СПОСОБ КОРРЕКЦИИ АНТИИНФЕКЦИОННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ КАНДИДА-БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ НА ФОНЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЫ Российский патент 2007 года по МПК A61K31/496 A61K31/167 A61P31/00 

Предлагаемый способ относится к медицине, а именно к иммунологии и микробиологии, и может быть использован с целью повышения антиинфекционной резистентности организма при гнойно-воспалительных процессах смешанной этиологии у больных с ожоговой травмой.

Ожоговая травма приводит к существенным отклонениям в иммунной системе и развитие иммунных нарушений представляет значительный интерес, поскольку реакции иммунитета участвуют не только в защите организма от инфекции, но и в возникновении аутоиммунной агрессии (Пинегин Б.В. Современные представления о стимуляции антиинфекционного иммунитета с помощью иммуномодулирующих препаратов // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - Т.45, №12. - С.3-8). Универсальный характер носит снижение активности иммунной системы в ранние сроки после обширных ожогов. Иммунная недостаточность связана с уменьшением числа и функциональной активности Т - лимфоцитов, макрофагов и стволовых кроветворных клеток. При ожогах происходит изменение реактивности организма. У обожженных животных атипично протекают реакции ГЧЗТ, нередко происходит ускорение отторжения кожного аутотрансплантата, пересаженного на ожоговую рану. Представления об аутоиммунных реакциях всецело основываются на анализе вредных эффектов аутоантигенов, аутоантител или иммунных комплексов (Назаров И.П., Колегова Ж.Н. Профилактика и лечение вторичного иммунодефицита и гнойно-септических осложнений у тяжелообожженных // Сибирское медицинское обозрение. - 2003. - №1. - с.16-21).

Установлено, что в патогенезе ожоговых ран ключевое значение имеет инфекционный процесс, определяющий тяжесть ожоговой травмы. При этом инфекционно-септические состояния во многом определяют характер заживления ожоговых ран и течение восстановительного периода (Брудастов Ю.А., Сборец Т.С., Гриценко В.А., Плотников А.О., Брудастов А.Н., Воронов О.Н Свойства Staphylococcus aureus при неблагоприятном течении ожоговой инфекции // ЖМЭИ. - 2003. - №4. - с.47-51). Это объясняется спецификой ожоговой травмы, при которой образуются не только входные ворота для инфекции, но и формируется выраженное иммунодефицитное состояние в связи с резким нарушением метаболических процессов в организме (Покровский В.И., Гордиенко С.П., Литвинова В.И. Иммунология инфекционного процесса // M. 1994-305 с.).

В последние годы отмечается все более возрастающая роль грибов и особенно Candida spp. как возбудителей нозокомиальной инфекции в хирургии и отделениях интенсивной терапии (Гельфанд Б.Р., Гологорский В.А., Гельфанд Е.Б., Лысенко Г.В., Бражнин Т.Б. Нозокомиальная грибковая инфекция в хирургии и интенсивной терапии: состояние проблем // Анналы хирургии. - 2001. - №3. - с.12-19).

Высокую группу риска составляют пациенты с обширными ожогами и множественными переломами (Клясова Г.А. Микотические инфекции: клиника, диагностика, лечение // Инфекции и антимикробная терапия. - 2002. - №6. - т.2. - с.184-186).

Особенно часто у больных с ожоговой болезнью совместно с грибами выделяются P.aeruginosa, S.aureus, E.coli, K.pneumoniae, Proteus spp., что еще больше осложняет течение ожоговой травмы (Сергеев А.Ю., Бурова С.А. Иммунитет при кандидозе и подходы к иммунокоррекции // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - №45:12. - с.30-31).

Гнойно-воспалительный процесс грибково-бактериальной этиологии на фоне ожоговой травмы значительно усугубляет активность иммунной системы и способствует снижению эффективности проводимой терапии (Назаров И.П., Колегова Ж.Н. Профилактика и лечение вторичного иммунодефицита и гнойно-септических осложнений у тяжелообожженных // Сибирское медицинское обозрение. - 2003. - №1. - с.16-21). Огромный арсенал антибактериальных средств не решает проблему борьбы с такой инфекцией, поэтому ведется поиск препаратов, повышающих устойчивость организма обожженных к микробам.

Кроме того, установлено, что при ожоговой травме возникают нарушения микроциркуляции и сосудистой проницаемости. От состояния микроциркуляции в значительной мере зависят эффективность кровообращения в микрососудах, оптимальное обеспечение тканей кислородом и адекватное удаление из них продуктов метаболизма. Пусковым фактором в повреждении фосфолипидов микросомальных мембран являются активация перекисного окисления липидов и эндогенных фосфолипаз (Парамонов Б.А., Порембский Я.О., Яблонский В.Г. Ожоги. Руководство для врачей // СПб.: СпецЛит, 2000. - с.351-410).

В связи с этим целесообразно профилактическое введение ингибиторов фосфолипаз с целью повышения резистентности мембран к гипоксическому воздействию при ожоговой травме.

Наиболее близким является метод применения полиоксидония при генерализованной моноинфекции на фоне ожоговой травмы (Гординская, Н.А., Пылаева С.И., Сидоркин В.Г. Влияние полиоксидония на уровень интоксикации у ожоговых больных // Иммунология. - 2002. - Т.23, №6. - С.363-365).

Этот метод имеет ряд недостатков: во-первых, полиоксидоний авторы применяли при моноинфекции на фоне ожоговой травмы. Кроме того, результаты коррекции оказались неоднозначными и зависели от времени введения препарата.

Как правило, у больных с ожоговой болезнью в последнее время с поверхности ожоговой раны выделяются ассоциации микроорганизмов, а не монокультура. В отличие от моноинфекции микст-инфекция, особенно грибково-бактериальная, резко усугубляет состояние иммунной системы организма.

Во-вторых, немаловажное значение в первые дни болезни при ожоговых травмах имеет болевой шок, который, в свою очередь, также вызывает супрессию иммунного ответа. А введением одного полиоксидония не достигается купирование болевого синдрома.

В связи с этим задачей изобретения было: разработать способ коррекции иммунологических сдвигов в условиях экспериментальной ожоговой травмы, осложненной микст-инфекцией Кандида-бактериальной этиологии, сопровождающейся резким снижением антиинфекционной резистентности организма.

Задача изобретения достигается тем, что экспериментальным животным (мышам линии СВА и крысам Вистар) с ожоговой травмой, осложненной грибково-бактериальной инфекцией, сопровождающейся резким снижением антиинфекционной резистентности, вводят внутримышечно полиоксидоний (сополимер N - окиси 1,4 -этиленпиперазин и ( N-карбоксиэтил)-1,4-этиленпиперазиния бромида с мол. массой 60-100 кД, высокомолекулярное соединение, обладающее выраженной иммунотропной активностью (Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизмы действия и клиническое применение // Иммунология. - 2003. - Т.24, №4. - С.196-202)) пятикратно 1 раз в сутки в дозе 0,1 мг на мышь и лидокаин (ингибитор фосфолипазы) внутримышечно пятикратно 1 раз в сутки в дозе 8 мкг/кг массы тела, с интервалом 24 часа между инъекциями.

В разработанном нами способе иммунокоррекции используется полиоксидоний, обладающий выраженной иммунотропной активностью, оказывая активирующее влияние на неспецифическую резистентность организма, фагоцитоз, гуморальный и клеточный иммунитет (Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Андронова Т.М. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегия их применения // Леч. врач. - 1998. - №4. - с.46-51).

С целью купирования болевого синдрома и как ингибитор фосфолипаз в разработанном способе используется лидокаин. Это α-диэтиламино-2,6-диметил-ацетанилида-гидрохлорид. Действует преимущественно в области чувствительных нервных окончаний. (Машковский М.Д. Лекарственные средства // Пособие для врачей. - 2001. - т.1. - с.294).

Изобретение поясняется следующей фигурой.

На фиг.1 показано достоверное снижение антиинфекционной резистентности (фагоцитарная активность, фагоцитарное число) организма у нелеченых животных с ожоговой травмой, осложненной Кандида-бактериальной инфекцией, по сравнению с интактными животными и животными с «чистым» ожогом.

На фиг.2 представлены результаты, демонстрирующие достоверное (р<0,01) повышение антиинфекционной резистентности (фагоцитарной активности, фагоцитарного числа) организма в результате сочетанного применения полиоксидония с лидокаином в условиях ожоговой травмы, осложненной Кандида-бактериальной инфекцией, относительно применения полиоксидония отдельно.

Способ осуществляется следующим образом. Термический ожог III-В степени площадью 30% поверхности тела вызывали под эфирным рауш-наркозом с помощью прибора для нанесения дозированного ожога.

Для создания модели микст-инфекции ожоговую поверхность орошали смесью живых 2 млрд. культур 1:1 через сутки после воспроизведения ожога. В работе использовались штаммы микроорганизмов, выделенные от больных с ожоговой травмой (Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae).

Экспериментальным животным ( мышам линии СВА и крысам Вистар) вводили внутримышечно полиоксидоний пятикратно 1 раз в сутки в дозе 0,1 мг на мышь и лидокаин внутримышечно пятикратно 1 раз в сутки в дозе 8 мкг/кг массы тела, с интервалом 24 часа между инъекциями.

Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по проценту фагоцитирующих клеток (активность), фагоцитарному числу (среднее количество фагоцитируемых микроорганизмов в расчете на один фагоцит) (Фримель Г. Иммунологические методы // М. - 1987). Функциональную активность нейтрофилов определяли по реакции восстановления нитросинего тетразолия (фагоцитарный резерв нейтрофилов-ФРН) (Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия // Метод. реком. - Казань. - 1979. - 17 с.). Активность бактерицидных систем нейтрофилов - по наличию лизосомальных катионных белков в цитоплазме (Шубич М.Г. Выявление катионных белков в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего // Вопр. мед. химии. - 1990. - №10. - т.16. - c.1321).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ «Microsoft Office XP». Достоверность различий сравниваемых величин оценивали с помощью критерия Стьюдента.

Пример конкретного выполнения.

Экспериментальные животные были разделены на группы (по 22 животного в каждой):

1 гр. интактные

2 гр. ожог

3 гр. ожог+ассоциация C.albicans+P.aeruginosa

4 гр. ожог+ассоциация C.albicans+K.pneumoniae (см. табл.1)

Полиоксидоний вводился пятикратно (один раз в сутки) внутримышечно в дозе 0,1 мг на мышь, а лидокаин пятикратно внутримышечно в дозе 8 мкг/кг массы. Кровь у животных брали из супраорбитальной вены на 3, 7, 14 сутки исследования. Причем одни группы животных получали только полиоксидоний, а другие в тех же условиях совместно с полиоксидонием - лидокаин.

Полученные нами данные согласуются с данными литературы о развитии иммунодефицита при ожоговой травме. Это состояние значительно усугубляется на фоне смешанной инфекции.

Так, у животных с микст-инфицированной ожоговой травмой C.albicans+P.aemginosa активность фагоцитоза и фагоцитарное число, а также ФРН были достоверно (Р<0,01) ниже относительно как интактных, так и животных, ожоговая травма которых была инфицирована ассоциацией C.albicans+K.pneumoniae). ( фиг.1, табл.1)

КБ нейтрофилов периферической крови животных с «чистым» ожогом обнаруживались в виде пылевидных отложений на 7 и 14 сутки и не обнаруживались на всех сроках исследования у животных с микст-инфицированной ожоговой травмой (табл.1).

Учитывая полученные результаты, можно предположить, что указанные изменения состояния организма обусловили повышение тяжести течения микст-инфекции и высокий процент гибели животных. Так, если среди животных с «чистым» ожогом выживаемость составила 83%, то у животных с микст-инфицированной ожоговой травмой ассоциацией C.albicans + K.pneumoniae - 45,0% и самый низкий процент выживаемости (40%) наблюдался в группе животных, рана которых была инфицированна ассоциацией C.albicans+P.aeruginosa (табл.1).

5-кратное введение (1 раз в сутки в дозе 0,1 мг на мышь) полиоксидония способствовало 83 и 95% выживанию животных, у которых ожоговая травма, инфицированная микст-инфекцией (табл.2, 3). Наблюдалось повышение изучаемых показателей фагоцитоза и ФРН, однако этот эффект зависел от ассоциации возбудителей и был менее выражен у животных с ожоговой травмой, инфицированной ассоциацией C.albicans+P.aeruginosa (фиг.2, табл.2, 3). КБ обнаруживались у животных только на 14 сутки исследования (табл.2,3). Несмотря на высокий процент выживаемости следует отметить, что высеваемость бактерий из селезенки наблюдалась до конца эксперимента (22 суток включительно).

Немаловажное значение при ожоговых травмах играет болевой синдром. С целью его купирования и как ингибитор фосфолипаз другие группы животных в тех же условиях получали полиоксидоний с лидокаином (1 раз в сутки в дозе 8 мкг/кг). При этом предполагалась возможность их синергидного влияния и соответственно повышения терапевтического эффекта за счет неодинаково механизма их действия.

Установлено, что сочетанное введение полиоксидония с лидокаином у всех животных с микст-инфицированной ожоговой травмой оказывало выраженный иммуностимулирующий эффект на все изучаемые показатели, достоверно усиливая и превышая уровни последних относительно применения только полиоксидония (фиг.2, табл.2, 3).

Важно отметить наличие лизосомальных КБ, которые отмечались уже на 7 сутки у всех животных, леченных двумя препаратами (табл.2, 3). Причем следует отметить, что в применяемых нами дозировках лидокаин хорошо переносится, не вызывает токсических и аллергических реакций.

Таким образом, применение полиоксидония в дозе 0,1 мг на мышь пятикратно при Кандида-бактериальной инфекции на фоне ожоговой болезни способствует повышению иммунного статуса организма животных, однако уровень изучаемых показателей не достигает таковых у интактных животных. Кроме того, в этих условиях полиоксидоний не оказывает выраженного влияния на элиминацию возбудителей до конца эксперимента.

В условиях введения с лидокаином полиоксидоний эффективно корригирует иммунный статус у животных с ожоговой травмой и гнойно-воспалительным процессом бактериально-грибковой этиологии, способствует полному очищению организма от возбудителей и 100% выживанию животных.

Таблица 1Показатели выживаемости, ФРН, КБ у нелеченых животныхИзучаемые
показателиГруппы животныхИнтактныеОжогОжог+микст-инфекция С.albicans+P.aeruginosaОжог+микст-инфекция С.albicans+K.pneumoniae Показатели в разные сроки исследования (сутки) М±m(n=22)  714714714714Выживаемость, % 100,0 83,0 40,0* 45,0*Фагоцитарный резерв нейтрофилов, %30±2,729,0±2,814,0±2,622,0±2,93,0±0,48,0±1,1*3,7±0,68,2±1,1*КБ-тест, средний гистохимический показатель0,11±0,010,12±0,02Пылевидные отложенияКБ не обнаруженыКБ не обнаруженыПримечание: достоверность различий с данными контрольных групп (интактные, ожог): *=Р<0,01

Таблица 2Результаты пршменения полиоксида в условиях с лидокаином у животных с ожогом и микст-инфекцией, вызванной
Calbicanc+aeruginosaИзучаемые
показателиГруппы животныхОжог+микст-инфекция С.albicans+P.aeruginosaПолиоксидонийПолиоксидоний+лидокаин Показатели в разные сроки исследования (сутки) М±m (n=22) 714714714Выживаемость, % 40,0 83,0 100,0*Фагоцитарный резерв нейтрофилов, %3,0±0,48,0±1,114,0±3,217,0±3,318,0±1,230,0±2,3*КБ-тест, средний гистохимически и показательКБ не обнаруженыПылевидные отложения0,05±0,010,12±0,020,39±0,03*Примечание: достоверность различий с данными контрольных групп (интактные, ожог): *=Р<0,01

Таблица 3Результаты пршменения полиоксида в условиях с лидокаином у животных с ожогом и микст-инфекцией, вызванной
Calbicanc+K.pneumoniaeИзучаемые
показателиГруппы животныхОжог+микс-инфекция С.albicans+К.pneumoniaeПолиоксидонийПолиоксидоний+лидокаин Показатели в разные сроки исследования (сутки) M±m(n=22) 714714714Выживаемость, % 45,0 95,0 100,0*Фагоцитарный резерв нейтрофилов, %3,7±0,68,2±1,115,0±3,219,0±3,419,0±1,232,0±2,6*КБ-тест, средний гистохимический показательКБ не обнаруженыПылевидные отложения0,05±0,010,13±0,020,45±0,04*Примечание: достоверность различий с данными контрольных групп (интактные, ожог): *=Р<0,01

Способ относится к медицине, а именно к иммунологии, микробиологии, и может быть использован при коррекции антиинфекционной резистентности организма при гнойно-воспалительных процессах Кандида-бактериальной этиологии на фоне экспериментальной ожоговой травмы. Для этого в течение пяти дней подряд осуществляют введение лидокаина. При этом дополнительно внутримышечно вводят полиоксидоний в дозе 0,1 мг в течение 5 дней подряд один раз в сутки. Способ повышает эффективность лечения за счет подбора препаратов, обеспечивающих специфическую иммунокоррекцию при этой патологии, а именно повышает естественную резистентность организма и позволяет обеспечить стабилизацию клеточных мембран. 2 ил., 3 табл.

Способ коррекции антиинфекционной резистентности организма при гнойно-воспалительных процессах Кандида-бактериальной этиологии на фоне экспериментальной ожоговой травмы, включающий введение лидокаина в течение 5 дней подряд, отличающийся тем, что животному дополнительно внутримышечно в течение 5 дней подряд один раз в сутки вводят полиоксидоний в дозе 0,1 мг.