СПОСОБ ГРУППОВОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2007 года по МПК A61B10/00 G01N33/483 

Настоящее изобретение относится к области ветеринарии и касается разработки способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота.

В стадах крупного рогатого скота принято копрологически исследовать до 10% поголовья. Однако для более объективной оценки гельминтологической ситуации, особенно у взрослого скота, требуется обследовать все поголовье.

В практических условиях в стадах крупного рогатого скота из-за низкой диагностической эффективности существующих гельминтоовоскопических методов и их большой трудоемкости не представляется возможным выявление всех инвазированных животных и индивидуальное их лечение. Поэтому быстрое определение истинной гельминтологической ситуации в гуртах и назначение соответствующих лечебно-профилактических мероприятий по всему стаду остается первостепенной задачей.

С увеличением объема диагностических исследований существующие лабораторные методы распознавания гельминтозных заболеваний не удовлетворяют практические запросы. Производительность труда гельминтоовоскопических исследований в течение рабочего дня не превышает 40-50 анализов (в среднем 10 мин на 1 пробу).

Для механизации и автоматизации диагностических исследований рекомендуется электромеханический аппарат для гельминтологических исследований животных (Котельников Г.А. Диагностика гельминтозов животных. Москва, "Колос", 1974, 240 с. (1); Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Москва, "Колос", 1984, 207 с. (2)). По указанию автора исследования ускоряются в семь раз, т.е. в течение рабочего дня с помощью этого аппарата можно исследовать до 350 проб фекалий.

При использовании данного аппарата одновременно механически размешивают 10 проб, а затем промывают загрязненные лопасти механизма. Для исследования каждую пробу (3 г) кладут в стаканы, находящиеся в кассетах, наливают 50 мл флотационного раствора или воды, в зависимости от того, проводят исследование методом флотации или седиментации. Кассеты с пробами вставляют в специальные пазы аппарата. При помощи реле устанавливают время размешивания проб в зависимости от исследуемого материала, а также регулируют подачу воды в ванне для промывки загрязненных мешалок. После, одновременно фильтруя, из аппарата вынимают кассеты со стаканами для последующего исследования материала.

При использовании метода последовательных смывов смесь отстаивают 5 мин (до образования осадка). Затем верхний слой жидкости сливают до осадка, а к осадку добавляют снова такое же количество воды и снова отстаивают 5 мин, после чего жидкость сливают до осадка. Такие операции повторяют до тех пор, пока надосадочный слой воды не будет прозрачным. Последний раз верхний слой сливают или отсасывают спринцовкой, а осадок поочередно разливают на предметные стекла и исследуют под микроскопом.

Недостаток при применении электромеханического аппарата то, что он автоматизирует лишь часть гельминтоовоскопических исследований, поэтому и в этом случае объем ручного труда остается большим. Кроме того, фекалии крупного рогатого скота приходится исследовать на трематодозы одними способами (методы осаждения), а на цестодозы и нематодозы другими (флотационные и комбинированные методы), так как в организме животных нередко встречаются ассоциативные формы инвазий.

Задача изобретения - разработка способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота в целях быстрого определения истинной гельминтологической ситуации в гуртах для проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий по всему стаду.

Сущность изобретения заключается в одновременном исследовании от 10 до 100 проб фекалий, которых осаждают в одной посуде, двукратно фильтруют и исследуют комбинированным гельминтоовоскопическим методом, используя в качестве флотационной жидкости смесь насыщенных растворов хлорида цинка, хлорида натрия и сахара в соотношении 2:1:1.

Способ групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота проводится по следующей схеме: с каждой пробы фекалий пинцетом берут примерно 1 г фекалий в стеклянную банку емкостью 2 л (от 10 до 100 проб). Затем взятые пробы заливают небольшим количеством воды и тщательно размешивают пипеткой или стеклянной палочкой, после чего при постоянном помешивании добавляют воду порциями до объема 2 л. Взвесь фекалий фильтруют через металлическое сито с размером ячеек 0,5×0,5 в другую банку емкостью 3 л. Оставшийся на сите осадок промывают 0,5 л воды. После взвесь повторно фильтруют через сито с размером ячеек 0,25×0,25 в чистую трехлитровую банку. Оставшийся на сите осадок повторно промывают 0,5 л воды. Двукратно отфильтрованную взвесь отстаивают 10 мин, надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя над осадком лишь небольшое ее количество. Таким образом, осадок промывают 3-5 раз обычным сливом воды. После последнего промывания примерно 100 мл осадка наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин при 1500 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют комбинированную флотационную жидкость, состоящую из трех ингредиентов - из насыщенных растворов хлорида цинка, хлорида натрия и сахара.

Вначале готовят отдельно базовые насыщенные растворы указанных солей и сахара: 1 - насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl₂ на 1 л воды, ρ-1,82), 2 - насыщенный раствор хлорида натрия (0,42 кг NaCl на 1 л воды, ρ-1,19), 3 - раствор сахара (1,67 кг С₁₂Н₂₂O₁₁ на 1 л воды, ρ-1,28). Для получения комбинированной флотационной жидкости смешивают эти растворы в соотношении 2:1:1. Плотность такого раствора составляет 1,53.

После добавления флотационной жидкости осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют в том же режиме. После центрифугирования пипеткой осторожно доливают флотационную жидкость в центрифужные пробирки, чтобы получился выпуклый мениск, сверху покрывают его предметным стеклом на 3-5 мин. Затем стекло быстро снимают, чтобы жидкость не стекала, поворачивают соприкасающей стороной кверху и микроскопируют.

ПРИМЕР 1. Сравнительное изучение диагностической эффективности седиментационного метода последовательных смывов и способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота проводилось в течение одного года в хозяйствах Республики Татарстан в 10 стадах с охватом 722 животных. Полученные результаты приведены в таблице.

Как видно из таблицы, в КП "Игенче" Высокогорского района из исследованных 45 проб фекалий крупного рогатого скота по методу последовательных смывов удалось обнаружить в 2-х пробах (4%) яйца дикроцелий и в 4-х пробах (9%) - яйца кишечных стронгилят.

С помощью групповой экспресс-диагностики гельминтозов данного стада в 1 мл поверхностной пленки были выявлены 3 яйца дикроцелий, 4 яйца фасциол и 9 яиц кишечных стронгилят. Следовательно, этот способ позволил установить то, что в стаде есть инвазированные животные не только дикроцелиозом и кишечными стронгилятами, но и фасциолезом.

В агрофирме "Нокса" Высокогорского района при использовании групповой экспресс-диагностики гельминтозов были выявлены 5 яиц дикроцелий и 11 яиц кишечных стронгилят. По методу последовательных смывов яйца дикроцелий не были выявлены ни в одной пробе, а яйца кишечных стронгилят были обнаружены только в одной пробе (7%).

Аналогичные результаты были получены в агрофирме "Идел" Высокогорского района при исследовании 13 проб фекалий крупного рогатого скота. При использовании метода последовательных смывов ни в одной пробе не удалось диагностировать яйца дикроцелий. При этом лишь в 1 пробе (8%) были обнаружены яйца кишечных стронгилят. Групповой способ экспресс-диагностики по этому стаду дал возможность выявить в 1 мл поверхностной пленки 6 яиц дикроцелий и 8 яиц кишечных стронгилят.

ТаблицаДиагностическая эффективность седиментационного метода последовательных смывов и способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота в хозяйствах Республики ТатарстанНазвание хозяйства и районаИсследовано проб фекалийВыявлено по методу последовательных смывовВыявлено по способу групповой экспресс-диагностики гельминтозов (количество яиц в 1 мл поверхностной пленки)дикроцелиозфасциолезкиш. стронгилятытрихоцефалездикроцелийфасциолкиш. стронгиляттрихоцефалпроб%проб%проб%проб%КП "Игенче" Высокогорского района4524--49--349-Агрофирма "Нокса" Высокогорского района15----17--5-11-Агрофирма "Идел" Высокогорского района13----18--6-8-Учхоз КГАВМ Высокогорского района150--3253---421-КП "Кунгер" Атнинского района20042212613--18732-Совхоз "Арский" Арского района37----38--8-15-КП "Турнали" Арского района55--35815---6188КП "Пошалым" Арского района107--1198---9267КП "Мирас" Кукморского района60478131627--9163818КП "Нурминка" Кукморского района4025513923--12142712Итого7221222238211--626020545

При исследовании 150 голов крупного рогатого скота в Учхозе КГАВМ Высокогорского района с помощью метода последовательных смывов удалось выявить в трех пробах (2%) яйца фасциол и в 5 пробах (3%) яйца кишечных стронгилят. При использовании способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов обнаружено в этом стаде 4 яйца фасциол и 21 яйцо кишечных стронгилят.

В КП "Кунгер" Атнинского района исследовано 200 проб фекалий крупного рогатого скота. По методу последовательных смывов были выявлены яйца дикроцелий в 4-х пробах (2%), фасциол - в 2-х (1%), а кишечных стронгилят в 26 пробах (13%). С помощью способа групповой экспресс-диагностики по этому стаду удалось обнаружить в 1 мл поверхностной пленки 18 яиц дикроцелий, 7 яиц фасциол и 32 яйца кишечных стронгилят. При исследовании данного стада результаты метода последовательных смывов совпали с результатами экспресс-метода.

При исследовании 37 проб фекалий от крупного рогатого скота в совхозе "Арский" Арского района, используя метод последовательных смывов, в 3-х пробах (8%) были обнаружены яйца кишечных стронгилят. При использовании способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов по этому стаду было выявлено 8 яиц дикроцелий и 15 яиц кишечных стронгилят, следовательно, была диагностирована дополнительно дикроцелиозная инвазия.

В КП "Турнали" Арского района было исследовано 55 проб фекалий крупного рогатого скота. По методу последовательных смывов удалось обнаружить в 3-х пробах (5%) яйца фасциол и в 8 пробах (15%) яйца кишечных стронгилят. С помощью способа групповой экспресс-диагностики по этому стаду в 1 мл поверхностной пленки было выявлено 6 яиц фасциол, 18 - кишечных стронгилят и 8 яиц трихоцефал. В этом случае в данном стаде дополнительно была диагностирована трихоцефалезная инвазия.

Аналогичные данные по эффективности способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота были получены и в остальных 3-х хозяйствах РТ (КП "Пошалым" Арского района, КП "Мирас" и КП "Нурминка" Кукморского района).

В целом в 10 хозяйствах республики были исследованы 722 пробы фекалий крупного рогатого скота. Из 10 происследованных стад при использовании метода последовательных смывов в 4-х была диагностирована дикроцелиозная, в 6 фасциолезная и во всех 10 стронгилятозная инвазия.

С помощью способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов в 7 стадах была выявлена дикроцелиозная, в 7 - фасциолезная и также во всех 10 стронгилятозная инвазия. Кроме того, в 4 стадах дополнительно был диагностирован трихоцефалез.

При исследовании 722 проб из 10 стад методом последовательных смывов было затрачено 120 часов рабочего времени (в среднем 10 мин на 1 пробу). При использовании способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов для исследования того же поголовья из 10 стад требуется всего 8 часов (в среднем 50 мин на стадо).

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют, что преимущество способа групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота заключается в том, что для ускорения исследований не требуются специальные аппараты и приспособления. Данный способ позволяет за короткое время выявить эпизоотологическую ситуацию по гельминтозам всего стада и позволяет одновременно диагностировать как яйца трематод, так и цестод и нематод. В течение рабочего дня предложенный способ позволяет исследовать до 10 стад крупного рогатого скота, с охватом более 1 тысячи животных. Диагностическая эффективность предложенного способа высокая.

В литературе данный способ не описан, поэтому он является новым, соответствует критерию изобретательского уровня и промышленной применимости.

Изобретение относится к области ветеринарии. Для исследования берут от 10 до 100 проб фекалий весом примерно 1 г. Их тщательно размешивают с водой и осаждают в одной посуде, двухкратно фильтруют, отфильтрованную взвесь промывают 3-5 раз, осадок центрифугируют 1-2 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют комбинированную флотационную жидкость. В качестве флотационной жидкости используют насыщенные растворы ZnCl₂ (2 кг на 1 л), NaCl (0,42 кг на 1 л) и сахара (1,67 кг на 1 л) взятые в соотношении 2:1:1 соответственно. После добавления флотационной жидкости осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют в том же режиме, надосадочную жидкость сливают и в пробирки доливают флотационную жидкость до получения выпуклого мениска, сверху покрывают его предметным стеклом на 3-5 мин, затем жидкость на стекле подвергают микроскопии. Способ позволяет одновременно и быстро диагностировать трематодозы, цестодозы и нематодозы. 1 табл.

Способ групповой экспресс-диагностики гельминтозов крупного рогатого скота, заключающийся в том, что берут от 10 до 100 проб фекалий весом примерно 1 г, размешивают их с водой и осаждают в одной посуде, двухкратно фильтруют, отфильтрованную взвесь промывают 3-5 раз, осадок центрифугируют 1-2 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют комбинированную флотационную жидкость, состоящую из насыщенных растворов ZnCl₂ (2 кг на 1 л), NaCl (0,42 кг на 1 л) и сахара (1,67 кг на 1 л), взятых в соотношении 2:1:1 соответственно, осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют в том же режиме, после чего доливают в пробирку флотационную жидкость до получения выпуклого мениска, сверху покрывают его предметным стеклом на 3-5 мин, после чего жидкость на стекле микроскопируют.