой иглы и шприца набирают костный мозг. После этого операционную рану ушивают послойно и обрабатывают наружный шов 5% спиртовым раствором йода. Для нормализации сердечной деятельности животному инъецируют сульфокамфокаин в дозе 1 мл на 20 кг живой массы.

Указанное приспособление для укладки и фиксации животного на время взятия проб костного мозга позволяет не поднимать крупных животных на стол для манипуляций, а позволяет подставить приспособление под него в нужный момент, когда животное теряет устойчивость после инъекции. Изображенные на фиг.4 фиксаторы позволяют обезопасить животное и персонал. Высота приспособления за счет съемных опор, а также наличие шарниров с нижней стороны опор облегчает методику, как и количество ручек для возможности снятия животного вместе с приспособлением на пол клетки после завершения взятия пробы.

Способ апробирован на двадцати четырех свиньях крупной белой породы на племенном заводе СХА «Михайловское» Марксовского района Саратовской области сотрудниками Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И.Вавилова - авторами данного изобретения. Все подопытные животные, ставшие экспериментальными в результате взятия костного мозга, возвращены в свои группы непосредственно после взятия проб, легко перенесли манипуляцию и сохранили высокий уровень продуктивности в последующем.

Изобретение относится к области животноводства и ветеринарии. Способ заключается в том, что осуществляют нейролептоаналгезию, помещают животное в боковое положение и фиксируют его с обеспечением свободного доступа к внутренней поверхности голени, на которой готовят операционное поле в области дистального отдела большеберцовой кости в средней трети диафиза. После обнажения большеберцовой кости выполняют трепанацию, формируют отверстие через первый кортикал, не нарушая целостности второго, отбирают костный мозг, ушивают операционную рану послойно и дезинфицируют наружный шов. Животные легко переносят операцию и сохраняют высокий уровень продуктивности. 4 ил.

Способ прижизненного отбора проб костного мозга у животного, характеризующийся тем, что осуществляют нейролептоаналгезию, помещение животного в боковое положение, фиксацию животного с обеспечением свободного доступа к внутренней поверхности голени, на которой готовят операционное поле в области дистального отдела большеберцовой кости в средней трети диафиза, после обнажения большеберцовой кости выполняют трепанацию, формируют отверстие через первой кортикал, не нарушая целостности второго, отбирают костный мозг, ушивают операционную рану послойно и дезинфицируют наружный шов.