Способ идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак с использованием искусственных нейронных сетей Российский патент 2023 года по МПК G01N33/48 A61D99/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение принадлежит области ветеринарной медицины, в частности к паразитологии и представляет собой способ идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак с использованием искусственных нейронных сетей. Изобретение может использоваться для диагностики и идентификации паразитарных заболеваний собак в частных и государственных ветеринарных организациях.

Уровень техники

Известен способ выявления яиц гельминтов флотационным методом, который характеризуется тем, что к предварительно растертым 1-3 граммам фекалий естественно инвазированных животных добавляют 10-15 мл воды, перемешивают и фильтруют. Полученный раствор центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин, после чего сливают надосадочную жидкость и добавляют флотационный раствор в объеме 5-7 мл, перемешивают и центрифугируют в течение 2-3 минут при 2000 об/мин. Затем пробирку переворачивают, не допуская расслоения суспензии, и отбирают из центра пробирки жидкость, заполняют камеру Макмастера и проводят подсчет яиц гельминтов с использованием счетной шкалы. Флотационный раствор содержит следующие компоненты: калия бромид, формалин, хлорид алюминия и воду (см. пат. RU 2019122059, МПК A61D 99/00, A61K 31/00 опубл. 10.07.2019).

Недостатком способа выявления яиц гельминтов флотационным методом является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация кишечных гельминтов.

Известен способ выявления яиц гельминтов в пробах различных объектов окружающей среды, который включает смешивание предварительно отмытого исследуемого образца с флотационным раствором и последующее микроскопирование всего объема флотанта, при этом в качестве флотационного раствора используют нитрат натрия плотностью 1,34 и осуществляют фильтрацию всего объема флотанта через аналитические трековые мембраны с диаметром пор 2,5-3,0 мкм (см. пат. RU 2020121607, МПК G01N 33/00, G01N 33/18, G01N 33/24 опубл. 25.06.2020).

Недостатком способа выявления яиц гельминтов в пробах различных объектов окружающей среды является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация видового состава фауны.

Известен способ для диагностики протозоозов и гельминтозов человека. Диагностическая система включает: сбор кала в консервант Турдыева; метод влажного мазка из консерванта; метод Като-Миура из консерванта; комбинированный гельминтоовоскопический метод с использованием трехкомпонентной флотационной системы, включающей насыщенные водные растворы хлорида цинка, ZnCl2, ρ=1,82, хлорида натрия, NaCl, ρ=1,12, и глицерин (х.ч.) в соотношении 1:1:1 по объему; метод флотации с использованием насыщенного водного раствора хлорида цинка (ZnCl2, ρ=1,82) при подозрении на трематодозы (см. пат. RU 2018101361, МПК G01N 33/48 опубл. 15.01.2018).

Недостатком способа для диагностики протозоозов и гельминтозов человека является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация обнаруженных яиц трематод.

Известен способ выявления яиц гельминтов, клещей и цист простейших в пробах почвы заключается в том, что пробу почвы весом 25 г помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды, смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин и центрифугируют в течение 3 мин при 800-1000 об/мин, воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы, состоящей из насыщенных растворов цинка хлорида (2 кг ZnCl₂ на 1 л), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л) и глицерина, взятых в соотношении 1:1:1, в пробирку доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, пробирку накрывают обезжиренным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости, через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют, снятие препарата рекомендуется повторить 2-3 раза (см. пат. RU 2011115920/15, МПК G01N 33/24 опубл. 21.04.2011).

Недостатком способа выявления яиц гельминтов, клещей и цист простейших в пробах почвы является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация в почве яиц таких гельминтов, как человеческая и свиная аскарида, а также токсокар.

Известен способ, который обеспечивает оптимизацию гельминтоовоскопический диагностики аскаридоза, заключающийся в увеличении выявляемости яиц и количественной оценке степени инвазии организма данным паразитом. Используют трехингредиентную флотационную систему, состоящую из насыщенных растворов хлористого цинка, сахарозы и хлористого натрия в соотношении 1,5:1:1 (объем/объем/объем). Для приготовления флотационных смесей ингредиентами служат насыщенные водные растворы хлорида цинка (ZnCl2, ρ - 1,82), хлорида натрия (NaCl, ρ - 1,19) и сахарозы. Удельный вес приготовленных флотационных растворов определяют с помощью денсиметра при t 125°С. Свежую пробу фекалий массой 1 грамм суспензируют в 10 мл воды, фильтруют через металлический фильтр с величиной пор 0,5×0,5 мм. Полученный фильтрат центрифугировали при 1500 g в течение 5 мин. Затем полученный осадок суспензируют во флотационном растворе и центрифугируют при 1500 g в течение 5 мин. Всплывающие цисты, концентрирующиеся в поверхностной пленке раствора, снимают при помощи стандартной металлической петли и подсчитывают их количество в объёме 0,2 мл флотационной жидкости без покровного стекла при окуляре с увеличением кратным ×10 и объективе с увеличением кратным ×20 (см. пат. RU 2008124010/14, МПК A61B 10/00 опубл. 03.06.2008).

Недостатком способа, обеспечивающего оптимизацию гельминтоовоскопический диагностики аскаридоза является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация всплывающих цист, концентрирующиеся в поверхностной пленке раствора.

Известен копрологический метод диагностики кишечных паразитов птиц и яиц клещей. Метод заключается в том, что берут пробу фекалий весом 1-2 г, помещают в копрологический стакан, заливают 10 мл дистиллированной воды, размешивают, доливают 20-30 мл воды, процеживают через металлическое сито в чистый стакан, дают взвеси отстояться в течение 5 мин, верхнюю часть сливают, оставшуюся часть переливают в центрифужную пробирку объемом 13 мл, центрифугируют в течение 3 мин при 1500 g, после сливают жидкость до осадка на дне пробирки, к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из насыщенного раствора хлористого цинка - 1750 грамм на 1 л, и насыщенного раствора сахара - 1333 грамм на 1 л, взятых в соотношении 1,5:1 соответственно, перемешивают и центрифугируют 3 мин при 1500 g, после чего микроскопируют поверхностную пленку (см. пат. RU 2016107505, МПК G01N 33/48, G01N 33/483 опубл. 01.03.2016).

Недостатком копрологического метода диагностики кишечных паразитов птиц и яиц клещей является интерпретация результатов исследования, а именно идентифицировать яйца и личинки кишечных паразитов птиц, их личинок, а также яйца клещей.

Известен способ диагностики лямблиоза у человека, который осуществляется с помощью суспендирования во флотационном растворе исследуемого образца, центрифугирования, снятия поверхностной пленки с флотационного раствора и её микроскопическое исследование. При этом центрифугируют при 1500 g в течение 5 минут. Для приготовления флотационных смесей ингредиентами служат насыщенные водные растворы хлорида цинка (ZnCL₂, ρ-1,82), хлорида натрия (NaCl, ρ-1,19) и глицерин в соотношении 1:1:1 (объем/ объем/ объем). Поверхностную пленку исследуют на наличие цист и/или вегетативных форм. Степень инвазии оценивают, как низкую, среднюю, высокую и очень высокую (см. пат. RU 2007128793/15, МПК G01N 33/48 опубл. 17.07.2007).

Недостатком способа диагностики лямблиоза у человека является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация лямблиоза и оценка степени инвазированности хозяина Giardia lamblia.

Известен способ для экспресс-обнаружения яиц геогельминтов в пробах почвы. Для этого 25 г пробы исследуемой почвы смешивают с 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода. Содержимое отстаивают после перемешивания, в результате чего на линии соприкосновения раствора с верхней границей почвы формируется зона, отличная по цвету от исследуемого образца. Из этой зоны пипеткой отбирают материал для микроскопирования и просматривают под увеличением ×40. Изобретение обеспечивает быстрый и точный способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы при санитарно-паразитологическом исследовании (см. пат. RU 2014135700/15, МПК G01N 33/24 опубл. 03.09.2014).

Недостатком способа для экспресс-обнаружения яиц геогельминтов в пробах почвы является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация обнаруженных яиц гельминтов в пробах почвы при санитарно-паразитологическом исследовании.

Известен способ диагностики паразитов птиц. Способ заключается в том, что берут 1-2 г помета, размешивают в 13 мл комбинированной флотационной жидкости, состоящей из насыщенного раствора хлорида цинка (2 кг на 1 л) и 2% водного раствора спирта поливинилового, взятых в соотношении 2:1 соответственно. Содержимое фильтруют, взвесь центрифугируют в течение 1-2 минуты при 1500 об/мин, после чего микроскопируют поверхностную пленку (см. пат. RU 2013135830/13, МПК A61D 99/00 опубл. 30.07.2013).

Недостатком способа диагностики паразитов птиц является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация паразитов птиц.

Известен способ Фюллеборна. Для этой методики нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли на 1 л воды (флотационный раствор). Пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационного раствора, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один слой в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 минут, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования. Этот способ в лабораторной практике может применяться для диагностики неоаскаридоза, стронгилятозов стронгилоидоза, мониезиоза и тизаниезиоза крупного рогатого скота, (см. Лутфуллин М. Х., Латыпов Д. Г., Корнишина М. Д. Ветеринарная гельминтология. Казань: «Идел-Пресс». 2007. 232 с.).

Недостатком способа Фюллеборна является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация возбудителей неоаскаридоза, стронгилятозов, стронгилоидоза, мониезиоза и тизаниезиоза крупного рогатого скота.

Известен способ Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Технология этого способа такая же, как и метода Фюллеборна, но в качестве флотационного раствора применяется нитрат аммония. При приготовлении флотационного раствора в 1 литре кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора - 1,32. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 минут. Данная методика обладает высокой диагностической эффективностью. В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлин крупного рогатого скота, (см. Котельников Г. А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. М.: Колос.1983. 280 с.).

Недостатком способа Фюллеборна, Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация яиц неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлин крупного рогатого скота.

Известен способ Котельникова-Хренова с нитратом свинца. Техника проведения этого способа аналогична способу Фюллеборна. В качестве флотационного раствора при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца из расчёта 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов. С его помощью легко выявляются и тяжёлые яйца фасциол (удельный вес 1,31-1,35), парамфистомат (1,33-1,38), дикроцелий (1,3) и тем более яйца с меньшим удельным весом, к которым относятся яйца аскаридат, стронгилят, трихоцефалят, стронгилоид, аноплоцефалят (мониезий), а также капсулы тизаниезий. (см. Котельников Г. А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. М.: Колос.1983. 280 с.).

Недостатком способа Котельникова-Хренова с нитратом свинца является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация яиц аскаридат, стронгилят, трихоцефалят, стронгилоидесов, аноплоцефалят (мониезий), а также капсулы тизаниезий.

Известен способ Дарлинга. Пробу фекалий весом 3-5 г размешивают в стаканчике с водой в количестве 20 мл. Полученную эмульсию фильтруют через марлю, переливают в пробирку, доливают водой до верха и центрифугируют в течение 3 минут. Затем жидкость сливают до осадка, осадок размешивают с жидкостью Дарлинга (насыщенный раствор поваренной соли, смешанной в равных частях с глицерином), центрифугируют 5 минут. Затем прикосновением петли с поверхности жидкости снимают пленку, наносят ее на предметное стекло и исследуют под микроскопом (см. Акбаев М. Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. Москва, «Колос», 1998, 744 с.).

Недостатком способа Дарлинга с нитратом свинца является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация возбудителей кишечных паразитарных заболеваний.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту принятый авторами за прототип является способ Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Технология этого способа такая же, как и метода Фюллеборна, но в качестве флотационного раствора применяется нитрат аммония. При приготовлении флотационного раствора в 1 литре кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора - 1,32. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 минут.

Недостатком способа Фюллеборна Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой является интерпретация результатов исследования, а именно идентификация яиц неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлин крупного рогатого скота.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний животных с использованием искусственных нейронных сетей.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения сводится к использованию искусственных нейронных сетей для идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак.

Технический результат достигается с помощью способа идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний животных с использованием искусственных нейронных сетей, который включает выделение цист простейших и яиц гельминтов флотационным способом Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой и дополнительно используют в качестве флотационного раствора: нитрат натрия, нитрат аммония, натриевой селитры с калиевой селитрой или тиосульфата натрия, для проведения микроскопии используется оптический микроскоп с использованием окулярной цифровой USB-камеры и электронно-вычислительная машина с операционной системой Unix, а идентификация возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак осуществляется при помощи искусственной нейронной сети.

Чертежи и иные материалы

На фигуре 1 продемонстрирована схема способа идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний животных с использованием искусственных нейронных сетей.

На фигуре 2 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

На фигуре 3 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

На фигуре 4 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

На фигуре 5 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

На фигуре 6 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

На фигуре 7 продемонстрирована идентификация Toxocara canis с использованием искусственной нейронной сети YOLO v5 (объектив 10х/0,25).

Осуществление изобретения

Способ идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак с использованием искусственных нейронных сетей включает выделения цист простейших и яиц гельминтов флотационным способом Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой, отличающийся тем, что дополнительно используются в качестве флотационного раствора: нитрата натрия, нитрат аммония, натриевой селитры с калиевой селитрой или тиосульфата натрия, с использованием обученной искусственной нейронной сети для идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак.

Нитрат натрия с плотностью 1,38 - 1,40 готовят из расчёта 1000 грамм соли на 1 литр воды. Соль вносят в эмалированную емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости.

Нитрат аммония с плотностью 1,3 готовят из расчёта 1500 грамм соли на 1 литр воды. Соль вносят в эмалированную емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости.

Раствор Брудастова, с плотностью 1,47 - 1,48 готовят из расчета 900 грамм натриевой селитры и 400 грамм калиевой селитры на 1 литр воды. Соли вносят в эмалированную емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости.

Тиосульфата натрия с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 грамм соли (гипосульфита натрия Na₂SO₃ 5Н₂О) на 1 литр воды. Соль вносят в эмалированную емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения. Раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка. Приготовленный раствор после остывания переливают в другие крупные емкости.

Для проведения микроскопии используется оптический микроскоп с использованием окулярной цифровой USB-камеры и электронно-вычислительная машина с операционной системой Unix. Идентификация возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак осуществляется при помощи искусственной нейронной сети (см. фиг. 1). Для идентификации кишечных возбудителей паразитарных заболеваний собак используется искусственная нейронная сеть на базе архитектуры YOLO (сверхточная искусственная нейронная сеть), которая обеспечивают высокую точность и скорость детектирования объектов на изображениях (см. пат. RU 2714901, МПК G06K 9/62 (2006.01), G06Q 20/18 (2012.01) опубл. 20.02.2020).

В приютах для бездомных собак в городе Ставрополе были собраны 46 проб фекалий собак для проведения микроскопии с использованием искусственной нейронной сети. Копрологическое исследование проводили на базе кафедры терапии и фармакологии Ставропольского государственного аграрного университета.

Пример №1. Образцы фекалий (n=12) кладут в стаканчик, заливают небольшим количеством флотационного раствора (нитрат аммония с плотностью 1,3 готовят из расчёта 1500 грамм соли на 1 литр воды) и тщательно размешивают палочкой, добавляя раствор порциями до объема 50 мл. Затем полученную взвесь фильтруют через чистое ситечко в другой стаканчик. Профильтрованную взвесь оставляют на 15 минут. Прикосновением металлической петли к поверхности полученной взвеси снимают не менее 3 капель с разных мест и переносят их на предметное стекло для микроскопии. Для проведения микроскопии используется оптический микроскоп с использованием окулярной цифровой USB-камеры и электронно-вычислительная машина с операционной системой Unix. Идентификация возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак осуществляется при помощи искусственной нейронной сети.

Идентификация кишечных паразитов собак осуществлялась в три этапа. Первый этап: идентификация кишечных паразитов собак осуществлялось при помощи обученной искусственной нейронной сети. Второй этап: ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры проводили копрологическое исследование. Третий этап: анализ полученных данных от обученной искусственной нейронной сети, ветеринарных специалистов и сотрудников кафедры.

Установлено, что из 12 проб обученная искусственная сеть обнаружила 6 проб инвазированных Toxocara canis (см. фиг. 2-3). Ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры обнаружили 6 проб инвазированных Toxocara canis. В оставшихся 6 пробах обученная нейронная сеть, ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры не обнаружили кишечных паразитозов собак.

Пример №2. Проводили аналогично примеру №1. Установлено, что из 12 проб обученная искусственная сеть обнаружила 9 проб инвазированных Toxocara canis (см. фиг. 4-5). Ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры обнаружили 6 проб инвазированных Toxocara canis. В оставшихся 3 проб обученная нейронная сеть, ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры не обнаружили кишечных паразитозов собак.

Пример №3. Проводили аналогично примеру №1. Установлено, что из 12 проб обученная искусственная сеть обнаружила 4 пробы инвазированных Toxocara canis (см. фиг. 6-7). Ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры обнаружили 4 пробы инвазированных Toxocara canis. В оставшихся 8 пробах обученная нейронная сеть, ветеринарные специалисты и сотрудники кафедры не обнаружили кишечных паразитов собак.

В ходе проведения исследований предлагаемого способа идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний животных с использованием искусственных нейронных сетей было доказано, что обученная искусственная нейронная сеть из 46 исследуемых проб фекалий собак идентифицировала Toxocara canis в 14 пробах. Полученный результат идентификации кишечных паразитозов собак является аналогичным результатам исследования проб ветеринарными специалистами и сотрудниками кафедры терапии и фармакологии Ставропольского государственного аграрного университета.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

1. Сокращение времени для проведения копрологического исследования;

2. Сокращение времени и упрощение интерпретации результатов копрологического исследования;

3. Автоматизация методов идентификации кишечных паразитозов собак.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины. Выполняют выделение цист простейших и яиц гельминтов приготовленным флотационным раствором, включающим: нитрат натрия, нитрат аммония, натриевой селитры с калиевой селитрой или тиосульфата натрия. Для проведения микроскопии используется оптический микроскоп с использованием окулярной цифровой USB-камеры и электронно-вычислительная машина с операционной системой Unix, а идентификация возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак осуществляется при помощи искусственной нейронной сети. Изобретение обеспечивает сокращение времени для проведения копрологического исследования; упрощение интерпретации его результатов; автоматизацию методов идентификации кишечных паразитозов собак путем использования искусственных нейронных сетей для идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак. 3 пр., 7 ил.

Способ идентификации возбудителей кишечных паразитарных заболеваний животных с использованием искусственных нейронных сетей, включающий выделение цист простейших и яиц гельминтов флотационным раствором, отличающийся тем, что в качестве флотационного раствора используют: нитрат натрия, нитрат аммония, натриевой селитры с калиевой селитрой или тиосульфата натрия,

при этом флотационный раствор готовят следующим образом:

нитрат натрия с плотностью 1,38-1,40 готовят из расчёта 1000 грамм соли на 1 литр воды, причем соль вносят в емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения, раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка, затем раствор остужают;

нитрат аммония с плотностью 1,3 готовят из расчёта 1500 грамм соли на 1 литр воды, причем соль вносят в емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения, раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка, затем раствор остужают;

раствор Брудастова с плотностью 1,47-1,48 готовят из расчета 900 грамм натриевой селитры и 400 грамм калиевой селитры на 1 литр воды, причем соли вносят в емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения, раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка, затем раствор остужают;

тиосульфат натрия с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 грамм соли - гипосульфита натрия Na₂SO₃ 5Н₂О на 1 литр воды, причем соль вносят в емкость с горячей водой порциями при постоянном помешивании до полного растворения, раствор доводят до кипения, пока не появится на его поверхности кристаллическая пленка, затем раствор остужают;

образцы фекалий заливают флотационным раствором и размешивают, добавляя раствор порциями до объема 50 мл, затем полученную взвесь фильтруют через ситечко, профильтрованную взвесь оставляют на 15 минут, петлей с поверхности полученной взвеси снимают не менее 3 капель с разных мест и переносят их на предметное стекло для микроскопии;

для проведения микроскопии используется оптический микроскоп с использованием окулярной цифровой USB-камеры и электронно-вычислительная машина с операционной системой Unix, а идентификацию возбудителей кишечных паразитарных заболеваний собак осуществляют при помощи искусственной нейронной сети на базе архитектуры YOLO v5 и копрологического исследования.