СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1994 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, направлено на совершенствование методов диагностики гельминтозов животных и может быть использовано в ветеринарии для своевременного выявления больных животных с целью проведения оздоровительных мероприятий и предотвращения убытков в животноводстве.

Одним из первоначальных методов обнаружения яиц гельминтов является метод Дарлинга (1911). В стакане с водой размешивают 3 г фекалий, процеживают в центрифужные пробирки, центрифугируют 1-2 мин, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют смесь равных частей насыщенного раствора соли и глицерина. Смесь взбалтывают и вновь центрифугируют 1-2 мин. Проволочной петлей снимают поверхностную пленку и исследуют на предметном стекле под микроскопом [1] .

Недостатком этого метода является двойное центрифугирование, что увеличивает длительность исследования, приводит к механической потере частиц яиц гельминтов. Кроме того флотационные свойства используемой смеси низки в отношении яиц отдельных гельминтов.

Известны также методы флотации с растворами нитрата свинца, гранулированной или обычной амиачной селитры, модификации метода Дарлинга по Котельникову и Хренову [2] .

Пробы фекалий (3 г) тщательно размешивают в стаканчиках, добавляя в них порциями воду. Взвесь каждой пробы фильтруют через ситечко с ячейками 0,5 х 0,5 мм в другой стаканчик и отстаивают 5 мин. Верхний слой сливают, оставляя осадок с надосадочной жидкостью в таком количестве, чтобы он поместился в обычную центрифужную пробирку. Взболтав осадок, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин при 1000-1500 об/мин. Затем воду до осадка сливают, а к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, взбалтывают и центрифугируют при том же режиме. После этого петлей снимают 3 капли с поверхности взвеси на предметное стекло и микроскопируют.

Недостатками указанных методов являются: продолжительность исследований, так как предусматривается либо отстаивание взвеси фекалий (5-20 мин) с последующим центрифугированием, либо двойное центрифугирование с последующим наложением на поверхность взвеси обезжиренного предметного стекла. Кроме того, при использовании насыщенного раствора нитрата свинца, имеющего плотность 1,5, наблюдается деформация яйцевых элементов, и в поле зрения появляются примеси, затрудняющие исследования.

Цель изобретения - улучшение диагностической эффективности предлагаемого метода в результате сокращения времени и повышения точности исследования.

Цель достигается тем, что в качестве флотационной жидкости используется смесь насыщенных растворов поваренной соли и гранулированной аммиачной селитры в соотношении 1: 1, плотностью 1,242, а также тем, что в исследуемый материал, взятый металлической петлей, добавляется 30% -ный водный раствор глицерина 1: 1.

Применяемая флотационная жидкость позволяет обнаруживать яйца гельминтов уже через 1 мин после центрифугирования взвеси фекалий при 1000-1500 об/мин. Это объясняется тем, что она имеет достаточно высокий удельный вес (1,242). Такая плотность выше, чем у насыщенного раствора поваренной соли (уд. вес 1,2), что повышает эффективность флотации, но ниже, чем у насыщенного раствора гранулированной аммиачной селитры (уд. вес 1,3), что снижает количество примесей в исследуемом материале и повышает точность обнаружения яиц гельминтов, не вызывает их деформацию. Добавление 30% -ного водного раствора глицерина приводит к коагуляции частиц примесей, просветляет препарат, предотвращает кристаллизацию и высыхание материала в жаркое время года.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску фекалий 3 г помещают в фарфоровую ступку, растирают пестиком и порциями при постоянном помешивании добавляют флотационную жидкость (смесь насыщенных растворов поваренной соли и гранулированной аммиачной селитры в соотношении 1: 1, плотностью 1,242) до объема 50 мл. Смесь фильтруют через ситечко с величиной сторон ячеек 0,25-0,3 мм в стаканчик, наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1 мин при 1000-1500 об/мин. Затем копрологической петлей диаметром 8-10 мм снимают 3 капли поверхностной пленки, переносят на предметное стекло, добавляют в каждую из них по капле 30% -ного раствора глицерина и микроскопируют.

Предлагаемый метод сокращает время и повышает качество исследований.

П р и м е р 1. Взято 45 проб фекалий лошадей в возрасте 5-6 лет. Из них 15 проб первого контроля исследовали по методу Дарлинга, 15 проб второго контроля - по методу Дарлинга в модификации Котельникова и Хренова с насыщенным раствором гранулированной аммиачной селитры и 15 опытных проб - по предлагаемому способу. При этом в одной капле поверхностной пленки первого контроля обнаруживалось 46 яиц стронгилят, второго контроля - 63, опыта - 74, т. е. в 1,17-1,6 раза больше. При этом поле зрения в опытных образцах было более светлым и свободным от постронних примесей. На исследование одной пробы первого контроля затрачивалось 9-10 мин, второго - 14-15 мин, а опыта - 4-5 мин, т. е. в 2-3 раза меньше контрольных.

П р и м е р 2. Взято 90 проб фекалий овец в возрасте от 1 года до 2 лет. Из них 30 проб первого контроля исследовали по методу Дарлинга, 30 проб второго контроля - по методу Дарлинга в модификации Котельникова и Хренова с насыщенным раствором гранулированной аммиачной селитры и 30 опытных проб по предлагаемому способу. Получены следующие результаты: при исследовании по методу Дарлинга в одной капле поверхностной пленки обнаруживалось в среднем по 3 яйца стронгилят, модификации Котельникова и Хренова - по 5, а по нашей методике - 7, т. е. в 1,4-2,33 раза больше. При этом поле зрения в опытных образцах было более светлым и без посторонних примесей. Длительность исследования была аналогичной примеру 1.

Предлагаемый способ повышает диагностическую эффективность за счет сокращения в 2-3 раза времени исследования, увеличения количества обнаруженных яиц гельминтов у лошадей в 1,17-1,6 раза, овец - 1,4-2,33 раза. При этом не установлено деформации яйцевых элементов, а поле зрения становится более светлым и свободным от посторонних примесей.

Использование: в ветеринарии для выявления больных животных. Сущность изобретения: заключается в смешении фекалий с флотационной жидкостью с последующей фильтрацией и микроскопированием взвеси. В качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор хлорида натрия и аммиачной селитры, взятые в соотношении 1 : 1, плотностью 1,242. При этом перед микроскопированием добавляют 30% -ный раствор глицерина.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖИВОТНЫХ, включающий взятие фекалий, растирание и смешивание их с флотационной жидкостью, фильтрацию взвеси, центрифугирование, извлечение яиц, микроскопирование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени исследования, в качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор хлорида натрия и аммиачной селитры, взятые в соотношении 1 : 1 плотностью 1,242, а после извлечения яиц в исследуемый материал перед микроскопированием добавляют 30% -ный водный раствор глицерина.