СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2298183C2

Изобретение относится к области медицины, диагностике и может быть использовано для определения активности миелопероксидазы в нейтрофилоах и эозинофилах мокроты.

Известен способ количественного определения активности миелопероксидазы в образцах жидкостей бронхоальвеолярного лаважа у больных муковисцидозом, предложенный K.Paul, E.Rietschel et al. (Amer. Jour. of Resp. and Crit Care, vol. 169, 2004). Реакция отслеживается по длине волны, 470 нм, на аппарате Arospec III, Germany. Активность миелопероксидазы определяется как соответствие 1 единицы активности миелопероксидазы расходу 1 ммоль перекиси водорода. Однако известный способ недостаточно точен и информативен, так как не позволяет количественно оценить активность миелопероксидазы в (отдельно взятой) определенной клетке.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа.

Поставленную задачу решают новым способом определения активности миелопероксидазы в нейтрофилах и эозинофилах мокроты, заключающийся в исследовании мокроты, причем исследуют свежеприготовленные мазки мокроты, для чего в световом микроскопе при увеличении ×1000 цифровой фотокамерой Sony DSC-S70 с максимальным разрешением производят фотографирование эозинофилов и нейтрофилов, скенограмму импортируют в программу Adobe Photoshop, после чего с помощью пакета программ Photoshop CS производят следующие действия: с помощью функции "лассо" выделяют нейтрофил или эозинофил, в функции "гистограмма" считывают показатель площадь клетки в пикселях, с помощью функции "волшебная палочка" из клетки удаляют ядро, далее в функции "гистограмма" считывают интенсивность окраски продуктов цитохимической реакции в синем спектре, интенсивность выражают в обратных единицах плотности и при величине интенсивности, равной 107,2±2,5 обр. ед. пл., для нейтрофилов и 59,2±4,3 обр. ед плот. для эозинофилов определяют норму при показателях, превышающих указанные значениями интенсивности определяют низкую активность миелопероксидазы в клетках, при показателях ниже указанных значений интенсивности определяют высокую активность миелопероксидазы.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежеприготовленные мазки не более однодневной давности фиксируют в спиртово-формалиновой смеси в течение 30 секунд.

Промывают в проточной воде, высушивают.

Стекла с мазками мокроты помещают на рельсы и заливают реактивом на миелопероксидазу (10 частей бензидина, 60 мл 96% этилового спирта, 40 мл дистиллированной воды, 0,2 мл 3% раствора перекиси водорода) на 20 минут.

Стекла с мазками мокроты промывают дистиллированной водой в течение 10 секунд и промокают фильтровальной бумагой.

Мазки докрашивают красителем азур-1 в течение 10-15 секунд.

Стекла промывают в проточной воде.

Затем в световом микроскопе при увеличении ×1000 цифровой фотокамерой Sony DSC-S70, с максимальным разрешением, производят фотографирование эозинофилов и нейтрофилов, скенограмму импортируют в программу Adobe Photoshop, после чего с помощью пакета программ Photoshop CS производят следующие действия: с помощью функции "лассо" выделяют нейтрофил или эозинофил, в функции "гистограмма" считывают показатель площадь клетки в пикселях, с помощью функции "волшебная палочка" из клетки удаляют ядро, далее в функции "гистограмма" считывают интенсивность окраски продуктов цитохимической реакции в синем спектре, обратной чувствительностью от 10 до 60 в зависимости от степени четкости изображения интенсивность выражают в обратных единицах плотности (обр. ед. пл.) и при величине интенсивности, равной 107,2±2,5 обр. ед. пл., для нейтрофилов и 59,2±4,3 обр. ед плот. для эозинофилов определяют норму, при показателях, превышающих указанные значения интенсивности, определяют низкую активность миелопероксидазы в клетках, при показателях ниже указанных значений интенсивности определяют высокую активность миелопероксидазы.

Предлагаемые критерии подобраны на основании интерпретации результатов экспериментальных исследований образцов мокроты в общей сложности 50 больных с хронической обструктивной болезнью легких и 25 здоровых некурящих лиц, группы контроля, у которых значения интенсивности окраски продуктов цитохимической реакции в контрольной группе составили 107,2+-2,5 обр. ед. пл., для нейтрофилов и 59,2+-4,3 обр. ед плот. для эозинофилов соответственно. Показатели, превышающие указанные значения интенсивности, свидетельствовали о низкой активности миелопероксидазы в клетках, показатели ниже указанных значений интенсивности свидетельствовали о высокой активности фермента.

Средние показатели интенсивности окраски продуктов цитохимической реакции у больных ХОБЛ составили 96,5±1,4 и 55,8±2,9 обр. ед. пл. для нейтрофилов и эозинофилов соответственно, что свидетельствует о высокой активности фермента в клетках индуцированной мокроты у больных в сравнении с группой контроля.

Преимуществом предлагаемого способа являются высокая точность, отсутствие субъективного восприятия исследователем цвета и яркости окраски препарата, возможность использования номинальной шкалы. Это позволяет повысить точность и информативность определения активности миелопероксидазы в клетках индуцированной мокроты, что представляется важным в диагностике и в плане дальнейших исследований по проблеме хронической обструктивной болезни легких.

Похожие патенты RU2298183C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ЦИТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ, ПРОТЕКАЮЩЕЙ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ 2005
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Будкова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
RU2298184C2
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ У ДЛИТЕЛЬНО КУРЯЩИХ ЛИЦ 2008
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Смотрова Анастасия Александровна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Акбашева Ольга Евгеньевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
  • Михайлова Алла Александровна
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Антипов Сергей Иванович
  • Варвянская Наталья Владимировна
RU2359618C1
СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ 2010
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Михайлова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
  • Антипов Сергей Иванович
  • Федосенко Сергей Вячеславович
  • Фисенко Анна Юрьевна
  • Кириллова Наталья Александровна
RU2425369C1
ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ГРИБА Pleurotus 1137 ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ НЕПЕРЕНОСИМОСТИ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ 2010
  • Герасименя Валерий Павлович
  • Захаров Сергей Викторович
  • Карпина Наталья Леонидовна
  • Ерохина Мария Владиславовна
  • Григорьева Валентина Николаевна
  • Трезвова Алла Вячеславовна
RU2435600C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ У БОЛЬНЫХ С ИБС В ПОСТИНФАРКТНЫЙ ПЕРИОД 2004
  • Дорофеева Наталья Петровна
  • Кастанаян Александр Алексианосович
  • Шлык Сергей Владимирович
  • Нахрацкая Ольга Ивановна
  • Паняева Виктория Леонидовна
  • Головатенко Ирина Сергеевна
RU2269922C1
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ КОГНИТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ С АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ НА ФОНЕ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2 ТИПА 2014
  • Тюкалова Людмила Ивановна
  • Лукьянова Мария Александровна
  • Гарганеева Наталья Петровна
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Фисенко Анна Юрьевна
RU2555334C1
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ПОВЫШЕННОГО УРОВНЯ ТРЕВОГИ И ДЕПРЕССИИ У ПАЦИЕНТОВ С АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ НА ФОНЕ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2 ТИПА 2014
  • Тюкалова Людмила Ивановна
  • Лукьянова Мария Александровна
  • Гарганеева Наталья Петровна
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Фисенко Анна Юрьевна
RU2554806C1
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПАНКРЕАТИТА АЛКОГОЛЬНОЙ И БИЛИАРНОЙ ЭТИОЛОГИИ 2005
  • Лазебник Леонид Борисович
  • Царегородцева Тамара Михайловна
  • Васильев Юрий Васильевич
  • Живаева Наталья Сергеевна
  • Винокурова Людмила Васильевна
  • Серова Татьяна Ивановна
  • Лычкова Алла Эдуардовна
RU2302003C1
СПОСОБ ПРОГНОЗА РАЗВИТИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ НА ФОНЕ ОСТРОЙ РЕСПИРАТОРНОЙ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 2012
  • Сергеева Ирина Владимировна
  • Тихонова Елена Петровна
  • Камзалакова Наталья Ивановна
  • Тихонова Юлия Сергеевна
  • Булыгин Геннадий Викторович
RU2522202C1
СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ 2004
  • Савина Лидия Васильевна
  • Яковенко Мария Сергеевна
  • Мингалева Евгения Анатольевна
  • Клименко Елена Федоровна
  • Кравцова Наталья Анатольевна
  • Конько Нелля Петровна
RU2280865C1

Реферат патента 2007 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ

Изобретение относится к области медицины, а именно диагностике. Сущность способа заключается в том, что исследуют свежеприготовленные мазки мокроты, не более однодневной давности, которые фиксируют формалино-спиртовым раствором, обмывают в проточной воде, высушивают, заливают реактивом на пероксидазу, промывают дистиллированной водой, промокают фильтровальной бумагой, докрашивают красителем азур-1. Затем фотографируют в световом микроскопе при увеличении ×100, с максимальным разрешением, скенограмму импортируют в программу Photoshop CS, определяют интенсивность окраски продуктов цитохимической реакции в синем спектре, выражают ее в обратных единицах плотности и при величине интенсивности, равной 107,2±2,5 обр. ед. пл., определяют норму для нейтрофилов и 59,2±4,3 обр. ед. пл. для эозинофилов, при показателях, превышающих указанные значения, определяют низкую активность миелопероксидазы в клетках, при показателях ниже указанных значений определяют высокую активность миелопероксидазы. Использование способа позволяет повысить точность и информативность определения активности миелопероксидазы в нейтрофилах и эозинофилах мокроты. 1 ил.

Формула изобретения RU 2 298 183 C2

Способ определения активности миелопероксидазы в нейтрофилах и эозинофилах мокроты, включающий исследование клеток в мазках биологического образца, которые фиксируют формалино-спиртовым раствором, обмывают в проточной воде, высушивают, заливают реактивом на пероксидазу, содержащим бензидин 96% этиловый спирт, дистиллированную воду, перекись водорода, докрашивают красителем, промывают в проточной воде и высушивают, отличающийся тем, что исследуют свежеприготовленные мазки мокроты не более однодневной давности, окрашивание производят в течение 20 мин, промывают дистиллированной водой в течение 10 с, промокают фильтровальной бумагой, докрашивают красителем азур-1 в течение 10-15 с, далее фотографируют в световом микроскопе при увеличении ×1000, с максимальным разрешением, скенограмму импортируют в программу Photoshop CS, определяют интенсивность окраски продуктов цитохимической реакции в синем спектре, выражают ее в обратных единицах плотности и при величине интенсивности, равной 107,2±2,5 обр. ед. пл., определяют норму для нейтрофилов и 59,2±4,3 обр. ед. пл. для эозинофилов, при показателях, превышающих указанные значения, определяют низкую активность миелопероксидазы в клетках, при показателях, ниже указанных значений, определяют высокую активность миелопероксидазы.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2007 года RU2298183C2

Лабораторные методы исследования в клинике
Справочник
/Под ред
В.В.Меньшикова
- М.: Медицина, 1987
Способ применения резонанс конденсатора, подключенного известным уже образом параллельно к обмотке трансформатора, дающего напряжение на анод генераторных ламп 1922
  • Минц А.Л.
SU129A1
СПОСОБ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В МАЗКАХ КРОВИ ЖИВОТНЫХ 2000
  • Гугушвили Н.Н.
  • Радуль Н.П.
RU2196509C2
ЛАБИНСКАЯ А.С
Микробиология с техникой микробиологических исследований
- М.: Медицина, 1978, с.30
Способ цитологического определения активности миелопероксидазы в крови 1987
  • Намазбаева Зулькия Игеновна
  • Базелюк Людмила Тимофеевна
SU1474512A1
КОНДЕНСАТОР 1991
  • Головко Сергей Александрович
RU2012934C1
Е.В.СЕЛИВАНОВ
Красители в биологии и медицине
Справочник.

RU 2 298 183 C2

Авторы

Черногорюк Георгий Эдинович

Рослякова Елена Петровна

Печеркина Ирина Николаевна

Будкова Алла Александровна

Варвянская Наталья Владимировна

Ямкина Наталья Сергеевна

Санжаровская Мария Сергеевна

Даты

2007-04-27Публикация

2005-07-20Подача