НОВЫЙ СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА ВИРУСОВ И/ИЛИ ВИРУЛИЦИДНЫЙ СПОСОБ И НОВЫЙ АНАЛОГ ПИРАЗИННУКЛЕОТИДА ИЛИ ПИРАЗИННУКЛЕОЗИДА Российский патент 2007 года по МПК A61K31/706 A61K31/7042 A61K31/7052 A61P31/12 C07H19/04 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста вирусов и/или вирулицидному способу, характеризующемуся тем, что в нем используют аналог пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида, образующийся под действием киназы, или его соль, новый аналог пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида или его соль, и способ лечения вирусной инфекции, с их использованием.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Признано, что инфекционные вирусные заболевания (например, грипп, герпесвирус, синдром приобретенного иммунодефицита (AIDS), вирусный гепатит, вирусная геморрагическая лихорадка и т.д.) являются важными медицинскими проблемами, и был исследован широкий круг способов лечения, таких как профилактика заболеваний с помощью вакцинации, или терапевтических способов с использованием лекарств. К настоящему времени разработано большое количество нуклеиновых кислот, содержащих пуриновые основания, пиримидиновые основания и их производные, которые можно использовать в качестве агентов для лекарственного лечения вирусных инфекций. Механизм действия этих агентов таков, что они подвергаются трифосфорилированию в клетках и ингибируют вирус-полимеразу. Примеры таких агентов могут включать азидотимидин и ацикловир [Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), Vol. 83, стр. 8333-8337 (1986); та же публикация, Vol. 74, стр. 5716-5720 (1977)].

Кроме того, сообщалось, что активная форма соединения, противовирусное действие которого проявляется тогда, когда его часть, соответствующая основаниям нуклеиновой кислоты, преобразуется в неприродную химическую структуру, представляет собой монофосфорилированную форму, получаемую в результате преобразования соединения в клетке, и что она ингибирует инозинмонофосфат-дегидрогеназу (IMPDH) в клетке, тем самым проявляя свои свойства. Примеры таких соединений могут включать рибавирин и EICAR [Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), Vol. 70, стр. 1174-1178 (1973); The Journal of Biological Chemistry (J. Biol. Chem.), Vol. 268, стр. 24591-24598 (1993)].

Кроме того, в качестве примера нуклеозидного и нуклеотидного аналогов, содержащих пиразиновое кольцо как основание, было известно соединение следующей формулы:

где R¹⁶ представляет собой атом водорода, метильную группу или децильную группу. Однако это соединение не проявляет противовирусной активности (отсутствие анти-Visna вирусной активности) [Nucleosides & Nucleotides, Vol. 15, Nos. 11 and 12, 5 стр. 1849-1861 (1996)].

С другой стороны, до сих пор не были известны нуклеозидные и нуклеотидные аналоги, содержащие пиразиновое кольцо, замещенное карбамоильной группой.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью по настоящему изобретению является создание высокобезопасного противовирусного агента, характеризующегося низкой токсичностью, который обладает не природной химической структурой в части, соответствующей основаниям нуклеиновой кислоты, и нового способа ингибирования роста вирусов и/или вирулицидного способа, в котором используют указанный противовирусный агент.

Авторы по настоящему изобретению обнаружили, что аналог пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида, представленный следующей общей формулой [1], или его соль:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу или карбамоилалкильную, или карбоксиалкильную группу, которые могут быть замещены; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена или защищена; A представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и n представляет собой целое число от 0 до 3; особенно, трифосфорилированный аналог пиразиннуклеотида или его соль демонстрирует высокую безопасность, превосходное ингибирование роста вирусов и/или вирулицидный эффект при низкой токсичности, который ингибирует вирус-полимеразу, особенно РНК-полимеразу непосредственно или в форме вещества, превращаемого из него in vivo.

Кроме того, авторы по настоящему изобретению разработали новый способ гидролиза или разложения in vivo или в клетке аналога пиразиннуклеотида, представленного следующей общей формулой [2], или его соли:

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, A и Y имеет указанные выше значения; и каждый из R⁷ и R⁸ в фосфорной кислоте или в фосфоновой кислоте независимо представляет собой защищенную или незащищенную, замещенную или незамещенную гидроксильную группу, которая должна разлагаться в физиологических условиях, вызывая этим образование аналога пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида, представленного общей формулой [1], или его соли, который под действием киназы, такой как нуклеотид-киназа, проявляет эффект ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный эффект.

Кроме того, авторы по настоящему изобретению обнаружили, что аналог пиразиннуклеотида, представленный следующей общей формулой [1z], или его соль:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу или карбамоилалкильную, или карбоксиалкильную группу, которые могут быть замещены; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена или защищена; R представляет собой гидроксильную группу, которая может быть защищена или замещена группой, разлагаемой в физиологических условиях; A представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; и n представляет собой целое число от 1 до 3, представляет собой соединение, которое преобразуется в физиологических условиях и ингибирует вирусную РНК-полимеразу таким же образом, как и соединение общей формулы [1], проявляя таким образом ингибирующий рост вируса эффект и/или вирулицидный эффект.

Любое из вышеуказанных соединений преобразуется in vivo или в клетке в аналог пиразинтрифосфатнуклеотида, представленный следующей общей формулой [1y]:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, и он демонстрирует эффект ингибирования РНК-полимеразы. Кроме того, соединение, представленное общей формулой [1x], представленной далее, является предшественником ингибитора РНК-полимеразы, который преобразуется в соединение, представленное общей формулой [1y] in vivo или в клетке:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу или карбамоилалкильную, или карбоксиалкильную группу, которые могут быть замещены; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, одинаковые или различные, представляют собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена или защищена; A представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и m представляет собой целое число от 0 до 2.

Предшественник ингибитора РНК-полимеразы по настоящему изобретению ингибирует полученную из вируса РНК-полимеразу с гораздо более высокой селективностью, чем полученную из клетки хозяина РНК-полимеразу. Предшественник ингибитора РНК-полимеразы по настоящему изобретению способен ингибировать полученную из вируса РНК-полимеразу с селективностью, предпочтительно, в 200 раз или более, более предпочтительно, в 1000 раз или более, и, еще более предпочтительно, в 2000 раз или более эффективно, чем полученную из клетки хозяина РНК-полимеразу. Кроме того, предшественник ингибитора РНК-полимеразы по настоящему изобретению значительно ингибирует инозинмонофосфат-дегидрогеназу, и после того как он преобразуется in vivo в трифосфорилированную форму, он ингибирует вирус-полимеразу. Соответственно, предшественник ингибитора РНК-полимеразы по настоящему изобретению отличается тем, что обладает чрезвычайно сильным ингибирующим вирус-полимеразу действием после того, как преобразуется in vivo, и он также обладает высокой селективностью, хотя цитотоксичность, вызываемая ингибированием инозинмонофосфат-дегидрогеназы, значительно снижена. Используя такую высокую селективность, можно получить очень безопасный агент.

Предшественник ингибитора РНК-полимеразы по настоящему изобретению обладает чрезвычайно высокой селективностью в отношении РНК-полимеразы и инозинмонофосфат-дегидрогеназы. Что касается структуры аналога пиразиннуклеозида или пиразинмононуклеотида, представленного следующей общей формулой [1w]:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу или карбамоилалкильную, или карбоксиалкильную группу, которые могут быть замещены; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена или защищена; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и p представляет собой 0 или 1, то соотношение ингибирующего эффекта предшественника в отношении полученной из вируса РНК-полимеразы после того как он преобразован in vivo, и ингибирующего эффекта предшественника в отношении полученной из клетки хозяина инозинмонофосфат-дегидрогеназы составляет, предпочтительно, 900:1 или более, более предпочтительно, 5000:1 или более, и еще более предпочтительно, 10000:1 или более.

Авторы по настоящему изобретению подтвердили, что в случае соединения, где каждый из R¹, R³ и R⁵ представляет собой атом водорода и каждый из R^4Z, R^6Z и R^z представляет собой гидроксильную группу, например, в производном пиразиннуклеотида, представленном следующей общей формулой [3z]:

где каждый из R¹, R², R³, R⁵ и Y имеет указанные выше значения; R^z представляет собой защищенную или незащищенную, замещенную или незамещенную гидроксильную группу, разлагаемую в физиологических условиях; каждый из R^4Z и R^6Z, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена или защищена, или R^4Z и R^6Z вместе образуют собой группу, представленную как -O-алкилен-О-, которая может быть замещена, если такое соединение вводят животному, тогда в плазме крови животного вырабатывается 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамид (другая номенклатура: 3,4-дигидро-3-оксо-4-β-D-рибофуранозил-2-пиразинкарбоксамид).

Более того, авторы по настоящему изобретению подтвердили, что, если аналог пиразиннуклеозида, представленный общей формулой [3z], или его соль, такой как 4-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидрокси-метил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамид, вводят животному, то в организме животного вырабатывается {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфат.

Таким образом, авторы по настоящему изобретению обнаружили, что при введении млекопитающим соединения, представленного общей формулой [3z], или его соли, или введении млекопитающему соединения, представленного общей формулой [2], или его соли, с тем, чтобы вызвать образование in vivo аналога пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида, представленного общей формулой [1], или его соли, наблюдается новый эффект ингибирования роста вирусов и/или новый вирулицидный эффект, и на основе этого открытия было создано настоящее изобретение.

Способ по настоящему изобретению можно использовать как способ лечения инфицированных вирусом пациентов, который включает стадию введения инфицированному вирусом пациенту вышеуказанного аналога пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида или его соли, такого, как соединение, представленное общей формулой [3z], или его соль. Более предпочтительно, способ по настоящему изобретению дополнительно включает стадию преобразования вышеуказанного соединения или его соли в аналог пиразинтрифосфатнуклеотида, представленный общей формулой [1y].

Кроме того, предпочтительно, в организме инфицированного вирусом пациента соединение общей формулы [3z] преобразуется в аналог пиразинтрифосфатнуклеотида, представленный общей формулой [1y] через аналог пиразиннуклеотида, представленный следующей общей формулой [1v]:

где R¹ представляет собой атом водорода или заместитель пиразинового кольца; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу. Аналог пиразиннуклеотида, представленный общей формулой [1v], характеризуется тем, что практически не ингибирует инозинмонофосфат-дегидрогеназу, полученную из клеток хозяина. Кроме того, аналог пиразинтрифосфатнуклеотида, представленный общей формулой [1y], характеризуется тем, что ингибирует полученную из вируса РНК-полимеразу более селективно, чем полученную из клетки хозяина РНК-полимеразу.

Кроме того, в результате интенсивных исследований, предпринятых авторами по настоящему изобретению в отношении ангидридов 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида, который является представительным соединением по настоящему изобретению, был разработан моногидрат 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида, который обладает превосходной стабильностью в процессе получения фармацевтического препарата. Этот гидрат представляет собой кристалл, который стабилен в процессе получения фармацевтических препаратов обычными способами и, при сравнении с ангидридами в процессе получения фармацевтических препаратов, обладает меньшей способностью к пылеобразованию и не прилипает к инструментам. Соответственно, он обеспечивает хорошее смешение и гранулирование. Влажное гранулирование обычно используют как гранулирование в процессе получения фармацевтических препаратов. Во время такого влажного гранулирования обычно используют воду и водный раствор, содержащий связующее. Однако известно, что если используют ангидрид, часть ангидрида претерпевает преобразование в гидрат, в зависимости от условий. Кроме того, аморфное вещество, образующееся в таком процессе, создает проблему с точки зрения стабильности фармацевтического препарата. Соответственно, если гидрат существует в кристаллической полиморфной форме, то для получения фармацевтического препарата из ангидрида необходимы жесткие условия. Однако моногидрат представляет собой кристалл, стабильный при обычном процессе получения фармацевтических препаратов, и поэтому является превосходным соединением, которое не вызывает вышеуказанных трудностей.

Кроме того, в конечном процессе получения моногидрата не требуется использования органического растворителя, так как его можно кристаллизовать из воды. Соответственно, очень мал риск того, что в полученном в конце процесса кристалле останутся органические растворители. Кроме того, так как для получения монокристалла не нужен органический растворитель, отсутствует необходимость во взрывобезопасном оборудовании. Таким образом, можно сказать, что это соединение обладает большими преимуществами с точки зрения производственного процесса.

Соединение по настоящему изобретению будет описано далее более подробно.

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В рассматриваемом описании, если нет других указаний, атом галогена означает атом фтора, атом хлора и атом йода; алкильная группа означает низшую алкильную группу например C_1-5 алкильную группу, такую как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и пентил; алкоксигруппа означает низшую алкоксигруппу например C_1-5 алкоксигруппу, такую как метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси и пентилокси; алкоксикарбонильная группа означает низшую алкоксикарбонильную группу, например C_1-5 алкоксикарбонильную группу, такую как метоксикарбонил, этоксикарбонил, н-пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, н-бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, втор-бутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, 4-гидроксибутоксикарбонил и пентилоксикарбонил; алкиламиногруппа означает, например, моно- или ди-С_1-5 алкиламиногруппу, такую как метиламино, этиламино, пропиламино, диметиламино, диэтиламино и метилэтиламино; галогеноалкильная группа означает, например, галогено-С_1-5 алкильную группу, такую как фторметил, хлорметил, бромметил, дихлорметил, трифторметил, трихлорметил, хлорэтил, дихлорэтил, трихлорэтил и хлорпропил; карбамоилалкильная группа означает, например, С_1-5 карбамоилалкильную группу, такую как карбамоилметил, карбамоилэтил, карбамоил-н-пропил, карбамоилизопропил, карбамоил-н-бутил, карбамоилизобутил и карбамоилпентил; карбоксиалкильная группа означает, например, С_1-5 карбоксиалкильную группу, такую как карбоксиметил, карбоксиэтил, карбокси-н-пропил, карбоксиизопропил, карбокси-н-бутил, карбоксиизобутил и карбоксипентил; алкенильная группа означает, например, C_2-5 алкенильную группу, такую как винил и аллил; циклоалкильная группа означает, например, C_3-6 циклоалкильную группу, такую как циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил; циклоалкилоксигруппа означает, например, C_3-6 циклоалкилоксигруппу, такую как циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси и циклогексилокси; арильная группа означает, например, группу, такую как фенил и нафтил; гетероциклическая группа означает, например, 4-6-членную или конденсированную гетероциклическую группу, содержащую, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из атома кислорода, атома азота и атома серы, такую как азетидинил, тиенил, фурил, пирролил, имидазолил, пиразолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, фуразанил, пирролидинил, пирролинил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, тиатриазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, пиранил, морфолинил, 1,2,4-триазинил, бензотиенил, нафтотиенил, бензофурил, изобензофурил, хроменил, индолизинил, изоиндолил, индолил, индазолил, пуринил, хинолил, изохинолил, фталазинил, нафтилидинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, изохроманил, хроманил, индолинил, изоиндолинил, бензоксазолил, триазолопиридил, тетразолопиридазинил, тетразолопиримидинил, тиазолопиридазинил, тиадиазолопиридазинил, триазолопиридазинил, бензимидазолил, бензотиазолил, 1,2,3,4-тетрагидрохинолил, имидазо[1,2-b][1,2,4]триазинил и хинуклидинил; алкиленовая группа означает, например, неразветвленную или разветвленную С_1-5 алкиленовую группу, такую как метилен, этилен и пропилен; алкилтиогруппа означает, например, неразветвленную или разветвленную С_1-5 алкилтиогруппу, такую как метилтио, этилтио, н-пропилтио, изопропилтио, н-бутилтио, изобутилтио, втор-бутилтио, трет-бутилтио и пентилтио; арилоксигруппа означает, например, группу, представленную как арил-O-, такую как фенокси и нафтокси; арилтиогруппа означает, например, группу, представленную как арил-S-, такую как фенилтио и нафтилтио; ариламиногруппа означает, например, фениламино и нафтиламино; циклоалкиламиногруппа означает, например, С_3-6 циклоалкиламиногруппу, такую как циклопропиламино, циклобутиламино, циклопентиламино и циклогексиламино; ацильная группа означает, например, С_2-6 алканоильную группу, такую как формил, ацетил или пропионил, ароильную группу, такую как бензоил или нафтоил, и гетероциклическую карбонильную группу, такую как никотиноил, теноил, пирролидинокарбонил или фуроил; ацилоксигруппа означает, например, С_2-6 алканоилоксигруппу, такую как ацетилокси или пропионилокси, ароилоксигруппу, такую как бензоилокси или нафтоилокси, и гетероциклическую карбонилоксигруппу, такую как никотиноилокси, теноилокси, пирролидинокарбонилокси или фуроилокси; арилсульфонилоксигруппа означает, например, группу, такую как фенилсульфонилокси и п-толуолсульфонилокси; алкилсульфонилоксигруппа означает, например, неразветвленную или разветвленную С_1-5 алкилсульфонилоксигруппу, такую как метилсульфонилокси, этилсульфонилокси, н-пропилсульфонилокси, изопропилсульфонилокси, н-бутил-сульфонилокси, изобутилсульфонилокси, втор-бутилсульфонилокси, трет-бутилсульфонилокси и пентилсульфонилокси, соответственно.

В общей формуле, представленной в описании, заместители пиразинового кольца R¹ включают группу, выбранную из атома галогена; алкильную группу, которая может быть замещена гидроксильной, алкокси, алкилтио, арильной, амино или алкиламиногруппой; алкильную или алкенильную группу, которые могут быть замещены атомом галогена; циклоалкильную группу; гидроксильную группу; алкоксигруппу; циклоалкилоксигруппу; алкоксикарбонильную группу; меркаптогруппу; алкилтиогруппу, которая может быть замещена арильной группой; арильную группу; арилоксигруппу; арилтиогруппу; ариламиногруппу; цианогруппу; нитрогруппу; аминогруппу, которая может быть замещена ацильной группой; алкиламиногруппу; циклоалкиламиногруппу; ацильную группу; карбоксильную группу; карбамоильную группу; тиокарбамоильную группу; алкилкарбамоильную группу и гетероциклическую группу, и одна или более из таких групп может быть замещена.

Защитные группы и заместители гидроксильной группы R^z включают, например, ацильную группу, которая может быть замещена, низшую алкоксикарбонильную группу и ацилоксиалкильную группу, более конкретно ацильную группу, которая может быть замещена, такую как ацетил, пропионил, валерил, бензоил, пивалоил, 2-аминоацетил, 2-аминопропионил, 2-аминовалерил и 2-аминокапроил; низшую алкоксикарбонильную группу, такую как метоксикарбонил, этоксикарбонил, н-пропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, н-бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, втор-бутоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил и 4-гидроксибутоксикарбонил; и ацилоксиалкильную группу, такую как ацетилоксиметил, пропионилоксиметил, изопропионилоксиметил, бутирилоксиметил, изобутирилоксиметил, валерилоксиметил, изовалерилоксиметил, пивалоилоксиметил и 1-пивалоилоксиэтил. R⁷ и R⁸, каждый, независимо, представляет собой защитную группу или заместитель гидроксильной группы, претерпевающий разложение в физиологических условиях в фосфат или фосфонат, и R-группа, разлагаемая в таких условиях, является, например, защитной группой или заместителем фосфата или фосфоната, описанных в Progress in Medicinal Chemistry, Vol. 34, стр. 111-147 (1997), Elsevier Science B.V., и Current Medicinal Chemistry, Vol. 7, стр. 995-1039 (2000). Конкретные примеры включают арильные группы, такие как фенил, хлорфенил, нитрофенил, цианофенил, нафтил; циклосалигенильные группы, такие как циклосалигенил, 5-метилциклосалигенил; амидатные группы, такие как метоксиаланинил и феноксиаланинил; галогеноэтильные группы, такие как трихлорэтил; ацилоксиалкильные группы, такие как ацетилоксиметил, пропионилоксиметил, изопропионилоксиметил, бутирилоксиметил, изобутирилоксиметил, валерилоксиметил, изовалерилоксиметил, пивалоилоксиметил и 1-пивалоилоксиэтил; ацилоксибензильные группы, такие как ацетилоксибензил, пропионилоксибензил, изопропионилоксибензил, бутирилоксибензил, изобутирилоксибензил, валерилоксибензил, изовалерилоксибензил, пивалоилоксибензил; S-низший ацилтиоалкильные группы, такие как ацетилтиоэтил, пропионилтиоэтил, изопропионилтиоэтил, бутирилтиоэтил, изобутирилтиоэтил, валерилтиоэтил, изовалерилтиоэтил, пивалоилтиоэтил, и пивалоилтиобутил; S-высший ацилтиоалкильные группы, такие как лауроилтиоэтил; S-ароилтио-алкильные группы, такие как бензоилтиоэтил и нафтоилтиоэтил; и дитиодиэтильную группу.

Выражение "разлагаемый в физиологических условиях" означает разлагаемый под действием ферментов, таких как эстераза, фосфодиэстераза, фосфонамидаза, гидролаза, аминогидролаза, трансаминаза или редуктаза, а также в результате физиологических реакций окисления, гидролиза и/или восстановления.

Примеры киназ включают нуклеотидкиназу, нуклеозидкиназу, нуклеозидфосфотрансферазу и 5'-нуклеотидазу.

Термин предшественник означает вещество, которое само продуцирует фармакологически активное вещество в результате преобразования/разложения in vivo.

Примеры защитных групп карбоксильной группы включают все группы, которые можно использовать в качестве обычных защитных групп для карбоксилной группы, например низшие алкильные группы, такие как метил, этил, н-пропил, изопропил, 1,1-диметилпропил, н-бутил, и трет-бутил; арильные группы, такие как фенил и нафтил; арилнизшие алкильные группы, такие как бензил, дифенилметил, тритил, п-нитробензил, п-метоксибензил, и бис(п-метоксифенил)метил; ацилнизшие алкильные группы, такие как ацетилметил, бензоилметил, п-нитробензоилметил, п-бромбензоилметил, и п-метансульфонилбензоилметил; кислородсодержащие гетероциклические группы, такие как 2-тетрагидропиранил и 2-тетрагидрофуранил; галогеннизшие алкильные группы, такие как 2,2,2-трихлорэтил; низшие алкилсилилалкильные группы, такие как 2-(триметилсилил)этил; ацилоксиалкильные группы, такие как ацетоксиметил, пропионилоксиметил и пивалоилоксиметил; азотсодержащие гетероциклические низшие алкильные группы, такие как фталимидметил и сукцинимидметил; циклоалкильные группы, такие как циклогексил; низшие алкоксинизшие алкильные группы, такие как метоксиметил, метоксиэтоксиметил и 2-(триметилсилил)этоксиметил; арилнизшие алкоксинизшие алкильные группы, такие как бензилоксиметил; низшие алкилтионизшие алкильные группы, такие как метилтиометил и 2-метилтиоэтил; арилтионизшие алкильные группы, такие как фенилтиометил; низшие алкенильные группы, такие как 1,1-диметил-2-пропенил, 3-метил-3-бутинил и арил; и замещенные силильные группы, такие как триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, диэтилизопропилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, дифенилметилсилил и трет-бутилметокси-фенилсилил.

Примеры защитных групп для аминогруппы и иминогруппы включают все группы, которые можно использовать как обычные аминозащитные группы, например ацильные группы, такие как трихлорэтоксикарбонил, трибромэтоксикарбонил, бензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил,

o-бромбензилоксикарбонил, (моно-, ди-, три-)хлорацетил, трифторацетил, фенилацетил, формил, ацетил, бензоил, трет-амилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил,

п-метоксибензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил,

4-(фенилазо)бензилоксикарбонил, 2-фурфурилоксикарбонил, дифенилметоксикарбонил, 1,1-диметилпропоксикарбонил,

изопропоксикарбонил, фталоил, сукцинил, аланил, лейцил, 1-адамантилоксикарбонил и 8-хинолилоксикарбонил; арилнизшие алкильные группы, такие как бензил, дифенилметил и тритил; арилтиогруппы, такие как 2-нитрофенилтио и 2,4-динитрофенилтио; алкан- или арен-сульфонильные группы, такие как метансульфонил и п-толуолсульфонил; ди-низшие алкиламинонизшие алкилиденовые группы, такие как N,N-диметиламинометилен; арилнизшие алкилиденовые группы, такие как бензилиден,

2-гидроксибензилиден, 2-гидрокси-5-хлорбензилиден и 2-гидрокси-1-нафтилметилен; азотсодержащие гетероциклические алкилиденовые группы, такие как 3-гидрокси-4-пиридилметилен; циклоалкилиденовые группы, такие как циклогексилиден,

2-этоксикарбонилциклогексилиден,

2-этоксикарбонилциклопентилиден, 2-ацетилциклогексилиден, и 3,3-диметил-5-оксициклогексилиден; диарил- или диарилнизшие алкилфосфорильные группы, такие как дифенилфосфорил и дибензилфосфорил; кислородсодержащие гетероциклические алкильные группы, такие как 5-метил-2-оксо-2H-l,3-диоксол-4-илметил; и низшие алкилзамещенные силильные группы, такие как триметилсилил.

Примеры защитных групп для гидроксильной группы включают все группы, которые можно использовать как обычные гидроксилзащитные группы, например ацильные группы, такие как бензилоксикарбонил, 4-нитробензилоксикарбонил, 4-бромбензилокси-карбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензил-оксикарбонил, метоксикарбонил, этоксикарбонил, трет-бутокси-карбонил, 1,1-диметилпропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, изобутилоксикарбонил, дифенилметоксикарбонил, 2,2,2-трихлор-этоксикарбонил, 2,2,2-трибромэтоксикарбонил, 2-(три-метилсилил)этоксикарбонил, 2-(фенилсульфонил)этоксикарбонил, 2-(трифенилфосфонио)этоксикарбонил, 2-фурфурилоксикарбонил, 1-адамантилоксикарбонил, винилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, S-бензилтиокарбонил, 4-этокси-1-нафтилоксикарбонил, 8-хинолилоксикарбонил, ацетил, формил, хлорацетил, дихлорацетил, трихлорацетил, трифторацетил, метоксиацетил, феноксиацетил, пивалоил и бензоил; низшие алкильные группы, такие как метил, трет-бутил, 2,2,2-трихлорэтил и 2-триметилсилилэтил; низшие алкенильные группы, такие как аллил; арилнизшие алкильные группы, такие как бензил, п-метоксибензил, 3,4-иметоксибензил, дифенилметил и тритил; кислород- и серусодержащие гетероциклические группы, такие как тетрагидрофурил, тетрагидропиранил и тетрагидротиопиранил; низшие алкокси- и низшие алкилтионизшие алкильные группы, такие как метоксиметил, метилтиометил, бензилоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил, 2,2,2-трихлорэтоксиметил, 2-(триметилсилил)этоксиметил и 1-этоксиэтил; алкил- и арилсульфонильные группы, такие как метансульфонил и п-толуолсульфонил; и замещенные силильные группы, такие как триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, диэтилизопропилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, дифенилметилсилил и трет-бутилметоксифенилсилил, и в случае дигидроксильных групп они также включают низшие алкилиденовые группы, такие как метилен, бензилиден и изопропилиден, низшие алкоксинизшие алкилиденовые группы, такие как метоксиметилен, и низшие алкилзамещенные силильные группы, такие как 1,1,3,3-тетраизо-пропилдисилоксанилиден.

Карбамоилалкильная группа или карбоксиалкильная группа R² может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена; алкильной группы, которая может быть замещена гидроксилом, алкокси, алкилтио, арилом, амино или алкиламиногруппой; галогеноалкильной группы; алкенильной группы; циклоалкильной группы; гидроксильной группы; алкоксигруппы; циклоалкилоксигруппой; алкоксикарбонильной группой; меркаптогруппы; алкилтиогруппы, которая может быть замещена арильной группой; арилоксигруппы; арилтиогруппы; ариламиногруппы; цианогруппы; нитрогруппы; аминогруппы, которая может быть замещена ацильной группой; алкиламиногруппы; циклоалкиламиногруппы; ацильной группы; карбоксильной группы; карбамоильной группы; тиокарбамоильной группы; алкилкарбамоильной группы и гетероциклической группы.

Одна или несколько из гидроксильных групп R³, R⁴, R⁵ и R⁶ могут быть замещены заместителями, выбранными из карбоксильной группы, которая может быть защищена, алкильной группы, алкоксикарбонильной группы, арильной группы, циклоалкильной группы, алкенильной группы, галогеноалкильной группы и гетероциклической группы.

Примеры солей общей формулы [1] и общей формулы [2] включают соли, образованные хорошо известными основными группами, такими как аминогруппа, или образованные кислотными группами, такими как гидроксильная, фосфорильная, фосфонильная или карбоксильная группа. Соли, образованные основными группами, включают, например, соли минеральных кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота и серная кислота; соли органических кислот, таких как винная кислота, муравьиная кислота и лимонная кислота; и соли сульфоновой кислоты, такой как метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, мезитиленсульфоновая кислота, и нафталинсульфоновая кислота. Соли, образованные кислотными группами, включают, например, соли щелочных металлов, таких как натрий и калий; соли щелочно-земельных металлов, таких как кальций и магний; соли аммония; а также соли азотсодержащих органических оснований, таких как триметиламин, триэтиламин, трибутиламин, пиридин, N,N-диметиланилин, N-метилпиперидин, N-метилморфолин, диэтиламин, дициклогексиламин, прокаин, дибензиламин, N-бензил-β-фенэтиламин, 1-эфенамин и N,N'-дибензилэтилендиамин.

Кроме того, если соединения, представленные общими формулами [1], [1v], [1w], [1x], [1y], [1z], [2] и [3z], и их соли имеют изомеры (например, оптические изомеры, геометрические изомеры, таутомеры, и т.д.), настоящее изобретение включает эти изомеры, сольваты, гидраты и различные формы кристаллов.

Примеры вирусов, к которым применим способ ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный способ по настоящему изобретению, могут включать вирус гриппа, вирус RS, вирус СПИДа, вирус папилломы, аденовирус, вирус гепатита A, вирус гепатита B, вирус гепатита C, вирус гепатита E, полиовирус, эховирус, вирус Коксаки, энтеровирус, риновирус, ротавирус, вирус болезни Ньюкастла, вирус паротита, вирус пузырчатого стоматита, вирус бешенства, вирус лихорадки Ласса, вирус кори, Филовирус, вирус японского энцефалита, вирус желтой лихорадки, вирус лихорадки денге или вирус Западного Нила. Предпочтительно, такие примеры могут включать вирус гриппа, вирус RS, вирус гепатита A, вирус гепатита C, вирус гепатита E, полиовирус, эховирус, вирус Коксаки, энтеровирус, риновирус, ротавирус, вирус болезни Ньюкастла, вирус паротита, вирус пузырчатого стоматита, вирус бешенства, вирус лихорадки Ласса, вирус кори, Филовирус, вирус японского энцефалита, вирус желтой лихорадки, вирус лихорадки денге или вирус Западного Нила. Особенно предпочтительно, такие примеры могут включать вирус гриппа и вирус гепатита С.

Предпочтительные соединения по настоящему изобретению могут включать соединения, содержащие указанные ниже заместители.

В каждой из описанных в настоящем изобретении общих формул примеры предпочтительных заместителей R¹ могут включать атом водорода, атом галогена, низшие алкильные группы и гидроксильную группу, более предпочтительно, атом водорода, атом фтора и атом хлора, и, еще более предпочтительно, атом водорода.

Примеры предпочтительных заместителей R² могут включать атом водорода, ацетильную группу, бензоильную группу, пивалоильную группу, карбамоилметильную группу и карбоксиметильную группу, более предпочтительно, атом водорода, ацетильную группу и карбоксиметильную группу, и, еще более предпочтительно, атом водорода.

Примеры предпочтительных заместителей каждого из R³, R⁴, R⁵ и R⁶ могут включать атом водорода и гидроксильную группу, которые могут быть замещены низшей алкоксикарбонильной, ацетильной, бензоильной или пивалоилоксиметильной группой, более предпочтительно, атом водорода и гидроксильную группу, которая может быть замещена ацетильной или бензоильной группой, и еще более предпочтительно, атом водорода и гидроксильную группу.

Примеры предпочтительных заместителей каждого из R^4Z и R^6Z могут включать те же заместители, что и описанные для R⁴ и R⁶, и метиленовую группу, причем оба R^4Z и R^6Z могут быть замещены.

Примеры предпочтительных заместителей R^z могут включать гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом, который может быть замещен, низшую алкоксикарбонильную или ацилоксиалкильную группу, более предпочтительно, гидроксильную группу, которая может быть замещена изовалерильной, ацетильной или пропионильной группами, которые могут быть замещены аминогруппой, которая может быть защищена, бензоильную группу, пивалоильную группу, этоксикарбонильную группу, изопропилоксикарбонильную группу или пивалоилоксиметильную группу, и, еще более предпочтительно, гидроксильную группу, которая может быть замещена изовалерильной, ацетильной или бензоильной группами, которые могут быть замещены аминогруппой.

Примеры предпочтительных заместителей R⁷ и R⁸ могут включать гидроксильную группу, которая может быть замещена циклосалигенильной, пивалоилоксиметильной, 1-пивалоилоксиэтильной или S-пивалоил-2-тиоэтильной группами.

Примером предпочтительного заместителя Y может быть атом кислорода. Примером предпочтительного заместителя для A может быть атом кислорода.

В частности, предпочтительным примером соединений, представленных общей формулой [3z], является соединение, представленное общей формулой [3z']:

где R^a представляет собой атом водорода или атом галогена; и каждый из R^b и R^c, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой атом водорода или защитную гидроксильную группу, или R^b и R^c вместе представляют собой алкиленовую группу, которая может быть замещена. Наиболее предпочтительно соединение, в котором в общей формуле [3z'] каждый из R^a, R^b и R^c представляет собой атом водорода.

Соединения, представленные далее, являются представительными соединениями по настоящему изобретению. Сокращения в формулах имеют следующие значения:

Ac: ацетил, Bz: бензоил, Me: метил и Et: этил.

Кроме того, сахарные цепочки в следующих формулах представительных соединений описаны обычно используемыми терминами. Например, конфигурация соединения, представленного следующей формулой:

означает любое из соединений, представленных следующими формулами:

Далее описан способ получения соединений по настоящему изобретению.

Аналог пиразиннуклеотида, представленный общей формулой [2], или его соль можно получить известными способами, способами, им эквивалентными, или способами, использующими комбинацию этих способов. Примеры публикаций, в которых описаны способы получения, могут включать Antiviral Research, Vol. 24, стр. 69 до 77 (1994); Antiviral Chemistry, Vol. 9, стр. 389 до 402 (1998); Journal of Chemical Society Perkin Transaction (J. Chem. Soc. PERKIN TRANS.) Vol. 1, стр. 1239-1245 (1993); и Патент США No. 5770725. Кроме того, соединение по настоящему изобретению можно также получить в соответствии со способами получения 1-5, представленными далее.

[Способ получения 1]

где каждый из R¹, R², R⁷ и R⁸ имеют указанные выше значения; и каждый из Z¹, Z², Z³ и Z⁴, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой атом водорода или защищенную гидроксильную группу. Однако, если Z¹, Z², Z³ и Z⁴ содержат гидроксильные группы, связанные с двумя или более различными атомами углерода, атомы кислорода каждой гидроксильной группы и атомы углерода, с которыми связана каждая гидроксильная группа, образуют кольцо вместе с защитными группами, так, что они могут быть защищены.

(a) Соединение, представленные общей формулой [2a], или его соль можно получить, (1) осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [3a], или его соли с фосфорилирующим агентом в присутствии или в отсутствие добавок, или (2) осуществляя взаимодействие указанного выше соединения или его соли с фосфорилирующим агентом в присутствии или в отсутствие добавок, осуществляя затем взаимодействие с окисляющим агентом, по способу, описанному, например, в 4th Jikken Kagaku Koza, Vol. 22, стр. 313-438 (1992).

В способе в соответствии с (1) выше растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметил-формамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; фосфорсодержащие сложные эфиры, такие как триметилфосфат; и пиридин. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Любой фосфорилирующий агент можно использовать в этой реакции, если только его обычно используют при фосфорилировании гидроксильной группы. Примеры таких реагентов могут включать фосфорные сложные диэфиры, такие как дибензилфосфат; фосфорные сложные дитиоэфиры, такие как S,S'-дифенилфосфородитиоат моноциклогексиламмоний; и хлориды фосфора, такие как фосфорилхлорид, или метилхлорфенилфосфорил P→N-L-аланинат. Такой фосфорилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [3a] или его соли.

Примеры добавок, используемых в этой реакции, могут включать азосоединения, такие как диэтилазодикарбоксилат или диизопропил азодикарбоксилат, фосфины, такие как трифенилфосфин, алленсульфонилхлориды, такие как 2,4,6-триизопропилбензолсульфонилхлорид, и основания, такие как пиридин или трет-бутилмагнийхлорид. Их можно использовать в комбинации. Такие добавки можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0, в отношении соединений, представленных общей формулой [3a], или их солей.

Эту реакцию обычно можно осуществлять при температуре от -50°C до 170°C, предпочтительно от 0°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

В способе в соответствии с (2) выше растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и пиридин. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

В этой реакции можно использовать любой фосфорилирующий агент, который обычно используют при фосфорилировании гидроксильной группы. Примеры таких реагентов могут включать фосфороамидиты, такие как диаллилдиизопропилфосфорамидит или бис(S-пивалоил-2-тиоэтил)-N,N-диизопропилфосфорамидит, и хлориды фосфора, такие как диаллилфосфорохлоридит.

Такой фосфорилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 3,0:1,0 в отношении соединений, представленных общей формулой [3a], или их солей.

Примеры добавок, используемых в этой реакции, могут включать азотсодержащие гетероциклические кольца, такие как 1H-тетразол, 4-диметиламинопиридин, пиридин или коллидин, и их можно использовать в комбинации. Такую добавку можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0, в отношении соединений, представленных общей формулой [3a], или их солей. Примеры окисляющих агентов, используемых в этой реакции, могут включать перекиси, такие как метахлорпербензойная кислота или трет-бутилгидроперекись, и галогенированные соединения, такие как йод. Такой окисляющий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1, в отношении соединений, представленных общей формулой [3a], или их солей.

Эту реакцию можно осуществить обычно при температуре от -78°C до 100°C, предпочтительно от -50°C до 50°C, и в течение от 1 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 6 час.

[Способ получения 2]

где каждый из R¹, R², Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения; каждый из R¹⁰ и R¹¹, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой защитную группу фосфорной кислоты, претерпевающую разложение в физиологических условиях; и X представляет собой атом галогена.

Соединение, представленное общей формулой [2b], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [3b], или его соли с соединением, представленным общей формулой [6a], по способу, описанному, например, в Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 37, стр. 3902-3909 (1994).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Соединение, представленное общей формулой [6a], используют в эквимолярном или большем количестве, и, более предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 3,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [3b], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 170°C, предпочтительно от 20°C до 120°C, и в течение от 5 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 1 до 10 час.

[Способ получения 3]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения.

Соединение, представленное общей формулой [2c], или его соль можно получить, осуществляя реакцию удаления защитных групп у соединения, представленного общей формулой [2a], или его соли.

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

В этой реакции можно использовать любой обеспечивающий удаление защитной группы агент, который обычно используют для удаления защитной группы у гидроксильной группы, и предпочтительные примеры таких реагентов могут включать: основания, такие как метоксид натрия, газообразный аммиак, аммиачная вода, бутиламин или гидразин; кислоты, такие как муравьиная кислота, водный раствор уксусной кислоты, водный раствор трифторуксусной кислоты, хлористоводородная кислота, бромтриметилсилан, ионообменная смола Dowex 50WX4-200 или ионообменная смола Amberlite IR-120; палладиевые катализаторы, такие как тетракистрифенилфосфинпалладий (0); и фосфины, такие как трифенилфосфин. Их можно использовать в комбинации, или они могут быть получены в реакционной системе. Такой удаляющий защитную группу агент можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 или более в отношении соединения, представленного общей формулой [2a], или его соли, и удаляющий защитную группу агент можно также использовать в качестве растворителя.

Такую реакцию удаления защитных групп обычно можно осуществлять при температуре от -50°C до 170°C, предпочтительно от -20°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 100 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 50 час.

[Способ получения 4]

где каждый из R¹, R⁷, R⁸, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения; и R^2a представляет собой ацильную группу.

Соединение, представленное общей формулой [2d], или его соль можно получить, подвергая соединение, представленное общей формулой [2a'], или его соль реакции ацилирования в присутствии деацидифицирующего агента, в присутствии или в отсутствие добавок, по способу, описанному, например, в the 4th Jikken Kagaku Koza, Vol. 22, стр. 137-151 and 166-169 (1992); Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 44, стр. 777-786 (2001); или JP-A-10-195075.

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; и воду. Эти растворители можно также использовать в комбинации.

Примеры ацилирующих агентов, используемых в этой реакции, могут включать: карбоновые кислоты, такие как уксусная кислота; защищенные аминокислоты, такие как N-(трет-бутоксикарбонил)-L-валин; галоидангидриды, такие как триметилуксусный хлорангидрид, ангидриды кислот, такие как уксусный ангидрид; имидазолы, такие как 1,1'-карбонилдиимидазол; карбоксилаты, такие как метилацетат; и ацетали амидов, такие как диметилацеталь N,N-диметилацетамида. Эти агенты можно получить в реакционной системе. Такой ацилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 2,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [2a'].

Примеры подщелачивающих агентов, используемых в этой реакции, могут включать пиридин, триэтиламин, гидрид натрия, трет-бутоксид калия, карбонат калия и бикарбонат натрия. Такой деацидифицирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 2,0:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [2a'].

Примеры добавок, используемых в этой реакции, могут включать 1,3-дициклогексилкарбодиимид, диэтилазодикарбоксилат и трифенилфосфин. Такую добавку можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 2,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [2a'].

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 100°C, предпочтительно при температуре от 20°C до 60°C, и в течение от 5 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 30 мин до 10 час.

[Способ получения 5]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ и R⁸ имеет указанные выше значения.

Соединения, представленные общей формулой [2e], или его соль, можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [7b], или его соли с реакционноспособным агентом в присутствии или в отсутствие добавок, по способу, описанному, например, в the 4th Jikken Kagaku Koza, Vol. 22, стр. 371-424 (1992); и Journal of Medicinal Chemistry (J. Med. Chem), Vol. 38, стр. 1372-1379 (1995).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции.

Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; мочевины, такие как N,N'-диметилпропиленмочевина; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и пиридин. Один или более из типов этих растворителей можно также использовать в комбинации.

В этой реакции можно использовать любой реакционноспособный агент, обычно используемый в реакции замещения фосфатной группы. Примеры таких реакционноспособных агентов, используемых в этой реакции, могут включать: галогенированные алкильные соединения, такие как пивалоилоксиметилхлорид или 1-(пивалоилокси)этилхлорид; спирты и фенолы, такие как 4-бромфенол, 4-хлорфенол, S-(2-гидроксиэтил)тиопивалоат или S-(4-гидроксибутил)тиоизобутилат; и амины, такие как метиловый сложный эфир аланина. Такой реакционноспособный агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве, и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [7b], или его соли.

Примеры добавок, используемых в этой реакции, могут включать: галогенированные соединения, такие как пятихлористый фосфор или йодид натрия; азотсодержащие гетероциклические соединения, такие как 1-метилимидазол или 1,1'-карбонилдиимидазол; азосоединения, такие как диэтилазодикарбоксилат или диизопропилазодикарбоксилат; фосфины, такие как трифенилфосфин; алленсульфонилхлориды, такие как 2,4,6-триизопропилбензол-сульфонилхлорид; и основания, такие как триэтиламин, пиридин или трет-бутилмагнийхлорид. Их можно использовать в комбинации. Такие добавки можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 10:1, и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,05:1 до 5,0:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [7b], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -50°C до 170°C, предпочтительно от 0°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

[Способ получения 6]

где каждый из R¹, R², R⁷, R⁸, Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Y имеет указанные выше значения.

Соединения, представленные общей формулой [2i], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 1, используя соединение, представленное общей формулой [3i], или его соль.

[Способ получения 7]

где каждый из R¹, R², Z¹, Z², Z³, Z⁴, R¹⁰, R¹¹, X и Y имеет указанные выше значения.

Соединение, представленные общей формулой [2j], или его соль, можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 2, используя соединения, представленное общей формулой [3j], или их соли.

[Способ получения 8]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Y имеет указанные выше значения.

Соединения, представленные общей формулой [2k], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединения, представленные общей формулой [2i], или их соли.

[Способ получения 9]

где каждый из R¹, R^2a, R⁷, R⁸, Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Y имеет указанные выше значения.

Соединение, представленные общей формулой [2m], или его соль, можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 4, используя соединения, представленные общей формулой [21], или их соли.

Далее представлено разъяснение способа получения соединений, представленных формулами [3a], [3e] и [3f], или их солей.

[Способ получения A]

где каждый из R¹, R², Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения; R¹² представляет собой низшие алкильные или арильные группы; R¹³ представляет собой атом галогена, ацилоксигруппу, алкилсульфонилоксигруппу или арилсульфонилоксигруппу; каждый из Z⁵, Z⁶, Z⁷ и Z⁸, одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или защищенную гидроксильную группу; Z⁹ представляет собой атом водорода или защитную группу гидроксильной группы; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу.

(a) Соединение, представленное общей формулой [3f], или его соль, можно получить, (1) включая соединение, представленное общей формулой [4b], или его соль в соединение, представленное общей формулой [4a], или его соль в присутствии или в отсутствие добавок, в соответствии с обычно используемым способом силилирования, и затем (2) осуществляя взаимодействие полученного соединения, представленного общей формулой [4a], или его соли с соединением, представленным общей формулой [6b], или его солью в присутствии или в отсутствие кислоты Льюиса.

Растворитель, используемый в этих реакциях, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ или дихлорэтан. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

В указанной выше реакции (1) можно использовать любой силилирующий агент, который обычно используют в процессе преобразования карбонильной группы в силиленольный эфир. Примеры таких силилирующих агентов могут включать 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазан, N,О-бис(триметилсилил)ацетамид и триметилсилилхлорид. Такой силилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 10,0:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [4b], или его соли.

Примером добавки, используемой в случае необходимости в этой реакции, служит сульфат аммония. Такую добавку можно использовать в молярном отношении от 0,01:1,0 до 10,0:1,0 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,05:1,0 до 5,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [4b], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 200°C, предпочтительно от 0°C до 150°C, и в течение от 5 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 12 час.

Соединение, представленные общей формулой [6b], или его соль, используемые в представленной выше реакции (2), можно использовать в молярном отношении от 0,5:1 до 10:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,5:1 до 5:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [4a], или его соли.

Примеры кислот Льюиса, используемых при необходимости в этой реакции, могут включать триметилсилилтрифторметансульфонат, хлорид олова(IV), хлорид титана(IV), и хлорид цинка. Такую кислоту Льюиса можно использовать в количестве 0,5 моль или более, и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,5:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [4a], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 100°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 50°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3e], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3f], или его солью.

(c) Соединение, представленное общей формулой [3a], или его соль можно получить, осуществляя защиту соединения, представленного общей формулой [3e], или его соли, используя реагент в присутствии или в отсутствие кислотного катализатора или основания.

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; кетоны, такие как ацетон; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

В этой реакции можно использовать любой реагент, обычно используемый для защиты гидроксильной группы.

Предпочтительные примеры могут включать 2,2-диметоксипропан, ацетилхлорид, и бензоилхлорид. Эти реагенты могут быть получены в реакционной системе. Такой реагент можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 10:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [3e], или его соли.

Примеры кислотных катализаторов или оснований, используемых в этой реакции, могут включать пиридинийпаратолуолсульфонат, паратолуолсульфоновую кислоту и триэтиламин. Такой кислотный катализатор или основание можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 10:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,05:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3e], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществлять при температуре от -50°C до 170°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 150°C, и в течение от 1 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 10 час.

Соединение, представленное общей формулой [4b], или его соль может быть коммерчески доступным или может быть получено известными способами, способами, им эквивалентными, или в результате комбинированного использования этих способов. Способы получения описаны в публикациях, таких как Journal of American Chemical Society (J. Am. Chem. Soc.), Vol. 71, p. 78 (1949); та же публикация, Vol. 78, стр. 242-244 (1956); Journal of Heterocyclic Chemistry (J. Heterocycl. Chem.), Vol. 15, No. 4, стр. 665-670 (1978); Journal of Chemical Society (J. Chem. Soc.), p. 1379 (1955); патент США No. 5597823; или Международная патентная публикация W000/10569.

Далее описан способ получения соединения, представленного общей формулой [3b], или его соли.

[Способ получения B]

где R⁹ представляет собой алкильную группу; и каждый из R¹, R², R¹², R¹³, Z¹, Z², Z³, Z⁴, Z⁵, Z⁶,Z⁷, Z⁸, Z⁹, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹², Z¹³ и X имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [3h], или его соль, можно получить, осуществляя реакцию по способу получения A(a), используя соединение, представленное общей формулой [4d], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3g], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3h], или его соль.

(c) Соединение, представленное общей формулой [3d], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения A(c), используя соединение, представленное общей формулой [3g], или его соль.

(d) Соединение, представленное общей формулой [3c], или его соль можно получить по способу, описанному, например, в the 4th Jikken Kagaku Koza, Vol. 19, стр. 416-482 (1992), (1) осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли с галогенирующим агентом в присутствии или в отсутствие добавок, или (2) осуществляя взаимодействие того же соединения или его соли с сульфонирующим агентом в присутствии деацидифицирующего агента, и затем осуществляя взаимодействие с галогенирующим агентом.

В способе, соответствующем указанному выше (1), растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Галогенирующий агент, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только это реагент, обычно используемый в реакции галогенирования гидроксильной группы. Предпочтительные примеры таких галогенирующих агентов могут включать йод, бром, хлор, йодистоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, бромид натрия, йодид калия, сульфурилхлорид, N-бромсукцинимид, N-хлорсукцинимид, четырехбромистый углерод или соединения фосфора, такие как трифенилйодфосфонат. Такой галогенирующий агент можно использовать в молярном отношении от 1:1 до 50:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 1:1 до 20:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли.

Добавки, используемые при необходимости в этой реакции, конкретно не ограничены, если только они представляют собой реагент, обычно используемый в реакции галогенирования гидроксильной группы. Предпочтительные примеры таких добавок могут включать: фосфины, такие как трифенилфосфин; азосоединения, такие как диэтилазодикарбоксилат; и силаны, такие как триметилсилилхлорид или гексаметилдисилоксан. Один или более из типов таких добавок можно использовать в комбинации. Такие добавки можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 10:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,1:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -80°C до 170°C, предпочтительно при температуре от -80°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 48 час.

В представленном выше способе получения (2) растворитель, используемый в реакции сульфонирования, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов таких растворителей можно использовать в комбинации.

Сульфонирующий агент, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он представляет собой реагент, обычно используемый в реакции сульфонирования гидроксильной группы. Предпочтительные примеры таких сульфонирующих агентов могут включать галогенированные сульфонилы, такие как метансульфонилхлорид или п-толуолсульфонилхлорид; ангидриды сульфоновых кислот, такие как ангидрид трифторметансульфоновой кислоты; и сульфоновые кислоты, такие как трифторметансульфоновая кислота. Такой сульфонирующий агент можно использовать в молярном отношении от 1:1 до 20:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли.

Деацидифицирующий агент, используемый при необходимости в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он представляет собой реагент, обычно используемый в реакции сульфонирования гидроксильной группы. Предпочтительные примеры таких подщелачивающих агентов могут включать основания, такие как пиридин, 2,6-лютидин, триэтиламин или метоксид натрия, и один или более из типов деацидифицирующих агентов можно использовать в комбинации. Такой деацидифицирующий агент можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 20:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,1:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществлять при температуре от -80°C до 100°C, предпочтительно при температуре от -20°C до 50°C, и в течение от 1 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 12 час.

Растворитель, используемый в реакции галогенирования, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; кетоны, такие как ацетон; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Галогенирующий агент, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он представляет собой реагент, обычно используемый в реакции галогенирования сульфонатной группы. Предпочтительные примеры таких галогенирующих агентов могут включать бромид натрия, йодид натрия, йодид калия и йодид магния. Такой галогенирующий агент можно использовать в молярном отношении от 1:1 до 50:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 1:1 до 20:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3d], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществлять при температуре от -80°C до 170°C, предпочтительно при температуре от -80°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 12 час.

(e) Соединение, представленное общей формулой [3b], или его соль можно получить, подвергая соединение, представленное общей формулой [3c], или его соль, реакции аммонолиза карбоксилата в присутствии или в отсутствие катализатора.

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов таких растворителей можно использовать в комбинации. Эту реакцию можно осуществить, используя реагент и условия, которые обычно используют при проведении реакции аммонолиза ароматического карбоксилата. Предпочтительно, можно использовать газообразный аммиак, жидкий аммиак или аммиачную воду. Такой реагент можно использовать в эквимолярном или большем количестве в отношении соединения, представленного общей формулой [3c], или его соли. Кроме того, этот реагент можно также использовать в качестве растворителя. Примеры катализаторов, используемых при необходимости в этой реакции, могут включать: кислые аммонийные соли, такие как аммонийхлорид; основания, такие как метоксид натрия или бутиллитий; и амиды щелочных металлов, такие как амид натрия. Такой катализатор можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 100:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,01:1 до 20:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3c], или его соли.

Эту реакцию можно осуществить обычно при температуре от -100°C до 250°C, предпочтительно при температуре от -78°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 30 мин до 50 час.

Соединение, представленное общей формулой [4d], или его соль может быть коммерчески доступным или может быть получено известными способами, способами, им эквивалентными, или способами, использующими их комбинацию. Публикация, представленная выше, в которой раскрыт способ получения соединения, представленного общей формулой [4b], является примером публикаций, раскрывающих способы получения соединений, представленных общей формулой [4d], или их солей.

Далее разъясняется способ получения соединений, представленных общей формулой [7b], или их солей.

[Способ получения C]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁹, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [8d], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [8a], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [7b], или его соль можно получить: (1) удаляя защитные группы у соединения, представленного общей формулой [8d], или его соли по способу получения 3 и затем амидируя полученный продукт по способу получения B(e); или (2) амидируя вышеуказанное соединение или его соль по способу получения B(e) и затем удаляя защитные группы у полученного продукта по способу получения 3.

(c) Соединение, представленное общей формулой [8b], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 4, используя соединение, представленное общей формулой [8c], или его соль.

(d) Соединение, представленное общей формулой [8f], или его соль можно получить, удаляя защитные группы у соединения, представленного общей формулой [8b] по способу получения 3.

Далее описан способ получения соединения, представленного общими формулами [8a] и [8b'], или его солей.

[Способ получения D]

где каждый из R¹, R², R⁹, R¹², R¹³, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [8a], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [9a], или его соли с соединением, представленным общей формулой [10a], или его солью по способу получения B(a).

(b) Соединение, представленное общей формулой [8b'], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [9c], или его соли с соединением, представленным общей формулой [10a], или его солью в соответствии со способом получения B(a).

Далее описан способ получения соединения, представленного общей формулой [10a], или его соль.

[Способ получения E]

где каждый из R⁹, R¹³, Z¹, Z², Z³, Z⁴, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³ имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [10c], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения A(c), используя соединение, представленное общей формулой [10b], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [10a], или его соль можно получить, осуществляя реакцию замещения для соединения, представленного общей формулой [10c], или его соли по способу, описанному например в Journal of Organic Chemistry (J. Org. Chem.) Vol. 55, стр. 3853-3857 (1990).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Реакционноспособный агент, используемый в этой реакции, может быть одним из обычно используемого в реакции замещения лактола в кислотных условиях. Примеры таких реакционноспособных агентов могут включать: органические кислоты и ангидриды кислот, такие как уксусная кислота или ангидрид уксусной кислоты; неорганические кислоты, такие как газообразный хлористый водород, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота или фтористоводородная кислота; галогеновые соединения, такие как хлор или бром; кислоты Льюиса, такие как четырехбромистый титан или хлортриметилсилан; и тиосоединения, такие как тиофенол или метилтиотриметилсилан. Такой реакционноспособный агент можно использовать в молярном отношении от 1:1 до 20:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 1:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [10c], или его соли, и может быть использован в качестве растворителя.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 200°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 100°C, и в течение от 5 мин до 48 час, предпочтительно в течение от 30 мин до 24 час.

Соединение, представленное общей формулой [l0b], можно получить по способу, описанному в Journal of Chemical Society Chemical Communication (J. Chem. Soc., Chem. Commun.), стр. 40-41 (1989).

Далее разъясняется химический способ получения аналога пиразиннуклеотида, представленного общей формулой [1], в которой A представляет собой атом кислорода.

[Способ получения F]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения; R¹⁴ представляет собой моноортофосфатную группу или хлорангидридмоноортофосфатную группу, которые могут быть защищены; и R¹⁵ представляет собой дифосфатную или трифосфатную группу, которая может быть защищена.

(a) Соединение, представленное общей формулой [5c,] или его соль можно получить, осуществляя реакцию в соответствии со способом получения 1, используя соединение, представленное общей формулой [3v], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [5b], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [5c], или его соль.

(c) Соединение, представленное общей формулой [5a], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [5b], или его соли с фосфорилирующим агентом в присутствии или в отсутствие конденсирующего агента способами, раскрытыми, например, в Chemical Review (Chem. Rev.), Vol. 100, стр. 2047-2059 (2000); Journal of Organic Chemistry (J. Org. Chem.), Vol. 55, стр. 1834-1841 (1990); или Acta Biochimica Biophysica Academia Scientiarum Hungaricae (Acta Biochim. et Biophys. Acad. Sci. Hung.), Vol. 16, стр. 131-133 (1981).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; сложные эфиры фосфорной кислоты, такие как триметилфосфат; и пиридин. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Фосфорилирующий агент, используемый в этой реакции, может быть одним из обычно используемых при фосфорилировании монофосфатных групп. Примеры таких фосфорилирующих агентов могут включать фосфаты, такие как три-н-бутиламмонийфосфат или три-н-бутиламмонийпирофосфат. Эти агенты могут быть также получены в реакционной системе. Такой фосфорилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1:1 до 10:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [5b], или его соли. Примеры конденсирующих агентов могут включать имидазолы, такие как 1,1'-карбонилдиимидазол или N-метилимидазол, и амины, такие как морфолин или диизопропиламин. Их можно также использовать в комбинации. Такой конденсирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1:1 до 5:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [5b], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -50°C до 100°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 50°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

(d) Соединение, представленное общей формулой [5a], или его соль можно получить, осуществляя реакцию в соответствии со способом получения F(c), используя соединение, представленное общей формулой [5c], или его соль.

(e) Соединение, представленное общей формулой [5a], или его соль, можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [3v], или его соли по способу получения 1, с тем, чтобы ввести его в соединение, представленное общей формулой [5c], или его соль, и затем осуществляя взаимодействие полученного соединения или его соли в той же системе по способу получения F(d).

[Способ получения G]

где каждый из R¹, R², R¹², R¹³, R^z, Z¹, Z², Z³, Z⁴, Z⁵, Z⁶,Z⁷, Z⁸, Z⁹, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹², Z¹³ и Y имеет указанные выше значения.

(a) Соединения, представленные общими формулами [31], [3m] и [3i], или их соли можно получить, осуществляя реакцию по способу получения A, используя соединение, представленное общей формулой [4f], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3n], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 4, используя соединение, представленное общей формулой [3i], или его соль; или его можно получить, подвергая соединение, представленное общей формулой [3i], или его соль реакции алкилирования в присутствии или в отсутствие кислоты или основания по способу, описанному, например в Shin Jikken Kagaku Koza, Vol. 14, стр. 567-587 (edited by The Chemical Society of Japan, 1977).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, хлороформ или дихлорэтан; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Эти растворители можно использовать в комбинации.

Примеры алкилирующих агентов, используемых в этой реакции, могут включать: галогенированные алкилы, такие как бензилбромид; сложные эфиры, такие как диэтилсульфат; диазосоединения, такие как дифенилдиазометан; олефины, такие как 2-метилпропен; и ацетали амидов, такие как диметилацеталь N,N-диметилацетамида. Такой алкилирующий агент можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 2,0:1,0, в отношении соединения, представленного общей формулой [3i].

Примеры кислот, используемых в этой реакции, могут включать п-толуолсульфоновую кислоту и серную кислоту. Примеры оснований, используемых в этой реакции, могут включать триэтиламин, метоксид натрия, гидрид натрия, трет-бутоксид калия, карбонат калия и металлический натрий. Такую кислоту или основание можно использовать в эквимолярном или большем количестве и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 2,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [3i].

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от 0°C до 100°C, предпочтительно при температуре от 20°C до 60°C, и в течение от 5 мин до 24 час, предпочтительно в течение от 30 мин до 10 час.

(c) Соединение, представленное общей формулой [3o], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3n] или его соль.

(d) Соединение, представленное общей формулой [3j'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию в соответствии со способом получения B(d), используя соединение, представленное общей формулой [3m], или его соль.

[Способ получения H]

где каждый из R¹, R², Z⁵, Z⁶, Z⁷, Z⁸, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹², Z¹³ и Y имеет указанные выше значения; R¹⁴ представляет собой защитную группу аминогруппы; и R¹⁸ представляет собой остаток аминокислоты, который может быть защищен.

(a) Соединение, представленное общей формулой [3p], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [3n'], или его соль, с агентом, обеспечивающим удаление защитной группы, в присутствии или в отсутствие катализатора, в соответствии с обычными способами, такими как один из раскрытых в Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Theodora W. Greene, стр. 494-653 (1999).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: воду; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; тиоспирты, такие как этантиол или тиофенол; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ или 1,2-дихлорэтан; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; простые тиоэфиры, такие как диметилсульфид; кетоны, такие как ацетон или метилэтилкетон; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; неорганические кислоты, такие как серная кислота или хлористоводородная кислота; карбоновые кислоты, такие как уксусная кислота или трифторуксусная кислота; сульфоновые кислоты, такие как трифторметансульфоновая кислота; нитроалканы, такие как нитрометан; и органические основания, такие как пиридин или триэтиламин. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Агенты, обеспечивающие удаление защитных групп, используемые в этой реакции, конкретно не ограничены, и в этой реакции можно использовать те, которые обычно используют при удалении аминозащитных групп. Предпочтительные примеры таких обеспечивающих удаление защитных групп агентов могут включать: газообразный водород; формиат аммония; цинк; натрий; хлорангидриды, такие как винилхлороформиат или ацетилхлорид; органические силаны, такие как триэтилсилан или триметилсилилйодид; гидрид трибутилолова; алкоксиды щелочных металлов, такие как трет-бутоксид калия; тиоалкоксиды щелочных металлов, такие как тиометоксид натрия; 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинон; боргидрид натрия; соли щелочных металлов, такие как фторид калия или йодид натрия; кислоты Льюиса, такие как трехбромистый бор, алюминийхлорид, хлорид рутения или хлорид цинка; неорганические кислоты, такие как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота или серная кислота; органические кислоты, такие как трифторуксусная кислота, метансульфоновая кислота или паратолуолсульфоновая кислота; неорганические основания, такие как карбонат калия, бикарбонат натрия или гидроксид натрия; органические основания, такие как пиперидин; амины, такие как аммиак или гидразин; органические соединения лития, такие как метиллитий; диаммонийнитрат церия; и перекиси, такие как перекись водорода, озон или пермарганцевая кислота. Такой обеспечивающий удаление защитных групп агент можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 1000:1 и, предпочтительно, от 0,1:1 до 100:1 в отношении соединения, представленного общей формулой [3n'], или его соли.

Катализатор, используемый при необходимости в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он представляет собой обычно используемый в реакции удаления защитных групп у защищенных аминогрупп.

Предпочтительные примеры таких катализаторов могут включать: палладиевые катализаторы, такие как палладий-на-угле; родий; никель Ренея; и оксид платины(IV). Такие катализаторы, как палладий-на-угле или никель Ренея, можно использовать в массовом отношении от 0,01:1 до 10:1 и, более предпочтительно, от 0,01:1 до 5:1 в отношении соединения, представленного общей формулой [3n'], или его соли. Катализаторы, отличающиеся от палладия-на-угле и никеля Рэнея, можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 10:1, и, предпочтительно, от 0,01:1 до 5:1, в отношении соединения, представленного общей формулой [3n'], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -80°C до 200°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 160°C, и в течение от 1 мин до 48 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 12 час.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3o'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3p], или его соль.

(c) Соединение, представленное общей формулой [3q], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3n'], или его соль.

(d) Соединение, представленное общей формулой [3o'], или его соль, можно получить, осуществляя реакцию по способу получения H(a), используя соединение, представленное общей формулой [3q], или его соль.

(e) Соединение, представленное общей формулой [3o'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, или способу получения H(a), используя соединение, представленное общей формулой [3n'], или его соль.

[Способ получения I]

где каждый из R¹, R^2a, Z⁵, Z⁶, Z⁷, Z⁸, Z⁹, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹², Z¹³ и Y имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [31'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 4, используя соединение, представленное общей формулой [3r], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3m'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [31'] или его соль.

[Способ получения J]

где каждый из R¹, R² и R¹² имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [4h], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [4g], или его соли со спиртом в присутствии или в отсутствие кислотного катализатора или основания в соответствии со способом, раскрытым, например, в Shin Jikken Kagaku Koza, Vol. 14, стр. 1599-1602 (1978).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ или дихлорэтан; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; и сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

Примеры спиртов, используемых в этой реакции, могут включать метанол, этанол и фенол. Такие спирты можно использовать в эквимолярном или большем количестве в отношении соединения, представленного общей формулой [4g], или его соли. Кроме того, спирт можно также использовать в качестве растворителя.

Реагент, обычно используемый в реакции имидирования нитрила, можно использовать в качестве кислотного катализатора, используемого в этой реакции. Хлористый водород служит примером такого кислотного катализатора. Такой кислотный катализатор можно использовать в молярном отношении от 0,1:1 или более в отношении соединения, представленного общей формулой [4g], или его соли.

Примеры оснований, используемых в этой реакции, могут включать алкоксиды металлов, такие как метоксид натрия, этоксид натрия или феноксид натрия. Эти основания могут быть также получены в реакционной системе. Такое основание можно использовать в этой реакции в молярном отношении от 0,01:1 или более и, предпочтительно, в молярном отношении от 1,0:1,0 до 5,0:1,0 в отношении соединения, представленного общей формулой [4g], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -78°C до 170°C, предпочтительно при температуре от -40°C до 120°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

(b) Соединение, представленное общей формулой [4f], или его соль можно получить, осуществляя взаимодействие соединения, представленного общей формулой [4h], или его соли с реагентом по способу, описанному, например, в Shin Jikken Kagaku Koza, Vol. 14, стр. 1614-1617 (1978).

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ или дихлорэтан; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; и сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации.

В этой реакции можно использовать реагент, обычно используемый в реакции амидинирования имидатов. Примеры таких реагентов могут включать: газообразный аммиак, спиртовой раствор аммиака, аммиачную воду или кислые аммонийные соли, такие как хлорид аммония; и аминокислоты, которые могут быть защищены, такие как этиловый сложный эфир глицина или его соли. Такой реагент можно использовать в этой реакции в эквимолярном или большем количестве в отношении соединения, представленного общей формулой [4h], или его соли, и его можно также использовать в качестве растворителя.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -78°C до 170°C, предпочтительно при температуре от 0°C до 120°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 5 мин до 24 час.

[Способ получения K]

где каждый из R¹, R² и R⁹ имеет указанные выше значения.

Соединение, представленное общей формулой [4b], или его соль можно получить, подвергая соединение, представленное общей формулой [4i], или его соль реакции конденсации с карбоксилатом и аминами, такими как аммиак или первичный амин, в присутствии или в отсутствие катализатора.

Растворитель, используемый в этой реакции, конкретно не ограничен, если только он не влияет на ход реакции. Примеры таких растворителей могут включать: ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол или ксилол; галогенированные углеводороды, такие как метиленхлорид или хлороформ; простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диэтиловый эфир диэтиленгликоля или диметилцеллозольв; нитрилы, такие как ацетонитрил; амиды, такие как N,N-диметилформамид или N,N-диметилацетамид; спирты, такие как метанол, этанол или пропанол; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; и воду. Один или более из типов этих растворителей можно использовать в комбинации. Эту реакцию можно осуществить, используя реагент и условия, которые обычно используют в реакции конденсации с ароматическим карбоксилатом и аминами. Примеры аминов, предпочтительно используемых в этой реакции, могут включать соединения аммиака, такие как газообразный аммиак, жидкий аммиак или аммиачная вода, и первичные амины, такие как диэтиловый сложный эфир L-аспарагиновой кислоты. Такие амины можно использовать в эквимолярном или большем количестве в отношении соединения, представленного общей формулой [4i], или его соли. Эти реагенты можно также использовать в качестве растворителей. Примеры катализаторов, используемых при необходимости в этой реакции, могут включать: кислые аммонийные соли, такие как аммонийхлорид; основания, такие как триэтиламин, метоксид натрия или бутиллитий; и амиды щелочных металлов, такие как амид натрия. Такой катализатор можно использовать в молярном отношении от 0,01:1 до 100:1 и, предпочтительно, в молярном отношении от 0,01:1 до 20:1 в отношении соединения, представленного общей формулой [4i], или его соли.

Эту реакцию обычно можно осуществить при температуре от -100°C до 250°C, предпочтительно при температуре от -78°C до 100°C, и в течение от 1 мин до 72 час, предпочтительно в течение от 30 мин до 50 час.

[Способ получения L]

где каждый из R¹, R^2a и Y имеет указанные выше значения.

Соединение, представленное общей формулой [4f''], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 4, используя соединение, представленное общей формулой [4j], или его соль.

[Способ получения M]

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁹, R^z, Z¹, Z², Z³ и Z⁴ имеет указанные выше значения.

(a) Соединение, представленное общей формулой [3t], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения G(b), используя соединение, представленное общей формулой [3d], или его соль.

(b) Соединение, представленное общей формулой [3s], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3t], или его соль.

(c) Соединение, представленное общей формулой [3a'], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения K, используя соединение, представленное общей формулой [3s], или его соль.

[Способ получения N]

где каждый из R¹, R², Z⁵, Z⁶, Z⁷, Z⁸, Z⁹, Z¹⁰, Z¹¹, Z¹², Z¹³ и Y имеет указанные выше значения.

Соединение, представленное общей формулой [3u], или его соль можно получить, осуществляя реакцию по способу получения 3, используя соединение, представленное общей формулой [3I], или его соль.

Если соединение, полученное указанным выше способом получения, имеет изомеры (например, оптические изомеры, геометрические изомеры, таутомеры, и т.д.), эти изомеры также можно использовать. Кроме того, можно также использовать сольваты, гидраты, и различные формы кристаллов. Кроме того, после завершения реакции представляющий собой интерес продукт реакции можно использовать непосредственно в следующих реакциях без его выделения.

Если соединение, полученное указанным выше способом, содержит амино, гидроксильную или карбоксильную группы, возможно также, что эти группы защищены ранее обычными защитными группами, и тогда, после завершения реакции, эти защитные группы удаляют обычными способами.

Соединение, представленное общей формулой [1], или его соль можно выделить, очистить или перекристаллизовать, используя обычные способы, такие как экстрагирование, кристаллизация и/или хроматографическая обработка на колонке.

Если соединение по настоящему изобретению используют как лекарство, его можно приготовить в виде фармацевтической композиции обычными способами, используя фармацевтический носитель, используемый в обычных фармацевтических препаратах. Здесь можно использовать различные типы носителей, которые обычно используют при приготовлении обычных лекарств, такие как эксципиенты, связующие, разрыхлители, смазывающие агенты, окрашивающие агенты, корректирующие агент, вкусовые агенты или поверхностно-активные агенты.

Формы для введения соединения по настоящему изобретению конкретно не ограничены, но их можно соответствующим образом выбрать в зависимости от терапевтических целей. Более конкретно, такие примеры форм для введения могут включать: парентеральные агенты, такие как препараты для инъекций, суппозитории или препараты для наружного использования (мази, припарки и т.д.); аэрозоли; и агенты для перорального введения, такие как таблетки, порошки, тонкие гранулы, гранулы, капсулы, жидкости, пилюли, суспензии, сиропы или эмульсии.

Различные типы описанных выше агентов можно приготовить в виде лекарств обычными способами.

Если соединение по настоящему изобретению приготавливают в твердой лекарственной форме для перорального введения, такой как таблетки, порошки, тонкие гранулы или гранулы, примеры используемых носителей могут включать: эксципиенты (лактозу, сахарозу, хлорид натрия, глюкозу, крахмал, карбонат кальция, каолин, кристаллическую целлюлозу, кальцийдифосфатангидрид, альгиновую кислоту и т.д.); связующие (простой сироп, раствор глюкозы, раствор крахмала, раствор желатина, поливиниловый спирт, поливиниловый эфир, поливинилпирролидон, карбоксиметилцеллюлозу, шеллак, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, альгинат натрия, гуммиарабик, гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, их водные и/или этанольные растворы и т.д.); разрыхлители (крахмал, альгиновую кислоту, сшитый поливинилпирролидон, сшитую натрийкарбоксиметилцеллюлозу, кальцийкарбоксиметилцеллюлозу, натрийгликолят крахмал и т.д.); агенты, регулирующие выделение (высшие жирные кислоты, высшие жирные спирты, масло какао, гидрированные масла, водорастворимые полимеры, полимеры, растворимые в желудочном соке, полимеры, растворимые в кишечном соке, и т.д.); агенты, усиливающие поглощение (поверхностно-активные агенты, такие как соли четвертичного аммония, натрийлаурилсульфат или сорбитанмоноолеат); абсорбенты (крахмал, лактоза, каолин, бентонит, ангидрид кремневой кислоты, гидрированная двуокись кремния, алюмометасиликат магния, коллоидная кремневая кислота и т.д.); и смазывающие агенты (очищенный тальк, стеарат, кремневые кислоты, полиэтиленгликоль и т.д.).

При необходимости таблетки можно превратить в таблетки, покрытые обычными кроющими агентами, такие как покрытые сахаром таблетки, покрытые желатином таблетки, таблетки с покрытием, которое растворимо в желудочном соке, таблетки с покрытием, которое растворимо в кишечном соке, или таблетки, покрытые водорастворимой пленкой.

Капсулы можно приготовить, смешивая соединение с вышеуказанными различными типами носителей и затем заполняя полученной смесью твердые желатиновые капсулы, и т.д.

Жидкими лекарственными формами могут быть водные или масляные суспензии, растворы, сиропы или эликсиры, и их можно получить обычными способами, используя обычные добавки.

Если соединение по настоящему изобретению приготавливают в форме, предназначенной для инъекций, примеры используемых при этом носителей могут включать: разбавители (воду, этиловый спирт, Macrogol, пропиленгликоль, и т.д.); регулирующие рН агенты или буферы (лимонную кислоту, уксусную кислоту, фосфорную кислоту, молочную кислоту и их соли, серную кислоту, гидроксид натрия и т.д.); и стабилизаторы (пиросульфит натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту, тиогликолевую кислоту, тиомолочную кислоту и т.д.). В этом случае обычные соли, глюкоза, маннит или глицерин могут содержаться в фармацевтической композиции в количестве, достаточном для приготовления изотоничного раствора. Кроме того, могут быть также добавлены обычные агенты, облегчающие растворение, успокаивающие агенты или локальные анестетики.

Способ введения, дозировку и количество доз можно соответствующим образом выбрать в зависимости от возраста пациента, веса тела и симптомов. Если пациентом является взрослый человек, соединение по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например с помощью инъекций, вливаний, введения в ректум и т.д.) в дозах от 0,1 до 1000 мг/кг, один раз в день, или разделив дозу на несколько раз.

Способ ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный способ по настоящему изобретению отличается тем, что он включает следующие стадии.

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R^z, A и Y имеет указанные выше значения.

Стадия A: аналог пиразиннуклеотида, представленный общей формулой [2], или его соль претерпевает in vivo преобразование в соединение, представленное общей формулой [2a], или его соль.

Стадия B: аналог пиразиннуклеозида, представленный общей формулой [3z], или его соль претерпевает in vivo преобразование в соединение, представленное общей формулой [2a], или его соль.

Стадия C: (1) аналог пиразиннуклеотида, представленный общей формулой [3z], или его соль претерпевает in vivo преобразование под действием фермента, такого как нуклеозидаза, в соединение, представленное общей формулой [4f], и затем (2) полученное соединения претерпевает in vivo преобразование под действием фермента, такого как фосфорибозилтрансфераза, в соединение, представленное общей формулой [2a], или его соль.

Что касается стадий B, C(l) и C(2), то in vivo могут происходить также и обратные преобразования.

Соединение, представленное общей формулой [2a], или его соль, образовавшееся в результате вышеуказанных стадий, далее превращается in vivo под действием фермента, такого как нуклеотидкиназа [Advances в Antiviral Drug Design, Vol. 2, стр. 167-172 (1996)], в соединение, представленное общей формулой [1b] (пиразиннуклеотидтрифосфат), или его соль. Это соединение или его соль демонстрирует эффект ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный эффект за счет ингибирования вирус-полимеразы. Кроме того, in vivo может также происходить обратное преобразование.

Кроме того, соединение, в котором на указанных выше стадиях Y представляет собой иминогруппу, преобразуется in vivo в соединение, содержащее атом кислорода, тем самым демонстрируя фармакологическое действие.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение будет раскрыто далее с помощью следующих тестируемых примеров. Однако ими настоящее изобретение не ограничивается. В следующих тестируемых примерах соединение A представляет собой соединение 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамид, полученный в примере 29; соединение B представляет собой соединение 6-хлор-4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамид, полученный в сравнительном примере 7; и соединения, представленные в таблицах, демонстрирующих результаты тестов, соответствуют продуктам, полученным в сравнительных примерах и в Примерах.

Тестовый пример 1 [Определение фосфатного соединения в клетке]

5 мл E'-MEM культуральной среды (содержащей 1% альбумин бычьей сыворотки и 3% раствор витаминов), содержащей соединение, 6-фтор-3-гидрокси-2-[2-¹⁴C]пиразинкарбоксамид, меченный ¹⁴C в положении 2 пиразинового кольца, добавляют к MDCK клеткам, которые были культивированы в монослое на 55 см² культуральном планшете. После завершения культивирования в условиях 35°C и 5% CO₂ в течение 20 час 6-фтор-3-гидрокси-2-[2-¹⁴C] пиразинкарбоксамид и полученное в результате преобразования соединение экстрагируют из клеточных фракций, используя 66,6% ацетонитрильный раствор. Экстракт лиофилизируют и концентрируют и затем анализируют, используя указанные далее условия ВЭЖХ.

В результате детектируют монофосфат (соединение ссылочного примера 15; время удерживания: 23,3 мин) и трифосфат (соединение ссылочного примера 16; время удерживания: 34,0 мин).

Условия анализа ВЭЖХ

Приборы

Насос: HITACHI L-6200

Детектор: HITACHI L-4000

Детектор радиоактивности: Packard FLO-ONE500

Условия анализа

Разделительная колонка: Develosil ODS-MG-5 (4,6 x 250 мм)

Подвижная фаза A: 0,2 M TEAA, pH 6,6

Подвижная фаза B: 10% ацетонитрил, 0,2 M TEAA, pH 6,6

Отношение смешивания: 0 до 10 мин; B 5% 10 до 35 мин; B 5% до 75% (линейно) 35 до 50 мин; B 75%

Тестовый пример 2 [Определение соединения с удаленными защитными группами в клетке]

Соединение примера 2 добавляют к MDCK клеткам, суспендированным в сбалансированном солевом растворе Хенка, и смесь инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа. После этого полученный продукт помещают на силиконовое масло (KF-99), затем осуществляют центрифугирование при температуре 4°C. Клеточные фракции из осадка суспендируют, осуществляют замораживание-оттаивание в указанной далее подвижной фазе и полученный раствор анализируют, используя указанные далее условия ВЭЖХ.

В результате детектируют монофосфат (время удерживания: 14,3 мин) как соединение с удаленными защитными группами.

Условия анализа с помощью ВЭЖХ

Приборы

Насос: HITACHI L-6000

Детектор: HITACHI L-7500

Условия анализа

Разделительная колонка: Develosil ODS-MG-5 (4,6 x 250 мм)

Подвижная фаза: 0,02 M раствор фосфатного буфера, pH 3,0

Тестовый пример 3-1

[Тест на ингибирование полимеразы (вирус гриппа)]

Частицы вируса гриппа обрабатывают растворяющим раствором (100 мМ Tris-HCl (pH 8), 100 мМ KC1, 5 мМ MgCl₂, 1,5 мМ DTT, 5% глицерин, 1,5% Triton N101, 1% LPC), и эти частицы используют как сырой фермент полимеразу. Каждое из тестируемых соединений в различных концентрациях добавляют к реакционному буферу (100 мМ Tris-HCl (pH 8,0), 100 мМ KCl, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ DTT, 0,25% Triton N101, 0,25 мМ ApG, 0,1 мМ ATP, 0,05 мМ CTP, 0,05 мМ UTP, 0,0005 мМ GTP, ³²P-GTP, сырой фермент), затем инкубируют при температуре 30°C в течение 60 мин. После этого добавляют 10% трихлоруксусную кислоту (TCA) и смесь выдерживают на льду в течение 60 мин. После этого смесь помещают по каплям на GF/C фильтр и затем фильтр промывают 5% TCA. Фильтр сушат, к нему добавляют сцинтилляционный коктейль. Радиоактивность определяют, используя жидкостной сцинтилляционный счетчик. Результаты измерений представляют собой как 50% ингибирующую концентрацию, при условии, что группа, в которую не добавлено тестируемого соединения, принимается за 100%. Результаты представлены в таблице 1.

[Таблица 1]Соединение 50% ингибирующая концентрация (мкМ)Ссылочный пример 160,14Ссылочный пример 170,33Ссылочный пример 220,076Ссылочный пример 230,25Ссылочный пример 2528

Тестовый пример 3-2

[Тест на ингибирование полимеразы (вирус гепатита C (HCV))]

NS5B участок вируса гепатита С получают в Escherichia coli и его используют в качестве HCV полимеразы при проведении этого теста. Последовательность 3'-участка HCV получают, используя in vitro способ транскрипции, и его используют как РНК матрицу при проведении этого теста.

Каждое из тестируемых соединений в различных концентрациях добавляют к реакционному буферу (20 мМ Tris-HCl (pH 8,0), 0,05 мМ MnCl₂, 1 мМ DTT, 20 единиц ингибитора РНКазы, [α-³²P]GTP, 0,05 мМ каждого из ATP, CTP и UTP и 2 мкг/мл РНК матрицы), затем инкубируют при температуре 30°C в течение 2 часов. После этого для окончания реакции добавляют 10% TCA. После этого реакционный раствор по каплям помещают на DE81 фильтр, и этот фильтр промывают затем 5% TCA. Фильтр сушат и добавляют сцинтилляционный коктейль. Радиоактивность определяют, используя жидкостной сцинтилляционный счетчик. Результаты измерений представляют собой как 50% ингибирующую концентрацию, при условии, что группа, в которую не добавлено тестируемого соединения, принимается за 100%. Результаты представлены в таблице 1-2.

[Таблица 1-2]Соединение 50% ингибирующая концентрация (мкМ)Ссылочный пример 160,75Ссылочный пример 172,7Ссылочный пример 220,088Ссылочный пример 232,2Ссылочный пример 251,6

Тестовый пример 3-3

[Тест на ингибирование человеческой РНК-полимеразы]

Экстракт ядер клеток Hela (Promega) используют как человеческую РНК-полимеразу при проведении этого теста. The pCMP script расщепляют, используя рестрикционные ферменты, затем очищают, и его используют как матрицу ДНК при проведении этого теста.

Каждое из тестируемых соединений в различных концентрациях добавляют к реакционному буферу (экстракт ядер клеток Hela, 3 мМ MgCl₂, 0,4 мМ каждого из ATP, UTP и CTP, 0,016 мМ GTP, 16 мкг/мл матрицы ДНК, 0,4 мКюри/мл [α-³²P]GTP), затем инкубируют при температуре 30°C в течение 1 часа. После завершения реакции реакционный раствор помещают по каплям на DE81 фильтр и фильтр затем трижды промывают 5% раствором Na₂HPO₄ в течение 30 мин и затем один раз дестиллированной водой в течение 1 мин. Фильтр сушат и к нему добавляют сцинтилляционный коктейль. Радиоактивность определяют, используя жидкостной сцинтилляционный счетчик. Результаты измерений представляют собой как 50% ингибирующую концентрацию, при условии, что группа, в которую не добавлено тестируемого соединения, принимается за 100%. Результаты представлены в таблице 1-3.

[Таблица 1-3]Соединение 50% ингибирующая концентрация (мкМ)Ссылочный пример 16>200Ссылочный пример 17>200Ссылочный пример 22>200Ссылочный пример 23>200Ссылочный пример 25>200

Тестовый пример 4

[Противогриппозное действие]

MDCK клетки, которые были полностью выращены в 6-ячеечном культуральном планшете, инфицируют вирусом гриппа A/PR/8/34 в количестве 70 БОЕд/лунку (БОЕд - бляшкообразующие единицы). Спустя 60 мин инфекционный раствор удаляют и добавляют E'-MEM культуральную среду, содержащую 0,6% благородного агара, 1% альбумина бычьей сыворотки и 3 мкг/мл ацетилтрипсина, который содержит 100 мкг/мл тестируемого соединения. Смесь полностью отверждается, и ее переворачивают. Ее культивируют в течение 3 дней в условиях 35°C, 100% влажности и 5% CO₂. После завершения культивирования выжившие клетки окрашивают 1% нейтральным красным, затем фиксируют 10% формалином. После этого агарную среду удаляют проточной водой и затем подсчитывают количество бляшек. Степень ингибирования бляшек выражают в процентах по отношению к контролю, к которому не добавляют тестируемого соединения. Результаты представлены в таблице 2.

[Таблица 2]СоединениеСтепень ингибирования (%)Ссылочный пример 742Ссылочный пример 1278Пример 2100Пример 6100Пример 1124Пример 2233Пример 29100Пример 3144Пример 32100

Тестовый пример 5

[Противо-BVDV действие]

MDBK клетки, которые были полностью выращены в 6-ячеечном культуральном планшете, инфицируют вирусом бычьей диарреи (BVDV) NADL в количестве 70 БОЕд/ячейку. Спустя 60 мин инфекционный раствор удаляют и добавляют тестируемый культуральный раствор (E'-MEM), содержащий 5% лошадиную сыворотку и 1% агар (Sea Plaque Agar), который содержит 100 мкг/мл тестируемого соединения. Смесь полностью отверждается, и затем ее культивируют в течение 3 дней в условиях 37°C, 100% влажности и 5% CO₂. После завершения культивирования тестовый планшет фиксируют 3% формальдегидным раствором и агарную среду удаляют проточной водой, затем окрашивают 1% раствором кристаллического фиолетового, чтобы подсчитать количество бляшек. Степень ингибирования бляшек выражают как процент, полученный при сравнении с контролем, к которому не было добавлено тестируемого соединения. Результаты представлены в таблице 3.

[Таблица 3]СоединениеСтепень ингибирования (%)Пример 2100Пример 468Пример 657Пример 29100Пример 32100

Тестовый пример 6

[Тест, подтверждающий присутствие фосфатной формы в печени мыши, которой вводили соединение A]

Соединение A вводят в хвостовую вену мыши в дозе 300 мг/кг. Через 30 мин после введения извлекают 1,6 г печени и затем измельчают при охлаждении льдом, добавляя 22,5 мл 70 % метанола, который был охлажден до -20°C, для экстрагирования соединения A и фосфатной формы (фосфатных форм). 10 мл надосадочной жидкости экстракта, цетрифугированного при температуре 4°C в течение 10 мин, очищают в представленных далее условиях, используя твердый экстракционный патрон (Varian BOND ELUT SAX HF 2 г/12 мл; элюированный 0,01 M до 1,0 M KCl), предварительно обработанный 12 мл метанола и 12 мл каждого из 1,0 M и 0,005 M KCl.

Фосфатную форму, содержащуюся в 5 мл No.3 0,05 M KCl элюата, и синтетическое монофосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 30) оказались идентичными на основании времен удерживания для ВЭЖХ- и УФ-спектров при проведении ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-1), раскрытого в ВЭЖХ-условиях. Кроме того, фосфатная форма, содержащаяся в 5 мл No.1 0,5 M KCl элюата, и синтетическое фосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 31) оказались идентичными на основании времен удерживания ВЭЖХ в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-2), раскрытого в ВЭЖХ-условиях. Кроме того, фосфатная форма, содержащаяся в 5 мл No.2 0,5 M KCl элюата, и синтетическое трифосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 22) оказались идентичными на основании времен удерживания ВЭЖХ в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-3), раскрытом в ВЭЖХ-условиях.

0,5 мл 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) и 0,5 мл 0,1 M MgCl₂ добавляют к 4 мл вышеуказанного No.3 0,05 M KCl элюата и затем добавляют 0,5 мл щелочной фосфатазы, полученной из кишечника теленка (EC3.1.3.1., 20 ед/мл), затем инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа. Аналогично, 0,5 мл 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) и 0,5 мл 0,1 M MgCl₂ добавляют к 4 мл выше указанного No.1 0,5 M KCl элюата и затем добавляют 0,5 мл щелочной фосфатазы, полученной из кишечника теленка (EC3.1.3.1., 20 ед/мл), затем инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа. Аналогично, 0,2 мл 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) и 0,2 мл 0,1 M MgCl₂ добавляют к 1,6 мл вышеуказанного No.2 0,5 M KCl элюата и затем добавляют 0,1 мл щелочной фосфатазы, полученной из кишечника теленка (EC3.1.3.1., 20 ед/мл), затем инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа.

На основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-4), раскрытого в ВЭЖХ-условиях, подтверждено, что монофосфат исчезает из No.3 0,05 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичными на основании времен удерживания при проведении ВЭЖХ- и УФ-спектров. Аналогично, на основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-4), раскрытого в ВЭЖХ-условиях, подтверждено, что дифосфатная форма исчезает из No.1 0,5 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичными на основании времен удерживания ВЭЖХ- и УФ-спектров. Аналогично, на основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-4), раскрытого в ВЭЖХ-условиях, было подтверждено, что трифосфат исчезает из No.2 0,5 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичными на основании времен удерживания ВЭЖХ- и УФ-спектров.

На основании этих результатов было подтверждено, что соединение A превратилось in vivo в монофосфат, затем в дифосфатную форму и затем в трифосфат.

Условия очистки с использованием твердого экстракционного патрона

Промывка: промывку осуществляют, используя следующие 3 растворителя в следующем порядке.

Вода (охлажденная льдом) 12 мл

60% метанол (охлажденный льдом) 12 мл

Вода (охлажденная льдом) 12 мл

Элюирование: элюирование последовательно осуществляют в следующих условиях концентрирования. (Элюирование осуществляют порциями в 5 мл. "x 2" и "x 3" означает, что элюирование порциями по 5 мл осуществляют дважды или трижды, соответственно для каждой концентрации. Фракции определяют как No.1 элюат, No.2 элюат и No.3 элюат последовательно.)

0,01 M KCl (5 мл x 2)

0,05 M KCl (5 мл x 3)

0,1 M KCl (5 мл x 3)

0,5 M KCl (5 мл x 2)

1,0 M KCl (5 мл x 2)

Условия анализа ВЭЖХ

ВЭЖХ-1

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 7,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

ВЭЖХ-2

Колонка: 4,6 x 250 мм, Whatman Partisil 10-SAX

Подвижная фаза: 0,2 M раствор фосфатного буфера (pH 3,5)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

ВЭЖХ-3

Колонка: 4,6 x 250 мм, Whatman Partisil 10-SAX

Подвижная фаза: 0,6 M раствор фосфатного буфера (pH 3,5)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

ВЭЖХ-4

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd.,

Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 2% ацетонитрил 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 5,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

Использованы следующие измерительные приборы

Diode Array Detector Agilent 1100 Series

Quatemary Pump Agilent 1100 Series

Autosampler Agilent 1100 Series

ChemStation Agilent 1100 Series

Тестовый пример 7

[Определение концентрации соединения A в плазме мыши, которой перорально ввели тестируемое соединение]

Тестируемое соединение вводят перорально один раз двум мышам (ICR) в группе. Кровь отбирают через 30 мин после введения. 400 мкл ацетонитрила добавляют к 200 мкл центрифугированной плазмы. Смесь центрифугируют и выпавший в осадок белок удаляют. Полученную надосадочную жидкость концентрируют при пониженном давлении и затем определяют концентрацию соединение A в плазме в следующих ВЭЖХ-условиях. Результаты представлены в таблице 4.

Условия анализа ВЭЖХ

Колонка: Develosil ODS-MG-5, 4,6 x 250 мм (Nomura Chemical Co., Ltd.)

Guard колонка: Develosil ODS-MG-5, 4,6 x 10 мМ (Nomura Chemical Co., Ltd.)

Детектирование: УФ 350 нм

Подвижная фаза: 2% ацетонитрил 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 5,0)

Измерительные приборы

Детектор: Shimadzu SPD-6A

Насос: HITACHI L-6000

[Таблица 4]Тестируемое соединениеДоза
мг/кгКонцентрация соединения А в плазме (мкг/мл)Ссылочный пример 42000,2Пример 17501,6Пример 19503,5Пример 21500,4Пример 22503,1Пример 28500,3Пример 345012,5Пример 36415,7

Тестовый пример 8

[Определение концентрации соединения B в плазме мыши, которой было перорально введено тестируемое соединение]

Соединение, полученное в сравнительном примере 6, перорально вводят в дозе 200 мг/кг один раз двум ICR мышам в группе. Кровь отбирают через 30 мин и 60 мин после введения. Осуществляют ту же самую операцию, что и в тестовом примере 7, и с помощью ВЭЖХ определяют концентрацию соединения B в плазме. Результаты представлены в таблице 5.

Условия анализа ВЭЖХ

Колонка: Develosil ODS-MG-5, 4,6 x 250 мм (Nomura Chemical Co., Ltd.)

Guard колонка: Develosil ODS-MG-5, 4,6 x 10 мм (Nomura Chemical Co., Ltd.)

Детектирование на длине волны: УФ 350 нм

Подвижная фаза: 5% ацетонитрил 0,4 M раствор фосфатного буфера (pH 6,0)

[Таблица 5]Тестируемое соединениеКонцентрация соединения B в плазме (мкг/мл) через 30 минчерез 60 минСсылочный пример 61,64,6

Тестовый пример 9

[Определение фосфатного соединения в клетке с помощью добавления 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида]

5 мл E'-MEM культуральной среды (содержащей 1% альбумин бычьей сыворотки и 3% раствор витаминов), содержащей 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамид (конечная концентрация: 5000 мкМ), добавляют к MDCK клеткам, которые были культивированы в монослое на 55 см² культуральном планшете, и культивирование осуществляют в условиях 37°C и 5% CO₂ в течение 24 час. 1 мл 70% метанола, который был охлажден до -20°C, добавляют к клеточной фракции при охлаждении льдом, и из нее экстрагируют 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамид, соединение A и фосфат(фосфаты). 0,7 мл надосадочной жидкости экстракта, центрифугированного при температуре 4°C в течение 10 мин, очищают в условиях, представленных далее, используя твердый экстракционный патрон (Varian BOND ELUT SAX HF 100 мг/1 мл; элюированный 0,01 M до 1,0 M KCl), предварительно обработанный 1 мл метанола и 1 мл каждого из 1,0 M и 0,005 M KCl.

Фосфатная форма, содержащаяся в 1 мл 0,05 M KCl элюата, и синтетическое монофосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 30) оказались идентичными на основании времен удерживания, полученных с помощью ВЭЖХ-и УФ-спектров в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-5). Кроме того, фосфатная форма, содержащаяся в 1 мл 0,25 M KCl элюата, и синтетическое фосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 31) оказались идентичными на основании времен удерживания, полученных с помощью ВЭЖХ, в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-6). Кроме того, фосфатная форма, содержащаяся в 1 мл 0,5 M KCl элюата, и синтетическое трифосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 22) оказались идентичными на основании времен удерживания, полученных с помощью ВЭЖХ, в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-6).

К 0,8 мл каждого из вышеуказанных KCl элюатов добавляют 0,1 мл 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) и 0,1 мл 0,1 M MgCl₂. Затем из смеси отбирают 0,8 мл, к чему добавляют 0,08 мл щелочной фосфатазы, полученной из кишечника теленка (EC3.1.3.1., 20 ед/мл), затем инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа.

На основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-7) подтверждают, что монофосфат исчезает из 0,05 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичны на основании времен удерживания при использовании ВЭЖХ. Кроме того, с помощью ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-8), было подтверждено, что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичны на основании идентичности УФ-спектров. Аналогично, результаты ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-7), подтвердили, что дифосфатная форма исчезает из 0,25 M KCl элюата и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичны на основании времен удерживания при измерении с помощью ВЭЖХ. Кроме того, на основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-8), было подтверждено, что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичными на основании УФ-спектров. Аналогично, на основании результатов ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-7), было подтверждено, что трифосфат исчезает из 0,5 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичны на основании времен удерживания по результатам ВЭЖХ.

На основании этих результатов было подтверждено, что 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамид превращается в клетке в соединение A, монофосфат (соединение, полученное в сравнительном примере 30), затем в дифосфатную форму (соединение, полученное в сравнительном примере 31) и затем в трифосфат (соединение, полученное в сравнительном примере 22).

Условия очистки при использовании твердого экстракционного патрона

Промывка: промывку осуществляют, используя следующие 3 растворителя в следующем порядке.

Вода (охлажденная льдом) 1 мл

60% метанол (охлажденный льдом) 1 мл

Вода (охлажденная льдом) 1 мл

Элюирование: Элюирование последовательно осуществляют в следующих условиях концентрирования. (Элюирование осуществляют порциями по 1 мл.)

0,01 M KCl (1 мл)

0,05 M KCl (1 мл)

0,25 M KCl (1 мл)

0,5 M KCl (1 мл)

1,0 M KCl (1 мл)

Условия анализа ВЭЖХ

ВЭЖХ-5

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 7,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

Используемые измерительные приборы

Diode Array Детектор Agilent 1100 Series

Quaternary Pump Agilent 1100 Series

Autosampler Agilent 1100 Series

ChemStation Agilent 1100 Series

ВЭЖХ-6

Колонка: 4,6 x 250 мм, Whatman Partisil 10-SAX

Подвижная фаза: 0,75 M раствор фосфатного буфера (pH 3,5)

Детектирование: УФ 350 нм

Используемые измерительные приборы

Спектрофотометрический детектор Shimadzu SPD-6A УФ

Насос HITACHI L-6000

ВЭЖХ-7

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co.,Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 5% ацетонитрил 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 5,0)

Детектирование: УФ 350 нм

Используемые измерительные приборы

Спектрофотометрический детектор Shimadzu SPD-6A УФ

Насос HITACHI L-6000

ВЭЖХ-8

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 2% ацетонитрил 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 5,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

Используемые измерительные приборы

Diode Array Детектор Agilent 1100 Series

Quatemary Pump Agilent 1100 Series

Autosampler Agilent 1100 Series

ChemStation Agilent 1100 Series

Тестовый пример 10

[Определение трифосфатного соединения в клетке путем добавления соединения A]

10 мл E'-MEM культуральной среды (содержащей 5% фетальную телячью сыворотку), содержащей сединение A, добавляют к MDBK клеткам, которые были культивированы в монослое на 55 см² культуральном планшете. После завершения культивирования в условиях 37°C и 5% CO₂ в течение 24 час культуру удаляют, используя клеточный скребок, и культуральную среду удаляют, осуществляя центрифугирование. После этого к полученной клеточной фракции добавляют 5% трихлоруксусную кислоту и затем экстрагируют преобразованное соединение. К экстракту добавляют равное количество 20% триоктиламин-содержащего пентана и полученный водный слой затем концентрируют, используя центрифужный концентратор. В вышеуказанном концентрате определяют компонент, время удерживания по данным ВЭЖХ которого совпадает с временем удерживания синтетического соединения трифосфата (соединение, полученное в сравнительном примере 22).

Условия анализа ВЭЖХ

Приборы

Насос: HITACHI L-6000

Детектор: HITACHI L-4000

Условия анализа

Разделительная колонка: Develosil ODS-MG-5 (4,6 x 250 мм)

Подвижная фаза: 7% ацетонитрил, 5 мМ тетрабутиламмонийбромид, 0,1 M раствор фосфатного буфера (pH 7,0)

Измерения на длине волны: 350 нм

Тестовый пример 11

[Определение монофосфатного и дифосфатного соединений в клетке путем добавления соединение A]

5 мл E'-MEM культуральной среды (содержащей 1% альбумина бычьей сыворотки и 3% раствор витаминов), содержащей соединение A (конечная концентрация: 5000 мкм), добавляют к MDCK клеткам, которые были культивированы в монослое на 55 см² культуральном планшете, и культивирование осуществляют в условиях 37°C и 5% CO₂ в течение 24 час. 1 мл 70% метанола, который был охлажден до -20°C, добавляют к клеточной фракции при охлаждении льдом, и из нее экстрагируют соединение A и фосфат (фосфаты). 0,7 мл из надосадочной жидкости экстракта, центрифугированного при температуре 4°C в течение 10 мин, очищают в представленных далее условиях, используя твердый экстракционный патрон (Varian BOND ELUT SAX HF 100 мг/1 мл; элюированный 0,01 M до 1,0 M KCl), предварительно обработанный 1 мл метанола и 1 мл каждого из 1,0 M и 0,005 M KCl.

Фосфатная форма, содержащаяся в 1 мл 0,05 M KCl No.1 элюата, и синтетическое монофосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 30) оказались идентичными на основании времен удерживания, полученных с помощью ВЭЖХ-и УФ-спектров в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-9). Кроме того, фосфатная форма, содержащаяся в 1 мл 0,5 M KCl элюата, и синтетическое дифосфатное соединение (соединение, полученное в сравнительном примере 31) оказались идентичными на основании времен уджерживания, полученных с помощью ВЭЖХ в ВЭЖХ-анализе (ВЭЖХ-10).

К 0,8 мл вышеуказанного 0,05 M KCl No.1 элюата добавляют 0,1 мл 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) и 0,1 мл 0,1 M MgCl₂. Затем отбирают 0,5 мл из смеси, к которой добавляют 0,06 мл щелочной фосфатазы, полученной из кишечника теленка (EC3.1.3.1., 20 ед/мл), затем инкубируют при температуре 37°C в течение 1 часа. На основании ВЭЖХ-анализа (ВЭЖХ-11) было подтверждено, что монофосфат исчезает из 0,05 M KCl элюата, и что вновь образовавшееся соединение и соединение A оказались идентичными на основании времен удерживания, полученных с помощью ВЭЖХ-и УФ-спектров.

На основании этих результатов было подтверждено, что соединение A превращается в клетке в монофосфат (соединение, полученное в сравнительном примере 30) и дифосфатную форму (соединение, полученное в сравнительном примере 31).

Условия очистки при использовании твердого экстракционного патрона

Промывка: Промывку осуществляют, используя следующие 3 растворителя в следующем порядке.

Вода (охлажденная льдом) 1 мл

60% метанол (охлажденный льдом) 1 мл

Вода (охлажденная льдом) 1 мл

Элюирование: элюирование последовательно осуществляют в следующих условиях концентрирования. (Элюирование осуществляют порциями по 1 мл. "x 2" означает, что элюирование порцией 1 мл осуществляют дважды для каждой концентрации. Фракции определяют как No.1 элюат и No.2 элюат последовательно.)

0,01M KCl (1 мл)

0,05 M KCl (1 мл x 2)

0,1 M KCl (1 мл)

0,5 M KCl (1 мл)

1,0 M KCl (1 мл)

Условия анализа ВЭЖХ

ВЭЖХ-9

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 7,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

Приборы, используемые при измерениях

Diode Array Детектор Agilent 1100 Series

Quatemary Pump Agilent 1100 Series

Autosampler Agilent 1100 Series

ChemStation Agilent 1100 Series

ВЭЖХ-10

Колонка: 4,6 x 250 мм, Whatman Partisil 10-SAX

Подвижная фаза: 0,2 M раствор фосфатного буфера (pH 3,5)

Детектирование: УФ 350 нм

Приборы, используемые при измерениях

УФ спектрофотометрический детектор Shimadzu SPD-6A

Насос HITACHI L-6000

ВЭЖХ-11

Колонка: 4,6 x 250 мм, Nomura Chemical Co., Ltd., Develosil ODS-MG-5

Подвижная фаза: 2% ацетонитрил 0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 5,0)

Детектирование: УФ 200 до 400 нм

Приборы, используемые при измерениях

Diode Array Detector Agilent 1100 Series

Quatemary Pump Agilent 1100 Series

Autosampler Agilent 1100 Series

ChemStation Agilent 1100 Series

Тестовый пример 12

[Тест на ингибирование инозинмонофосфат-дегидрогеназы (IMPDH)]

MDCK клетки, культивированные в монослое на культуральном планшете, суспендируют в 0,05 M Tris-HCl (pH 8,0) и суспензию гомогенизируют, используя гомогенизатор Downs для получения клеточного гомогенизата. Клеточный гомогенизат центрифугируют при 16000 x g и полученную таким образом надосадочную жидкость используют как раствор IMPDH фермента.

В качестве реакционных композиций используют 0,1 M Tris-HCl (pH 8,0), 0,1 M KCl, 30 мМ EDTA, 5 мМ NAD, 5 мг/мл альбумина бычьей сыворотки и 0,04 мМ [8-¹⁴C]-инозин 5'-монофосфат. После завершения реакции при температуре 37°C в течение 1 часа для окончания реакции добавляют 2 объема ацетонитрила и концентрируют реакционный продукт. Полученный концентрат анализируют в представленных далее условиях ВЭЖХ. Рассчитывают отношение между реакционным субстратом ([¹⁴C]-инозин 5'-монофосфат) и полученным продуктом реакции ([¹⁴C]-ксантозин 5'-монофосфат) и рассчитывают скорость реакции. В качестве контрольного соединения используют рибавиринмонофосфат. Результаты представлены в таблице 6.

Условия анализа ВЭЖХ

Разделительная колонка: Develosil ODS-MG-5 (4,6 x 250 мм)

Подвижная фаза: 20% ацетонитрил, 5 мМ бутиламмонийбромид,

0,02 M раствор фосфатного буфера (pH 7,0)

Радиационный детектор: Packard FLO-ONE500

[Таблица 6]Тестируемое соединение50% ингибирующая концентрация (мкМ)Ссылочный пример 30980Пример 37740Контрольное соединение1,9

Далее, соединения по настоящему изобретению будут раскрыты в сравнительных примерах и в примерах. Однако настоящее изобретение ими не ограничивается.

Все отношения смешивания элюентов выражены в объемных отношениях. Силикагель BW-127ZH (Fuji Silysia Chemical Ltd.) используют в качестве среды для хроматографии на колонке; для обращенно-фазовой хроматографии на колонке с силикагелем в качестве носителя используют YMC GEL ODS-AM 120-S50 (YMC Co., Ltd.); и для ионообменной хроматографии в качестве носителя используют DEAE целлюлозу (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Символы, использованные в сравнительных примерах и примерах, означают следующее: DMSO-d₆: дейтерированный диметилсульфоксид, Ms: метансульфонильная группа, Ph: фенильная группа, и Et: этильная группа.

Ссылочный пример 1

1,52 г Метил 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 12,2 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и суспензию нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 1 часа. После выстаивания для охлаждения растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток растворяют в 30 мл дихлорэтана в атмосфере азота. Затем последовательно добавляют 4,98 г β-D-рибофураноз-l-ацетат-2,3,5-трибензоата и 1,73 мл хлорида олова(IV) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 14 час. Реакционную смесь разбавляют 30 мл хлороформа и 30 мл водного раствора бикарбоната натрия и осадок удаляют фильтрованием, получая органический слой. Полученный органический слой последовательно промывают водой и насыщенным солевым раствором. После этого слой сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: н-гексан:этилацетат=1:1], в результате чего получают 3,4 г твердого вещества белого цвета, метил 4-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(бензоилокси)-5-[(бензоилокси)-метил]тетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1: 1734, 1660

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 3,96 (3H, с), 4,71 (1H, дд, J=4,0, 12,4 Гц), 4,8-4,9 (2H, м), 5,8-5,9 (2H, м), 6,45 (1H, д, J=4,0 Гц), 7,34 (1Н, д, J=4,2 Гц), 7,3-7,6 (9H, м), 7,70 (1H, д, J=4,2 Гц), 7,9-8,0 (4H, м), 8,0-8,1 (2H, м).

Ссылочный пример 2

36,3 г Метил 4-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(бензоилокси)-5-[{бензоилокси)метил]тетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 400 мл метанола и добавляют 11,7 г 28% метанольного раствора метоксида натрия при охлаждении льдом. Смесь перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. pH реакционного раствора доводят до рН 4, используя 2M хлористоводородную кислоту, и затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: ацетонитрил:вода = 1:4], в результате чего получают 12,6 г твердого вещества желтого цвета, метил 4-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1: 1740

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,6-3,65 (1H, м), 3,75-3,8 (1H, м), 3,83 (3H, с), 3,9-4,0 (3H, м), 5,13 (1H, д, J=5,2 Гц), 5,29 (1Н, т, J=5,2 Гц), 5,64 (1H, д, J=2,4 Гц), 5,91 (1Н, д, J=2,4 Гц), 7,48 (1H, д, J=4,4 Гц), 8,31 (1Н, д, J=4,4 Гц).

Ссылочный пример 3

0,5 г Метил 4-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 5 мл ацетона и последовательно добавляют 1 мл триметилортоформиата и 33 мг моногидрата паратолуолсульфоновой кислоты. Смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 1 часа и затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают на хроматографической колонке [элюент: этилацетат], в результате чего получают 0,49 г твердого вещества белого цвета, метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1: 1728

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,35 (3H, с), 1,60 (3H, с), 2,55 (1Н, т, J=4,6 Гц), 3,8-3,9 (1Н, м), 3,97 (3H, с), 3,95-4,0 (1Н, м), 4,4-4,5 (1Н, м), 4,97 (1H, дд, J=3,2, 6,3 Гц), 5,01 (1Н, дд, J=2,4, 6,3 Гц), 5,80 (1Н, д, J=2,4 Гц), 7,49 (1Н, д, J=4,3 Гц), 7,69 (1H, д, J=4,3 Гц).

Ссылочный пример 4

6,78 г Метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 68 мл метанола и затем в это вводят газообразный аммиак при охлаждении льдом для насыщения. Затем, после осуществления реакции при той же температуре в течение 1,5 час, выпавшее в осадок твердое вещество собирают фильтрованием, в результате чего получают 2,34 г твердого вещества светло желтого цвета, 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида. Фильтрат концентрируют, в результате чего получают 2,54 г указанного выше соединения.

ИК(KBr) см^-1: 1701, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,29 (3H, с), 1,51 (3H, с), 3,5-3,6 (1H, м), 3,6-3,7 (1Н, м), 4,3-4,4 (1Н, м), 4,7-4,8 (1Н, м), 4,8-4,9 (1Н, м), 5,22 (1Н, т, J=4,7 Гц), 5,98 (1Н, с), 7,55 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,76 (1Н, ушир.с), 8,04 (1H, д, J=4,0 Гц), 8,36 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 5

15 мл Сульфурилхлорида добавляют по каплям в 80 мл суспензии N,N-диметилформамида, содержащей 20 г 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида, при температуре от 80°C до 90°C. Смесь перемешивают при температуре от 95°C до 100°C в течение 1 часа и затем выливают в смешанный раствор 200 мл ледяной воды и 200 мл этилацетата. Органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют 5 раз 100 мл этилацетата и затем экстракты объединяют с органическим слоем. Смесь промывают насыщенным солевым раствором. Затем смесь обрабатывают активированным углем и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток суспендируют в 50 мл воды, добавляют 3,2 г бикарбоната натрия и растворяют. Затем добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту до доведения рН раствора до pH 2. Выпавший осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 4,8 г твердого вещества белого цвета, 6-хлор-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1660

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 8,51 (2H, ушир.с), 8,73 (1Н, с), 13,60 (1Н, ушир.с)

Ссылочный пример 6

7,5 мл Суспензии 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана, содержащей 1,5 г 6-хлор-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида, нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 30 мин. После охлаждения ее концентрируют при пониженном давлении. Добавляют 5 мл толуола и растворитель удаляют при пониженном давлении. Затем добавляют 5 мл толуола и растворитель снова удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют 15 мл ацетонитрила, растворяют и при охлаждении льдом последовательно добавляют β-D-рибофураноз-1,2,3,5-тетраацетат и хлорид олова(IV), затем перемешивают при комнатной температуре в течение 5 час. Реакционную смесь разбавляют 30 мл этилацетата и 20 мл воды и затем рН доводят до 7, добавляя водный раствор бикарбоната натрия. После этого осадок удаляют фильтрованием и выделяют органический слой. Водный слой трижды экстрагируют 10 мл этилацетата и экстракты объединяют с органическим слоем. Полученную смесь промывают насыщенным солевым раствором и затем сушат над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют диэтиловый эфир и смесь собирают фильтрованием, в результате чего получают 2,8 г твердого вещества светло-желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-(аминокарбонил)-5-хлор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата.

ИК(KBr) см^-1: 1756, 1733, 1701, 1648

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 2,09 (3H, с), 2,18 (3H, с), 2,23 (3H, с), 4,45 (2H, с), 4,5-4,6 (1Н, м), 5,2-5,3 (1H, м), 5,45-5,5 (1Н, м), 6,14 (1Н, д, J=2,0 Гц), б,22 (1H, ушир.с), 8,06 (1H, с), 8,84 (1H, с).

Ссылочный пример 7

1,8 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-(аминокарбонил)-5-хлор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата суспендируют в 27 мл метанола и добавляют 2,4 г 28% метанольного раствора метоксида натрия при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 30 мин. Добавляют 0,95 мл уксусной кислоты и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 3:1], в результате чего получают 0,73 г твердого вещества светло-желтого цвета, 6-хлор-4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1693

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,35 (3H, ушир.с), 3,65 (1H, д, J=12,0 Гц), 3,8-3,9 (1Н, м), 3,9-4,0 (3H, м), 5,81 (1Н, с), 7,92 (1H, ушир.с), 8,44 (1Н, ушир.с), 8,70 (1H, с).

Ссылочный пример 8

0,3 г 6-Хлор-4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида растворяют в смешанном растворителе, содержащем 0,6 мл ацетона и 1,5 мл N,N-диметилформамида, и затем последовательно добавляют 3 мл 2,2-диметоксипропана и 0,12 г пиридиниевой соли п-толуолсульфоновой кислоты, затем перемешивают при 50°C в течение 5 час. После охлаждения добавляют смешанный растворитель, состоящий из 5 мл этилацетата и 5 мл воды, и выделяют органический слой. Этот слой промывают водой, затем насыщенным солевым раствором и затем сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 10:1], в результате чего получают 0,18 г твердого вещества светло желтого цвета, 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-6-хлор-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1700

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,29 (3H, с), 1,50 (3H, с), 3,5-3,6 (1Н, м), 3,7-3,8 (1H, м), 4,3-4,4 (1Н, м), 4,74 (1H, дд, J=2,9, 6,1 Гц), 4,88 (1Н, дд, J=2,0, 6,l Гц), 5,37 (1H, т, J=4,6 Гц), 5,95 (1Н, д, J=1,7 Гц), 7,93 (1Н, ушир.с), 8,32 (1Н, с), 8,41 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 9

1,0 г Метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 5,0 мл пиридина и затем добавляют 0,36 мл метансульфонилхлорида при 10°C, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 час. Реакционную смесь выливают в смешанный раствор 20 мл этилацетата и 20 мл воды. Органический слой отделяют и водный слой трижды экстрагируют 20 мл этилацетата. Затем экстракты объединяют с органическим слоем. Смесь промывают насыщенным солевым раствором и сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении, в результате чего получают 1,2 г бесцветного маслянистого продукта, метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-2,2-диметил-6-(метилсульфонил)окси]метил]-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1: 1734, 1669

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,35 (3H, с), 1,58 (3H, с), 3,02 (3H, с), 3,98 (3H, с), 4,51 (2H, с), 4,8-5,2 (3H, м), 5,73 (1H, ушир.с), 7,43 (2H, ушир.с).

Ссылочный пример 10

1,2 г Метил 4-[(3aR, 4R, 6R, 6aR)-2,2-диметил-6-[[(метилсульфонил)окси]метил]тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 12 мл ацетона. Добавляют 2,3 г натрийиодида и смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и затем выливают в смешанный раствор 20 мл этилацетата и 20 мл воды. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют 20 мл этилацетата. Затем экстракты объединяют с органическим слоем. Смесь последовательно промывают водным раствором тиосульфата натрия, затем насыщенным солевым раствором и затем ее сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: толуол:этилацетат = 2:1], в результате чего получают 1,0 г маслянистого продукта желтого цвета, метил 4-[(3aR,4R,6S,6aR)-6-(йодметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1: 1734,1670,1654

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,36 (3H, с), 1,59 (3H, с), 3,3-3,7 (2H, м), 3,98 (3H, с), 4,3-4,5 (1Н, м), 4,9-5,1 (2H, м), 5,76 (1Н, д, J=1,7 Гц), 7,5-7,6 (2H, м).

Ссылочный пример 11

0,55 г Метил 4-[(3aR,4R,6S, 6aR)-6-(йодметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 5 мл метанола и вводят газообразный аммиак при охлаждении льдом до насыщения. После перемешивания при той же температуре в течение 1 часа растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют диизопропиловый эфир и выпавший осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,45 г твердого продукта желтого цвета, 4-[(3aR,4R,6S,6aR)-6-(йодметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1684, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,30 (3H, с), 1,51 (3H, с), 3,3-3,5 (2H, м), 4,3-4,4 (1Н, м), 4,79 (1Н, дд, J=3,6, 6,4 Гц), 5,13 (1Н, дд, J=1,2, 6,0 Гц), 6,00 (1Н, д, J=l,6 Гц), 7,53 (1Н, д, J=4,4 Гц), 7,76 (1H, ушир.с), 7,90 (1H, д, J=4,4 Гц), 8,20 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 12

5,3 г 6-Фтор-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 53 мл ацетонитрила в токе азота и добавляют 8,4 мл N,O-бис(триметилсилил)ацетамида при охлаждении льдом, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 час. К реакционной смеси при охлаждении льдом последовательно добавляют 53 мл ацетонитрильного раствора, содержащего 9,4 г (2R, 3R, 4R)-4,5-бис(ацетилокси)-2-(гидроксиметил)тетрагидро-3-фуранилацетата, который был отдельно получен по способу, описанному в Carbohydrate Research (Carbohydr. Res.), Vol. 203, No. 9, стр. 324-329 (1990), и 7,2 мл хлорида олова(IV), и полученную таким образом смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. Реакционную смесь выливают в смешанный раствор, состоящий из 100 мл этилацетата и 300 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Органические слои разделяют и водный слой затем экстрагируют 700 мл этилацетата. Такие органические слои объединяют и затем сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 200 мл метанола и добавляют 100 мл 80% водного раствора уксусной кислоты, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ: метанол =40:1]. Затем добавляют хлороформ и диизопропиловый эфир и смесь собирают фильтрованием, в результате чего получают 9,3 г твердого вещества светло желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-5-(гидроксиметил)тетрагидро-3-фуранил ацетата.

ИК(KBr) см^-1: 1752,1686

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 2,04 (3H, с), 2,10 (3H, с), 3,64 (1Н, ддд, J=2,5, 5,0, 13 Гц), 3,86 (1Н, ддд, J=2,5, 5,0, 13 Гц), 4,29 (1H, д, J=6,O Гц), 5,35 (1H, т, J=6,0 Гц), 5,49 (1Н, дд, J=3,0, 5,O Гц), 5,65 (1Н, т, J=5,0 Гц), 6,11 (1Н, д, J=3,0 Гц), 7,96 (1H, ушир.с), 8,42 (1Н, д, J=5,O Гц), 8,49 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 13

1,5 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-5-(гидроксиметил)тетрагидро-3-фуранилацетата и 0,84 г 1H-тетразола растворяют в 30 мл ацетонитрила в токе азота. Затем добавляют 20 мл ацетонитрильного раствора, содержащего 1,4 мл диаллилдиизопропилфосфорамидита, при охлаждении льдом и смесь перемешивают в течение 20 мин. 10 мл Ацетонитрильного раствора, содержащего 1,4 г м-хлорпербензойной кислоты, добавляют к реакционной смеси, затем перемешивают в течение 10 мин. К реакционной смеси добавляют 60 мл этилацетата и полученную смесь затем выливают в 60 мл воды. Органические слои разделяют и водный слой экстрагируют 90 мл этилацетата. Органические слои объединяют и добавляют 30 мл воды. рН смеси доводят до pH 8, добавляя насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и затем отделяют водный слой. Органический слой промывают насыщенным солевым раствором и затем сушат над безводным сульфатом магния, затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 40:1], в результате чего получают 1,3 г твердого вещества желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-5-([[бис(аллилокси)-фосфорил]окси]метил)тетрагидро-3-фуранилацетата.

ИК(KBr) см^-1: 1753, 1694,

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 2,11 (3H, с), 2,15 (3H, с), 4,32-4,35 (1H, м), 4,47-4,52 (2H, м), 4,58-4,64 (4H, м), 5,27 (2H, дт, J=l,0, 10,5 Гц), 5,37-5,44 (4H, м), 5,90-6,00 (2H, м), 6,28 (1Н, д, J=4,0 Гц), б,32 (1H, ушир.с), 7,99 (1Н, д, J=6,0 Гц), 9,02 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 14

0,23 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-5-([[бис(аллилокси)фосфорил]-окси]метил)тетрагидро-3-фуранилацетата растворяют в 4,0 мл метанола и добавляют 0,17 г 28% метанольного раствора метоксида натрия при охлаждении льдом, затем перемешивают в течение 5 мин. Добавляют 0,15 мл уксусной кислоты, и растворитель удаляют при пониженном давлении. 1,0 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-5-([[бис(аллилокси)фосфорил]окси]метил)тетрагидро-3-фуранилацетата подвергают выше указанной реакции.

Реакционные смеси объединяют и полученную смесь очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 40:1], в результате чего получают 0,35 г твердого вещества желтого цвета, [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилдиаллилфосфата.

ИК(KBr) см^-1: 1684

¹H-ЯМР (DMSO-d₆, D₂О) δ: 3,1-4,7 (9H, м), 5,1-5,5 (4H, м), 5,7-6,2 (3H, м), 7,94 (1Н, д, J=6,0 Гц).

Ссылочный пример 15

0,82 г [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(Аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилдиаллилфосфата растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 8,2 мл метанола и 8,2 мл тетрагидрофурана, в токе азота. Последовательно добавляют 0,11 г тетракистрифенилфосфинпалладия(0) и 0,28 г трифенилфосфина и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. При охлаждении водой к реакционной смеси последовательно добавляют 1,9 мл тетрагидрофуранового раствора, содержащего 0,68 мл муравьиной кислоты и 8,2 мл тетрагидрофуранового раствора, содержащего 1,1 мл н-бутиламина, и полученную смесь перемешивают при температуре от 30°C до 35°C в течение 1 часа и при температуре от 40°C до 45°C в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляют 10 мл воды и органический растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный водный раствор промывают 20 мл хлороформа и промывочной слой экстрагируют 30 мл воды. Все водные слои объединяют и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: вода], в результате чего получают 0,29 г н-бутил аммонийной соли в виде твердого вещества желтого цвета, [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилдигидрофосфата.

ИК(KBr) см^-1: 1685

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 0,75-0,90 (3H, м), 1,25-1,40 (2H, м), 1,45-1,70 (2H, м), 2,70-2,80 (2H, м), 3,3-4,7 (8H, м), 5,33 (1Н, д, J=10 Гц), 5,42 (1Н, д, J=17 Гц), 5,90 (2H, ушир.с), 7,95 (1Н, ушир.с), 8,34 (1Н, д, J=5,0 Гц), 8,63 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 16

0,21 г н-Бутиламмонийной соли [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокси-тетрагидро-2-фуранил]метилдигидрофосфата суспендируют в смешанном растворе, состоящем из 4,2 мл ацетонитрила и 8,4 мл N,N-диметилформамида, и затем добавляют 0,15 г 1,1'-карбонилдиимидазола и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем к реакционной смеси добавляют 19 мкл метанола, затем перемешивают в течение 30 мин. Затем к реакционной смеси добавляют 2,0 мл раствора N,N-диметилформамида, содержащего 0,86 г три-н-бутиламмонийпирофосфата, и полученную смесь перемешивают далее в течение 14 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток последовательно очищают, используя ионообменную хроматографию на колонке [элюент: 0,10 моль/л раствор триэтиламмонийбикарбонат] и хроматографию с обращенной фазой на колонке [элюент: вода]. К полученному твердому веществу добавляют 0,90 мл метанола и добавляют 4,5 мл ацетонового раствора, содержащего 0,17 г перхлората натрия. Осадок центрифугируют и затем промывают ацетоном, в результате чего получают 60 мг натриевой соли твердого вещества светло-желтого цвета, [[2R,3S,4R,5R]-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилтрифосфата.

ИК(KBr) см^-1: 3422, 1686, 1252, 1108

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,3-4,5 (5H, м), 6,09 (1Н, с), 8,41 (1Н, д, J=5,1 Гц).

Ссылочный пример 17

0,12 г 6-Хлор-4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 1,2 мл триметилфосфата и добавляют 38 мкл оксихлорида фосфора, при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь выливают в 3,0 мл диметилформамидного раствора, содержащего 0,30 мл н-трибутиламина и 0,72 г н-трибутиламмонийпирофосфата, при охлаждении льдом и полученный раствор перемешивают при той же температуре в течение 5 мин. К реакционной смеси последовательно добавляют 10 мл 0,1 моль/л раствора триэтиламмонийбикарбоната и 10 мл воды и полученную смесь очищают, используя колоночную ионообменную хроматографию [элюент: 0,07 моль/л раствор триэтиламмонийбикарбоната] и хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: вода], в результате чего получают 41 мг твердого вещества, представляющего собой триэтиламмонийную соль {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-хлор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата. 41 мг из полученной триэтиламмонийной соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-хлор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата растворяют в 0,43 мл метанола и затем добавляют 2,2 мл ацетонового раствора, содержащего 78 мг перхлората натрия. Полученное твердое вещество центрифугируют и затем промывают 2,2 мл ацетона, в результате чего получают 26 мг натриевой соли твердого вещества белого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-хлор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метил трифосфата.

ИК(KBr) см^-1: 1700, 1654

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,25-4,5 (5H, м), 6,08 (1Н, с), 8,44 (1Н, с).

Ссылочный пример 18

43 мг Диэтил 2-[(2R,3S,4R,5R)-3,4-дигидрокси-5-метокситетрагидро-2-фуранил]этилфосфоната, который был получен по способу, описанному в Journal of Chemical Society Chemical Communication (J. Chem. Soc., Chem. Commun.), стр. 40-41 (1989), и 82 мкл триэтиламина растворяют в 1 мл дихлорметана. Затем последовательно добавляют 0,21 мл бензоилхлорида и 10 мг 4-диметиламинопиридина и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Указанным выше способом обрабатывают 0,80 г диэтил 2-[(2R,3S,4R,5R)-3,4-дигидрокси-5-метокситетрагидро-2-фуранил этилфосфоната. Затем к полученной реакционной смеси добавляют 10 мл воды, органические слои разделяют и водный слой дважды экстрагируют 20 мл хлороформа. Органические слои объединяют и затем последовательно промывают водой и насыщенным солевым раствором, затем сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ], в результате чего получают 1,38 г бесцветного продукта в виде масла, (2R,3R,4R,5R)-4-(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)-этил]-2-метокситетрагидро-3-фуранилбензоата.

ИК(KBr) см^-1: 1729

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,3-1,35 (6H, м), 1,8-2,2 (4H, м), 3,46 (3H, с), 4,0-4,2 (4H, м), 4,3-4,45 (1H, м), 5,10 (1Н, с), 5,52 (1Н, т, J=5,1 Гц), 5,59 (1Н, д, J=5,1 Гц), 7,33 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,41 (2H, т, J=7,8 Гц), 7,5-7,6 (2Н, м), 7,90 (2H, д, J=7,3 Гц), 7,99 (2H, д, J=7,3 Гц).

Ссылочный пример 19

1,34 г (2R,3R,4R,5R)-4-(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)этил]-2-метокситетрагидро-3-фуранилбензоата и 1,30 мл уксусного ангидрида растворяют в 20 мл уксусной кислоты и добавляют 0,13 мл концентрированной серной кислоты при охлаждении льдом. После поднятия температуры до комнатной смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 16 часов. Полученную реакционную смесь выливают в смешанный раствор, состоящий из 50 мл этилацетата, 50 мл льда и 100 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Органические слои разделяют и водный слой дважды экстрагируют 50 мл этилацетата. Органические слои объединяют и затем промывают насыщенным солевым раствором. Затем их сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: толуол:этилацетат = 1:1], в результате чего получают 1,19 г бесцветного маслянистого продукта, (2S,3R,4R,5R)-2-(ацетилокси)-4-(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)этил]тетрагидро-3-фуранилбензоата.

ИК(KBr) см^-1: 1729

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,3-1,35 (6H, м), 1,8-2,2 (4H, м), 2,11, 2,16 (3H, 2с), 4,05-4,2 (4H, м), 4,45-4,5 (1Н, м), 5,45-5,7 (2H, м), 6,37, 6,62 (1Н, 2д, J=l,0, 3,9 Гц), 7,3-7,5 (4H, м), 7,5-7,6 (2H, м), 7,85-7,9 (2H, м), 7,95-8,05 (2H, м).

Ссылочный пример 20

50 мг Метил 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 1,6 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и раствор нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 1 часа в атмосфере азота. После выстаивания для охлаждения растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют ацетонитрилный раствор, содержащий 0,17 г (2S,3R,4R,5R)-2-(ацетилокси)-4-(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)этил]тетрагидро-3-фуранилбензоата. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток суспендируют в 2,00 мл ацетонитрила в атмосфере азота и затем добавляют 67 мкл хлорида олова(IV) при охлаждении льдом, затем выдерживают при комнатной температуре в течение 24 часов. 300 мг Метил 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксилата обрабатывают тем же способом и полученную реакционную смесь выливают в смешанный раствор, состоящий из 50 мл этилацетата, 50 мл льда и 100 мл водного насыщенного раствора бикарбоната натрия. Осадок удаляют фильтрованием, органические слои разделяют и водный слой экстрагируют 50 мл этилацетата. Органические слои объединяют и полученные органические слои промывают насыщенным солевым раствором и затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: этилацетат:метанол = 100:1], в результате чего получают 0,76 г продукта в виде бесцветного масла, метил 4-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)-этил]тетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК (чистый) см^-1: 1734, 1670

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,3-1,35 (6H, м), 1,85-2,3 (4H, м), 3,97 (3H, с), 4,05-4,2 (4H, м), 4,45-4,55 (1H, м), 5,65 (1H, т, J=6,5 Гц), 5,74 (1Н, дд, J=3,6, 5,9 Гц), 6,24 (1Н, д, J=3,6 Гц), 7,3-7,4 (4H, м), 7,5-7,6 (4H, м), 7,85-7,95 (4H, м).

Ссылочный пример 21

6-Фтор-3-гидрокси-2-[2-¹⁴C]пиразинкарбоксамид (радиохимическая чистота: 99,0%) получают из диэтил[2-¹⁴C]малоната в качестве исходного материала известными способами, способами, им эквивалентными, или в результате их совместного использования. Такой способ получения раскрыт, например, в международной патентной публикации W000/10569.

Ссылочный пример 22

140 мг Натриевой соли твердого вещества белого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата, получают из 136 мг 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 17.

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,30-4,39 (4H, м), 4,45-4,48 (1H, м), 6,14 (1Н, с), 7,86 (1Н, д, J=3,6 Гц), 8,34 (1H, д, J=3,6 Гц).

Ссылочный пример 23

0,06 г Натриевой соли твердого вещества белого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-метил-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата получают из 0,1 г 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-6-метил-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 17.

ИК(KBr) см^-1: 1684,1654

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 2,44 (3H, с), 4,31-4,47 (5H, м), 6,12 (1Н, с), 8,20 (1Н, с).

Ссылочный пример 24

0,02 г Натриевой соли твердого вещества желтого цвета,

{(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-5-фенил-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата получают из 0,06 г 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-6-фенил-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамид по способу ссылочного примера 17.

ИК(KBr) см^-1: 1684,1654

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,07-4,41 (5H, м), 6,22 (1Н, с), 7,47-7,60 (3H, м), 7,99 (2H, д, J=7,8 Гц), 8,58 (1Н, с).

Ссылочный пример 25

146 мг Натриевой соли твердого вещества белого цвета,

{(2S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-4-гидрокситетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата получают из 128 мг 4-[(2R,3R,5S)-3-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 17.

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 2,04-2,18 (2H, м), 4,23-4,29 (1H, м), 4,50-4,58 (2H, м), 4,78-4,88 (1H, м), 6,03 (1Н, с), 7,86 (1Н, д, J=3,8 Гц), 8,41 (1H, д, J=3,8 Гц).

Ссылочный пример 26

0,9 г Метил 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 9 мл N,N-диметилацетамида. Добавляют 2,3 мл бензальдегиддиметилацеталя и 160 мг пиридиний-п-толуолсульфоната и смесь перемешивают при 65°C в течение 7 час. Затем реакционный раствор выливают в смешанный раствор из 10 мл этилацетата и 5 мл воды. Выпавшее в осадок твердое вещество собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,24 г твердого вещества белого цвета, метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2-фенилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата. Затем фильтрат отделяют и полученный органический слой последовательно промывают 5 мл воды и 5 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток промывают этилацетатом, в результате чего получают 0,40 г твердого вещества белого цвета, метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2-фенилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата.

ИК(KBr) см^-1:^{3440, 1731}

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,61-3,71 (2H, м), 3,83 (3H, с), 4,50-4,53 (1Н, м), 4,86 (1Н, дд, J=2,2, 6,6 Гц), 5,01 (1H, дд, J=2,0, 6,3 Гц), 5,23 (1Н, т, J=4,9 Гц), 5,95 (1Н, с), 6,07 (1Н, д, J=2,0 Гц), 7,45-7,47 (3H, м), 7,49 (1Н, д, J=4,4 Гц), 7,54-7,57 (2H, м), 8,09 (1H, д, J=4,4 Гц).

Ссылочный пример 27

0,30 г Метил 3-гидрокси-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 1,5 мл диметилсульфоксида и затем последовательно добавляют 0,70 мл триэтиламина и 0,54 г гидрохлорида диэтилового сложного эфира L-аспарагиновой кислоты, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 8 час. Затем к реакционному раствору добавляют хлороформ и воду, рН смеси доводят до 2, используя 2 моль/л соляную кислоту, и выделяют органический слой. Полученный органический слой промывают водой и затем сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют толуол и н-гексан и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,18 г диэтил (2S)-2-{[(3-гидрокси-2-пиразинил)карбонил]амино}бутандиоата.

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,27 (3H, т, J=7,2 Гц), 1,30 (3H, т, J=7 Гц), 2,94 (1Н, дд, J=4,4, 17,2 Гц), 3,15 (1H, дд, J=4,8, 17,2 Гц), 4,14-4,23 (2H, м), 4,24-4,32 (2H, м), 4,99-5,02 (1H, м), 8,15 (1Н, д, J=2,6 Гц), 8,40 (1Н, д, J=1,5 Гц), 8,78 (1Н, д, J=5,9 Гц), 12,4 (1Н, ушир.с).

Ссылочный пример 28

2,0 г 3-Оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбонитрила растворяют в 20 мл метанола и затем в раствор вводят газообразный хлористый водород при охлаждении льдом до насыщения. После перемешивания при той же температуре в течение 6 часов добавляют этилацетат и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 2,3 г твердого вещества желтого цвета, гидрохлорида метил 3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксимидата.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 4,27 (3H, с), 7,88 (1H, д, J=3,4 Гц), 7,91 (1Н, ушир.с), 8,07 (1Н, ушир.с), 8,15 (1H, д, J=3,4 Гц), 8,71 (1Н, ушир.с)

Ссылочный пример 29

0,40 г Гидрохлорида метил 3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразин карбоксимидата растворяют в 4 мл 25% водного раствора аммиака, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляют метанол и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,21 г твердого вещества светло-желтого цвета, 3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксимидата.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 7,60 (1Н, с), 8,19 (1Н, с).

Ссылочный пример 30

0,2 г 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-Дигидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 4 мл ацетонитрила и затем добавляют 0,2 мл дифосфорилхлорида при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 20 мин. рН реакционного раствора доводят до 7, используя 1 моль/л раствор триэтиламмонийбикарбонат, и затем его концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: вода], в результате чего получают 0,29 г триэтиламмонийной соли в виде твердого вещества, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилфосфата.

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 1,28 (9H, т, J=7,3 Гц), 3,20 (6H, q, J=7,3 Гц), 4,15-4,20 (1Н, м), 4,28-4,40 (4H, м), 6,11 (1H, д, J=2,O Гц), 7,80 (1Н, д, J=4,2 Гц), 8,34 (1H, д, J=4,2 Гц).

7 мл Ацетонового раствора, содержащего 0,35 г перхлората натрия, при комнатной температуре добавляют к 1,4 мл метанольной суспензии, содержащей 0,28 г вышеуказанной триэтиламмонийной соли монофосфорной кислоты, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. Осадок собирают фильтрованием, затем его промывают ацетоном, в результате чего получают 0,19 г натриевой соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилфосфата в виде твердого вещества белого цвета.

ИК(KBr) см^-1: 1662

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,15-4,19 (1Н, м), 4,29-4,38 (4H, м), 6,12 (1Н, с), 7,80 (1Н, д, J=3,8 Гц), 8,35 (1H, д, J=3,8 Гц).

Ссылочный пример 31

0,11 г 4-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-Дигидрокси 5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 2,0 мл триметилфосфата и затем добавляют 0,11 мл оксихлорида фосфора при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляют 6,0 мл диметилформамидного раствора, содержащего 1,2 мл трибутиламина и 1,12 г трибутил-аммонийфосфата, и полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют 0,1 моль/л раствора триэтиламмонийбикарбоната и полученную смесь оставляют при комнатной температуре в течение 12 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя ионообменную хроматографию на колонке [элюент: 0,07 моль/л раствор триэтиламмонийбикарбоната], чтобы собрать обе фракции, содержащие триэтиламмонийные соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилдифосфата, и фракции, содержащие триэтиламмонийные соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокси-тетрагидро-2-фуранил}метилтрифосфата, в результате чего получают 143 мг твердого вещества и 113 мг другого твердого вещества. 110 мг из 143 мг полученной триэтиламмонийной соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилдифосфата растворяют в 3,0 мл метанола и затем добавляют 7,5 мл ацетонового раствора, содержащего 0,28 г перхлората натрия. Твердое вещество выделяют центрифугированием и затем промывают ацетоном, в результате чего получают 64 мг натриевой соли {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилдифосфата в виде твердого вещества белого цвета.

ИК(KBr) см^-1: 3418, 1682, 1236, 983, 905

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,2-4,5 (5H, м), 6,12 (1Н, с), 7,83 (1Н, д, J=3,7 Гц), 8,35 (1H, д, J=3,7 Гц).

Пример 1

65 мг 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(Гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида, 44 мг 1H-тетразола и 10 мг молекулярных сит 4Е суспендируют в 2,0 мл ацетонитрила. Порциями, при охлаждении льдом, добавляют 3,0 мл ацетонитрильного раствора, содержащего 0,16 г бис(S-пивалоил-2-тиоэтил)-N,N-диизопропилфосфорамидита, который был отдельно получен по способу, описанному в Journal of Medicinal Chemistry (J.Med.Chem.) Vol. 38, No. 20, стр. 3941-3950 (1995), и полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 40 мин. 1,0 мл Ацетонитрильного раствора, содержащего 78 мг м-хлорпербензойной кислоты, добавляют к реакционной смеси и полученную смесь перемешивают далее при той же температуре в течение 10 мин. К реакционной смеси добавляют 10 мл этилацетата и 10 мл воды. Органические слои разделяют и водный слой экстрагируют 20 мл этилацетата. Все органические слои объединяют и объединенный слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 50:1], в результате чего получают 68 мг продукта в виде масла желтого цвета, S-(2-{[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]-диоксол-4-илметокси]-[2-(2, 2-диметил-пропионилсульфанил)этокси]фосфорилокси}-этилового) сложного эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1684

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,22 (9H, с), l, 23 (9H, с), 1,40 (3H, с), 1,65 (3H, с), 3,08 (2H, т, J=, 6,9 Гц), 3,10 (2H, т, J=6,8 Гц), 4,04-4,12 (4H, м), 4,29-4,36 (1H, м), 4,39-4,45 (1Н, м), 4,59-4,64 (1Н, м), 4,86-4,68 (2H, м), 6,02 (1H, ушир.с), 6,05 (1Н, д, J=1,5 Гц), 7,84 (1H, д, J=4,3 Гц), 7,87 (1Н, д, J=4,3 Гц), 9,17 (1Н, ушир.с).

Пример 2

60 мг S-(2-{[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]-[2-(2,2-диметилпропионилсульфанил)этокси]фосфорил-окси}этилового) эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 2,4 мл воды и 2,4 мл метанола, затем порциями добавляют 1,2 г ионообменной смолы Dowex 50WX4-200 (H+ форма) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Реакционную смесь фильтруют, удаленную смолу промывают метанолом и фильтрат и промывочную жидкость объединяют. Органический растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 36 мг твердого вещества белого цвета, S-(2-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-илметокси]-[2-(2,2-диметил-пропионилсульфанил)этокси]фосфорилокси]этилового)эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1677, 1660

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,22 (9H, с), l, 23 (9H, с), 3,11 (4H, т, J=7,0 Гц), 3,67 (1H, ушир.с), 4,05-4,15 (4H, м), 4,25-4,38 (3H, м), 4,44-4,52 (2H, м), 4,67 (1H, ушир.с), 6,04 (1Н, д, J=3,7 Гц), 6,10 (1H, ушир.с), 7,90 (1H, д, J=4,1 Гц), 8,08 (1Н, д, J=4,1 Гц), 8,95 (1Н, ушир.с).

Пример 3

12 мг Продукта в виде масла желтого цвета, S-(2-{[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-5-хлор-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d]-[1,3]диоксол-4-илметокси]-[2-(2,2-диметилпропионилсульфанил)этокси]фосфорилокси}этилового) эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты получают из 40 мг 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-6-хлор-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида по способу примера 1.

ИК(чистый) см^-1: 1687

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,21 (9H, с), l, 22 (9H, с), 1,40 (3H, с), 1,64 (3H, с), 3,07 (2H, дт, J=7,0, l,5 Гц), 3,14 (2H, т, J=6,8 Гц), 4,06-4,16 (4H, м), 4,34-4,39 (1H, м), 4,42-4,47 (1Н, м), 4,63-4,65 (1Н, м), 4,85 (1Н, дд, J=6,4, 2,2 Гц), 4,89 (1H, дд, J=6,2, 2,8 Гц), 6,04 (1Н, д, J=2,2 Гц), 6,17 (1Н, ушир.с), 7,98 (1Н, с), 9,07 (1Н, ушир.с)

Пример 4

7 мг Продукта в виде масла желтого цвета, S-(2-{[(2R,3S,4R,5R)-5-(3-карбамоил-5-хлор-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-илметокси]-[2-(2,2-диметил-пропионилсульфанил)этокси]фосфорилокси}этилового) эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты получают из 12 мг S-(2-{[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-5-хлор-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]-[2-(2,2-диметилпропионилсульфанил)этокси]фосфорилокси}этилового) эфира 2,2-диметилтиопропионовой кислоты по способу примера 2.

ИК(чистый) см^-1: 1686, 1654

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,21 (9H, с), l,23 (9H, с), 3,00 (1H, ушир.с), 3,10-3,16 (4H, м), 3,83 (1H, ушир.с), 4,05-4,20 (4H, м), 4,25-4,55 (5H, м), 6,02 (1H, д, J=2,4 Гц), 6,40 (1H, ушир.с), 8,15 (1Н, с), 8,81 (1Н, ушир.с).

Пример 5

0,05 г 4-[(3aR,4R,6S,6aR)-6-(Йодметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 2 мл толуола. Добавляют 70 мг серебряной соли бис(2,2-диметилпропионилоксиметил)фосфата, которая была отдельно получена по способу, описанному в Journal of Medicinal Chemistry (J. Med. Chem.), Vol. 37, стр. 3902-3909 (1994), и смесь перемешивают при 60°C в течение 2 часов. 0,15 г 4-[(3aR,4R 6S,6aR)-6-(йодметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d]-[1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида обрабатывают указанным выше способом. Полученные реакционные смеси объединяют и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 10:1], в результате чего получают 0,12 г твердого вещества желтого цвета, [(3aR,4R,6R, 6aR)-6-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметил-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]-(2,2-диметилпропионилоксиметокси)фосфорилоксиметилового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1750, 1684, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,14 (18H, с), 1,29 (3H, с), 1,51 (3H, с), 3,5-3,7 (2H, м), 4,34 (1Н, дд, J=4,0, 7,2 Гц), 4,75 (1Н, дд, J=2,8, 6,0 Гц), 4,86 (1H, дд, J=2,0, 6,0 Гц), 5,23 (1Н, т, J=4,8 Гц), 5,31 (2H, с), 5,34 (2H, с), 5,97 (1Н, д, J=2,0 Гц), 7,56 (1H, д, J=4,4 Гц), 7,83 (1H, ушир.с), 8,06 (1Н, д, J=4,4 Гц), 8,43 (1Н, ушир.с).

Пример 6

0,1 г [(3aR, 4R, 6R, 6aR)-6-(3-Карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]-(2,2-диметилпропионилоксиметокси)фосфорилоксиметилового сложного эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты растворяют в смешанном растворе, состоящем из 1,5 мл метанола и 1,5 мл воды, и добавляют 5 мл йонообменной смолы Dowex 50WX4-200 (H+ форма), затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 час. После этого смолу удаляют фильтрованием и затем промывают смешанным раствором, состоящим из 2,5 мл ацетонитрила и 2,5 мл воды. Полученные промывочную жидкость и фильтрат объединяют и органический растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток лиофилизируют, в результате чего получают 0,07 г твердого вещества светло-желтого цвета, [(2R,3S,4R,5R)-5-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-илметокси]-(2,2-диметилпропионилоксиметокси)фосфорилоксиметилового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1751, 1670

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,16 (18H, с), 3,64 (1H, дд, J=2,0, 12,4 Гц), 3,81 (1Н, дд, J=2,0, 12,4 Гц), 3,9-4,О (ЗН, м), 5,46 (2H, с), 5,49 (2H, с), 5,92 (1Н, д, J=2,4 Гц), 7,54 (1H, д, J=4,4 Гц), 7,75 (1Н, ушир.с), 8,29 (1Н, д, J=4,4 Гц), 8,35 (1Н, ушир.с).

Пример 7

0,50 г 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(Гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 50 мл пиридина. После этого к суспензии последовательно добавляют 43 мл тетрагидрофуранового раствора, содержащего 2,2 г метилхлорфенилфосфорил P->N-L-аланината, который был отдельно получен по способу, описанному в Antiviral Research, Vol. 43, стр. 37-53 (1999), и 1,3 мл N-метилимидазола, и смесь перемешивают при той же температуре в течение 3 час. Растворитель удаляют из реакционной смеси при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол =40:1], в результате чего получают 0,43 г твердого вещества светло-желтого цвета, метилового эфира (2S)-[[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]феноксифосфориламино]пропионовой кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1749,1684

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,22, 1,23 (3H, д, J=7,I Гц), 1,28, 1,30 (3H, с), 1,50, 1,51 (3H, с), 3,58, 3,60 (3H, с), 3,80-3,88 (1Н, м), 4,15-4,34 (2H, м), 4,42-4,45, 4,50-4,54 (1Н, м), 4,74, 4,81 (1H, дд, J=2,0, 6,3 Гц), 4,67, 4,93 (1Н, дд, J=3,0, 6,1 Гц), 5,94-5,97 (1Н, м), 6,09-6,15 (1Н, м), 7,08-7,20 (3H, м), 7,32-7,39 (2H, м), 7,46, 7,51 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,75-7,80 (1Н, ушир.с), 7,84-7,87 (1H, м), 8,26-8,32 (1Н, м).

Пример 8

49 мг Твердого вещества белого цвета, метилового эфира (2S)-{[(2R,3S,4R,5R)-5-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-илметокси]феноксифосфориламино]пропионовой кислоты получают из 190 мг метилового эфира (2S)-{[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(3-карбамоил-2-оксо-2H-пиразин-1-ил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-илметокси]феноксифосфориламино]пропионовой кислоты по способу примера 2.

ИК(KBr) см^-1: 1735, 1676, 1661

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,21, 1,23 (3H, д, J=7,2 Гц), 3,57, 3,58 (3H, с), 3,81-3,98 (2H, м), 4,02-4,04 (1Н, м), 4,12-4,41 (3H, м), 5,60 (2H, ушир.с), 5,91-5,94 (1H, м), 6,10-6,20 (1Н, м), 7,15-7,24 (3H, м), 7,34-7,45 (3H, м), 7,73 (1H, ушир.с), 7,81, 7,86 (1Н, д, J=4,2 Гц), 8,29 (1Н, ушир.с).

Пример 9

0,20 г Метил 4-[(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(бензоилокси)-5-[2-(диэтоксифосфорил)этил]тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата растворяют в 2,0 мл ацетонитрила и затем добавляют 0,33 мл бромтриметилсилана при охлаждении льдом, затем перемешивают при 0°C в течение 30 мин и затем при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют из реакционной смеси при пониженном давлении. К полученному твердому веществу добавляют 2,0 мл метанола и растворяют его, после этого в раствор вводят газообразный аммиак при охлаждении льдом до насыщения, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Растворитель удаляют из реакционной смеси при пониженном давлении, добавляют 10 мл воды и смесь промывают хлороформом. Затем нерастворившиеся продукты отфильтровывают и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент:вода], в результате чего получают 28 мг твердого вещества светло-желтого цвета, 2-[(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]этилфосфорной кислоты.

ИК(KBr) см^-1: 1676

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 1,7-1,95 (2H, м), 2,0-2,2 (2H, м), 3,95-4,0 (1Н, м), 4,2-4,25 (1Н, м), 4,33 (1H, д, J=4,6 Гц), 6,06 (1Н, с), 7,79 (1Н, д, J=4,O Гц), 8,03 (1H, д, J=4,0 Гц).

Пример 10

1,2 г Продукта в виде масла желтого цвета, [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-метил-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата получают из 0,43 г 3-гидрокси-6-метил-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 6.

ИК(KBr) см^-1: 1727, 1686, 1654

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,15 (3H, с), 4,67 (1H, дд, J=3,4, 12,7 Гц), 4,85-4,88 (1Н, м), 4,99 (1H, дд, J=2,4, 12,7 Гц), 5,88-5,95 (2H, м), 6,03 (1H, д, J=3,2 Гц), 6,47 (1H, д, J=3,9 Гц), 7,36-7,65 (10H, м), 7,93-8,00 (4H, м), 8,10-8,13 (2H, м), 9,12 (1Н, д, J=3,9 Гц).

Пример 11

0,4 г Твердого вещества светло желтого цвета, 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-6-метил-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида получают из 1,05 г [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-метил-2-оксо-l-(2H)пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата по способу ссылочного примера 7.

ИК(KBr) см^-1: 1698, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 2,24 (3H, с), 3,62-3,67 (1H, м), 3,80-3,85 (1Н, м), 3,94-4,01 (3H, м), 5,10 (1H, д, J=5,1 Гц), 5,32 (1H, т, J=4,8 Гц), 5,62 (1H, д, J=3,2 Гц), 5,92 (1Н, д, J=1,7 Гц), 7,76 (1Н, ушир.с), 8,16 (1Н, с), 8,48 (1Н, ушир.с).

Пример 12

0,5 г Продукта в виде масла желтого цвета, метилбензоата [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-5-фенил-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранила] получают из 0,35 г 3-гидрокси-6-фенил-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 6.

ИК(KBr) см^-1: 1720, 1717, 1684, 1654

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 4,77 (1H, дд, J=3,6, 12,4 Гц), 4,90-4,97 (2H, м), 5,93-5,99 (2H, м), 6,03 (1H, д, J=3,7 Гц), 6,58 (1Н, д, J=4,2 Гц), 7,32-7,68 (14H, м), 7,95-8,05 (6H, м), 8,11 (1Н, с), 8,93 (1Н, д, J=3,4 Гц).

Пример 13

0,12 г Твердого вещества желтого цвета, 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-6-фенил-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида получают из 0,48 г метилбензоата [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-5-фенил-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранила] по способу ссылочного примера 7.

ИК(KBr) см^-1: 1685, 1670, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,71-3,75 (1H, м), 3,93-3,97 (1H, м), 4,02-4,15 (3H, м), 5,10 (1Н, д, J=6,6 Гц), 5,67 (1H, т, J=4,0 Гц), 5,73 (1Н, д, J=4,6 Гц), 5,96 (1Н, с), 7,32-7,46 (3H, м), 7,82 (1H, ушир.с), 7,88 (2H, д, J=7,8 Гц), 8,43 (1Н, ушир.с), 9,07 (1H, с).

Пример 14

0,24 г 3-Гидрокси-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 5 мл 1,1,1-3,3,3-гексаметилдисилазана и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют 5 мл ксилола и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку последовательно добавляют 12,5 мл ацетонитрила, 0,50 г метилбензоата [(2S,4R)-4,5-бис(ацетилокси)тетрагидро-2-фуранила] и 0,29 мл хлорида олова(IV) и смесь затем перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К реакционному раствору добавляют воду и органический растворитель удаляют при пониженном давлении. Затем к остатку добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и этилацетат и нерастворимые продукты удаляют фильтрованием. Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом. Полученный органический слой сушат над безводным сульфатом магния и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 16:1], в результате чего получают 0,61 г твердого вещества светло- желтого цвета, метилбензоата {(2S,4R,5R)-4-(ацетилокси)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-2-фуранила}.

ИК(KBr) см^-1: 1743, 1706, 1667

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,13-2,23 (5H, м), 4,67 (1H, дд, J=4,0, 12,8 Гц), 4,78-4,85 (2H, м), 5,48 (1H, д, J=4,O Гц), 6,05 (1Н, с), 6,61 (1Н, ушир.с), 7,47-7,51 (2H, м), 7,58 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,62-7,66 (1H, м), 7,96 (1Н, д, J=4,O Гц), 8,02-8,04 (2H, м), 9,06 (1Н, ушир.с).

Пример 15

1,21 г Метилбензоата {(2S,4R,5R)-4-(ацетилокси)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-2-фуранила} растворяют в 36 мл метанола и затем добавляют 1,28 г 28% метанольного раствора метоксида натрия при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. рН реакционного раствора доводят до 5, добавляя 1 моль/л соляную кислоту, и растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: н-гексан:этилацетат=4:1], и добавляют смешанный растворитель, состоящий из 2-пропанола и этилацетата. Осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,47 г твердого вещества белого цвета, 4-[(2R,3R,5S)-3-гидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1682, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,72 (1H, дд, J=5,2, 13,2 Гц), 1,86-1,93 (1Н, м), 3,61-3,66 (1Н, м), 3,88-3,93 (1H, м), 4,25 (1Н, т, J=4,0 Гц), 4,43-4,48 (1Н, м), 5,28 (1Н, т, J=5,O Гц), 5,77 (1Н, д, J=4,O Гц), 5,82 (1Н, с), 7,56 (1Н, д, J=4,4 Гц), 7,76 (1Н, ушир.с), 8,37 (1H, д, J=4,4 Гц), 8,42 (1Н, ушир.с).

Пример 16

0,5 г 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(Гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида растворяют в 5 мл N,N-диметилформамида, и затем добавляют 0,29 г 1,1'-карбонилдиимидазола, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляют 0,21 мл 1,4-бутандиола и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем при 60°C в течение 1 часа. Затем добавляют 0,29 мл 1,4-бутандиола и смесь перемешивают при 60°C в течение 3 час. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении и затем к концентрату добавляют 30 мл этилацетата, 30 мл воды и 5 мл насыщенного солевого раствора. Органические слои отделяют и водный слой затем экстрагируют 20 мл этилацетата. Органические слои объединяют и затем сушат над безводным сульфатом магния, а растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: этилацетат:метанол = 10:1], в результате чего получают 0,31 г продукта в виде масла светло- желтого цвета, {(3aR,4R,6R,6aR)-6-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]-диоксол-4-ил} метил 4-гидроксибутилкарбоната.

ИК(KBr) см^-1: 1750, 1684, 1654

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,41 (3H, с), 1,47-1,54 (2H, м), 1,62-1,68 (5H, м), 3,60-3,66 (2H, м), 4,04-4,16 (2H, м), 4,32 (1Н, дд, J=3,2, 12,4 Гц), 4,48 (1H, дд, J=2,2, 12,2 Гц), 4,73-4,76 (1Н, м), 4,79 (1H, дд, J=2,4, 6,0 Гц), 4,92 (1Н, дд, J=1,8, 6,2 Гц), 5,98 (1H, д, J=2,O Гц), 6,31 (1Н, д, J=23,6 Гц), 7,77 (1Н, с), 7,75 (1Н, с), 8,78 (1Н, ушир.), 9,25 (1Н, ушир.с).

Пример 17

1,2 г {(3aR,4R,6R,6aR)-6-[3-(Аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил} метил 4-гидроксибутилкарбоната растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 8 мл метанола и 60 мл воды, и затем добавляют 19 г ионообменной смолы Dowex 50WX4-200 (H+ форма), затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Затем эту смолу выделяют фильтрованием, и ее промывают метанолом, а затем водой. Полученный фильтрат и промывки объединяют, и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде, и раствор затем лиофилизируют. Полученный твердый продукт промывают ацетонитрилом, затем хлороформом, в результате чего получают 0,16 г бесцветного твердого вещества, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метил

4-гидроксибутилкарбоната.

ИК(KBr) см^-1: 1745, 1664

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,45-1,51 (2H, м), 1,64-1,67 (2H, м), 3,40-3,42 (2H, м), 3,90 (1H, д, J=4,8 Гц), 4,08-4,15 (4H, м), 4,36-4,47 (3H, м), 5,38 (1H, д, J=5,2 Гц), 5,74 (1H, ушир.с), 5,92 (1Н, с), 7,50 (1Н, д, J=3,6 Гц), 7,75 (1H, ушир.с), 7,81 (1Н, д, J=3,6 Гц), 8,30 (1Н, ушир.с).

Пример 18

200 мг (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5- [3-(аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата растворяют в 2 мл пиридина, и затем добавляют 0,1 мл гидразинмоногидрата, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляют ацетон и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: этилацетат:метанол =10:1], в результате чего получают 42 мг твердого вещества белого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилацетата.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,20 (3H, с), 3,90 (1H, дд, J=6,8, 11,5), 4,06-4,09 (1Н, м), 4,12-4,17 (1Н, м), 4,31 (1Н, дд, J=5,6, 12,7), 4,35 (1H, дд, J=3,4, 12,7), 5,33 (1Н, д, J=6,6), 5,73, (1Н, д, J=5,1), 5,90 (1H, д, J=2,0), 7,57 (1Н, д, J=4,4), 7,75 (1Н, ушир.с), 7,85 (1H, д, J=4,4), 8,31 (1Н, ушир.с).

Пример 19

5 г 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-Дигидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 25 мл уксусного ангидрида и 12,5 мл пиридина, и суспензию перемешивают при 50°C в течение 1 часа, а затем при 70°C в течение 1 часа. После охлаждения суспензии до комнатной температуры, не растворившиеся продукты удаляют фильтрованием. Остаток концентрируют при пониженном давлении, и концентрат очищают затем, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: этилацетат], в результате чего получают 1,26 г твердого вещества светло желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-2-[3-[(ацетиламино)карбонил]-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-4-(ацетилокси)-5-[(ацетилокси)метил]тетрагидро-3-фуранилацетата.

ИК(KBr) см^-1: 1750, 1709

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 2,06 (6H, с), 2,09 (3H, с), 2,17 (3H, с), 4,26-4,42 (3H, м), 5,35 (1Н, т, J=6,1 Гц), 5,50 (1Н, дд, J=3,7, 6,1 Гц), 6,06 (1Н, д, J=3,4 Гц), 7,50 (1Н, д, J=4,4 Гц), 7,83 (1Н, д, J=4,4 Гц), 11,44 (1Н, с).

Пример 20

0,2 г 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(Гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 1 мл уксусного ангидрида и 4 мл пиридина, и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении, к остатку добавляют 5 мл воды, и смесь 10 раз экстрагируют по 5 мл этилацетата. Органические слои объединяют, добавляют 1 мл воды, и рН полученного раствора доводят до 3, используя 2 моль/л соляную кислоту. Органический слой отделяют, промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, и затем сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол =10:1], в результате чего получают 0,15 г продукта в виде масла светло-желтого цвета, {(3aR,4R,6R,6aR)-6-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил}метилацетата.

ИК(KBr) см^-1: 1743, 1685

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,41 (3H, с), 1,65 (3H, с), 1,94 (3H, с), 4,32 (1Н, дд, J=4,4, 12,5 Гц), 4,40 (1H, дд, J=2,9, 12,5 Гц), 4,68-4,71 (1Н, м), 4,76 (1Н, дд, J=2,9, 6,1 Гц), 4,87 (1Н, дд, J=2,1, 6,2 Гц), 5,95 (1H, д, J=2,O Гц), 6,17 (1Н, ушир.с), 7,70 (1Н, д, J=4,2 Гц), 7,80 (1H, д, J=4,2 Гц), 9,13 (1Н, ушир.с).

Пример 21

0,5 г Метил 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2-фенилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксилата суспендируют в 15 мл метанольного раствора, содержащего приблизительно 5 моль/л сухого аммиака, и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Осадок собирают фильтрованием и затем промывают метанолом, в результате чего получают 0,34 г бесцветного твердого вещества, 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(гидроксиметил)-2-фенилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1684

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,61-3,75 (2H, м), 4,52-4,54 (1Н, м), 4,87 (1Н, дд, J=2,4, 6,3 Гц), 5,00 (1H, дд, J=2,2, 6,6 Гц), 5,25 (1H, т, J=4,9 Гц), 5,96 (1Н, с), 6,10 (1H, д, J=2,0 Гц), 7,45-7,48 (3H, м), 7,54-7,57 (3H, м), 7,76 (1Н, ушир.с), 8,06 (1Н, д, J=4,4 Гц), 8,34 (1Н, ушир.с).

Пример 22

1,39 г 3-Гидрокси-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 10 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. После охлаждения растворитель удаляют при пониженном давлении. Затем добавляют 5 мл толуола и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку последовательно добавляют 15 мл ацетонитрила, 4,14 г 1,2,3,5-тетраацетата β-D-рибофуранозы и 1,99 мл триметилсилилтрифторметансульфоната и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляют 0,95 г 1,2,3,5-тетраацетата β-D-рибофуранозы и смесь перемешивают далее при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и добавляют хлороформ и воду. Органический слой отделяют, его промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляют при пониженном давлении. К остатку добавляют этилацетат и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 1,73 г (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата.

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 2,10 (3H, с), 2,16 (3H, с), 2,17 (3H, с), 4,40-4,52 (3H, м), 5,29 (1Н, т, J=6,2 Гц), 5,48 (1Н, дд, J=3,2, 5,1 Гц), 6,05 (1Н, ушир.с), 6,16 (1Н, д, J=3,2 Гц), 7,79 (1H, д, J=4,2 Гц), 7,81 (1Н, д, J=4,2 Гц), 8,98 (1Н, ушир.с).

Пример 23

0,40 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата суспендируют в тетрагидрофуране и затем к суспензии последовательно добавляют 0,06 г гидрида натрия (60% суспензия в минеральном масле) и 0,14 мл пивалоилхлорида при охлаждении льдом. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляют 0,06 г гидрида натрия (60% суспензия в минеральном масле) и 0,14 мл пивалоилхлорида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Далее добавляют 0,06 г гидрида натрия (60% суспензия в минеральном масле) и 0,14 мл пивалоилхлорида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционному раствору добавляют этилацетат и воду. Органический слой отделяют, промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: н-гексан:этилацетат =3:1], в результате чего получают 0,14 г твердого вещества желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-{[(2,2-диметилпропаноил)амино]карбонил}-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранил ацетата.

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 1,30 (9H, с), 2,13 (3H, с), 2,16 (6H, с), 4,39-4,49 (2H, м), 4,52-4,55 (1H, м), 5,29 (1H, т, J=5,9 Гц), 5,48 (1Н, дд, J=3,7, 5,6 Гц), 6,22 (1H, д, J=3,4 Гц), 7,84 (1Н, д, J=4,2 Гц), 7,86 (1H, д, J=4,2 Гц), 11,82 (1H, ушир.с).

Пример 24

0,16 г Диэтил (2S)-2-{[(3-гидрокси-2-пиразинил)карбонил]-амино}бутандиоата суспендируют в 2 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. После охлаждения растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют 1 мл толуола и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку последовательно добавляют 2 мл ацетонитрила, 0,24 г 1,2,3,5-тетраацетата β-D-рибофуранозы и 0,11 мл триметилсилилтрифторметансульфоната и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляют хлороформ и воду и выделяют органический слой. Полученный органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол =40:1], в результате чего получают 0,25 г твердого вещества светло-желтого цвета, диэтил (2S)-2-{[(4-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(ацетилокси)-5-[(ацетилокси)метил]тетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинил)карбонил]амино}бутандиоата.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,25 (3H, т, J=7,2 Гц), 1,28 (3H, т, J=7,2 Гц), 2,10 (3H, с), 2,15 (3H, с), 2,17 (3H, с), 2,98 (1Н, дд, J=4,8, 17,2 Гц), 3,11 (1H, дд, J=4,8 Гц, 17,2 Гц), 4,13-4,18 (2H, м), 4,21-4,28 (2H, м), 4,40-4,47 (2H, м), 4,49-4,51 (1Н, м), 5,09-5,12 (1H, м), 5,26-5,28 (1H, м), 5,43-5,44 (1Н, м), 6,27 (1Н, д, J=3,3 Гц), 7,77 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,79 (1H, д, J=4,O Гц), 10,13 (1Н, д, J=8,1 Гц).

Пример 25

0,21 г Диэтил (2S)-2-{[(4-{(2R,3R,4R,5R)-3,4-бис(ацетилокси)-5-[(ацетилокси)метил]тетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинил)карбонил]амино}бутандиоата растворяют в этаноле и затем добавляют 75 мг этоксида натрия при охлаждении льдом, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем перемешивание заканчивают и реакционную смесь оставляют на ночь при комнатной температуре. К смеси последовательно добавляют 0,13 мл уксусной кислоты и 1 мл воды и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: хлороформ:метанол = 40:1]. К полученному остатку добавляют этилацетат и н-гексан и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 39 мг твердого вещества желтого цвета, диэтил (2S)-2-{[(4-{(2R,3R,4S,5R)-5-[(ацетилокси)метил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинил)карбонил]амино}бутандиоата.

ИК(KBr) см^-1: 1739, 1670

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,18 (6H, т, J=6,8 Гц), 2,10 (3H, с), 2,89 (2H, ушир.с), 3,90 (1Н, ушир.с), 4,07-4,15 (6H, м), 4,30-4,38 (2H, м), 4,87-4,92 (1Н, м), 5,30-5,34 (1H, м), 5,77-5,79 (1Н, м), 5,91 (1Н, с), 7,70 (1H, д, J=3,4 Гц), 7,96 (1Н, д, J=3,4 Гц), 9,83 (1Н, д, J=7,6 Гц).

Пример 26

0,31 г 4-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(Гидроксиметил)-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида растворяют в 2 мл N,N-диметилформамида, и затем последовательно добавляют 0,33 г N-(трет-бутоксикарбонил)-L-валина, 12 мг 4-диметиламинопиридина и 0,41 г 1,3-дициклогексилкарбодиимида, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. К смеси добавляют 0,5 мл уксусной кислоты и ее перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем добавляют этилацетат и воду и нерастворившиеся продукты удаляют фильтрованием. Органический слой отделяют, промывают 1 моль/л соляной кислотой и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку с силикагелем [элюент: этилацетат], в результате чего получают 0,40 г твердого вещества желтого цвета, {(3aR,4R,6R,6aR)-6-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил}метил (2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-метил бутаноата.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 0,83-0,86 (6H, м), 1,30 (3H, с), 1,38 (9H, с), 1,52 (3H, с), 1,86-1,95 (1H, м), 3,79 (1H, т, J=7,2 Гц), 4,27-4,34 (2H, м), 4,46 (1H, ушир.с), 4,78-4,80 (1Н, м), 5,03 (1H, д, J=6,I Гц), 6,00 (1Н, с), 7,24 (1Н, д, J=7,2 Гц), 7,54 (1Н, д, J=4,3 Гц), 7,77 (1H, ушир.с), 7,86 (1Н, д, J=4,3 Гц), 8,28 (1Н, ушир.с).

Пример 27

0,26 г {(3aR,4R,6R,6aR)-6-[3-(Аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-2,2-диметилтетрагидрофуро[3,4-d][1,3]диоксол-4-ил}метил (2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-метилбутаноата растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 3 мл метанола и 3 мл воды, и затем добавляют 2,6 г ионообменной смолы Dowex 50WX4-200 (H+ форма), затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. Затем смолу выделяют фильтрованием и ее промывают метанолом и затем водой. Полученный фильтрат и промывки объединяют и растворитель удаляют при пониженном давлении. Добавляют 2 мл толуола и растворитель удаляют при пониженном давлении, в результате чего получают 70 мг твердого вещества светло-желтого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(амино-карбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метил (2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-метил бутаноата.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 0,87-0,91 (6H, м), 1,38 (9H, с), 1,97-2,05 (1Н, м), 3,53 (2H, ушир.), 3,85-3,93 (2H, м), 4,07 (1H, ушир.с), 4,19 (1Н, ушир.с), 4,31-4,35 (1Н, м), 4,39-4,42 (1H, м), 5,92 (1Н, с), 7,32 (1Н, д, J=7,6 Гц), 7,60 (1H, д, J=4,1 Гц), 7,76 (1H, ушир.с), 7,87 (1Н, д, =4,I Гц), 8,32 (1Н, ушир.с).

Пример 28

14,1 г 3-Гидрокси-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 150 мл толуола и суспензию перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 1 часа, затем воду удаляют с помощью азеотропной перегонки. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляют при пониженном давлении. К остатку добавляют 42,3 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и полученную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, добавляют 45 мл толуола и растворитель удаляют при пониженном давлении. Используя 45 мл толуола, вышеописанную операцию повторяют дважды. Остаток растворяют в 40 мл ацетонитрила, и затем его добавляют к 100 мл ацетонитрильного раствора, содержащего 48,4 г 1-ацетат 2,3,5-трибензоата β-D-рибофуранозы. 25 г Хлорида олова(IV) добавляют по каплям в смесь при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивают при 50°C в течение 4,5 час. После охлаждения до комнатной температуры его добавляют к смешанному раствору, состоящему из 100 г бикарбоната натрия, 500 мл воды и 280 мл метиленхлорида. Нерастворившиеся продукты отфильтровывают и выделяют органический слой. Полученный органический слой промывают 50 мл воды и затем 50 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют 280 мл этилацетата и 30 мл воды и смесь нагревают до 50°C, затем смесь охлаждают до 5°C, и осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 40,9 г твердого вещества серовато-белого цвета, [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-l(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата.

ИК(KBr) см^-1: 1729, 1683

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 4,69-4,78 (2H, м), 4,88-4,92 (1H, м), 5,97-6,05 (2H, м), 6,34 (1H, д, J=2,4 Гц), 7,40-7,54 (7H, м), 7,62-7,71 (3H, м), 7,80 (1H, ушир.с), 7,84-7,86 (2H, м), 7,95-8,03 (5H, м), 8,22 (1Н, м).

Пример 29

17,5 мл воды, содержащей 2,2 г гидроксида натрия, добавляют при комнатной температуре к 330 мл метанольной суспензии, содержащей 35 г [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата. Смесь перемешивают при той же температуре в течение 2 часов и затем охлаждают до 5°C. Полученный осадок собирают фильтрованием, в результате чего получают 12,5 г твердого вещества светло-желтого цвета, 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида (содержание воды: 0,4%).

ИК(KBr) см^-1: 3406, 1654

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,65 (1H, ддд, J=2,6, 5,1, 12,5 Гц), 3,81 (1Н, ддд, J=2,2, 4,8, 12,l Гц), 3,96-4,00 (2H, м), 4,01-4,03 (1Н, м), 5,10 (1Н, д, J=5,9 Гц), 5,28 (1H, т, J=4,9 Гц), 5,64 (1Н, д, J=4,8 Гц), 5,93 (1Н, д, J=2,6 Гц), 7,54 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,74 (1Н, с), 8,29 (1H, д, J=4,00 Гц), 8,36 (1H, с)

Пример 29(2)

11 г 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-Дигидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида, полученного в примере 29, растворяют в 300 мл воды (45°C) и затем добавляют 1,1 г активированного угля, затем перемешивают в течение 10 мин. Активированный уголь отфильтровывают и дважды промывают 20 мл воды. Фильтрат и промывки объединяют и добавляют 1,1 г активированного угля, затем перемешивают в течение 10 мин. Активированный уголь отфильтровывают, дважды промывают 20 мл воды и затем концентрируют при пониженном давлении. К концентрату добавляют 90 мл воды, затем смесь фильтруют, в результате чего получают 9,35 г бесцветных кристаллов, моногидрата 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида (содержание воды: 6,8%).

ИК(KBr) см^-1: 3578, 3399, 3091, 2929, 1674

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,65 (1H, ддд, J=2,6, 5,1, 12,5 Гц), 3,81 (1Н, ддд, J=2,2, 4,8, 12,1 Гц), 3,96-4,00 (2H, м), 4,01-4,03 (1Н, м), 5,10 (1Н, д, J=5,9 Гц), 5,28 (1H, т, J=4,9 Гц), 5,64 (1Н, д, J=4,8 Гц), 5,93 (1Н, д, J=2,6 Гц), 7,54 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,74 (1Н, с), 8,29 (1H, д, J=4,O Гц), 8,36 (1Н, с).

Пример 30

0,47 г Твердого вещества светло-желтого цвета, [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата получают из 0,23 г 6-фтор-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 6.

ИК(KBr) см^-1: 1726, 1690

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 4,6-5,0 (3H, м), 5,9-6,1 (2H, м), 6,33 (1Н, с), 7,3-8,2 (17H, м), 8,53 (1Н, ушир.с).

Пример 31

7,37 г Твердого вещества светло-желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранил ацетата получают из 4,0 г 6-фтор-3-гидрокси-2-пиразинкарбоксамида по способу ссылочного примера 6.

ИК(KBr) см^-1: 1748, 1715, 1662

¹H-ЯМР (CDC1₃) δ: 2,04 (3H, с), 2,08 (3H, с), 2,18 (3H, с) 4,47-4,58 (3H, м), 5,20-5,34 (1Н, м), 5,51 (1H, дд, J=2,3, 5,0 Гц), 6,16 (1Н, д, J=2,2 Гц), 6,41 (1Н, ушир.с), 7,95 (1H, д, J=5,6 Гц), 8,94 (1Н, ушир.с).

Пример 32

0,15 г [(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(Аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил]метилбензоата растворяют в 2,0 мл метанола и затем добавляют 0,14 г 28% метанольного раствора метоксида натрия при охлаждении льдом. Полученную смесь перемешивают при той же температуре в течение 20 мин и затем при комнатной температуре в течение 30 мин. К реакционной смеси добавляют 0,75 мл 1 моль/л соляной кислоты и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают, используя хроматографическую колонку [элюент: хлороформ:метанол = 5:1], и затем добавляют изопропанол и диэтиловый эфир. Смесь затем фильтруют, в результате чего получают 40 мг 4-[(2R, 3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-6-фтор-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида.

ИК(KBr) см^-1: 1686

Пример 33

0,20 г 3-Оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксимидамида и 10 мг сульфата аммония суспендируют в 2,0 мл 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана и суспензию нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 10 мин в токе азота. Добавляют 9,0 мг сульфата аммония и смесь далее нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают и растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в 4,0 мл ацетонитрила и затем к нему последовательно добавляют 0,46 г 1,2,3,5-тетраацетата β-D-рибофуранозы и 0,34 мл хлорида олова(IV), затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час. К реакционной смеси добавляют 10 мкл трифторуксусной кислоты и 1,0 мл воды и растворитель затем удаляют при пониженном давлении. Используя 0,05 г 3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксимидата, повторяют указанную выше реакцию, в результате чего получают реакционную смесь. Полученные реакционные смеси объединяют и затем очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент:ацетонитрил:вода = 1:4], в результате чего получают 0,34 г твердого вещества светло-желтого цвета, (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-[амино(имино)метил]-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранил ацетата.

ИК(KBr) см^-1: 3392, 1750, 1685

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 2,11 (3H, с), 2,16 (6H, с), 4,4-4,7 (3H, м), 5,31 (1H, т, J=5,4 Гц), 5,5-5,6 (1Н, м), 6,22 (1H, д, J=3,0 Гц), 7,8-8,0 (1Н, м), 8,1-8,3 (1Н, м), 8,67 (1H, ушир.с), 10,45 (2H, ушир.с).

Пример 34

0,10 г (2R,3R,4R,5R)-4-(Ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-[амино(имино)метил]-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранил ацетата добавляют к 5,0 мл 25% водного аммиака при охлаждении льдом и смесь перемешивают при той же температуре в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляют 4,9 мл уксусной кислоты и растворитель удаляют при пониженном давлении. Используя 20 мг (2R,3R,4R,5R)-4-(ацетилокси)-2-[(ацетилокси)метил]-5-[3-[амино(имино)метил]-2-оксо-1(2H)-пиразинил]тетрагидро-3-фуранилацетата, осуществляют вышеуказанную реакцию. Полученные реакционные смеси объединяют и затем очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: вода]. К полученному твердому веществу добавляют 5,0 мл 1 моль/л соляной кислоты и растворитель удаляют при пониженном давлении. Кроме того, добавляют далее 5,0 мл 1 моль/л соляной кислоты и растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют этанол и твердое вещество собирают фильтрованием, в результате чего получают 30 мг гидрохлорида твердого вещества светло-желтого цвета, 4-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидро-2-фуранил]-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксимидамида.

ИК(KBr) см^-1: 3374, 3281, 1690

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 3,7-3,9 (2H, м), 3,9-4,2 (3H, м), 5,1-5,3 (1Н, м), 5,3-5,6 (1Н, м), 5,6-5,8 (1Н, м), 5,90 (1Н, с), 7,86 (1Н, д, J=4,0 Гц), 8,76 (1Н, д, J=4,0 Гц), 9,44 (4H, ушир.с).

Пример 35

37 мг {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(Аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метилбензоата получают из 200 мг {(2R,3R,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-бис(бензоилокси)тетрагидро-2-фуранил}метилбензоата по способу примера 18.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 4,06 (1H, дд, J= 6,6, 12,7), 4,12-4,15 (1Н, м), 4,28-4,32 (1Н, м), 4,59 (1H, дд, J=5,1, 12,2), 4,67 (1Н, дд, J=2,7, 12,5), 5,40 (1Н, д, J=6,3), 5,76 (1Н, д, J=4,9), 5,91 (1Н, д, J=2,0), 7,37 (1H, д, J=4,4), 7,57 (2H, т, J=7,8), 7,71 (1H, дд, J=7,1, 7,6), 7,75 (1H, ушир.с), 7,85 (1Н, д, J=4,2), 8,01 (2H, дд, J=l,0, 7,4), 8,30 (1Н, ушир.с).

Пример 36

100 мг {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(Аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метил (2S)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-метилбутаноата растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 1 мл трифторуксусной кислоты и 0,1 мл воды, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Трифторуксусную кислоту удаляют при пониженном давлении и добавляют воду. Смесь доводят до pH 8, используя насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, и затем ее очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: 10% водный раствор ацетонитрила], с последующей азеотропной перегонкой с этанолом, в результате чего получают 59 мг твердого вещества белого цвета, {(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил}метил (2S)-2-амино-3-метилбутаноата.

ИК(KBr) см^-1: 1724, 1670, 1653

¹H-ЯМР (DMSO-d₆, D₂О) δ: 0,84 (ЗН, д, J=6,6 Гц), 0,89 (3H, д, J=6,6 Гц), 1,82-1,90 (1Н, м), 3,22 (1Н, д, J=5,2 Гц), 3,88-3,94 (1H, м), 4,09 (1Н, с), 4,17-4,20 (1Н, м), 4,36-4,38 (2H, м), 5,91 (1Н, с), 7,58 (1Н, д, J=4,0 Гц), 7,90 (1Н, д, J=4,0).

Пример 37

58 мг 4-[(2R,3R,4S,5R)]-3,4-Дигидрокси-5-(гидроксиметил)-тетрагидро-2-фуранил]-6-фтор-3-оксо-3,4-дигидро-2-пиразинкарбоксамида суспендируют в 1 мл триметилфосфата и затем последовательно добавляют 37 мкл пиридина и 49 мкл оксихлорида фосфора при охлаждении льдом, затем перемешивают при той же температуре в течение 1 часа. Добавляют 3 мл 1 моль/л водного раствора триэтиламмонийбикарбоната и смесь перемешивают в течение 15 мин. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают, используя ионообменную хроматографию на колонке [элюент: 0,1 моль/л водный раствор триэтиламмонийбикарбоната]. Затем его очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонке с силикагелем [элюент: вода], в результате чего получают 39 мг триэтиламмонийной соли [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилфосфата в виде твердого вещества.

3 мл Ацетонового раствора, содержащего 0,14 г перхлората натрия, добавляют к 0,5 мл метанольной суспензии, содержащей 36 мг полученных выше триэтиламмонийных солей монофосфорной кислоты, при комнатной температуре и смесь перемешивают в течение 30 мин. Осадок собирают фильтрованием и промывают ацетоном, в результате чего получают 27 мг натриевой соли [(2R,3S,4R,5R)-5-[3-(аминокарбонил)-5-фтор-2-оксо-1(2H)-пиразинил]-3,4-дигидрокситетрагидро-2-фуранил]метилфосфата твердого вещества светло-желтого цвета.

¹H-ЯМР (D₂О) δ: 4,13-4,18 (1H, м), 4,29-4,40 (4H, м), 6,10 (1Н, с), 8,46 (1Н, д, J=4,9 Гц).

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

На основании вышеуказанных примеров исследования было обнаружено, что аналог пиразиннуклеотидтрифосфата обладает способностью специфически ингибировать вирус-полимеразу в тесте по ингибированию вирус-полимеразы, что пиразинкарбоксамиднуклеотид, модифицированный заместителем, представленным в настоящем изобретении, перемещается в клетку и обладает в ней противовирусной активностью, хотя обычно было известно, что нуклеотид не может попасть в клетку через клеточную мембрану, и что пиразиннуклеозид преобразуется в аналог пиразиннуклеотидтрифосфата в организме животного, которому вводят пиразиннуклеозид. Соответственно, способ ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный способ по настоящему изобретению, который характеризуется использованием аналога пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида, образующегося под действием киназы, такой как нуклеотидкиназа, или его соли, можно использовать как способ для лечения вирусной инфекции. Кроме того, новый аналог пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида или его соль по настоящему изобретению можно использовать в качестве средства для профилактики и/или лечения вирусной инфекции.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к способу ингибирования роста вирусов и/или вирулицидному эффекту, в котором аналог пиразиннуклеотида [2] и аналог пиразиннуклеозида [3z] подвергаются биотрансформации, разложению и затем фосфорилированию, таким образом, что они становятся аналогом пиразиннуклеотида [1b], демонстрируя вышеуказанный эффект. Этот способ можно использовать как способ лечения вирусных инфекций. Кроме того, аналог пиразинкарбоксамида или его соли по настоящему изобретению можно использовать в качестве агента для профилактики или лечения вирусных инфекций. Технический результат: создание нового противовирусного агента и разработка способов его применения. 12 н. и 38 з.п. ф-лы.

где каждый из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹ и А имеет указанные в описании значения.

1. Способ ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный способ путем воздействия на субъект аналогом пиразиннуклеотида, представленного следующей общей формулой [1] или его солью:

где R¹ представляет собой атом водорода, галоген, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшей алкилиденовой группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и n представляет собой целое число от 0 до 3.

где R¹ представляет собой атом водорода, галоген, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, которые могут быть замещены алкильной или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшим алкилиденом; каждый из R⁷ и R⁸ в фосфорной кислоте или фосфиновой кислоте независимо представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена s-низшим ацилтиоалкилом, ацил алкоксиалкилом, арилом или амидированной группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; и Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу.

где R¹ представляет собой атом водорода, галоген, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшим алкилиденом; каждый из R⁷ и R⁸ в фосфорной кислоте или фосфиновой кислоте независимо представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена s-низшим ацилтиоалкилом, ацилоксиалкилом, арилом или амидированной группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкилом или алкоксикарбонилом; каждый из R³, R^4z, R⁵ и R^6z, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой или R^4z и R^6z вместе представляют собой группу, представленную как -О-алкилен-O-, которая может быть замещена алкильной или арильной группой; R^z представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшей алкоксикарбонильной группой; и Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкилом или алкоксикарбонилом; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшим алкилиденом; R представляет собой гидроксильную группу; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; и n представляет собой целое число от 1 до 3.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшей алкилиденовой группой; R представляет собой гидроксильную группу; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; и n представляет собой целое число от 1 до 3; при условии, что исключается случай, когда R представляет собой гидроксильную группу, А представляет собой атом кислорода, и R¹ представляет собой атом водорода или атом галогена.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкилом или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшей алкилиденовой группой; каждый из R⁷ и R⁸ в фосфорной кислоте или фосфиновой кислоте независимо представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена s-низшим ацилтиоалкилом, ацилоксиалкилом, арилом или амидированной группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; и Y представляет собой атом кислорода.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкилом или алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R^4z, R⁵ и R^6z, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой, или R^4z и R^6z вместе представляют собой группу, представленную как -О-алкилен-O-, которая может быть замещена алкилом или арильной группой; R^z представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена ацилом или низшей алкоксикарбонильной группой; и Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу.

где R^a представляет собой атом водорода или атом галогена; и каждый из R^b и R^c, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или ацильную группу, или R^b и R^c вместе представляют собой алкиленовую группу, которая может быть замещена алкильной или арильной группой.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной и алкоксикарбонильнои группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой или низшей алкилиденовой группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и m представляет собой целое число от 0 до 2, который преобразуется in vivo в аналог пиразинтрифосфатнуклеотида, представленный общей формулой [1y]:

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, тем самым, демонстрируя эффект ингибирования РНК-полимеразы,

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной и алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода, или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой или низшей алкилиденовой группой; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и р представляет собой 0 или 1, отличающийся тем, что отношение ингибирующего эффекта предшественника ингибитора РНК-полимеразы в отношении полученной из вируса РНК-полимеразы к ингибирующему эффекту предшественника ингибитора РНК-полимеразы в отношении полученной из клетки хозяина инозинмонофосфатдегидрогеназы составляет 900:1 или более.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группы; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной и алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R^4z, R⁵ и R^6z, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой, или R^4z и R^6z вместе представляют собой группу, представленную как -О-алкилен-O-, которая может быть замещена алкильной или арильной группой; R^z представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной или низшей алкоксикарбонильной группой; и Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, в организме пациента, инфицированного вирусом.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу или заместитель пиразинового кольца; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной и алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной или низшей алкилиденовой группой; А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу; Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу; и n представляет собой целое число от 0 до 3.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; R² представляет собой атом водорода, ацильную группу, или карбоксиалкильную группу, замещенную алкильной и алкоксикарбонильной группой; каждый из R³, R^4z, R⁵ и R^6z, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной группой, или R^4z и R^6z вместе представляют собой группу, представленную как -О-алкилен-O-, которая может быть замещена алкильной или арильной группой; R^z представляет собой гидроксильную группу, которая может быть замещена ацильной или низшей алкоксикарбонильной группой; и Y представляет собой атом кислорода или иминогруппу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу.

где R¹ представляет собой атом водорода, атом галогена, алкильную или арильную группу; и каждый из Z¹⁰, Z¹¹, Z¹² и Z¹³, которые могут быть одинаковые или различные, представляет собой атом водорода или гидроксильную группу.