СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ЦИТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ, ПРОТЕКАЮЩЕЙ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Описание патента на изобретение RU2298184C2

Изобретение относится к области медицины, к средствам для диагностики и может быть использовано для определения продуктов цитохимической реакции, протекающей в нейтрофилах и эозинофилах индуцированной мокроты под воздействием миелопероксидазы (МПО).

Наиболее близким к предлагаемому является способ, предложенный K.Paul, E.Rietschel et al., заключающийся в количественном определении активности МПО у больных муковисцидозом (Amer. Jour. of Resp. and Crit Care, vol. 169, 2004), путем спектрофотокалорометрии образцов жидкостей бронхоальвеолярного лаважа. Реакция отслеживается по длине волны 470 нм, на аппарате Arospec III, Germany. Активность МПО определяется как соответствие 1 единицы активности МПО расходу 1 ммоль перекиси водорода. Однако известный способ недостаточно точен и информативен, так как не позволяет количественно оценить активность МПО в (отдельно взятой) определенной клетке, за счет чего снижается точность диагностики бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких, при которых нейтрофилы и эозинофилы являются основным клеточным субстратом воспаления.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа.

Поставленную задачу решают новым способом определения продуктов цитохимической реакции, протекающей в нейтрофилах и эозинофилах под воздействием миелопероксидазы, заключающимся в исследовании образцов мокроты, причем исследуют свежеприготовленные мазки индуцированной мокроты не более однодневной давности, которые фиксируют в 4% спиртово-формалиновой смеси в течение 30 секунд, промывают в проточной воде, высушивают, после чего помещают на рельсы и заливают реактивом, состоящим из 10 частей бензидина, 60 мл 96% этилового спирта, 40 мл дистиллированной воды, 0,2 мл 3% раствора перекиси водорода и выдерживают в течение 20 минут, затем промывают дистиллированной водой в течение 10 секунд, промокают фильтровальной бумагой, докрашивают красителем азур-1 в течение 5-15 секунд и промывают в проточной воде.

Способ осуществляют следующим образом:

1. Свежеприготовленные мазки не более однодневной давности фиксируют в спиртово-формалиновой смеси в течение 30 секунд.

2. Промывают в проточной воде, высушивают.

3. Стекла с мазками мокроты помещают на рельсы и заливают реактивом на миелопероксидазу (10 частей бензидина, 60 мл 96% этилового спирта, 40 мл дистиллированной воды, 0,2 мл 3% раствора перекиси водорода) на 20 минут.

4. Стекла с мазками мокроты промывают дистиллированной водой в течение 10 секунд и промокают фильтровальной бумагой.

5. Мазки докрашивают красителем азур-1 в течение 10-15 секунд.

6. Стекла промывают в проточной воде.

Предлагаемый способ был предложен в результате анализа результатов экспериментов с препаратами индуцированной мокроты, при которых проводилось варьирование времени контакта клеток мазка индуцированной мокроты с реактивом на миелопероксидазу, а также использованием препаратов с различным сроком давности приготовления. При времени контакта клеток мазка индуцированной мокроты с реактивом на миелопероксидазу менее 20 минут и/или при наличии мазка, приготовленного более суток назад, продукты цитохимической реакции в клетках не выявлялись, либо выявлялись с меньшей степенью интенсивности окрашивания (Фиг 1).

При увеличении времени контакта клеток мазка индуцированной мокроты с реактивом на миелопероксидазу и/или при наличии свежего мазка, сроком давности менее суток, продукты реакции окрашивались очень интенсивно, что затрудняло процесс идентификации клеток (Фиг.2).

Проведено исследование образцов мокроты 50 пациентов с хронической обструктивной болезнью легких. Продукты реакции обнаруживались в 38-89% нейтрофилов и в 100% эозинофилов индуцированной мокроты больных хронической обструктивной болезнью легких. Данная методика апробирована на кафедре госпитальной терапии ГОУ ВПО "Сибирский государственный медицинский университет".

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с большей точностью и информативностью провести определение продуктов цитохимической реакции, протекающей в нейтрофилах и эозинофилах индуцированной мокроты под воздействием миелопероксидазы, что важно для постановки точного диагноза и назначения, в соответствии с этим, более адекватных лечебно-профилактических мероприятий.

Похожие патенты RU2298184C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ 2005
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Будкова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
RU2298183C2
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ У ДЛИТЕЛЬНО КУРЯЩИХ ЛИЦ 2008
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Смотрова Анастасия Александровна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Акбашева Ольга Евгеньевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
  • Михайлова Алла Александровна
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Антипов Сергей Иванович
  • Варвянская Наталья Владимировна
RU2359618C1
СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ 2010
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Михайлова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
  • Антипов Сергей Иванович
  • Федосенко Сергей Вячеславович
  • Фисенко Анна Юрьевна
  • Кириллова Наталья Александровна
RU2425369C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ВРЕДНЫХ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ФАКТОРОВ НА ОРГАНИЗМ РАБОТНИКОВ, ЗАНЯТЫХ В ПРОИЗВОДСТВЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ СМОЛ НЕ БОЛЕЕ 5 ЛЕТ 2013
  • Бакиров Ахат Бариевич
  • Бадамшина Гульнара Галимяновна
  • Бакиров Булат Ахатович
  • Тимашева Гульнара Вильевна
  • Каримова Лилия Казымовна
  • Валеева Эльвира Тимерьяновна
  • Валеева Оксана Валерьевна
  • Власова Наталья Викторовна
RU2559585C2
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ 2012
  • Генинг Татьяна Петровна
  • Генинг Снежанна Олеговна
  • Абакумова Татьяна Владимировна
  • Арсланова Динара Ришатовна
  • Антонеева Инна Ивановна
  • Рябова Лидия Георгиевна
  • Сидоренко Екатерина Геннадьевна
RU2488823C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО МЕТАБОЛИЗМА НЕЙТРОФИЛОВ У РАБОТНИКОВ НЕФТЕХИМИЧЕСКОГО И ХИМИЧЕСКОГО ПРОИЗВОДСТВА 2011
  • Бадамшина Гульнара Галимяновна
  • Тимашева Гульнара Вильевна
  • Бакиров Ахат Бариевич
  • Каримова Лилия Казымовна
  • Валеева Эльвира Тимерьяновна
  • Гизатуллина Дина Фаритовна
RU2473086C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ГНОЙНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ, ОСЛОЖНЕННОЙ СТЕНОЗОМ 2002
  • Нестерова И.В.
  • Фомичева Е.В.
RU2237251C2
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ КЛИНИЧЕСКИХ ФОРМ БРУЦЕЛЛЕЗА У ЛЮДЕЙ 1995
  • Сафронова В.М.
  • Локтев Н.А.
  • Ткаченко Л.И.
RU2103687C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА 1992
  • Гусева Светлана Анатольевна[Ua]
  • Ганджа Игорь Михайлович[Ua]
  • Широбоков Владимир Павлович[Ua]
  • Корнюшенко Ольга Николаевна[Ua]
  • Волкова Татьяна Григорьевна[Ua]
RU2068997C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО СПОНДИЛИТА 2004
  • Гусева Валентина Николаевна
  • Керко Ольга Вячеславовна
  • Новикова Наталья Сергеевна
  • Алешина Галина Матвеевна
  • Кокряков Владимир Николаевич
  • Шендерова Рива Ильинична
  • Сушкова Елена Алексеевна
RU2308723C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 298 184 C2

Реферат патента 2007 года СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ЦИТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ, ПРОТЕКАЮЩЕЙ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам лабораторной диагностики. Сущность способа заключается в том, что исследуют свежеприготовленные мазки мокроты, не более однодневной давности, которые фиксируют формалино-спиртовым раствором, обмывают в проточной воде, высушивают, заливают бензидиновым реактивом на пероксидазу на 20 мин, промывают дистиллированной водой в течение 10 с, докрашивают красителем азур-1 в течение 5-15 с, промывают в проточной воде и высушивают. Использование способа позволяет повысить точность и информативность определения продуктов цитохимической реакции, протекающей в нейтрофилах и эозинофилах мокроты под воздействием миелопероксидазы. 2 ил.

Формула изобретения RU 2 298 184 C2

Способ определения продуктов цитохимической реакции, протекающей в нейтрофилах и эозинофилах мокроты под воздействием миелопероксидазы, включающий исследование клеток в мазках биологического образца, которые фиксируют формалино-спиртовым раствором, обмывают в проточной воде, высушивают, заливают реактивом на пероксидазу, содержащим бензидин, 96% этиловый спирт, воду, перекись водорода, докрашивают красителем, промывают в проточной воде и высушивают, отличающийся тем, что исследуют свежеприготовленные мазки мокроты, не более однодневной давности, окрашивание производят в течение 20 мин, промывают дистиллированной водой в течение 10 с и докрашивают красителем азур-1 в течение 5-15 с.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2007 года RU2298184C2

Лабораторные методы исследования в клинике
Справочник
Под ред
В.В.Меньшикова
- М.: Медицина, 1987
Способ применения резонанс конденсатора, подключенного известным уже образом параллельно к обмотке трансформатора, дающего напряжение на анод генераторных ламп 1922
  • Минц А.Л.
SU129A1
СПОСОБ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В МАЗКАХ КРОВИ ЖИВОТНЫХ 2000
  • Гугушвили Н.Н.
  • Радуль Н.П.
RU2196509C2
А.С.ЛАБИНСКАЯ
Микробиология с техникой микробиологических исследований
- М.: Медицина, 1978, с.30
Способ цитологического определения активности миелопероксидазы в крови 1987
  • Намазбаева Зулькия Игеновна
  • Базелюк Людмила Тимофеевна
SU1474512A1
КОНДЕНСАТОР 1991
  • Головко Сергей Александрович
RU2012934C1
E.B.СЕЛИВАНОВ
Красители в биологии и медицине
Справочник.

RU 2 298 184 C2

Авторы

Черногорюк Георгий Эдинович

Рослякова Елена Петровна

Печеркина Ирина Николаевна

Будкова Алла Александровна

Варвянская Наталья Владимировна

Ямкина Наталья Сергеевна

Санжаровская Мария Сергеевна

Даты

2007-04-27Публикация

2005-07-20Подача